Name: הכנה וניתוח של במבחנה שלושה שד ממדי המחליפים קרצינומה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: למדו כיצד ליצור תחליפי תלת-ממד של סרטן השד במבחנה ולנתח צפיפות תאים בחתכים היסטולוגיים באמצעות ביוריאקטור זרימה. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות תרפיות ומחקר התנהגות תאית בסביבה פיזיולוגית רלוונטית יותר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המרכז למחלות עצם מטבוליות של אוניברסיטת אלבמה בברמינגהם ביצע את העיבוד ההיסטולוגי והחתך של פונדקאיות. Southern Research (ברמינגהם, AL) סיפקה תמיכה לייצור מערכת הביוריאקטור. המימון ניתן על ידי התוכנית לחקר סרטן השד של משרד ההגנה של ארצות הברית (BC121367).

<ol><li>Hakanson, M., Textor, M., Charnley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+3D+environments+to+elucidate+the+effect+of+environmental+parameters+on+drug+response+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Engineered 3D environments to elucidate the effect of environmental parameters on drug response in cancer.</a> Integr Biol (Camb). 3 (1), 31-38 (2011).</li>
<li>Horning, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-D+tumor+model+for+in+vitro+evaluation+of+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">3-D tumor model for in vitro evaluation of anticancer drugs.</a> Mol Pharm. 5 (5), 849-862 (2008).</li>
<li>Dhiman, H. K., Ray, A. R., Panda, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+chitosan+scaffold-based+MCF-7+cell+culture+for+the+determination+of+the+cytotoxicity+of+tamoxifen%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional chitosan scaffold-based MCF-7 cell culture for the determination of the cytotoxicity of tamoxifen.</a> Biomaterials. 26 (9), 979-986 (2005).</li>
<li>Place, A. E., Jin Huh, S., Polyak, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microenvironment+in+breast+cancer+progression%3A+biology+and+implications+for+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The microenvironment in breast cancer progression: biology and implications for treatment.</a> Breast Cancer Res. 13 (6), 227(2011).</li>
<li>Mao, Y., Keller, E. T., Garfield, D. H., Shen, K., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+in+tumor+microenvironment+and+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Stromal cells in tumor microenvironment and breast cancer.</a> Cancer Metastasis Rev. 32 (1-2), 303-315 (2013).</li>
<li>Paulsson, J., Micke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+cancer-associated+fibroblasts+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer.</a> Semin Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).</li>
<li>Roskelley, C. D., Desprez, P. Y., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-dependent+tissue-specific+gene+expression+in+mammary+epithelial+cells+requires+both+physical+and+biochemical+signal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 12378-12382 (1994).</li>
<li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2008).</li>
<li>Ivascu, A., Kubbies, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+generation+of+single-tumor+spheroids+for+high-throughput+cell+function+and+toxicity+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Rapid generation of single-tumor spheroids for high-throughput cell function and toxicity analysis.</a> J Biomol Screen. 11 (8), 922-932 (2006).</li>
<li>Lovitt, C. J., Shelper, T. B., Avery, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+cell+culture+techniques+for+cancer+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Advanced cell culture techniques for cancer drug discovery.</a> Biology (Basel). 3 (2), 345-367 (2014).</li>
<li>Bergamaschi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+signature+identifies+breast+cancer+subgroups+with+different+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix signature identifies breast cancer subgroups with different clinical outcome.</a> J Pathol. 214 (3), 357-367 (2008).</li>
<li>Oskarsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+components+in+breast+cancer+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Breast%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix components in breast cancer progression and metastasis.</a> The Breast. 22, S66-S72 (2013).</li>
<li>Kelley, L. C., Lohmer, L. L., Hagedorn, E. J., Sherwood, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traversing+the+basement+membrane+in+vivo%3A+A+diversity+of+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22JBC%22%5BJournal%5D)">Traversing the basement membrane in vivo: A diversity of strategies.</a> JBC. 204 (3), 291-301 (2014).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+fibroblasts+modulate+epithelial+cell+proliferation+in+three-dimensional+in+vitro+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Breast fibroblasts modulate epithelial cell proliferation in three-dimensional in vitro co-culture.</a> Breast Cancer Res. 4, (2004).</li>
<li>Wendt, D., Marsano, A., Jakob, M., Heberer, M., Martin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+perfusion+of+cell+suspensions+through+three-dimensional+scaffolds+enhances+cell+seeding+efficiency+and+uniformity%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Oscillating perfusion of cell suspensions through three-dimensional scaffolds enhances cell seeding efficiency and uniformity.</a> Biotechnol Bioeng. 84 (2), 205-214 (2003).</li>
<li>Marshall, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-perfusion+bioreactor+system+for+engineered+breast+cancer+surrogates+to+be+used+in+preclinical+testing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Flow-perfusion bioreactor system for engineered breast cancer surrogates to be used in preclinical testing.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2015).</li>
<li>Calcagnile, P., Fragouli, D., Mele, E., Ruffilli, R., Athanassiou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+foams+with+functional+nanocomposite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22RSC+Adv%22%5BJournal%5D)">Polymeric foams with functional nanocomposite cells.</a> RSC Adv. 4, 19177-19182 (2014).</li>
<li>Naba, A., Clauser, K. R., Lamar, J. M., Carr, S. A., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+signatures+of+human+mammary+carcinoma+identify+novel+metastasis+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix signatures of human mammary carcinoma identify novel metastasis promoters.</a> eLife. 3, (2014).</li>
<li>Lochter, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+extracellular+matrix+constituents+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Involvement of extracellular matrix constituents in breast cancer.</a> Semin Cancer Biol. 6 (3), 165-173 (1995).</li>
<li>Joiner, K. S., Spangler, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+HistoGel-embedded+specimens+for+use+in+veterinary+diagnostic+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Diagn+Invest%22%5BJournal%5D)">Evaluation of HistoGel-embedded specimens for use in veterinary diagnostic pathology.</a> J Vet Diagn Invest. 24 (4), 710-715 (2012).</li>
