Name: הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: למד ליצור תאי דנדריטים טולרוגניים ובוגרים ממונוציטים לחקר אימונולוגיה ופיתוח חיסונים. השיטה מאפשרת ייצור מספרים גבוהים של תאים מבודדים עם תכונות מטבוליות שונות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי הסוכנות למדע, טכנולוגיה Reasearch מימון Core (כדי JEC).

<ol><li>Jolles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paul+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Paul Langerhans.</a> J Clin Pathol. 55 (4), 243-24 (2002).</li>
<li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology%2C+quantitation%2C+tissue+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).</li>
<li>Steinman, R. M., Swanson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endocytic+activity+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">The endocytic activity of dendritic cells.</a> J Exp Med. 182 (2), 283-288 (1995).</li>
<li>Hemmi, H., Akira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR+signalling+and+the+function+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Immunol+Allergy%22%5BJournal%5D)">TLR signalling and the function of dendritic cells.</a> Chem Immunol Allergy. 86, 120-135 (2005).</li>
<li>Mueller, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+maintaining+peripheral+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms maintaining peripheral tolerance.</a> Nat Immunol. 11 (1), 21-27 (2010).</li>
<li>Inaba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+phagocytosed+cellular+fragments+on+the+major+histocompatibility+complex+class+II+products+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of phagocytosed cellular fragments on the major histocompatibility complex class II products of dendritic cells.</a> J Exp Med. 188 (11), 2163-2173 (1998).</li>
<li>Caux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B70%2FB7-2+is+identical+to+CD86+and+is+the+major+functional+ligand+for+CD28+expressed+on+human+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">B70/B7-2 is identical to CD86 and is the major functional ligand for CD28 expressed on human dendritic cells.</a> J Exp Med. 180 (5), 1841-1847 (1994).</li>
<li>Paavonen, J., Lehtinen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+human+papillomavirus+and+other+sexually+transmitted+agents+in+the+etiology+of+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Interactions between human papillomavirus and other sexually transmitted agents in the etiology of cervical cancer.</a> Curr Opin Infect Dis. 12 (1), 67-71 (1999).</li>
<li>Ohtani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+target+of+rapamycin+and+glycogen+synthase+kinase+3+differentially+regulate+lipopolysaccharide-induced+interleukin-12+production+in+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Mammalian target of rapamycin and glycogen synthase kinase 3 differentially regulate lipopolysaccharide-induced interleukin-12 production in dendritic cells.</a> Blood. 112 (3), 635-643 (2008).</li>
<li>Wilde, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+in+renal+biopsies+of+patients+with+ANCA-associated+vasculitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells in renal biopsies of patients with ANCA-associated vasculitis.</a> Nephrol Dial Transplant. 24 (7), 2151-2156 (2009).</li>
<li>Al-Hello, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enterovirus+strain+isolated+from+diabetic+child+belongs+to+a+genetic+subcluster+of+echovirus+11%2C+but+is+also+neutralised+with+monotypic+antisera+to+coxsackievirus+A9%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">An enterovirus strain isolated from diabetic child belongs to a genetic subcluster of echovirus 11, but is also neutralised with monotypic antisera to coxsackievirus A9.</a> J Gen Virol. 89, 1949-1959 (2008).</li>
