Name: מניעת חום מתח תופעות לוואי בחולדות על ידי Subtilis Bacillus זנים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: למד כיצד למנוע תופעות לוואי של חום מתח בחולדות באמצעות טיפול מונע בזן Bacillus subtilis BSB3. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות חיידקים פרוביוטיים בהגנה על מערכות ביולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי קרן אוניברסיטת אובורן FOP 101002-139294-2050.

כל הפרוצדורות אושרו על ידי IACUC של אוניברסיטת אובורן, אובורן, אלבמה. 1. הכנת תרבות מדיה, צלחות תרבית חיידקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחסן 10 מ&quot;ל של מרק מזין בבקבוק עם מושבה אחת של תרבות BSB3 subtilis Bacillus, גדל לילה על צלחת אגר מזין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך 500 מ&quot;ל של נביגה בינוני 19 (לליטר: מרק מזין Bacto, 8 גרם; 10% (w / v) KCl, 10 מ&quot;ל; 1.2% (w / v) MgSO 4 x 7H 2 O, 10 מ&quot;ל; אגר, 15 ז) ו חיטוי ב 121 מעלות צלסיוס למשך 20 דקות. אפשר לקרר 50 o C ולהוסיף הפתרונות סטרילי הבאים: 1 M Ca (NO 3) 2, 1 מ&quot;ל; 0.01 M MnCl 2, 1 מ&quot;ל; 1 מ&quot;מ FeSO 4, 1 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בינוני מוכן מצנן 40 o צלזיוס למשך 20 דקות בטמפרטורת חדר ויוצק 25 מיליליטר לתוך כל אחת 20 מנות סטרילי פטרי בקבינט סטרילי. בואו המדיום לחזק הלילה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים 0.5 מ&quot;ל של תרבות הלילה של Bacillus subtilis BSB3 על פני השטח של המדיום צלחות פטרי. דגירת התרבות ב 37 מעלות צלסיוס במשך 5 ימים עד נביגה 90%. לחשוף נבגים שלב בהיר על ידי מיקרוסקופ ברזולוציה גבוהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיידקים קציר על ידי הוספת 1 מ&quot;ל של בופר פוספט סטרילית (PBS) לצלחת וחורקים חיידקים ממשטח באמצעות מפזר תא סטרילי. אחסן את ההשעיה במקרר עד הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר הכדאיות של חיידקים על ידי ציפוי 0.1 מ&quot;ל של דילול המתאים (10 -5 עד 10 -6) של השעיה חיידקים על צלחות בינוני נביגה ואחריו הדגירה של 18 - 24 שעות ב 37 מעלות צלסיוס </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרוזן מושב חיידקים על הצלחות באמצעות מונה מושבה ולחשב את כייל של חיידקים בתרחיף הנבדק. כן השעיה חיידקי עם הריכוז הסופי 1 x 10 8 CFU / ml ב- PBS. </li></ol> 2. בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש 32 חולדות זכרים ספראג-Dawley (250 - 300 גרם). לשמור על חיות בתנאים הפתוגן ללא ספציפיים עם גישה חופשית צ&#39;או ומים גלולים סטנדרטיות. להקים טמפרטורה ממוצע (21 ± 1 o C), לחות (50 ± 5%) ו מחזור אור כהה 12 שעות. </li></ol> 3. עיצוב ניסיוני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל יחס לבעלי החיים על ידי gavage פי 11, אחרי 2 ימים של התאקלמות. השתמש מזרק עם מחט gavage הפה. פנקו 16 חולדות עם B. subtilis ההשעיה