<li>Varsegi, G. M., Shidham, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Block+Preparation+from+Cytology+Specimen+with+Predominance+of+Individually+Scattered+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells.</a> J Vis Exp. (29), e1316(2009).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Breast+Fibroblasts+Inhibit+Growth+of+the+MCF10AT+Xenograft+Model+of+Proliferative+Breast+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human Breast Fibroblasts Inhibit Growth of the MCF10AT Xenograft Model of Proliferative Breast Disease.</a> Am J Pathol. 170 (3), (2007).</li>
<li>Otali, D., He, Q., Stockard, C. R., Grizzle, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+immunorecognition+by+transferring+cells+from+10%25+neutral+buffered+formalin+to+70%25+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Preservation of immunorecognition by transferring cells from 10% neutral buffered formalin to 70% ethanol.</a> Biotech Histochem. 88 (0), 170-180 (2013).</li>
<li>Webster, S. S., Jenkins, L., Burg, K. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+Techniques+for+Porous%2C+Absorbable%2C+Polymeric+Scaffolds%2C+Used+in+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histotechnol%22%5BJournal%5D)">Histological Techniques for Porous, Absorbable, Polymeric Scaffolds, Used in Tissue Engineering.</a> J Histotechnol. 26 (1), 57-65 (2003).</li>
<li>Troy, T. -C., Arabzadeh, A., Enikanolaiye, A., Lariviere, N., Turksen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+on+Paraffin+Sections+of+Mouse+Epidermis+Using+Fluorescent+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry on Paraffin Sections of Mouse Epidermis Using Fluorescent Antibodies.</a> J Vis Exp. (11), (2008).</li>
<li>Carpenter, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CellProfiler%3A+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biol. 7 (10), R100(2006).</li>
<li>Kwon, Y. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gli1+enhances+migration+and+invasion+via+up-regulation+of+MMP-11+and+promotes+metastasis+in+ERa+negative+breast+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Gli1 enhances migration and invasion via up-regulation of MMP-11 and promotes metastasis in ERa negative breast cancer cell lines.</a> Clin Exp Metastasis. (28), (2011).</li>
<li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+for+Immunohistochemistry+on+Cryosectioned+Rat+Brain+Tissue%3A+Example+Staining+for+Microglia+and+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primer for Immunohistochemistry on Cryosectioned Rat Brain Tissue: Example Staining for Microglia and Neurons.</a> J Vis Exp. (99), e52293(2015).</li>
<li>Pal, A., Kleer, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+cultures%3A+a+tool+to+study+normal+acinar+architecture+vs.+malignant+transformation+of+breast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Three dimensional cultures: a tool to study normal acinar architecture vs. malignant transformation of breast cells.</a> J Vis Exp. (86), e51311(2014).</li>
<li>Hasselbach, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+High+Grade+Glioma+Cell+Culture+from+Surgical+Specimens+for+Use+in+Clinically+Relevant+Animal+Models+and+3D+Immunochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optimization of High Grade Glioma Cell Culture from Surgical Specimens for Use in Clinically Relevant Animal Models and 3D Immunochemistry.</a> J Vis Exp. (83), e51088(2014).</li>
<li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Hanging+Drop+Cell+Culture+Protocol+for+Generation+of+3D+Spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids.</a> J Vis Exp. (51), e2720(2011).</li>
<li>Materne, E. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multi-organ+Chip+-+A+Microfluidic+Platform+for+Long-term+Multi-tissue+Coculture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture.</a> J Vis Exp. (98), e52526(2015).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Molecular+Distinctions+Between+Normal+Breast-Associated+Fibroblasts+and+Breast+Cancer-Associated+Fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenviron%22%5BJournal%5D)">Identification of Molecular Distinctions Between Normal Breast-Associated Fibroblasts and Breast Cancer-Associated Fibroblasts.</a> Cancer Microenviron. 2, 9-21 (2009).</li>
<li>Wang, J. D., Douville, N. J., Takayama, S., ElSayed, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+molecular+absorption+into+PDMS+microfluidic+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of molecular absorption into PDMS microfluidic channels.</a> Ann Biomed Eng. 40 (9), 1862-1873 (2012).</li>
<li>Halldorsson, S., Lucumi, E., Gomez-Sjoberg, R., Fleming, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+and+challenges+of+microfluidic+cell+culture+in+polydimethylsiloxane+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Advantages and challenges of microfluidic cell culture in polydimethylsiloxane devices.</a> Biosens Bioelectron. 63, 218-231 (2015).</li>
<li>Regehr, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+implications+of+polydimethylsiloxane-based+microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Biological implications of polydimethylsiloxane-based microfluidic cell culture.</a> Lab Chip. 9 (15), 2132-2139 (2009).</li>
<li>Burdett, E., Kasper, F. K., Mikos, A. G., Ludwig, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+tumors%3A+a+tissue+engineering+perspective+in+cancer+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Engineering tumors: a tissue engineering perspective in cancer biology.</a> Tissue Eng Part B Rev. 16 (3), 351-359 (2010).</li>
<li>Caruso, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+coagulative+necrosis+in+malignant+epithelial+tumors+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Lett%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of coagulative necrosis in malignant epithelial tumors (Review).</a> Oncol Lett. 8 (4), 1397-1402 (2014).</li>
<li>Elmore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%3A+A+Review+of+Programmed+Cell+Death%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death.</a> Toxicol Pathol. 35 (4), 495-516 (2007).</li>
<li>Majno, G., Joris, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%2C+oncosis%2C+and+necrosis.+An+overview+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death.</a> Am J Pathol. 146 (1), 3-15 (1995).</li>
<li>Ogino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathological+epidemiology+of+epigenetics%3A+emerging+integrative+science+to+analyze+environment%2C+host%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathological epidemiology of epigenetics: emerging integrative science to analyze environment, host, and disease.</a> Mod Pathol. 26 (4), 465-484 (2013).</li>
<li>Otali, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+effects+of+formalin+fixation+and+tissue+processing+on+immunorecognition%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Combined effects of formalin fixation and tissue processing on immunorecognition.</a> Biotech Histochem. 84 (5), 223-247 (2009).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