<li>Ziegler-Heitbrock, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nomenclature+of+monocytes+and+dendritic+cells+in+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood.</a> Blood. 116 (16), 74-80 (2010).</li>
<li>Osugi, Y., Vuckovic, S., Hart, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+blood+CD11c%28%2B%29+dendritic+cells+and+monocyte-derived+dendritic+cells+differ+in+their+ability+to+stimulate+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Myeloid blood CD11c(+) dendritic cells and monocyte-derived dendritic cells differ in their ability to stimulate T lymphocytes.</a> Blood. 100 (8), 2858-2866 (2002).</li>
<li>Reynolds, G., Haniffa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+Mouse+Mononuclear+Phagocyte+Networks%3A+A+Tale+of+Two+Species%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human and Mouse Mononuclear Phagocyte Networks: A Tale of Two Species.</a> Front Immunol. 6, (2015).</li>
<li>Jefford, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+comparison+of+DCs+generated+in+vivo+with+Flt3+ligand+or+in+vitro+from+blood+monocytes%3A+differential+regulation+of+function+by+specific+classes+of+physiologic+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli.</a> Blood. 102 (5), 1753-1763 (2003).</li>
<li>Menck, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+monocytes+by+double+gradient+centrifugation+and+their+differentiation+to+macrophages+in+teflon-coated+cell+culture+bags%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of human monocytes by double gradient centrifugation and their differentiation to macrophages in teflon-coated cell culture bags.</a> J Vis Exp. (91), (2014).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+human+granulocyte+and+monocyte+isolation+procedures+on+functional+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Impact of human granulocyte and monocyte isolation procedures on functional studies.</a> Clin Vaccine Immunol. 19 (7), 1065-1074 (2012).</li>
<li>Menon, V., Thomas, R., Ghale, A. R., Reinhard, C., Pruszak, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+protocols+for+surface+and+intracellular+antigen+analyses+of+neural+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry protocols for surface and intracellular antigen analyses of neural cell types.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Faresjo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+useful+guide+for+analysis+of+immune+markers+by+fluorochrome+%28Luminex%29+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A useful guide for analysis of immune markers by fluorochrome (Luminex) technique.</a> Methods Mol Biol. 1172, 87-96 (2014).</li>
<li>Baker, H. N., Murphy, R., Lopez, E., Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conversion+of+a+capture+ELISA+to+a+Luminex+xMAP+assay+using+a+multiplex+antibody+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Conversion of a capture ELISA to a Luminex xMAP assay using a multiplex antibody screening method.</a> J Vis Exp. (65), (2012).</li>
<li>Defawe, O. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+qualification+of+a+multiplex+bead+array+to+assess+cytokine+and+chemokine+production+by+vaccine-specific+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization and qualification of a multiplex bead array to assess cytokine and chemokine production by vaccine-specific cells.</a> J Immunol Methods. 382 (1-2), 117-128 (2012).</li>
<li>Nicholls, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioenergetic+profile+experiment+using+C2C12+myoblast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Bioenergetic profile experiment using C2C12 myoblast cells.</a> J Vis Exp. (46), (2010).</li>
<li>Chunharas, A., Pabunruang, W., Hongeng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Congenital+self-healing+Langerhans+cell+histiocytosis+with+pulmonary+involvement%3A+spontaneous+regression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Assoc+Thai%22%5BJournal%5D)">Congenital self-healing Langerhans cell histiocytosis with pulmonary involvement: spontaneous regression.</a> J Med Assoc Thai. 85, 1309-1313 (2002).</li>