BSB3 (1 מ&quot;ל לכל חולדה) פעמיים ביום למשך יומיים (קבוצת &#39;subtilis). פנקו 16 חולדות עם PBS (1 מ&quot;ל לכל חולדה) פעמיים ביום למשך יומיים (קבוצת PBS) (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הטיפול, חלוקה משנית בכל קבוצה (8 חולדות לכל קבוצה): קבוצה 1- מלאה (PBS / לא מתח), קבוצה 2 ב &#39; subtilis (ב subtilis / לא מתח), מתח קבוצה 3- (מתח PBS / חום) וקבוצת 4- ב subtilis + מתח (סטרס B. subtilis / חום). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדדו את חום רקטלי של כל עכברוש באמצעות ELECTRONIC מדחום דיגיטלי. שמור חולדות של קבוצות 1 ו -2 בטמפרטורת החדר למשך 25 דקות. חיות של קבוצות מקום 3 ו -4 בתא האקלים ב 45 מעלות צלסיוס ולחות יחסית של 55% במשך 25 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, למדוד את החום רקטלי של כל עכברוש בכל הקבוצות באמצעות מדחום דיגיטלי אלקטרוני. מניחים את כל חיות בטמפרטורת החדר למשך 4 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חולדות עם isoflurane (2 - 4%) בצנצנת הרדמה סגר ולבחון את החולדות עד מורדמים עמוק (בהעדר בתגובה קמצוץ הבוהן). להרדים חולדות על ידי עריפת ראש מהירה עם גיליוטינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> איסוף דם גזע מכל עכברוש 20 (15 - 16 מ&quot;ל) עם טפטפות apyrogenic לתוך צינורות apyrogenic להשיג סרום ומיד לקחת דגימות דם (7 μl מכל עכברוש) עם טפטפת לבדיקה מיקרוסקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים צינורות עם הדם במקרר לפחות 30 דקות כדי לאפשר קרישה. צינורות צנטריפוגה ב 20 מעלות צלסיוס, 7,000 XG במשך 10 דקות ובמהירותלהסיר בסרום עם טפטפת. סרום Aliquot המתקבל בכל עכברוש לתוך 50 כרכים μl ולאחסן ב -20 מעלות צלסיוס עד assay. </li></ol> 4. הליך כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור / לקצץ את כל הפרווה מן הבטן ואת בית החזה של החלק התחתון של הפגר עם מספריים חשמליים. מניח את הפגר בתוך ארון סטרילי ולטפל השטח המגולח של הפגר עם אלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אזמל סטרילי כדי ליצור חתך קו האמצע של הבטן. סר כבד, בלוטות לימפה mesenteric, טחול ומעי דק מכל עכברוש באמצעות פינצטה סטרילית. </li></ol> 5. ניתוח של טרנסלוקציה בקטריאלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל דגימה של הכבד, בלוטות לימפה mesenteric והטחול לתוך צינורות סטרילי-שקל מראש ולשקול. חשב את המשקל של המדגם כהבדל בין המשקל של צינור עם מדגם והמשקל של שפופרת ריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף PBS סטרילי כדי צינור להשיג דילול 1:10 (w / v) של המדגם homogenize כל דגימה עם homogenizer רקמות זכוכית סטרילית לקבל השעיה הומוגנית 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את דילולים סדרתי (10 -1 עד 10 -4) של כל דגימה ב PBS סטרילית. פלייט 0.1 מ&quot;ל של כל דילולים של כל רקמות על פני MacConkey ו -5% אגר דם Brucella דם אגר עם hemin (0.005 g / L) K1 ויטמין (0.01 גר &#39;/ ל&#39;) צלחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירת MacConkey של וצלחות אגרו דם 5% אירוביים ו צלחות אגרו דם Brucella בתנאים אנאירוביים ב 37 o C 22. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רוזן מושבות של חיידקים אירוביים לאחר 24 שעות, ומושבות של חיידקים אנאירוביים לאחר 48 שעות של דגירה בעזרת מונה מושבה. לבטא את התוצאות על פי מספר יחידות-מושבה להרכיב (CFU) בתוך גרם של רקמה. </li></ol> 6. ניתוח היסטולוגית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסירו דגימות מעי דקות מכל עכברוש ידי ההליך כירורגי (צעדים 4.1 - 4.2). תקן דגימות של קבע Bouin, להטביע פרפין,להכין 6 מיקרומטר חלקים וחתכים הכתם עם באמצעות hematoxylin ו eosin נהלים קבועים 23. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במערכת מיקרוסקופ ברזולוציה גבוהה למדידת גובה של villi מעי ועובי רירי סך כל דגימה (100X הגדלה) 24. לנתח 4 דגימות מכל עכברים ויגרמו לפחות עשרים מדידות במדגם אחד. אין מהיר תוצאות מיקרומטר. </li></ol> 7. Assay ציטוקין <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ערכות ELISA העכברוש מסחריות-1β IL; IL-6; TNF-α; INF-γ, ו- IL-10 כדי למדוד רמות ציטוקינים בסרום על פי פרוטוקול של היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור עקומות סטנדרטיות עבור כל קבוצה של דגימות assayed באמצעות סטנדרטים עבור הערכה הרלוונטית. הגדר את רמת ציטוקינים כל דגימה על ידי השוואה של נתוני ניסוי עם עקומת התקן המתאימה. </li></ol> 8. Assay lipopolysaccharide <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח ברמה של LPS בסרום באמצעות ערכת עכברוש LPS ELISA פיהפרוטוקול של היצרן. הערכת ריכוז LPS בדגימות על ידי השוואה של הערכים שהתקבלו עם הערכים של עקומת סטנדרט. </li></ol> 9. מיקרוסקופי אור רזולוציה הגבוהה של דם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במערכת מיקרוסקופ שתואר לעיל 25,26. השתמש פלטפורמת בידוד רעידות כבסיס למערכת מיקרוסקופ ומצלמת וידאו ומחשב 25 להקליט את התמונות בשידור החיות. לכייל תמונות בדיקה באמצעות שקופיות ריצ&#39;רדסון כפי שתוארו לעיל 27. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח 7 μl של דם טרי שנשאב בכל עכברוש בשקופית זכוכית, coverslip, לצלם ולהקליט עשר מסגרות תמונה של 72 × 53.3 מיקרומטר 2 בכל מדגם (הגדלה 1,700X). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את ריכוז של שלפוחית ​​באמצעות תוכנה המספקת תמונות אופטיות-נוף ישיר ברזולוציה גבוהה בזמן אמת. בדוק מינימום של 20 מסגרות תמונה עבור כל תנאי הניסוי 28. </li></ol> 10. Statisטיקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אין מהיר כל הערכים כמו תוחלת וסטיית תקן. בביצוע ניתוחים סטטיסטיים והתוויית גרף. לנתח את התוצאות עם מבחן t שני מדגם, להגדיר את הרמה המובהקת 0.05 להגדיר מובהקות סטטיסטיות. </li></ol>