בזאת, שיטה של ​​תרבות 3D תואר המשלבת רכיבים של microenvironment הרקמות, כוללים תאי מטריקס (ECM) ו פיברובלסטים סטרומה אדם, בנפח שיותר מקרוב מודלי סרטן השד אנושי כדי לאפשר התפתחות של מורפולוגיה 3D מסכמת . השיטה תרבות 3D תיאר מייצג בצורה טובה יותר של מחלות אנושיות מאשר תרבית תאים 2D המסורתית כי סוגי תאים מרובים משולבים לתוך נפח 3D של ECM. מעבר לנדרש יצוין, כי פרמטרים אלה (כלומר, סוגי תאים מרובים, ECM, ונפח 3D) לספק קשר הופקע יותר ללמוד תהליכים ביולוגיים בגלל מבנה רקמה, אותות...

תלת ממד (3D) מודלי תרבות שיותר במדויק לחקות את אדריכלות גידול microenvironment in vivo חשובים מחקרים שמטרתם לנתח את יחסי הגומלין המורכבים בין תאי microenvironment שלהם כדי לבחון את היעילות של טיפולים מועמדים. חמצן גידול משפיע ממדי והדרגות מזינות, אחידות חשיפה לסמים, זרימת לחץ / דם ביניים, ו 3D אדריכלות 1-4. הנוכחות של המיקרו-סביבת סטרומה המתאימה תורמת השפעות ממדיות גידול איתות תא ECM ואיתות paracrine בין תאי סטרומה ותאי אפיתל ממאירים. ההשפעות של ממדיות גידול ואת microenvironment על ​​תפקוד הסלולר מבוססות היטב, עם שני גורמי שינוי תרופה בתגובה 1,3,5-8. בנוסף, קינטיקה צמיחה הסלולר, קצב חילוף חומרים, ואיתות תא שונה בין שני ממדיים (2D) תרבות ותרבות 3D, עם גורמים אלה affecting תגובה תאית 1,3,8-10. במבחנה, במיקרו-סביבה של פונדקאית הגידול יכול להיות מווסתת על ידי כולל מרכיבים ECM יציגים ונוגעים אוכלוסיות תאים סטרומה. תאי אפיתל ממאירים מושפעים ECM ותאי סטרומה הסרטן קשור או באופן סינרגיסטי / מגן לקדם התקדמות גידול או באופן מדכא לעכב 5,6,10 התפשטות גידול נוספת. בשני ההקשר, stroma יכול להשפיע על תגובה טיפולית משלוח סמים באמצעות איתות paracrine ו / או על ידי הגדלת לחץ ביניים בגידול הדבר שגרם לפגיעת משלוח סמים 1,6. לכן, התוספת של ECM ותאי סטרומה לתוך במודלים פרה תעזור לשחזר היבטים של הגידול כי לא יכול להיות מודל היטב בתרבות 2D. בזאת שיטת להקים פונדקאיות סרטן השד משלב microenvironment מסכם, כולל מרכיבי ECM ו- sתאי tromal, בנפח 3D מתואר. בשנת סרטן השד, אוכלוסיית תאי סטרומה מורכבת ברובה של פיברובלסטים הסרטן קשור (CAF) ואת ECM סטרומה מורכב ברובה מסוג קולגן אני עם שיעור נמוך יותר של רכיבים מטריקס המצויים קרום המרתף, כולל laminin וסוג קולגן IV 1,4,11-13. לכן, רכיבים אלה של microenvironment סרטן שד (כלומר, CAF, אני קולגן, ואת קרום במרתף) שולבו את התחליפים. שיטה זו יכולה לשמש כדי ליצור פונדקאיות 3D מוצק, בלתי-perfused (איור 1 א) או יכול להיות מותאם לכלול זלוף של המדיום דרך פונדקאית באמצעות מערכת bioreactor (איור 1B). שתי הגישות המתוארות כאן. שיטה זו יכולה גם להיות שונה כדי לכלול אלמנטים סטרומה אחרים, כגון מקרופאגים גידולים הקשורים, או לבנות מודל גידולים מוצקים אחרים על ידי התאמת מרכיבים תאיים ו ECM, לפי העניין. <pclass = &quot;jove_content&quot;&gt; עבור הפונדקאית סרטן שד המתואר כאן, יש לנו מנוצל הקו הסלולרי מד&quot;א- MB-231 (231) סרטן השד, CAF מבודדת בעבר מפני סרטן שד אנושי 14, ו ECM מורכב 90% קולגן אני ( 6 מ&quot;ג / מ&quot;ל) ו -10% חומר קרום במרתף מופחת גורם הגדילה (BM). הפונדקאי גם הוא גדל שקופית קאמרית 8 היטב (פונדקאית מוצקה) או מערכת bioreactor היא מנוצלת כדי לספק זלוף מזין רציף (פונדקאי perfused). כל מערכת bioreactor זלוף שיכול להכיל נפח של תאים המכילים ECM יכול לשמש 15. כדוגמא, אנו מתארים את הכנו את תחליפי רקמות במערכת bioreactor שלנו. מערכת זו פותחה ללא צורך במיקור חוץ אינו זמין מסחרי. בגלל ההתמקדות שלנו כאן היא על ההכנה והניתוח של פונדקאיות רקמת 3D, אנחנו לא נכנסנו בפירוט רב לגבי הפרטים של ייצור והרכבה של מערכת bioreactor שלנו. עם זאת, תיאור מפורט שלמערכת זו והתפתחותה פורסמו 16. במערכת bioreactor זה, ערוץ זרימה polydimethylsiloxane (PDMS) משמש כדי לשכן את פונדקאית, אשר נתמך על ידי קצף PDMS (נוצר באמצעות שיטות דומות לאלה שתוארו על ידי Calcagnile et al. 17). כרך זה הוא חדר 4 microchannels (כל 400 מיקרומטר קוטר) אשר perfused ברציפות על ידי מדיום באמצעות משאבת microphysiologic לספק חמצן וחומרים מזינים הפונדקאי. הניתוח מתאים של פונדקאיות הוא חיוני כדי לקבל מידע רלוונטי לגבי תפקוד הסלולר בתגובה