Denervation כירורגי עורית: שיטה לבדיקת הדרישה עצבה בעכברי מודל של מחלת עור

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבחון את השפעת העצבים על עור תקין ופתולוגי. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לענות על שאלות מפתח בביולוגיה רגילה של העור, כגון האם עצבים עוריים משפיעים על הומאוסטזיס ומחלות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן להשוות דגימות עור שלמות ומנותקות מאותה חיה.

הדגמה חזותית של טכניקה זו היא קריטית מכיוון שעצבים יכולים להיות קשים לזיהוי והסרה עם נזק מינימלי לרקמות שמסביב. ראשית, יש להרדים את העכבר ולבדוק שהוא הגיע למישור ההרגעה הנכון באמצעות צביטה בבוהן. כמו כן, ודא שהעכבר מפגין נשימה ופעימות לב תקינות.

כעת הניחו את החיה על משטח חימום באזור ניתוח אספטי. בעזרת קוצץ חשמלי, הסר בזהירות את השיער מהצד הגבי בו תילקח הביופסיה. לאחר מכן נגב את האזור המגולח באמצעות מגבוני Betadyne ואלכוהול.

ודא שכל גזירי השיער מוסרים מהאתר. כעת מתאר את אתר הביופסיה באמצעות טוש שחור. כדי להשיג חתכים אורכיים של זקיקי שיער, הקצה הארוך יותר של הביופסיה צריך לרוץ בכיוון קדמי לאחור parasetidal לקו האמצע הגבי.

בעזרת אזמל, בצע כריתה בעובי מלא מבלי לפגוע בפאשיה השרירית הבסיסית. הדימום הוא בדרך כלל מינימלי. דגימת הביופסיה צריכה לכלול את האפידרמיס, הדרמיס, השומן התת עורי והפניקולוס קרנוסוס.

משטחים את דגימת העור שנכרתה על מגבת נייר יבשה, כשצד הדרמיס כלפי מטה. חתוך את מגבת הנייר העודפת, ואחסן את הדגימה על TBS קר עד שעה אם יש צורך לאסוף דגימות אחרות. בחזרה לעכבר, תפר את מקום הביופסיה באמצעות 60 תפרי ניילון במרחק של כשלושה מילימטרים זה מזה.

לאחר מכן עקוב אחר העכבר בכלוב התאוששות עד שהוא חוזר להכרה. השתמש במשככי כאבים בהתאם לטיפול מוסדי ייעודי בבעלי חיים, ופעל לפי ההנחיות שלהם אם העכבר נראה במצוקה. תוך שבעה עד 10 ימים מהניתוח, הסר את התפרים.

המשך בעיבוד הביופסיות להיסטולוגיה או צביעה שלמה. להרדים את בעל החיים, לגלח את כל עור הגב ולנקות את האזור בדומה להליך הביופסיה. כעת בצע חתך באמצעות אזמל סטרילי לאורך קו האמצע הגבי מבסיס הצוואר ועד כחצי סנטימטר מעל הזנב.

בעזרת מלקחיים קהים סטריליים, משוך בעדינות את העור בצד שמאל הרחק מהצד כדי לדמיין את הרקמה הבסיסית מכריות השומן של עצם השכמה ליד הצוואר ועד ממש מעל הגפה האחורית. כעת זהה את העצב העורי הגבי תחת מיקרוסקופ אור מנתח. אלה מופיעים כגדילים לבנים העוברים בזנב דרך הפאשיה השקופה של דופן תא המטען לפני שהם מבצעים כיפופים חדים ונכנסים לרקמת החיבור הרופפת מתחת לעור.

לאחר מכן, באמצעות מלקחיים עדינים במיוחד, הסר את העצב אך ורק מהצד השמאלי של החיה הממוקם באתרים אנטומיים T3 עד T12 על ידי מריטה מהמקום שבו הקטעים שלהם מתכופפים בדופן תא המטען לאתרי הכניסה שלהם לעור. כוונו את המלקחיים אנכית ותפסו את העצבים כחצי סנטימטר מתחת לאתרי העיקול שלהם. לאחר התפיסה, משוך כלפי מעלה כדי לגרום לעצבים להימתח ולהיפרד מהרקמה שמסביב כדי להסיר אותם.