<ol><li>Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+function+in+the+heat-stressed+human%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular function in the heat-stressed human.</a> Acta Physiol. 199, 407-423 (2010).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gastrointestinal+permeability+in+exertional+heatstroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Sport+Sci.+Rev%22%5BJournal%5D)">Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke.</a> Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+heat+stress+on+the+porcine+small+intestine%3A+A+morphological+and+gene+expression+study%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A-Mol.+Integr.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study.</a> Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).</li>
<li>Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Frontiers+in+Thermoregulation+and+Exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Med%22%5BJournal%5D)">New Frontiers in Thermoregulation and Exercise.</a> Sports Med. 16, 163-167 (1993).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+gastrointestinal+barrier+dysfunction+and+its+inflammatory+effects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects.</a> J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).</li>
<li>Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gastrointestinal+system+-+An+essential+target+organ+of+the+athlete%27s+health+and+physical+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance.</a> Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).</li>
<li>Khan, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbes%2C+intestinal+inflammation+and+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroent%22%5BJournal%5D)">Microbes, intestinal inflammation and probiotics.</a> Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).</li>
<li>Quigley, E. M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prebiotics+and+Probiotics%3A+Their+Role+in+the+Management+of+Gastrointestinal+Disorders+in+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults.</a> Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).</li>
<li>Gore, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+secondary+prevention+effects+of+the+probiotics+Lactobacillus+paracasei+or+Bifidobacterium+lactis+on+early+infant+eczema%3A+randomized+controlled+trial+with+follow-up+until+age+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Allergy%22%5BJournal%5D)">Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years.</a> Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).</li>
<li>Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+probiotics+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr.+J%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, probiotics and diabetes.</a> Nutr. J. 13, (2014).</li>
<li>Eutamene, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+between+Lactobacillus+paracasei+and+its+bacterial+products+to+counteract+stress-induced+gut+permeability+and+sensitivity+increase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats.</a> J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).</li>
<li>Ait-Belgnaoui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+farciminis+treatment+attenuates+stress-induced+overexpression+of+Fos+protein+in+spinal+and+supraspinal+sites+after+colorectal+distension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).</li>
<li>Fujiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bacillus+subtilis+quorum-sensing+molecule+CSF+contributes+to+intestinal+Homeostasis+via+OCTN2%2C+a+host+cell+membrane+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter.</a> Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).</li>
<li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacillus+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiol. 28, 214-220 (2011).</li>
<li>Pinchuk, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+anti-Helicobacter+pylori+activity+of+the+probiotic+strain+Bacillus+subtilis+3+is+due+to+secretion+of+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Ch%22%5BJournal%5D)">In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics.</a> Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotics+against+Campylobacter+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Travel+Med%22%5BJournal%5D)">Probiotics against Campylobacter pathogens.</a> J. Travel Med. 4, 167-170 (1997).</li>
<li>Gracheva, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+the+new+bacterial+preparation+biosporin+in+treating+acute+intestinal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Zh+Mikrobiol+Epidemiol+Immunobiol%22%5BJournal%5D)">The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections.</a> Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).</li>
<li>Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Bacillus+probiotics+in+prevention+of+antibiotic-associated+diarrhoea%3A+a+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JMM+Case+Report%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial.</a> JMM Case Report. 1, (2014).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Methods+for+Storage+Stability+and+Release+of+Bacillus+Spores%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Prog%22%5BJournal%5D)">Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores.</a> Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).</li>
<li>Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVogel%2C+HG+%22eds+H.G.+Vogel+%26+W.H.+Vogel%22">eds H.G. Vogel & W.H. Vogel</a>. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).</li>
<li>Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+induces+the+translocation+of+cutaneous+and+gastrointestinal+microflora+to+secondary+lymphoid+organs+of+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice.</a> J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).</li>
<li>Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+commensal+microflora+by+toll-like+receptors+is+required+for+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis.</a> Cell. 118, 229-241 (2004).</li>
<li>Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+cytokine%2C+corticosterone%2C+and+tissue+injury+responses+in+mice+during+heat+strain+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).</li>
<li>Ribeiro, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+and+morphometric+study+of+intestinal+mucosa+in+rats+after+massive+intestinal+resection.+Influence+of+a+glutamine-enriched+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Hosp.+Cl%C3%ACn.+Fac.+Med.+S.+Paulo%22%5BJournal%5D)">Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet.</a> Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).</li>
<li>Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+90+nm+%28lambda%2F5%29+in+an+optical+transmission+microscope+with+an+annular+condenser%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser.</a> Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).</li>
<li>Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+administration+of+Bacillus+subtilis+strain+BSB3+can+prevent+heat+stress-related+adverse+effects+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats.</a> J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).</li>
<li>Richardson, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Test+slides%3A+Diatoms+to+divisions-What+are+you+looking+at%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Roy+Microsc+Soc%22%5BJournal%5D)">Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at.</a> Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).</li>
<li>Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+evaluation+of+vesicles+shed+by+rat+erythrocytes+at+elevated+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Therm+Biol%22%5BJournal%5D)">Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures.</a> J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).</li>
<li>Leon, L. R., Helwig, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+stroke%3A+Role+of+the+systemic+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response.</a> J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).</li>
<li>Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+Shock+Protein+70+as+a+Biomarker+of+Heat+Stress+in+a+Simulated+Hot+Cockpit%5BTitle%5D)+AND+%22Aviat+Space+Env+Med%22%5BJournal%5D)">Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit.</a> Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