לייחס או מניפולציות אחרות. מחליפים ניתן לנתח בשיטות שונות, כולל הדמיה ישירה של פונדקאיות שלמות באמצעות מיקרוסקופ confocal או אמצעים אחרים של הדמיה לא פולשנית, ניתוח הסלולר עקיף על ידי מנסה לאמוד תקשורת המותנה, או perfusate עבור מוצרים מופרשים, או ניתוח על סעיפים היסטולוגית לאחר קיבוע ועיבוד לפָּרָפִין. פרמטר אחד כזה שיכול להיות מוערך על סעיפים היסטולוגית הוא צפיפות תאים. אנו מציגים גישה אחת למדוד צפיפות התאים (כלומר, את מספר התאים בעלי הגרעין לכל אזור סעיף) באמצעות טכניקות עיבוד תמונה חצי אוטומטי להחיל photomicrographs סעיפים היסטולוגית פונדקאית מוכתם hematoxylin ו eosin (H &amp; E). צפיפות התאים יכולים לשמש כאינדיקטור את השינוי היחסי מספר הסלולרי לאורך זמן או הנובע תנאים וטיפולים צמיחה שונים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54004/54004fig1.jpg" /> איור 1. נפח 3D ומערכת bioreactor. א) סכמטי של התהליך על מנת ליצור פונדקאיות 3D מוצקות. למעלה: קריקטורה של נפח 3D מוצק המכיל ECM (ורוד), קרצינומה של תאי אפיתל (צהובים), CAF (כתום); תחתון:. מבט מלמעלה של פונדקאיות המכילות שקופיות קאמריות 8-גם B) סכמטי של התהליך על מנת ליצור perfused פונדקאית 3D. למעלה: cartoon של נפח 3D עם ערוצים כדי לאפשר זלוף בינוני המכיל ECM (ורוד), קרצינומה של תאי אפיתל (צהוב), CAF (כתום); התיכון: תמונה של ערוץ זרימה PDMS המכיל קצף PDMS (חץ שחור) להיות מוזרק עם תא + ECM וחדרה ידי חוטי נירוסטה מצופה פולימר (חץ ורוד) מדידת 400 מיקרומטר קוטר; תחתונה:. תמונה של ערוץ הזרימה PDMS המכיל פונדקאית המחוברים למערכת bioreactor כדי לאפשר זלוף תווך רציף (משאבת peristaltic ואת המאגר התקשורת לא מוצג) C) תמונות של מדרגות עיבוד הן פונדקאיות מוצק perfused לאחר התרבות. משמאל: תמונה של cryomold המכיל דגימת עיבוד ג&#39;ל פונדקאית; תיכון: תמונה של בלוק פרפין המכיל פונדקאי קבועה ומעובדים; מימין:. תמונה של זכוכית שקופית עם קטע היסטולוגית מוכתם E H &amp; של פונדקאית <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54004/54004fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג</a>גרסה גדולה יותר של דמות זו.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco's Modified Eagel Medium 1x (DMEM)</td><td>Corning CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0.25% טריפסין + 2.21&nbsp; mM EDTA 1x</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>לוחות תרבית רקמות, 100&nbsp; mm</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229620</td><td></td></tr><tr><td>צלחות תרבית רקמה סטריליות, 35&nbsp; מ"מ</td><td>CellTreat מוצרים מדעיים</td><td>229638</td><td>להיווצרות קצף PDMS&nbsp;</td></tr><tr><td>פיפטה מזכוכית 9 אינץ'</td><td>פישר&nbsp;</td><td>13-678-20D</td><td>סטרילי</td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפטה</td><td>CellTreat מוצרים מדעיים</td><td>229210B</td><td>סטרילי</td></tr><tr><td>1,000 ומיקרו; l קצות פיפטות</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-166</td><td>סטרילי מסונן</td></tr><tr><td>200 ומיקרו; l קצות פיפטה</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-141</td><td>סטרילי מסונן</td></tr><tr><td>10 ומיקרו; l קצות פיפטה</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-158</td> צינורות חרוטיים <td>מסוננים</td></tr><tr><td>סטריליים 15 מ"ל</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229410</td><td>צינורות חרוטיים סטריליים</td></tr><tr><td>50 מ"ל</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229422</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה סטריליים 1.5 מ"ל</td><td>FisherBrand</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>סטרילי טריפן כחול</td><td>קורנינג Cellgro</td><td>25-900-CI</td><td>עקר</td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>24236-10</td><td>PDMS אלסטומר וסוכן ריפוי. משמש לביו-ריאקטור הפנימי שלנו.</td></tr><tr><td>קצף</td><td></td><td></td> PDMS <td>מיוצר בבית לשימוש בביו-ריאקטור הביתי שלנו.