<li>Bai, L., Feuerer, M., Beckhove, P., Umansky, V., Schirrmacher, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dendritic+cells+from+human+bone+marrow+mononuclear+cells%3A+advantages+for+clinical+application+in+comparison+to+peripheral+blood+monocyte+derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Generation of dendritic cells from human bone marrow mononuclear cells: advantages for clinical application in comparison to peripheral blood monocyte derived cells.</a> Int J Oncol. 20 (2), 247-253 (2002).</li>
<li>Felzmann, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+enrichment+from+leukapharesis+products+for+the+generation+of+DCs+by+plastic+adherence%2C+or+by+positive+or+negative+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Monocyte enrichment from leukapharesis products for the generation of DCs by plastic adherence, or by positive or negative selection.</a> Cytotherapy. 5 (5), 391-398 (2003).</li>
<li>Berger, T. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+elutriation+of+monocytes+within+a+closed+system+%28Elutra%29+for+clinical-scale+generation+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient elutriation of monocytes within a closed system (Elutra) for clinical-scale generation of dendritic cells.</a> J Immunol Methods. 298 (1-2), 1-2 (2005).</li>
<li>Sallusto, F., Lanzavecchia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+presentation+of+soluble+antigen+by+cultured+human+dendritic+cells+is+maintained+by+granulocyte%2Fmacrophage+colony-stimulating+factor+plus+interleukin+4+and+downregulated+by+tumor+necrosis+factor+alpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Efficient presentation of soluble antigen by cultured human dendritic cells is maintained by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor plus interleukin 4 and downregulated by tumor necrosis factor alpha.</a> J Exp Med. 179 (4), 1109-1118 (1994).</li>
<li>Pace, S. T., Gelman, B. B., Wong, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Langerhans+cell+histiocytosis+of+the+lacrimal+gland+in+an+adult%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Primary Langerhans cell histiocytosis of the lacrimal gland in an adult.</a> Can J Ophthalmol. 50 (3), 40-43 (2015).</li>
<li>Ravanfar, P., Wallace, J. S., Pace, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diaper+dermatitis%3A+a+review+and+update%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Diaper dermatitis: a review and update.</a> Curr Opin Pediatr. 24 (4), 472-479 (2012).</li>
<li>Gebhardt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+case+of+cutaneous+Rosai-Dorfman+disease+refractory+to+imatinib+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A case of cutaneous Rosai-Dorfman disease refractory to imatinib therapy.</a> Arch Dermatol. 145 (5), 571-574 (2009).</li>
<li>Vazquez, P., Robles, A. M., de Pablo, F., Hernandez-Sanchez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-neural+tyrosine+hydroxylase%2C+via+modulation+of+endocrine+pancreatic+precursors%2C+is+required+for+normal+development+of+beta+cells+in+the+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Non-neural tyrosine hydroxylase, via modulation of endocrine pancreatic precursors, is required for normal development of beta cells in the mouse pancreas.</a> Diabetologia. 57 (11), 2339-2347 (2014).</li>
<li>Pellacani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+melanoma+types+based+on+reflectance+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Distinct melanoma types based on reflectance confocal microscopy.</a> Exp Dermatol. 23 (6), 414-418 (2014).</li>