חשיפת תוצאות בטמפרטורה גבוהה בתנאים בריאותיים חמורים 29. מניעה וגילוי מוקדם של סיבוכים הקשורים עומס החום הם בעלי חשיבות חיונית 30. הפרוטוקול המובא יכול לשמש כדי להעריך את היעילות של גישות שונות למניעת תופעות לוואי עומס חום. צעדים קריטיים בתוך פרוטוקול זה כוללים: הליך הטיפול בחום (45 מעלות צלסיוס, 25 דק &#39;); השימוש בחומרים apyrogenic במהלך איסוף ועיבוד של הדם ...

גורמי לחץ שונים משפיעים על בריאות האדם ובעלי החיים. טמפרטורה היא אחד הגורמים המלחיצים ביותר, הגורמים למחלות כרוניות, חריפות ואפילו קטלניות1. שינויים במורפולוגיה של המעי ואובדן שלמות מחסום המעי לאחר עקת חום תועדו במקרים רבים2,3. מחסום מגן זה אחראי להגנה מפני טרנסלוקציה של חיידקי המעיים והרעלים שלהם, בפרט ליפופוליסכרידים (LPS), מהלומן למחזור הדם הפנימי4,5. יציבות המיקרוביוטה של המעיים משפיעה באופן משמעותי על תפקוד מחסום המעי, התגובה החיסונית של המארח וסבילות למצבי לחץ6. לפיכך, אפנון של מיקרוביוטת המעי יכול לספק גישה חדשה למניעת תופעות לוואי הקשורות ללחץ. 
חיידקים מועילים שימשו כאסטרטגיה מבטיחה לשינוי המיקרוביוטה של המעיים לניהול מוצלח של מצבים קליניים שונים, כגון שלשולים, מחלות מעי דלקתיות, אטופיק דרמטיטיס, הפרעות מטבוליות7-10. ההשפעות הפרוביוטיות של חיידקים מועילים כוללות ייצור של מטבוליטים חיוניים לתמיכה בבריאות המעיים, גירוי מערכת החיסון, קידום סבילות ללקטוז, שיקום תפקוד לקוי של האפיתל. פרוביוטיקה הייתה יעילה במניעת סיבוכים הקשורים ללחץ במבחנה ובמודלים של בעלי חיים11,12. 
חוקרים הקדישו תשומת לב רבה יותר לחיידקי בצילוס כפרוביוטיקה מכיוון שחיידקים אלה תומכים בהומאוסטזיס במעי13 ויש להם השפעות מועילות על המארח14. הנתונים הקודמים שלנו הראו יעילות גבוהה של פרוביוטיקה בצילוס נגד פתוגנים במבחנה15,16 ובניסויים קליניים17,18. כאן, אנו שואפים להעריך את ההשפעה המונעת של זן B. subtilis BSB3 כנגד סיבוכים לאחר עומס חום.