</td></tr><tr><td>קולגן בקר בריכוז גבוה סוג I</td><td>ביומטריצה מתקדמת</td><td>5133-A</td><td>FibriCol ~ 10 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>גורם גדילה מופחת מטריג'ל (קרום מרתף)</td> <td>קורנינג</td><td>354230</td><td>חומר קרום מרתף</td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>סיגמא</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>ביולוגיה מולקולרית כיתה</td><td>דיג</td> מים <td>BP2819-1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 10x&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2429</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek מערכת שקופיות קאמריות&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>177402</td><td></td></tr><tr><td>ביו-ריאקטור</td><td></td><td></td> בעל 8 <td>בארות תוצרת הבית.</td></tr><tr><td>קפיץ לאחור 304 נירוסטה&mdash; מצופה בפולימר PTFE</td><td>McMaster-Carr</td><td>1749T19</td><td>חוטי נירוסטה ליצירת מיקרו-ערוצים במערכת הביוריאקטור הפנימית שלנו. צינורות משאבת סיליקון בקוטר 0.016 אינץ'</td></tr><tr><td>BioPharm Plus מרפא פלטינה, L/S 14</td><td>Masterflex</td><td>EW-96440-14</td><td>לשימוש במערכת הביוריאקטור הפנימית שלנו. מזהה צינור: 1.6 מ"מ, גודל דוקרני צינור: 1/16 אינץ'.</td></tr><tr><td>ערכות צינורות 2 עצירות, PVC לא מתרחב, 1.52&nbsp; מזהה מ"מ</td><td>Cole-Parmer&nbsp;</td><td>EW-74906-36</td><td>לשימוש במערכת הביוריאקטור הפנימית שלנו (עם משאבה מיקרופריסטלית).&nbsp;</td></tr><tr><td>משאבה מיקרו פריסטלטית דיוק שישה ערוצים</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74906-04</td><td>לשימוש עם מערכת הביוריאקטור הפנימית שלנו</td></tr><tr><td>מזרקי טוברקולין</td><td>BD Medical</td><td>309625</td><td>26 מד 3/8 אינץ'. מחט; </td></tr><tr><td>מלקחיים סטריליים לניתוח רקמות</td><td>FisherBrand</td><td>13-812-36</td><td>5.5 אינץ'</td></tr><tr><td>מיני צינור מסובב</td><td>Boekel Scientific</td><td>260750</td><td>אפשרות ציוד לסיבוב פונדקאי. משמש עם קרוסלה לצינורות 50 מ"ל (מספר דגם 260753)</td></tr><tr><td>קרוסלת צינור 50 מ"ל</td><td>Boekel Scientific</td><td>260753</td><td>בשימוש עם מסובב צינור</td></tr><tr><td>מיני Bambino&nbsp; תנור היברידיזציה</td><td>Boekel Scientific</td><td>230301</td><td>אפשרות ציוד לסיבוב פונדקאי</td></tr><tr><td>ג'ל עיבוד דגימות HistoGel ג'ל</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>ג'ל לעיבוד דגימות המתואר בשלב 5.2</td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Andwin Scientific</td><td>4566</td><td>15 מ"מ x 15 מ"מ x 5 מ"מ</td></tr><tr><td>סימון רקמות Dye</td><td>Cancer Diagnostics, inc.&nbsp;</td><td>ניתן להשתמש ב-03000P</td><td>לסימון פונדקאות, &nbsp; המאפשר לכלול מספר דגימות בקלטת רקמה אחת&nbsp;</td></tr><tr><td>קלטות רקמות צירים&nbsp;</td><td>FisherBrand</td><td>22-272-416</td><td></td></tr><tr><td>פורמלין</td><td>פישר</td><td>23-245-685</td><td></td></tr><tr><td>GoldSeal שקופיות זכוכית רגילות</td><td>Thermo Scientific</td><td>3048-002</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>פישר</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>אתנול, 200 הוכחה (100%), USP</td><td>Decon Laboratories, Inc.</td><td>2805M</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Thermo Scientific ריצ'רד-אלן סיינטיפיק</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>מבהיר</td><td>Thermo Scientific ריצ'רד-אלן סיינטיפיק</td><td>7401</td><td></td></tr><tr><td>Bluing Solution</td><td>Thermo Scientific ריצ'רד-אלן סיינטיפיק</td><td>7301</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Thermo Scientific ריצ'רד-אלן סיינטיפיק</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>ציטוסיל XYL הרכבה מדיה</td><td>תרמו סיינטיפיק ריצ'רד-אלן סיינטיפיק</td><td>83124</td><td></td></tr><tr><td>כיסויים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-548-5G</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנה וניתוח של<em&gt; במבחנה</em&gt; שלושה שד ממדי המחליפים קרצינומה

