14 בפברואר 2017
פרוטוקול זה מספק תיאור מפורט של הגישה האקו-קרדיוגרפית לפנוטיפ מקיף של תפקוד הלב ומסתמי הלב בעכברים.
המטרה הכוללת של פרוטוקול הד זה היא להראות שיטות וגישות המשמשות להדמיית תפקוד מסתמי הלב במכרסמים. השיטות שנציג בפניכם היום יכולות לענות על שאלות מפתח בתחום מחלות הלב, עם דגש ספציפי על הערכת הלב כיחידה משולבת בתנאים של מחלת מסתמי לב. ההשלכות של גישה זו הן עמוקות לתחום מחלות מסתמי הלב מכיוון שהערכה אקו לב מקיפה של הלב לא רק תאפשר זיהוי של תפקוד לקוי של מסתמי הלב במסתמי לב מרובים, אלא גם תאפשר לחוקרים להבין את יחסי הגומלין המורכבים בין תפקוד הלב למדדים שונים של תפקוד מסתמי הלב.
למרות שניתן למנף שיטה זו כדי לאפיין מודלים של בעלי חיים שבהם מחלת מסתמי הלב היא הפגם העיקרי שלנו, ניתן ליישם אותה גם על מערכות אחרות שבהן תפקוד לקוי של מסתמי הלב עשוי להופיע משני לעלבונות אחרים כגון אי ספיקת לב, או מפרצת אבי העורקים החזי. לפיכך, המלצתנו היא כי יש לבצע פנוטיפ מקיף של מסתמי הלב והלב באופן שגרתי ברוב מחקרי המחקר. לראשונה עלה לנו הרעיון לצלם את הגישה שלנו לפנוטיפ מקיף של מסתמי הלב והלב, לאחר שהשתתפנו במספר פגישות שבהן הייתה שונות עמוקה בשיטות ובפרוטוקולים המשמשים להערכת תפקוד מסתמי הלב.
אנו מקווים שכתב היד הזה והסרטון הנלווה יעוררו דיון בשטח לגבי המתודולוגיות והסטנדרטים הטובים ביותר שיש לעקוב אחריהם, מה שבסופו של דבר מתיישב עם היוזמות האחרונות של המכונים הלאומיים לבריאות לשיפור הקפדנות והשחזור של מחקרים מחקריים. היתרון העיקרי של אקו לב הוא בכך שהוא מסוגל להעריך באופן לא פולשני את המורפולוגיה והתפקוד של הלב בזמן אמת. זה קל לביצוע, וניתן לבצע אותו באופן סדרתי.
לפיכך, הוא אידיאלי ביותר במחקרי מעקב סדרתיים. באופן כללי, אנשים חדשים בהדמיית לב ומסתמי לב יתקשו עקב אתגרים לוגיסטיים הקשורים למתן וטיטרציה של הרדמה, כמו גם האתגרים הטכניים הקשורים לחלונות האנטומיים הקטנים מאוד שניתן להשתמש בהם לאקו לב והצורך לזהות במדויק מבני לב וכיווני בדיקה בזמן ההדמיה. אנו מקווים שהדגמה ויזואלית של הגישה שלנו תאיץ את הקצב שבו חוקרים יכולים ללמוד לבצע אקו לב בעכברים, ובסופו של דבר תשמש פלטפורמה לדיון בשיטות עבודה מומלצות להדמיה של בעלי חיים קטנים.
כדי להתחיל, הפעל את מכונת האולטרסאונד המצוידת במתמר אולטרסאונד בתדר גבוה. הזן את תעודת הזהות של בעל החיים למדידה, יחד עם תאריך, שעה וכל מידע רלוונטי אחר. מחממים את הפלטפורמה ל-37 מעלות צלזיוס, ואז מרימים בעדינות את העכבר בזנבו, ומחזיקים בחוזקה את החיה בעורף.
הנח את האף של החיה לתוך חרוט האף והתחל הרדמה כמתואר בפרוטוקול הטקסט הנלווה. לאחר ההרדמה, הניחו את החיה במהירות ובדייקנות על הרציף במצב שכיבה, וודאו שכפות הרגליים הקדמיות והאחוריות מונחות על חיישני האק"ג של הפלטפורמה. השתמש בנייר דבק כדי לאבטח את החיה על כל ארבעת הגפיים, כדי לייצב את הראש במנגנון חרוט האף ולייצב את הזנב.
לאחר מכן, בדוק את הדופק באמצעות חיישני האק"ג בפלטפורמה, או באמצעות מכשיר חיצוני. ודא שהדופק הבסיסי הוא בין 600 ל-700 פעימות לדקה. עקוב אחר הדופק וודא שהוא לא ייפול מתחת ל -450 פעימות לדקה בשום פנים ואופן.
בנוסף, עקוב אחר טמפרטורת הגוף באמצעות מדחום רקטלי ושמור על הטמפרטורה בין 36.5 מעלות צלזיוס ל-38 מעלות צלזיוס. כל עוד החיוניים יציבים, השתמש בקוצץ חשמלי המיועד לשימוש עם שיער דק כדי לגלח את השיער מחזה העכבר. לאחר מכן, קחו מגבת נייר לחה ונגבו את החזה כדי להסיר את השערות שנותרו.