<table><tbody><tr><td>תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS)</td><td>סיגמא-אולדריץ',&nbsp;סנט לואיס,</td><td>MO P4417</td><td></td></tr><tr><td>אלכוהול אתילי&nbsp;</td><td>מוצרי פארמקו בע"מ ברוקפילד, קונטיקט, ארה"ב&nbsp;</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>אגר</td><td>VWR</td><td>97064-334</td><td></td></tr><tr><td>צלחות אגר MacConkey</td><td>VWR</td><td>470180-742</td><td></td></tr><tr><td>5% צלחות אגר דם</td><td>VWR</td><td>89405-024</td><td></td></tr><tr><td>צלחת אגר דם ברוצלה עם המין וויטמין K</td><td>VWR</td><td>89405-032</td><td></td></tr><tr><td>Bouin' s מדעי</td><td>מיקרוסקופיה אלקטרונית מקבעת, האטפילד, פנסילבניה, ארה"ב</td><td>15990</td><td></td></tr><tr><td>IL-10 Rat ELISA kit</td><td>Invitrogen, קמרילו, קליפורניה, ארה"ב</td><td>KRC0101</td><td></td></tr><tr><td>IL-1beta Rat Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, קמרילו, קליפורניה, ארה"ב</td><td>KRC0011</td><td></td></tr><tr><td>IL-6 Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, קמרילו, קליפורניה, ארה"ב</td><td>KRC0061</td><td></td></tr><tr><td>INF-gamma Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, קמרילו, קליפורניה, ארה"ב</td><td></td><td></td>KRC4021</tr><tr><td>TNF-alpha Rat ELISA Kit</td><td>Invitrogen, קמרילו, קליפורניה, ארה"ב</td><td>KRC3011</td><td></td></tr><tr><td>Rat LPS ELISA Kit</td><td>NeoBioLab, MA, ארה"ב</td><td>RL0275</td><td></td></tr><tr><td>תא סביבתי 6020-1</td><td>Caron, Marietta, OH, ארה"ב</td><td>6020-1</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה&nbsp;</td><td>בקמן קולטר, אינדיאנפוליס, אינדיאנה, ארה"ב</td><td>אופטימה L-90K</td><td></td></tr><tr><td>אולטרה צנטריפוגה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת אופטית מיקרוסקופ אור</td><td>CitoViva Technology Inc., אובורן, AL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דלפק מושבה</td><td>פישר סיינטיפיק, פיטסבורג, פנסילבניה, ארה"ב</td><td>RE-3325</td><td></td></tr><tr><td>מקפיא</td><td>Haier, ברוקלין, ניו יורק, ארה"ב</td><td>HCMO50LA</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופלייט אולטרה קורא</td><td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, ארה"ב</td><td>ELx 808</td><td></td></tr><tr><td>מכונת כביסה אוטומטית</td><td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, ארה"ב</td><td>ELx50</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes</td><td>Gilson, Pipetman, France</td><td>P100, P200, P1000</td><td></td></tr><tr><td>C24 Incubator Shaker</td><td>New Brunswick Scientific, Enfield, CT, USA</td><td>Classic C24</td><td></td></tr><tr><td>Rocking Shaker&nbsp;</td><td>Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, ארה"ב</td><td>55</td><td></td></tr><tr><td>צלחות פטרי</td><td>פישר סיינטיפיק, פיטסבורג, פנסילבניה, ארה"ב</td><td>875713</td><td>100 מ"מ x 15 מ"מ</td></tr><tr><td>SterilGard III Advance</td><td>The Baker Company, סנפורד, ME, ארה"ב</td><td>SG403</td><td></td></tr><tr><td>צלוחיות גידול תרבות</td><td>Corning Incorporated, קורנינג, ניו יורק, ארה"ב</td><td>4995</td><td>PYREX 250 מ"ל צלוחיות Erlenmeyer</td></tr><tr><td>ספקטרומטר אופטי Genesys 20</td><td>תרמו סיינטיפיק, וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב.</td><td>4001</td><td></td></tr><tr><td>Sony DXC-33 מצלמת וידאו</td><td>Sony</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Richardson שקופית בדיקה</td><td>מדע מיקרוסקופיה אלקטרונית, האטפילד, פנסילבניה, ארה"ב</td><td>80303</td><td></td></tr><tr><td>Millipore מערכת טיהור מים</td><td>Millipore</td><td>Direct-Q</td><td></td></tr><tr><td>Image-Pro Plus תוכנה</td><td>מדיה קיברנטיקה, MD, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>איזון קרן משולשת</td><td>OHAUS Corporation, פרסיפני, ניו ג'רזי, ארה"ב</td><td></td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר רקמות, Dounce</td><td>VWR</td><td>71000-518</td><td></td></tr></tbody></table>

מניעת חום מתח תופעות לוואי בחולדות על ידי<em&gt; subtilis bacillus</em&gt; זנים

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

מחקר זה נועד להעריך את ההשפעה המגנה של זן subtilis Bacillus נגד סיבוכים הקשורים לחום מתח. שלושים ושתיים חולדות Sprague-Dawley שימשו במחקר זה. בעלי החיים טופלו דרך פה פעם ביום למשך ימים עם B. subtilis BSB3 זן או PBS. למחרת, לאחר הטיפול האחרון, כל קבוצה חולקה ושתי קבוצות ניסוי (אחד שטופל PBS ואחד שטופל ב subtilis) הוצבו 45 o צלזיוס למשך 25 דקות. שתי קבוצות בקרה נשאר במשך 25 דקות בטמפרטורת החדר. כל החולדות היו מורדמות ופרמטרים שונים נותחו בכל הקבוצות. השפעות שליליות של עומס חום רשומות על ידי הירידה של גובה villi ועובי רירי הכולל באפיתל המעי; טרנסלוקציה של חיידקים מן לומן; גדל vesiculation של אריתרוציטים והעלאה של lipopolysaccharides (LPS) רמה בדם. יעילות המגן של טיפול מוערכת על ידי מראשvention של תופעות לוואי אלה. הפרוטוקול הוקם לטיפול האוראלי של חולדות עם חיידקים למניעת סיבוכי עומס חום, אבל פרוטוקול זה יכול להיות משונה המשמש מסלולים אחרים של ממשל ועל ניתוח של תרכובות שונות.