הימנע מפגיעה בכלי הדם הסמוכים. הקפד לשמור על לחות הרקמה לאורך כל ההליך על ידי מריחה מעת לעת של טיפות של 0.9% תמיסת מלח דוממת. המשך להסיר את כל העצבים המשתרעים מדופן תא המטען לעור, אך אל תשבש את העצבים בתוך הפאשיה הצפופה של דופן תא המטען.

לאחר מכן, הסר את כל העצבים מדש העור החשוף. סיבים אלה מהווים את הענפים הדיסטליים של העצב העורי הגבי ומופיעים כגדילים מסועפים לבנים הממוקמים באופן ספורדי בתוך רקמת החיבור בצד העורי של דש העור. כדי להסיר את הענפים העדינים הללו, מקם את המלקחיים בערך במקביל למשטח העור, אחוז בעצב ומרוט כלפי מעלה.

הסר את כל העצבים הגלויים בצורה זו. אין לנקב את כלי הדם והעור. במהלך שלב זה, חשוב להימנע מקרע בכלי הדם הסמוכים.

אם אתה מוצא עצב עם כלי דם סמוך, עקוב אחריו בסופו של דבר לאזור שבו אין כלי סמוך והסר אותו על ידי מריטה. כעת, שחרר את העור בצד ימין של חתך קו האמצע הגבי, אך אל תסיר עצבים. זה ישמש כבקרה אופרטיבית מזויפת נגדית.

לבסוף, תפר את החיה ונטר לאחר הניתוח כמו קודם. מאוחר יותר, כדי לאשר את אובדן העצבים היציב, שבועות לאחר הניתוח, דקרו בעדינות את האזור המנותק באמצעות מחט היפודרמית סטרילית. שימו לב אם החיה מגיבה, בדרך כלל על ידי רעידות או הפניית ראש.

אם אזור העור עבר ניתוק עצבים יציב, החיה תפגין תגובה מועטה או ללא תגובה. קצור ביופסיות עור מאזור חוסר התגובה והצד הנגדי של הדמה לדגימות ניסוי וביקורת תואמות. מהביופסיות, חשוב לדגום חתכים היסטולוגיים מרובים כדי לזהות הבדלים פוטנציאליים בשפע כיפת המגע או במורפולוגיה בין הדגימות הדמה לדגימות העצבים.

זן העכבר glebe one cree ERT2 מאפשר מיקוד של רקומבינציה גנטית המושרה על ידי טמוקסיפן לאזורים בעור המציגים פעילות גבוהה של מסלול קיפוד כגון אפיתל כיפת מגע. עכברים אלה הוצלבו כדי לגרום לעכברים מדווחים של abolaxi לדמיין את אפיתל כיפת המגע. צמתים חיוניים לשמירה על כיפות מגע רגילות כמו גם על תאי מרקל הקשורים אליהם.

זה מודגם בניסוי על ידי אובדן הדרגתי של מורפולוגיה נורמלית של כיפת מגע כמו גם אובדן של קרטין שמונה תאים שהושקעו בעקבות ניתוק עצבים. עצבים חיוניים גם לקידום איתות קיפוד בכיפת המגע כפי שמנוטר על ידי ביטויי Glebe one cree ERE2, וצביעה קולקטיבית של בטא ביתית מעור דמה ועור מנותק עצבים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לכרות בניתוח עצבים עוריים גביים על מנת לבדוק אם עצבים אלה מעורבים בתפקוד עור תקין או אם הם מווסתים מחלה.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו באופן שגרתי ואמין עם לחץ מינימלי על החיה. בעקבות הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות כגון צביעת אמינו פלואורסצנטי כדי לאשר אם העצבים מוסרים לחלוטין מהעור, והאם ביטוי הגנים מושפע.