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

תלת ממד תרבות (3D) היא שיטה רלוונטית יותר מבחינה פיזיולוגיה מודל התנהגות תאי במבחנה משני תרבות ממדים. קרצינומות, כולל קרצינומות השד, הן רקמות 3D מורכבים מורכב מתאי אפיתל סרטן ורכיבים סטרומה, כולל fibroblasts ו תאי מטריקס (ECM). עם זאת, רוב במבחנת מודלים של סרטן שד פולשני מורכבים רק תאי אפיתל סרטן, השמטת stroma, ולכן ארכיטקטורת 3D של גידול in vivo. המודלים של קרצינומה 3D מתאימים חשובים הבנה מדויקת של ביולוגית גידול, התנהגות, ואת תגובה לטיפול. עם זאת, משך תרבות ונפח של מודלי 3D הוא מוגבל על ידי הזמינות של חמצן וחומרים מזינים בתוך התרבות. בזאת, אנחנו מדגימים שיטה שבה שד קרצינומה תאי אפיתל פיברובלסטים סטרומה ישולבו ECM כדי ליצור פונדקאי סרטן שד 3D הכולל stroma ויכול להיות מתורבתת כמומבנה 3D מוצק או באמצעות מערכת bioreactor זלוף לספק חמצן וחומרים מזינים. בעקבות התקנת תקופת צמיחה ראשונית, פונדקאיים יכול לשמש לבדיקות סמים פרה-קליניות. לחלופין, המרכיבים הסלולר מטריצה ​​של פונדקאי יכולים להיות שונים כדי לענות על מגוון של שאלות ביולוגיות. לאחר בתרבות, פונדקאיות הם קבועים ומעובדים כדי פרפין, באופן דומה את הטיפול דגימות קרצינומה שד קלינית, להערכת הפרמטרים של עניין. ההערכה של פרמטר אחד כזה, את הצפיפות של תאים הנמצאים, מוסבר, שבו מערכות תוכנה ניתוח התמונה ImageJ ו CellProfiler מוחלים photomicrographs סעיפים היסטולוגית של פונדקאיות לכמת את מספר התאים בעלי הגרעין ליחידת שטח. זה יכול לשמש כאינדיקטור של שינוי מספר תאים לאורך זמן או שינוי מספר התא וכתוצאה מתנאים וטיפולים צמיחה שונים.

שני מחליפי 3D מוצקים perfused סרטן השד הוכנו כמתואר לעיל גדל במשך 7 ימים. בהמשך לכך, פונדקאיות שתוקנו, מעובד כדי פרפין, מחולק, ומוכתמים hematoxylin ו eosin, כפי שתואר לעיל. מספר תאי בעלי גרעין ליחידת שטח (שניהם 231 התאים CAF) של כל פונדקאי נמדד. כפי שניתן לראות בתרשים 12, photomicrographs נציג הסעיפים המוכתמים E H &amp; להפגין ריכוז גבוה של תאים הנמצאים את תחליפי perfused (איור 12 א) לעומת פונדקאיות המוצקות <strong...

אנו מדגימים שיטה ליצירת פונדקאיות תלת מימדיות לסרטן השד, שניתן לתרבית באמצעות מערכת ביו-ריאקטור זלוף כדי לספק חמצן וחומרים מזינים. לאחר הגדילה, הפונדקאיות מקובעות ומעובדות לפרפין להערכת פרמטרים מעניינים. מוסברת ההערכה של פרמטר אחד כזה, צפיפות התאים.