<li>Shi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatic+involvement+of+Langerhans+cell+histiocytosis+in+children--imaging+findings+of+computed+tomography%2C+magnetic+resonance+imaging+and+magnetic+resonance+cholangiopancreatography%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Radiol%22%5BJournal%5D)">Hepatic involvement of Langerhans cell histiocytosis in children--imaging findings of computed tomography, magnetic resonance imaging and magnetic resonance cholangiopancreatography.</a> Pediatr Radiol. 44 (6), 713-718 (2014).</li>
<li>Haustein, M., Terai, N., Pablik, J., Pillunat, L. E., Sommer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapy-resistant+swelling+of+the+upper+eyelid+in+childhood%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmologe%22%5BJournal%5D)">Therapy-resistant swelling of the upper eyelid in childhood.</a> Ophthalmologe. 111 (1), 53-57 (2014).</li>
<li>Haidinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+role+of+mammalian+target+of+rapamycin+in+human+dendritic+cell+function+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A versatile role of mammalian target of rapamycin in human dendritic cell function and differentiation.</a> J Immunol. 185 (7), 3919-3931 (2010).</li>
<li>Macedo, C., Turquist, H., Metes, D., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoregulatory+properties+of+rapamycin-conditioned+monocyte-derived+dendritic+cells+and+their+role+in+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Res%22%5BJournal%5D)">Immunoregulatory properties of rapamycin-conditioned monocyte-derived dendritic cells and their role in transplantation.</a> Transplant Res. 1 (1), 16(2012).</li>
<li>Fischer, R., Turnquist, H. R., Taner, T., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+rapamycin+in+the+induction+of+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Exp+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Use of rapamycin in the induction of tolerogenic dendritic cells.</a> Handb Exp Pharmacol. 188 (188), 215-232 (2009).</li>
<li>Nicolette, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+for+active+immunotherapy%3A+optimizing+design+and+manufacture+in+order+to+develop+commercially+and+clinically+viable+products%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells for active immunotherapy: optimizing design and manufacture in order to develop commercially and clinically viable products.</a> Vaccine. 25, 47-60 (2007).</li>
<li>Han, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+3+clinical+dendritic+cell+maturation+protocols+containing+lipopolysaccharide+and+interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 3 clinical dendritic cell maturation protocols containing lipopolysaccharide and interferon-gamma.</a> J Immunother. 32 (4), 399-407 (2009).</li>
<li>Paananen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+biological+analysis+of+echovirus+9+strain+isolated+from+a+diabetic+child%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Molecular and biological analysis of echovirus 9 strain isolated from a diabetic child.</a> J Med Virol. 69 (4), 529-537 (2003).</li>
<li>HC, O. N., Wilson, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+with+in+vitro+production+of+dendritic+cells+using+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Limitations with in vitro production of dendritic cells using cytokines.</a> J Leukoc Biol. 75 (4), 600-603 (2004).</li>
<li>Mest, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose-induced+insulin+secretion+is+potentiated+by+a+new+imidazoline+compound%5BTitle%5D)+AND+%22Naunyn+Schmiedebergs+Arch+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Glucose-induced insulin secretion is potentiated by a new imidazoline compound.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 364 (1), 47-52 (2001).</li>