טמפרטורת הגוף הממוצעת של בעלי חיים לפני ומיד אחרי עומס החום היה 36.7 ± 0.07 מעלות צלסיוס ו -40.3 ± 0.17 מעלות צלסיוס, בהתאמה (P &lt;0.05). חשיפה של חולדות לחום (קבוצה 3) הביאה עיכוב משמעותי של גובה villi ועובי רירי כולל (איורים 2, 3). אוראלי של זן BSB3 לפני מעי מוגן מתח משפעת החום המזיקה. טרנסלוקציה של חיידקים...

תיארנו פרוטוקול למניעת השפעות עקת חום בחולדות על ידי טיפול מקדים דרך הפה בחיידקים מועילים. ניתן לשנות פרוטוקול זה ולהשתמש בו לדרכי מתן שונות ולניתוח תרכובות שונות.

מניעת חום מתח תופעות לוואי בחולדות על ידי<em&gt; Subtilis Bacillus</em&gt; זנים

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

המטרה הכוללת של ניסוי זה היא להעריך את ההשפעה המניעתית של זן B.subtilis BSB3 נגד סיבוכים לאחר עקה תרמית. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח במניעת השפעות שליליות מעקה תרמית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן להשתמש בה להערכת גישות שונות להפחתת הסיבוכים של עקה תרמית.את הפרוצדורה הזו תדגים לודמילה גלובה (Ludmila Globa) ואולג פוסובי (Oleg Pusovyy), עמיתי מחקר מהמעבדה שלנו. כדי להתחיל, נשתמש במושבה בודדת של Bacillus subtilis BSB3 שגודלה למשך לילה על צלחת אגר מזין (nutrient agar).החדירו עשרה מיליליטר של ציר הזנה (nutrient broth) לבקבוק ארלנמאייר. גדלו את התרבית למשך לילה בטמפרטורה של 37 degrees Celsius. הכינו 500 מיליליטר של מצע לספורולציה לפי המתכון המוצג כאן.ועקרו באוטוקלב בטמפרטורה של 121 °C למשך 20 דקות. המתינו שהתווך יתקרר ל-50 °C לפני הוספת התמיסות הסטריליות הבאות. בתוך תא סטרילי, קררו את התווך שהוכן בטמפרטורת החדר ל-40 °C למשך 20 דקות.שפכו 25 milliliters לתוך כל אחת מ-20 צלחות פטרי סטריליות. המתינו שהמצע יתקשה במהלך הלילה. לאחר מכן, פזרו 0.5 milliliters של תרבית Bacillus subtilis BSB3 שגדלה בן לילה על פני השטח של צלחות מצע הספורולציה.דגרו את הצלחות בטמפרטורה של 37 °C למשך חמישה ימים עד להגעה ל-90% sporulation. לאחר מכן, השתמשו במיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה כדי לבדוק נו

prevention-heat-stress-adverse-effects-rats-bacillus-subtilis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

וידאו זה מדגים את הניקוד אינדוקציה קליני במודל חיה של טרשת נפוצה: כרוני, relapsing Encephalomyelitis אוטואימונית ניסיונית התובע חולדות. המחלה, הנגרמת על ידי חולדות מחסנת עם תחליב המכיל חוט השדרה שלם חולדה adjuvant פרוינד של שלמה, מציג סימנים קליניים דומים מחלות אנושיות.

אינדוקציה ניקוד קליני כרוני, relapsing Encephalomyelitis אוטואימונית ניסויית

מקור: Sorokulova, I., et al. מניעת תופעות לוואי של מתח חום בחולדות על ידי זן Bacillus subtilis . J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים חולדות שטופלו מראש בחיידקים מועילים או בתמיסת מלח עם פוספט (PBS) ונחשפו ללחץ חום כדי להעריך את תקינות מחסום המעי. פחות מושבות חיידקים שמקורן במעיים מהכבד של חולדות שטופלו, בניגוד למושבות רבות בחולדות ביקורת, מצביעות על מחסום אפיתל שלם וטרנסלוקציה מינימלית של חיידקים.