כשהחיה מהודקת היטב על הרציף, והראש פונה הצידה, הטה את השולחן 15 עד 20 מעלות שמאלה כדי לקרב את הלב לדופן החזה. לאחר מכן, מרחו כמות נדיבה של ג'ל אולטרסאונד על המתמר או ישירות על החזה של החיה. מקם את המתמר בצורה פרסטרנית כ-90 מעלות בניצב עם הציר הארוך של הלב כך שסמן אינדקס התמונה של המתמר מצביע לאחור.
בעוד במצב DB שניים, החלק את ה-defilade של המתמר עד ששסתום אבי העורקים נראה לאורך הציר הקצר. לאחר מכן, סובב את המתמר בכיוון השעון עד שסמן אינדקס התמונה מצביע על cadad. זוהי תצוגת הציר הארוך הפרסטרנלי.
התבונן במסלול אבי העורקים, מסתם אבי העורקים, דרכי היציאה של החדר השמאלי, המסתם המיטרלי, הפרוזדור השמאלי וחלק ממערכת היציאה של החדר הימני בתצוגת התמונה. מדוד את הממד האחורי הפרוזדורי הגדול ביותר של אבי העורקים באמצעות הקליפר האלקטרוני המשויך לכלי המדידה המוטבע במכונה. לאחר מכן, צמצם את רוחב התמונה כך שרק שסתום אבי העורקים יהיה בתצוגת התמונה על ידי התאמת כפתור רוחב התמונה בלוח הבקרה.
מקם את קו החקירה של מצב M במקום בו הוא מצטלב עם קצות המסתם האאורטלי כדי להעריך במדויק את הפרדת המסתם האאורטלי. בתצוגת מצב M של שסתום אבי העורקים, מדוד את מרחק ההפרדה באמצעות הקליפר האלקטרוני. בעודך בתצוגת הציר הארוך של שסתום אבי העורקים, לחץ על מקש הבקרה של דופלר הצבע בלוח הבקרה כדי להחיל דופלר צבע על אזור המסתם האאורטלי.
לאחר מכן, לחץ על מקש בקרת הדופלר שלאחר הגל. בעזרת כדור המסלול, הנח את נפח הדגימה שלאחר הגל באבי העורקים העולה הפרוקסימלי ממש מעל שסתום אבי העורקים, וודא שהזווית בין קרן האולטרסאונד לזרימת הדם נמוכה מ-60 מעלות על ידי הטיית הפלטפורמה, או המתמר. לאחר מכן, מדוד את מהירות השיא מהתצוגה הספקטרלית באמצעות הקליפרים האלקטרוניים.
התחל בהצבת המתמר במצב אפיקלי במצב B ומיקום המתמר כך שהוא יהיה בזווית לכיוון ראש העכבר. התבונן בחדר הימני, החדר השמאלי, הפרוזדור הימני והאטריום השמאלי, בתצוגת התמונה. מנקודת המבט של ארבעת החדרים, הבא את המסתם המיטרלי למיקוד על ידי הפחתת רוחב התמונה.
לאחר מכן, הנח את סמן מצב M על פני המסתם המיטרלי כדי להעריך את עובי העלונים. באמצעות תצוגת ארבעת החדרים האפיקלית, החל דופלר צבעוני כדי לדמות את הזרימה מהאטריום השמאלי דרך המסתם המיטרלי במהלך הדיאסטולה. התבונן בזרימה על פני המסתם המיטרלי המקודד באדום.
מתצוגת ציר הריאה האפיקלי, הטה או כוון את קצה המתמר באמצעות תנועת נדנדה כך שהחדר הימני יהיה במרכז תצוגת התמונה. צמצם את רוחב התמונה כך שרק החדר הימני יהיה גלוי בתצוגת התמונה. לאחר מכן, מרחו דופלר צבע באזור המסתם התלת-שפתי.
לאחר מכן, העבר את המתמר למצב ציר ארוך פרסטרנלי שונה בגובה המסתם האאורטלי. לאחר מכן, הטה את המתמר מעט כלפי מעלה כדי לקבל תצוגת ציר קצרה של המסתם הריאתי. בתצוגה זו, החל הדמיית מצב M כדי להעריך את מרחק ההפרדה של המסתם הריאתי.
לאחר מכן, מרחו דופלר צבע באזור המסתם הריאתי כדי להעריך רגורגיטציה והיצרות מסתמים. בשני מצבי DB, הנח את המתמר במצב הציר הקצר הפרסטרנלי בגובה השרירים הפפילריים כדי לקבל מבט קצר על הציר של החדר השמאלי. ממבט זה, לחץ על כפתור מצב M הממוקם בלוח הבקרה.