<li>Puc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+activity+after+cold+preservation+of+pancreatic+islet+cells+treated+with+pefloxacin+%28PFX%29%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial activity after cold preservation of pancreatic islet cells treated with pefloxacin (PFX).</a> Ann Transplant. 3 (1), 38-41 (1998).</li>
<li>Alarcon, C., Serna, J., Perez-Villamil, B., de Pablo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+differentially+regulated+processing+of+proinsulin+in+developing+chick+pancreas%2C+liver+and+neuroretina%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Letters%22%5BJournal%5D)">Synthesis and differentially regulated processing of proinsulin in developing chick pancreas, liver and neuroretina.</a> FEBS Letters. 436 (3), 361-366 (1998).</li>
<li>Jekunen, A. P., Kairemo, K. J., Paavonen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+Hand-Schuller-Christian+syndrome+by+a+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Imaging of Hand-Schuller-Christian syndrome by a monoclonal antibody.</a> Clin Nucl Med. 22 (11), 771-774 (1997).</li>
<li>Pearce, E. J., Everts, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell metabolism.</a> Nat Rev Immunol. 15 (1), 18-29 (2015).</li>
</ol>

דמי גישה פתוחה למאמר זה סופקו על ידי Agilent Technologies.

מאמר זה מתאר שיטה להפקה מ moDCs מונוציטים בשלה, moDCs tolerogenic ו moDCs הבוגרת. הצעדים החשובים בפרוטוקול זה נדונים בהרחבה בפסקאות הבאות. חשוב לציין כי דם היקפי אדם משמש כחומר החל בפרוטוקול זה ואמצעי זהירות אוניברסלית לטיפול דם אדם צריך להיות מתורגל. למרות זאת קיים היתכנות טכנית לגזור DCs ממח עצם בבני האדם 24, הבידול במבחנת DC מתאי נמצא בדם היקפי עדיף בשל הזמינות של דם היקפי לעומת מח עצם. בין התאים הנמצאים בדם היקפי, תאי CD34 + גזע hematopoietic ומונוציטים משמשים עבור הדור במבחנה של DCs. CD34 Hematopoietic + תאי גזע בתרבית עם GM-CSF ו- TNF-α לגזור CD1a + ו- CD14 + תת אשר לאחר מכן הם מובחנים יותר לתוך לנגרהנסכמו תאים ותאים דנדריטיים. לעומת זאת, מונוציטים הם בתרבית GM-CSF ו- IL-4 כדי ליצור moDCs בשלה. פרוטוקולים כמה משמשים להעשרת מונוציטים מדם היקפי; למשל, על ידי דבקות צלחות פלסטיק, elutriation וערכות בידוד 25, 26 היתרונות של הפרוטוקול הדבק הם ניזק מינימאלי תאים יחסית חסכוניים תא אולם הטוהר עלול להיות בסיכון.; אשר היוו צעד נוסף נדרש כדי לנתק את התאים עבור ניסויים נוספים. Elutriation היא טכניקה שמפרידה תאים בהתבסס על הגודל והצפיפות שלהם. היתרונות של elutriation הם כדאי תא מונוציטים יכול לשמש בקלות עבור ניסויים נוספים; טכניקת אולם זה מוגבל על ידי הזמינות של elutriator וחוסר היכולת להפריד אוכלוסיות שונות של תאים (T תאים מונוציטים) עם פרמטרי שקיעה דומים. מסחרי ערכות בידוד זמינות לנצל microbeads מגנטי או חיובי לבחור אולבחור את אוכלוסיית monocytic שלילית. כמה פרוטוקולים מוטים כלפי בידוד מונוציטים באמצעות הסלקציה השלילית כמו מונוציטים המבודדים להישאר &quot;נגעו&quot; (לא כבול על ידי סמנים או microbeads). בפרוטוקול זה, חרוזי CD14 שמשו מונוציטים אדם בחרו חיוביים PBMCs. CD14 חסר תחום ציטופלסמית ומחייבת של נוגדנים CD14 אינה מפעילה הולכת אותות. יתר על כן, microbeads יהיה להתנתק מונוציטים אחרי תרבות ומכאן לא לעכב את תהליך הבידול. בנוסף, CD14 מתבטא בחריפות על רוב מונוציטים ו חלוש על נויטרופילים וכמה תאי דנדריטים מיאלואידית, ומכאן שיטה זו של תוצאות בידוד בטהרת תא גבוהה יותר מאשר השיטות האחרות 17. מונוציטים בדם יכול להיות מובחן לתוך DCs או מקרופאגים ועל גורל מונוציטים תלוי במידה רבה על הסביבה ציטוקינים. במאמר זה, moDCs מופקים על ידי הוספת גורם מגרה המושבה מקרופאג-גרנולוציט (GM-CSF) ו- interleukin 4 (IL-4) כדי מונוציטים בדם היקפיים אנושיים. GM-CSF נדרש להישרדות מונוציטים ו- IL-4 מפעילה פעילות מעכבת על בידול מקרופאג; והתוספת קומבינטורית של GM-SCSF ו- IL-4 מונוציטים להניב אחוז גבוה יותר של moDCs בשלה לעומת ציטוקינים הפרט 27. ישנם פרוטוקולים אחרים שיוצרים moDCs ידי הוספת אלפא tumor necrosis factor (TNF-α), אינטרפרון אלפא (IFN-α) ו -13 Interleukin (IL-13) כדי מונוציטים בדם ההיקפי 28, 29, 30. השילוב של GM-CSF ו- IL-4 היה מותאם בשנת 1990 ועכשיו פרוטוקול מקובל שיוצר DCs בשלה פלסטיק מובחן לתוך moDCs immunogenic או tolerogenic ומקוטבת לתוך Th1, moDCs קידום Th2 או