הערכת ההשפעה של חיידקים מועילים על טרנסלוקציה של חיידקי מעיים בחולדות עם סטרס חום

מקור: סורוקולובה, א., ואחרים. מניעת תופעות לוואי מלחץ חום בעכברים על ידי זן Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)הסרטון מציג ניתוחים היסטולוגיים ומיקרוסקופיים של דם המשמשים להערכת ההשפעות המגנות של Bacillus subtilis בעכברים החשופים ללחץ חום.

ניתוחים היסטולוגיים וההמטולוגיים להערכת השפעות Bacillus subtilis בעכברים תחת לחץ חום

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול שלב אחר שלב לחקר מכת חום במאמץ (EHS) במודל עכבר.

מודל עכבר שבץ חום במאמץ: פרוטוקול לחקר מנגנונים העומדים בבסיס מכת חום במאמץ

אנו מציגים פרוטוקול זירוז ולגלות CMHs הנגרמת על ידי הזרקת LPS בחולדות ספראג-Dawley, אשר עשוי להיות מנוצל בעתיד חקירות מחקר בפתוגנזה של CMHs.

Microhemorrhages מוחי תת חריפה הנגרמת על ידי הזרקת ליפופוליסכריד בחולדות

כאן, אנו מתארים את הפרוטוקול ואת יישומו של מתיל-Seq, פלטפורמה epigenomic, באמצעות מודל עכברוש לזיהוי שינויים epigenetic הקשורים בחשיפה מתח כרוני. תוצאות מדגימים כי פלטפורמת מתיל-Seq עכברוש הוא מסוגל זיהוי הבדלים מתילציה הנובעים מחשיפה ללחץ אצל חולדות.

פלטפורמה מתיל-Seq חולדה כדי לזהות שינויים Epigenetic הקשורים בחשיפה מתח

כאן, אנו מאפיינים את התגובות הסלולר מדגיש התגובה התאית ב-נמטודות C. אלגיה על ידי מדידת ההפעלה של כתבים פלורסנט ההמרה ולומר רגישות ללחץ פיזיולוגי.

מדידות התגובות הפיזיולוגיות של הלחץ בג. אלגיה

הפרוטוקול מתאר התפתחות של מודל סטנדרטי, חוזר, פרה-אקליני של מכת חום מאמץ (EHS) בעכברים ללא גירויים חיצוניים שליליים כגון הלם חשמלי. המודל מהווה פלטפורמה ללימודים מכאניסטיים, מונעים וטיפוליים.

מודל פרה-אקליני של מכת חום מאמץ בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל עכברי קוליטיס המושרה על ידי פסאודו-חיידקים נטולי חיידקים דקסטרן סולפט נתרן כדי לחקור את תפקידה של מיקרוביוטת המעיים בוויסות ההשפעות החיוביות של Bacillus cereus על קוליטיס.

חקירת ההשפעות המקלות של מתן Bacillus cereus על קוליטיס באמצעות אפנון מיקרוביוטה של המעיים

חיידקי מעיים עשויים להשפיע באופן חיובי או שלילי על בריאות המארח שלהם באמצעות מנגנונים ספציפיים או שמורים. Caenorhabditis elegans היא פלטפורמה נוחה לסינון עבור חיידקים כאלה. הפרוטוקול הנוכחי מתאר סינון בתפוקה גבוהה של 48 חיידקים מבודדים להשפעה על עמידות לעקה של נמטודה, המשמשים כפרוקסי לבריאות התולעים.

הקרנה בתפוקה גבוהה של מבודדים מיקרוביאליים עם השפעה על בריאות Caenorhabditis elegans

פרוטוקול זה מתאר מודל לחץ קל כרוני בלתי צפוי (CUMS) לדיכאון המבוסס על תיאוריה רפואית מונגולית, יחד עם שיטות לאימות מבחנים התנהגותיים.

לחץ כרוני בלתי צפוי קל בחולדות מבוסס על התרופה המונגולית

למד כיצד למנוע תופעות לוואי של חום מתח בחולדות באמצעות טיפול מונע בזן Bacillus subtilis BSB3. שיטה זו מאפשרת הערכת יעילות חיידקים פרוביוטיים בהגנה על מערכות ביולוגיות.

מניעת חום מתח תופעות לוואי בחולדות על ידי

גלה סרטונים נוספים