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

המטרה הכוללת של מערך נהלים זה היא לייצר תרביות תאים תלת-ממדיות שישמשו כמודלים חלופיים (surrogates) לסרטן השד in vitro, ולהציג שיטה למדידת גדילת תאים בחתכים היסטולוגיים של מודלים אלו. תרבית תאים תלת-ממדית היא שיטה רלוונטית יותר מבחינה פיזיולוגית למידול התנהגות תאים in vitro מאשר תרבית תאים דו-ממדית. באמצעות שינוי ההרכב התאי בתנאים ניסיוניים, ניתן להתאים את מערך נהלים זה למענה על מגוון שאלות ביולוגיות ולהערכת היעילות של תרופות פוטנציאליות.כדי לשלב את התאים בתוך ה-ECM, הוסיפו על קרח את התאים ואת ארבעת הרכיבים הקשורים הראשונים המופיעים בטבלה 1 בכתב היד המצורף, אל מבחנה של מיקרוצנטריפוגה בנפח של שני מיליליטר. לאחר מכן, ערבבו אותם בעדינות באמצעות פיפטינג, והימנעו מיצירת בועות. עקבו אחר רמת ה-pH באמצעות ה-phenol red שב-10XD MEM כדי לוודא שהתערובת מציגה גוון כתום-ורוד, המעיד על pH של שבע.אם התערובת נראית צהובה וה-pH נמוך מדי, הוסיפו לאט sodium bicarbonate בריכוז 7.5% טיפה אחר טיפה עד להשגת הצבע המתאים. זכרו להשאיר את התערובת על קרח, ולעבוד במהירות כדי למנוע פולימריזציה מוקדמת של ה-ECM. עבור תרביות תלת-ממדיות (3D) מוצקות, השאירו את ה-chamber slide על קרח כדי למנוע פולימריזציה מוקדמת של ה-ECM.העבירו באיטיות בעזרת פפיטה 100 µL מתערובת התאים וה-ECM לכל באער של שקופית בעלת שמונה תאים, ופפיטו את תערובת התאים וה-ECM מסביב לקצות הבאער כדי לסייע בפיזור טוב יותר של התערובת. לאחר מכן, דגרו את התחליפים בטמפרטורה של 37 °C וב-5% CO2 למשך 45 דקות כדי לאפשר פולימריזציה של ה-ECM. לאחר ארבעים וחמש דקות, הוסיפו 100 µL של מצע גידול לכל באער, ודגרו ב-37 °C וב-5% CO2 למשך כל משך הניסוי.יש להחליף את מצע הגידול מדי יומיים. מגבלה של תרביות בתלת-ממד (3D) היא שדיפוזיית החמצן והרכיבים התזונתיים אל תוך הנפח עשויה להיות בלתי מספקת לתמיכה בסיביות התאים. הוספת מערכת ביו-ריאקטור עשויה לסייע בהתגברות על מגבלה זו ולהגביר את הצמיחה.כדי לבצע פרפוזיה לתרביות תלת-ממדיות במערכת ביו-ריאקטור, הכין והרכב באופן סטרילי את חלקו של הביו-ריאקטור המשמש למארח את התחליפים. בתוך מנדף תרביות תאים, באמצעות מזרק עם מחט בכיול 26 gauge, הזרק את תערובת התאים וה-ECM לאזור בביו-ריאקטור הפרפוזיה המיועד להכיל תאים, ועבור במהירות לשלב הבא. כדי להבטיח פיזור אחיד יותר של התאים בתוך התחליפים, הנח את רכיב הביו-ריאקטור המארח את התחליפים לתוך מבחנה קונית של 50 milliliter.סובב את התחליפים באופן רציף במהירות של 18 rpm תוך דגירה בטמפרטורה של 37 degrees Celsius בתנור היברידיזציה in situ או באינקובטור למשך 45 דקות כדי לאפשר פולימריזציה של ה-ECM. לאחר הפולימריזציה והוספת המצע, חבר את מכלול הביוריאקטור למשאבה. התחל בפרפוזיה של המצע באינקובטור בטמפרטורה של 37 degrees Celsius וב-five percent CO2.המשך בפרפוזיה של המצע לאורך כל הניסוי, והחלף את מצע התרבית בהתאם לדרישות התכנון הניסויי הספציפי. בסיום הניסוי, עטוף את התחליפים בג'ל לעיבוד דגימות כדי לשמור על שלמותם במהלך העיבוד, ולהקל על החיתוך ההיסטולוגי. לשם כך, המס את הג'ל לעיבוד דגימות באמבט מים של 60 °C עד שיהיה מוכן לשימוש.לאחר מכן, טפטפו באמצעות פיפט כ-300 µL של ג'ל לעיבוד דגימות לתחתית של תבנית הקפאה (cryomold) מסומנת. בעזרת להב סקלפל ופינצטה, הוציאו בזהירות תחליף (surrogate) מהביוריאקטור או מתוך באער של למינאית עם שמונה באערים, והניחו אותו בתוך תבניות ההקפאה המכילות ג'ל לעיבוד דגימות. טפטפו באמצעות פיפט כ-300 µL נוספים של ג'ל לעיבוד דגימות כדי לכסות את התחליף בתבנית ההקפאה.לאחר מכן, הדגרינו את הדגימה בטמפרטורה של 4 °C למשך 30 דקות. ברגע שג'ל עיבוד הדגימה התמצק, הוציאו את ג'ל עיבוד הדגימה המכיל את התחליף (surrogate) מהתבנית להקפאה (cryomold) והניחו אותו בתוך קסטה לרקמה. אם יש להניח יותר מתחליף אחד באותה קסטה לרקמה, ניתן להשתמש בצבעים לסימון רקמות כדי להבדיל בין הדגימות לאחר הקיבוע והעיבוד.לאחר מכן, מקמי את קסטת הרקמה המכילה את התחליף בפורמלין ניטרלי מנוטרל בריכוז 10% למשך עשר עד שתים עשרה שעות בטמפרטורת החדר כדי לאפשר קיבוע מלא. לאחר הקיבוע, העבירי את קסטת הרקמה המכילה את התחליף ל-70% אתנול. התחליף המקובע מוכן כעת לעיבוד לפאראפין ולחיתוך היסטולוגי עוקב.כדי למדוד את צפיפות התאים ולהפיק תמונות מיקרוסקופיות של חתכים שנצבעו ב-H and E, פתחו קובץ תמונה של התחליף (surrogate). באמצעות כלי הפוליגון (Polygon tool) בתוכנת ImageJ ובעזרת גבולות ה-ECM כמדריך, התחמו את שטח התחליף על ידי גרירת העכבר ולחיצה ליצירת נקודות עיגון. לאחר ההתחמה, בחרו ב-Measure תחת לשונית Analyze.בשלב הבא, העלו ל-Cell Profiler את קבצי התמונה ששימשו למדידת שטח התחליף (surrogate area) על ידי גרירת קבצי התמונה לרשימת הקבצים. לאחר מכן, הקצו שם לכל תמונה שיובאה במודול Names and Types Import ובחרו את סוג התמונה. לאחר יצירת צינור הניתוח (analysis pipeline), הפעילו את מצב הבדיקה (Test Mode) ולחצו על Run ב-Cell Profiler.יש להעריך את האובייקטים המסוננים כדי לוודא שמרבית הגרעינים בתמונת הבדיקה זוהו כראוי, ושהפרמטרים האופטימליים נבחרו לזיהוי התאים. הגרעינים שנכללו יסומנו במעגל ירוק. לאחר מכן, שמרו את הפרויקט, צאו ממצב הבדיקה ולחצו על Analyze Images.מוצגת כאן תמונה מייצגת של חיתוך שנצבע ב-H and E מתוך תחליף שעבר פרפוזיה וגודל במשך שבעה ימים. וזוהי תמונה מייצגת של חיתוך שנצבע ב-H and E מתוך תחליף מוצק שגודל במשך שבעה ימים עם החלפת מצע כל יומיים. הצפיפות התאית נמוכה בהרבה בתחליפים המוצקים.גרף זה מציג השוואה של מספר התאים הגרעיניים הממוצע ליחידת שטח לאחר שבעה ימי גידול. תחליף מבושש (perfused) ותחליף מוצק. נתונים מספריים אלו תומכים ברמת התאיות המופיעה במיקרו-צילומים של החתכים שצבעו H and E.גרף זה מציג את ההשוואה של מדד סימון Ki-67, המהווה מדד לשגשוג תאים לאחר שבעה ימי גדילה של תחליפים מבוססי פרפוזיה ותחליפים מוצקים. נתונים אלו תומכים שוב בצמיחה רבה יותר בתחליפים מבוססי פרפוזיה. לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון היברידיזציה in situ והיסטוכימיה של חלבונים על חתכים היסטולוגיים של התחליפים כדי לענות על שאלות הנוגעות לביטוי RNA וחלבונים.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן ההכנה והעיבוד של תחליפי רקמה תלת-ממדיים במודל in vitro, וביצוע ניתוח של התחליפים על חתכים היסטולוגיים שנצבעו ב-H and E.

preparation-analysis-vitro-three-dimensional-breast-carcinoma

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

באמצעות PCR כמותי, אנו מדגימים כיצד המודל ומבוססת חומוס CAM ניתן להשתמש כדי לנתח את כמותית גרורות של תאים סרטניים אנושיים לאיברים רחוקים.

