במודל עכבר של רשתית איסכמיה reperfusion נזק ע"י העלאת רמת הלחץ התוך עיני

המטרה הכוללת של טכניקה זו, היא לספק מודל ניסיוני של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית, והשלכותיה הפתולוגיות. שיטה זו משמשת בדרך כלל לחקירת המנגנונים העומדים בבסיס איסכמיה-רפרפוזיה ברשתית, כמו גם להערכת גישות טיפוליות פוטנציאליות לטיפול בפתולוגיות נלוות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יוצרת פגיעה ממוקדת מאוד במבני העין, תוך גרימת נזק מינימלי לרקמות הסובבות.

התועלת של טכניקה זו משתרעת לקראת הבנה ושלושה חודשים של ביטויים מרובים של פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה ברשתית, כולל: דלקת, מתח חמצוני ותפקוד לקוי של הבהייה ביחידה הנוירו-וסקולרית של הרשתית. הדגמת וידאו של שיטה זו היא קריטית מכיוון שהטכניקות הכירורגיות למיקום צינורית עשויות להיות קשות לשחזור ללא מדריך חזותי. לפני תחילת ההליך, יש לחמם כלוב ריק על השולחן.

לאחר מכן הכנס את הקצה החד של צינור אתר ה-Y המנוקב מראש לבקבוק של 0.1% נתרן הפרין, ותלה את החלק התחתון של נתרן הפרין מהארכת קוטב IV. פתח בנקישה את מכסה מסנן האוויר על הצינור. לאחר מכן הרם את בקבוק הנתרן של הפרין ל-163 סנטימטרים ממשטח השולחן לשיא טפטוף הנתרן הפרין, כדי לייצר לחץ זרימת נתרן של הפרין של 120 מיליליטר כספית.

פתח את צינור אתר ה-Y המנוקב מראש, כדי לאפשר לנתרן הפרין למלא את הצינור, וחבר את צינור אתר ה-Y המנוקב מראש לסעפת חמשת השסתומים. לאחר מכן, באמצעות אביזרי צינור זכר Luer לזכר Luer, חבר מחטים בגודל 30 אינץ' בגודל חצי אינץ' לסעפת חמש היציאות. הכנס כל אחת מהמחטים לקטע עשרה אינץ' משלה של צינורות בגודל 30

לאחר מכן, בעזרת המוסטטים, שברו קצות מחט חדשים בגודל 30 אינץ' והכנסו את הקצוות הקהים שלהם לקצוות הפתוחים של צינור ה-30. לאחר מכן, השתמש בסרט כדי לסדר את צינורות המחט כך שהצינורות המחוברים ליציאות הפנימיות ממוקמים על גבי הצינורות המחוברים ליציאות החיצוניות כדי למנוע הסתבכות של הצינור במהלך צינורית החדר הקדמי. כעת, הפעל את זרימת הנתרן של 0.1% הפרין לסעפת חמשת השסתומים ולכל יציאה בודדת למשך שתיים-שלוש דקות כדי להסיר בועות אוויר.

לאחר מכן, כבה את כל היציאות בסעפת חמשת השסתומים. כדי לבצע את הקנולציה, לאחר מתן ההרדמה, הכניסו את כל העכברים לכלוב החם שעל שולחן הניתוחים, ואשרו את השגת ההרדמה העמוקה על ידי חוסר תגובה לצביטה בבוהן לאחר חמש עד עשר דקות. לאחר מכן יש לתת טיפה אחת של טרופיקמיד להרחבת אישונים, וטיפה אחת של פרופרקאין להרדמה מקומית לתוך העיניים של כל אחת מהחיות, ולסדר את העכברים לפי סדר ההרדמה, כך שהעכבר הראשון שמורדם יהיה העכבר הראשון שיעבור קנול.

בזמן ההמתנה לטיפות העיניים שייכנסו לתוקף, הכינו פיסות סרט ישרות בגודל ארבעה סנטימטרים, משכו בחוזקה את הסרט לפני הקריעה, והניחו בצד פיסת סרט אחת לכל חיה. שימו לב שאי משיכה בחוזקה בקלטת, תגרום לסלסול הקלטת. כאשר העכבר הראשון מוכן, הניחו את החיה מתחת למיקרוסקופ כירורגי.