TH17. moDCs בשלה הם מובחנים לתוך moDCs tolerogenic על ידי תוספת של ויטמין D3 ו dexamethasone. ישנם מספר פרוטוקולים ליצור DCs tolerogenic למשל, באמצעותגורם-kappa B גרעיני (NF-kB) עיכוב, הפעלה β-קטנין, ויטמין D3, Dexamethasone ו -31 Rapamycin, 32, 33, 34, 35, 9, 36, 37. למרות ששני הוויטמין D3 ו dexamethasone לבד דווחו לגרום שפעת tolerogenic על DCS, השילוב של ויטמין D3 ו תוצאת dexamethasone בתוך דיכוי גדול יותר של alloproliferation מאשר כאשר תרופות פרט משמשות. לכן, בפרוטוקול הקיים עבור הדור של tolerogenic DCs שונה כדי שילוב של ויטמין D3 ו dexamethasone. שיטה זו מתבצעת מקובל כיום כמודל DCs tolerogenic אדם עם תועלת טיפולית. כמו כן, חשוב לציין כי ויטמין D3 מחדש ו dexamethasone יש חיי מדף קצרים. בפרוטוקול זה, lipopolysaccharides (LPS) נוסף כמו inducer התבגרות DC. moDCs בשלה יכולה להיגרם גם בשלה באמצעות קוקטייל פרו-דלקתי:(TNF-α), בטא Interleukin 1 (IL-1β), Interleukin 6 (IL-6) ו- E2 פרוסטגלנדין) או ציטוקינים פרו-דלקתיים (TNF-α ו גמא אינטרפרון (IFN-Γ)). קוקטייל פרו-דלקתיים מייצר moDCs בוגרת עם גבוה שיתוף גירוי ופונקציות נודדות אבל הם מייצרים רמות נמוכות יחסית של IL-12 38. TNF-α או IFN-Γ לבדו אינו מסוגל לעורר פנוטיפ הדנדריטים יציב 39. LPS מגרה כמו-אגרה קולטן 4 (TLR4), מתווכת את ההפעלה של NF-kB ו קינאזות חלבון מופעל mitogen (MAPKs) כדי לגרום התבגרות DC. התבגרות DC המושרה על ידי LPS מראה בתקנה עד סמני התבגרות DC (CD83, CD86, HLA-DR) וגם הובילה את הייצור של IL-12p70. בנוסף, שלב זה יכול להיות שונה יותר לשייך LPS עם אגוניסטים TLR3 לייצר DCs בוגרת חיסונים לסרטן קליניים. במאמר זה, DCS tolerogenic מוצג להיות עמיד בפני התבגרות על טיפול LPS. אלה למחצה להתבגר כמו DCs אינם immunogenic ולעשות לא release הפרו דלקתי ציטוקינים 40. המגבלות של פרוטוקול זה לשכב את תהליך הבידול. התהליך לוקח 8 ימים מהיום 0 עד יום 7 שמהווה קושי להיות מותאם לתוך תפוקה גבוהה מנתח. שינוי בפרוטוקול נדרש לקצר את תהליך הבידול עדיין להניב מספר רב של DCs קיימא במדינות השונות. שנית, הקל DCS מופק על ידי תוספת של ציטוקינים בפרוטוקול זה וציטוקינים אלה לא לקיים אוכלוסיית DC עבור תקופה ארוכה של זמן. יתר על כן, ציטוקינים משמשים בריכוזים גבוהים בהרבה in vivo ועלולה לגרום להתפתחות מוטה של המסלולים שאינם זהים מבחינה פיזיולוגית in vivo DCs. לדוגמא בתרבויות במבחנה של מבשרי DC הוכח להגיב GM-CSF, שאינו ציטוקינים חיוני לבידול נורמלי DC in vivo 41. אף על פי כן, גירוי ציטוקינים יכול להיות שיטה שימושית גןלדרג מספרים גבוהים של DC במבחנה לניסויים. היכולת להכפיף תאים אלה המופקים בפרוטוקול זה כדי ניתוחים אחרים כגון מכתים immunofluorescence, cytometry זרימה, allo מחקרי תגובה ואת חילוף חומרי מחקרים מגדילים את התועלת של שיטה זו. DCs במבחנה אלה לשמש מודל טוב כדי לשפר את הידע של פיתוח DC, התבגרות והצגת אנטיגן וזה קשה לעשות בעבר עם המספרים הנדירים של in vivo DCs. יכולתם של DCs להסדיר חסינות אימונולוגיים לעומת סובלנות גורם להם מועמדים אטרקטיביים הרפוי נגד סרטן ומחלות אוטואימוניות 42, 43, 44, 45. DCs immunogenic שנוצר בפרוטוקול זה יכול לשמש כדי לשפר את יעילות החיסון נגד מחלות זיהומיות וגידולים; בעוד שניתן להשתמש DCs tolerogenic לשלוט בתגובות תא T הרצוי ולמנוע דחיות לאחר השתלה. המורכבאיזון בין חסינות וסובלנות תלוי מאוד על מצב בידול DC. בידול DC הוא תכנית הסלולר ומתואמת נשלטת על ידי מסלולי איתות מרובים גורל מטבולים. מדינות בידול שונים של DC שונה בצרכים bioenergetic וביוסינטזה; למשל, DCS מופעל דורש עיבודים מטבולית אנרגטיים יותר חשובים להישרדות והגירה לעומת DCs ב נח מדינה. חשוב לציין כי ויטמין D3, dexamethasone ו rapamycin ידועים ביכולתם לגרום DCs tolerogenic, תוארו להשפיע מטבוליזם DC. במאמר זה, את חילוף החומרים האנרגטיים של moDCs ממדינות בידול שונות אופיינו באמצעות מנתחי שטף תאיים ו moDCs tolerogenic הציג פלסטיות המטבולית הגבוהה ביותר LPS-induced התבגרות ירד פלסטיות זו. מטבוליזם אנאבוליים תומך התבגרות DCs תוך השפעות חילוף החומרים קטבולי tolerogenic DC מתפקד 46. קל DCSהמופק פרוטוקול זה יכול לשמש כדי להעריך האם לשנות את המצב מהטבולים של DCs טומן בחובם את מפתח השינוי חסינות וסובלנות רפויה. לסיכום, הצגנו פרוטוקול הדור של בוסר, tolerogenic ובוגרת moDCs חיוני ללימוד פונקציות immunoregulatory &#39;DCs.