ניתוח כמותי של גרורות סרטן באמצעות דגם העובר העופות

לטווח ארוך של תרבות האדם סרטן השד דוגמאות וניתוח שלהם באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

בסרטון זה, אנו מתארים את השיטה לתרבית משותפת של גרעיני שורש גביים ותאים סרטניים על קרום כוריאואלנטואי אפרוח או CAM כדי לחקור פלישה פריעצבית.

Chick Chorioallantoic Membrane או CAM Tumor Model: שיטת In Ovo להדמיית פלישה פריעצבית של תאי גידול

מאמר זה מספק מתודולוגיות מפורטות לשימוש במבחנים תלת ממדי (3D) לכמת פלישת תאי סרטן השד. באופן ספציפי, אנו דנים בהליכים הנדרשים להקמת מבחני כאלה, כימות, וניתוח נתונים, וכן שיטות לבדיקת ההפסד של שלמות קרום המתרחש כאשר תאים לפלוש.

כימות של הפולשנות תאי סרטן השד תוך שימוש במודל תלת ממדים (3D)

פלישה לרקמות נורמליות שמסביב היא מאפיין מגדיר של גידולים ממאירים. אנו מספקים כאן מבחן מיקרו-צלחת פשוט ואוטומטי למחצה של פלישה לביומטריצה תלת מימדית טבעית שהודגמה במספר מודלים של סרטן אנושי מתקדם.

Assay (3D) תלת ממדי גידול ספרואיד הפלישה

כאן, אנו מתארים שיטה תלת מימדי התרבות לנתח המורפולוגיה של ראשי תאים סרטניים בשד, כמו גם כדי לחקור את יחסי הגומלין ישירים ועקיפים ומונוציטים לבין התוצאות כגון קולגן השפלה, גיוס תאים חיסוניים, תא הפלישה, קידום של דלקת הקשורים לסרטן.

ניתוח התקשורת בין ומונוציטים ו תאים סרטניים בשד ראשי במטריצה חוץ-תאית לחלץ (ECME)-מבוסס מערכת תלת מימדי

עבודה זו מוגדרות מראש פרוטוקול מתקדם כדי להעריך במדויק את טעינת הגידול על ידי זיהוי של חלבון פלורסנט ירוק אותות biלומינסנציה, כמו גם שילוב של טכניקת גילוי מולקולרי כמותי.

לומדת משולשת סרטן השד שלילי באמצעות אורתובנושא שד סרטן השד מודל

תרבויות תלת ממדיות של החולה BMPC דגימות ו xenografts של סרטן הערמונית גרורתי העצם לשמור על טרוגניות תפקודית של גידולים המקורי שלהם וכתוצאה מכך ציסטות, spheroids ו מורכבים, גידול כמו אורגנואידים. כתב יד זה מספק אסטרטגיה מיטוב ופרוטוקול לתרבות תלת-ממדית של מטופלים הטרוגנית דגימות נגזרות והניתוח שלהם באמצעות IFC.

הקמה וניתוח של תלת מימדי (3D) אורגנואידים נגזר החולה סרטן הערמונית העצם גרורות דגימות ושתלי Xenografts להם

מאמר זה מפרט את השלבים הדרושים כדי לזרוע שורות תאי נוירובלסטומה על פיגומים תלת-ממדיים מבוססי קולגן שתוארו קודם לכן, לשמור על גדילת התאים למסגרת זמן שנקבעה מראש, ולאחזר פיגומים עבור מספר ניתוחים של צמיחת תאים והתנהגות תאים ויישומים במורד הזרם, הניתנים להתאמה כדי לספק מגוון מטרות ניסוי.

מודל ביומימטי תלת מימדי במבחנה של נוירובלסטומה באמצעות פיגומים מבוססי קולגן

הצלבה בין תאי אפיתל חלביים לתאי אנדותל תורמת חשובה להתקדמות סרטן השד, לצמיחת הגידול ולגרורות. במחקר זה, כדוריות נעשו מתאי סרטן השד יחד עם תאי אנדותל כלי דם ו/או לימפתיים ולהדגים את ישימותם כמערכת במבחנה לחקר סרטן השד.

כדורי תא אפיתל ואנדותל של חלבי כמודל הפריה תפקודי פוטנציאלי לחקר סרטן השד

פרוטוקול זה מתאר שיטות לתרבות, מניפולציה וניתוח CAFs של עכברים, כולל מבחנים פונקציונליים במבחנה/in vivo , טרנסקריפטומיקה וניתוח חישובי. יתר על כן, הוא מתאר פלטפורמה מבוססת אינטרנט שפותחה כדי לנתח את הטרנסקריפטומים הזמינים לציבור של רכיבי סטרומה ואפיתל של לכידת לייזר מאוסף של גידולי סרטן שד אנושיים.

פיברובלסטים הקשורים לסרטן מגידולי חלב של עכברים ככלים למחקרים מולקולריים וחישוביים

למדו כיצד ליצור תחליפי תלת-ממד של סרטן השד במבחנה ולנתח צפיפות תאים בחתכים היסטולוגיים באמצעות ביוריאקטור זרימה. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות תרפיות ומחקר התנהגות תאית בסביבה פיזיולוגית רלוונטית יותר.

הכנה וניתוח של

גלה סרטונים נוספים