באמצעות כדור המסלול, מקם את סמן מצב M במרכז חלל החדר השמאלי בגובה השרירים הפפילריים, וקבל תמונות במצב M. לאחר מכן, מדוד את ממד חלל החדר השמאלי בדיאסטולה הסופית שבה המרחק בין הקיר הפנימי לקיר האחורי הוא הגדול ביותר, וסיסטולה קצה שבה התנועה פנימה של הקירות הפנימיים והאחוריים היא מקסימלית. לאחר מכן, העבירו את המתמר לחלון האפיקלי, מרחו צבע על המסתם המיטרלי והניחו את נפח הדגימה בקצות עלוני המסתם המיטרלי.
מדוד את מהירות הזרימה המיטרלית השיא מהתצוגה הספקטרלית של מהירויות דופלר גלי דופק על פני המסתם המיטרלי. כאשר נפח הדגימה ממוקם בין זרימת החדר השמאלי ליציאה, ולא אותות הסגירה והפתיחה של המסתם המיטרלי ואבי העורקים. מדוד את זמן ההרפיה האיזובולומי, זמן ההתכווצות האיזובולומית וזמן פליטת החדר השמאלי.
לאחר מכן, בצע הדמיית דופלר רקמות של הטבעת המיטרלית בתצוגת הציר הארוך האפיקלי. לחץ על מקש הבקרה TGI והנח את עוצמת הקול לדוגמה בהיבט המדיאלי של הטבעת המיטרלית. בסיום, הסר את כל ג'ל האולטרסאונד העודף מהעכבר.
הסר בעדינות את הסרט המאבטח את בעל החיים וכבה את ההרדמה. הניחו את החיה על מגבת נייר סופגת והתבוננו בבעל החיים עד להשגת שכיבה על החזה. מוצגת כאן הערכה של תפקוד המסתם האאורטלי בעכבר רגיל לעומת תפקוד המסתם האאורטלי בעכבר עם מחלת מסתם אבי העורקים ההסתיידות.
בעכבר עם שסתומים מסויידים, התלוליות מעובות ויש להן אקוגניות מוגברת מה שמביא לפתיחה מוגבלת במהלך הסיסטולה. מהחלון האפיקלי מוצג מבט צירי ארוך של המסתם המיטרלי. ניתן למדוד את עובי העלון המיטרלי באמצעות קו החקירה במצב M.
מדידת עובי המסתם המיטרלי יכולה להיות מאתגרת ביותר בהתחשב בעלונים הדקים, האקוגניים והנעים במהירות של המסתם המיטרלי הרגיל. דופלר הצבע המוצג בתצוגת ציר ארוך שונה זו של המסתם המיטרלי מראה סילון צבע פסיפס במסתם המיטרלי במהלך הסיסטולה. הצבע הכחול הוא עדות לרגורגיטציה של המסתם המיטרלי.
מהחלון הפרסטרנלי מתקבלות תצוגות ציר קצרות וארוכות של המסתם הריאתי. בתמונה זו, קו החקירה של מצב M מוחל על פני המסתם הריאתי, וניתן למדוד את מרחק ההפרדה של השסתום מתצוגה זו. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 15 עד 20 דקות אם היא מבוצעת כראוי.
בזמן ניסיון הליך זה, חשוב שיהיה לך ידע בסיסי באנטומיה ופיזיולוגיה של הלב, ידע מעשי בעקרונות ובטרמינולוגיה של סונוגרפיה, וניסיון באולטרסאונד לב כדי לאפשר הערכה מדויקת ויעילה בזמן של תפקוד הלב במכרסמים. לאחר צפייה בסרטון זה אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע אולטרסאונד לב במכרסמים על ידי קבלת תמונות ממטוסי הדמיה שונים, ומדידת פרמטרים של אקו דופלר המתארים כראוי את תפקוד הלב ומסתמי הלב.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
פרוטוקול זה מספק תיאור מפורט של הגישה האקו-קרדיוגרפית לצורך פנוטיפיקה מקיפה של תפקודי הלב ומסתומי הלב בעכברים. השיטות המוצגות יכולות לענות על שאלות מפתח במחלות לב, ובמיוחד בהערכת תפקוד מסתומי הלב.
פנוטיפיקה אקו-קרדיוגרפית סטנדרטית בעכברים מאפשרת זיהוי מהימן של תפקוד לקוי של המסתמים ושל הגומלין בין המסתמים ללב, ובכך נותנת מענה לאתגרי השחזור במחקר קרדיווסקולרי פרה-קליני. גישה זו תומכת בתיקוף יעדים (target validation) על ידי אספקת מדדים תפקודיים כמותיים ואורכיים במערכות הרלוונטיות למחלה, ובכך מפחיתה עמימות מכניסטית בשלבי הגילוי המוקדמים. יישום שגרתי של שיטה זו מקל על סריקה פנוטיפית של מודלים שונו גנטית, ובכך משפר את רמת הביטחון החזויה עבור היפותזות טיפוליות.
השיטה משתלבת ברצף הגילוי, החל משלב הגילוי המוקדם ועד לזיהוי מובילים (Lead Identification) ועבודות פרה-קליניות, על ידי אספקת פנוטיפ פונקציונלי סטנדרטי המשמש לקבלת החלטות של המשך או עצירה (go/no-go).