לאחר מכן, הפעל את יציאת הנתרן הראשונה של 0.1% הפרין בסעפת חמשת השסתומים, והשתמש בזוג מלקחיים כדי להניע בעדינות עין אחת. לאחר מכן, הכנס את מחט הצינורית בגודל 30 לתוך החדר הקדמי בערך באמצע הדרך בין הסיבים האזוריים לקודקוד הקרנית. הקפדה להימנע מחדירה לקונריאה בפעם השנייה.

שימו לב שנעשה שימוש בתנועת פיתול עדינה כדי להחדיר את הצינורית עמוק לתוך החדר הקדמי. כעת, לחץ על הצינור בגודל 30 כנגד השולחן כדי למזער כל תנועה של הצינורית המוכנסת תוך כדי הושטת יד לפיסת סרט, והשתמש בסרט כדי להדק את הצינור לשולחן. לאחר אבטחת הצינור, רשום את שעת תחילת הניתוח.

השתמש במיקרוסקופ כדי לוודא שאין דליפה, ושעין האיסכמיה-רפרפוזיה גדולה יותר מהעין הנגדית, כדי לבסס נוכחות של התנפחות העין. יש למרוח היפרומלוז על שתי העיניים כל 30 דקות, עד לסיום הניסוי כדי לשמן את הקרנית, ולאטום כל דליפות מיקרו. אם בעל חיים מתעורר במהלך ההליך, הרם את הזנב ותן בוסטר קטמין תוך צפק.

90 דקות לאחר קנולציה של החיה הראשונה, משוך בעדינות את הצינורית מהחדר הקדמי, ושמן את שתי העיניים בג'לי סיכה. כאשר מסירים את הצינוריות הבאות, הנח כל עכבר בחזרה לכלוב שעל שולחן הניתוחים, עד שבעלי החיים יתאוששו לחלוטין. לאחר הסרת כל הצינוריות, יש לחטא אותן במגבוני אלכוהול.

לאחר מכן השתמש במזרק של 60 מיליליטר מלא באוויר כדי להוציא את נתרן הפרין מסעפת חמשת השסתומים, מחטי 30 מד, צינורות 30 מד וצינוריות. לאחר מכן, שטפו את כל המכשירים במזרק של 60 מיליליטר מלא במים מזוקקים. לבסוף, הוציאו את המים המזוקקים מכל החומרים עם 60 מיליליטר אוויר, ואחסנו את הציוד המחוטא והשטוף לשימוש מאוחר יותר.

תיוג חיסוני של NeuN של גרעיני עצב חושף אובדן משמעותי של תאי נורונל, בעקבות עלבון איסכמיה-רפרפוזיה, על ידי הדמיה מיקרוסקופית קונפוקלית, שבעה ימים לאחר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה. ואכן, כימות ידני של תאי ה-NeuN החיוביים בביקורת, ועיניים חוזרות של איסכמיה, מדגים ירידה בספירת הנוירונים בשכבת תאי הגנגליון לאחר הפציעה, מה שמעיד על נוכחות של מוות תאים המושרה על ידי איסכמיה-רפרפוזיה. אמפליטודות נמוכות יותר של גל a וגל b שתועדו על ידי אלקטרורטינוגרפיה מצביעות גם על התרחשות של ליקויים הנגרמים על ידי איסכמיה-רפרפוזיה בתפקוד עצבי הרשתית בהשוואה לעיניים ביקורת, שאינן פגועות.

לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו על עשרה בעלי חיים תוך כחמש שעות, כולל השעתיים האחרונות שהושקעו בהמתנה לעכברים להתאושש מההרדמה. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לשמור על הרדמה עמוקה. כהרגעה יעילה תמנע תזוזה של הצינורית על ידי תנועת בעלי חיים.

בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כמו אלקטרורטינוגרפיה כדי לענות על שאלות נוספות על תפקוד הרשתית. טכניקה זו אפשרה לחוקרים ברפואת עיניים, מדעי המוח וביולוגיה של כלי הדם לחקור פתוגנזה נוירו-וסקולרית ברשתית, והתערבות טיפולית במכרסמים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד ליצור פגיעה ממוקדת ברשתית, באמצעות קנולציה של החדר הקדמי של העין.

אל תשכח, שעבודה עם מכשירים כירורגיים עלולה להיות מסוכנת ביותר, וכי תמיד יש לנקוט באמצעי זהירות, כגון שימוש בסילוק חדים יעיל, בעת ביצוע הליך זה.