DC תוארה לראשונה על ידי פול לנגרהנס (תאי לנגרהנס) במאה התשע עשרה אשר בסימוכין ידי Jolles 1 ומאופיינת ראלף שטיינמן זנוויל כהן בשנת 1973 שזיהו אותם מציגי אנטיגן מקצועיים תאים 2. DCs נמצא בדם היקפי וברוב הרקמות של הגוף, במיוחד בשפע ברקמות חשופות לסביבה החיצונית כמו העור (בהווה כתאים לנגרהנס) ובסופו של רפידות האף, הריאות, הקיבה והמעיים המאפשרות אותם נתקלים אנטיגנים חיצוניים. יש בשלה DCs יכולת endocytic אך יכולת נמוכה יחסית כדי לעורר תאי T 3. בשלה DCs לבטא קולטנים זיהוי דפוסים שונים (PRRs) כי דפוסים מולקולריים ללכוד קשור הפתוגן (PAMPs) או דפוסים מולקולריים הקשורים ניזק (damps) 4. אותות סכנה הפעילו לנהוג הבשלה לקראת DCs immunogenic בעוד מולקולות עצמיות לגרום unresponsivene תא Tss אפופטוזיס 5. DCs immunogenic מאופיין גברת הביטוי של מולקולות MHC ומולקולות משטח שיתוף גירוי ויכולתי תאי T נאיביים ממשלת 6,7. בשלה DCs ניתן גם התבגר כלפי מדינה Treg וישכנע או tolerogenic בתגובה 1a המטבוליט ויטמין D3, 25 (O) 2 D 3 וסוכני אימונוסופרסיבי מסוימים כמו Interleukin-10 (IL-10), dexamethasone ו Rapamycin 8-9. DCs Tolerogenic מאופיין ביטוי immunoreceptor שלהם טירוזין מבוסס מוטיבים מעכבים (ITIMs) המכילים קולטנים ligands שטח. התמרה האות של ITIMs המכילים בני משפחה ILT, ILT3 ו ILT4 ב DCs tolerogenic לעכב alloproliferation ולנסוע Foxp3 + Treg הרחבת 10,11. תכונות ייחודיות אלה של DCs tolerogenic להוביל העצמה העמוקה שלהם in vivo, כלומר את יכולתו להשפיע על סובלנות עמידה שתלי אלוגנאית מושתלי supprESS להתפתחותן של מחלות אוטואימוניות. Tolerogenic DCs ניתן לראות אפוא כמו תת-סוג של DCs בוגרת מקוטב שבו לתפקד בלימת אקטיבציה החיסונית. נכון לעכשיו, יש שני תת הכללי של תאים דנדריטים בדם ההיקפי האנושי: DCS plasmacytoid ו DCs מיאלואידית 12. DCs במחזור הם המהווים נדירים פחות מ -2% של לויקוציטים בדם אנושי וזה מהווה קושי לבידודה של מספר מתאים של DCs ללמוד פונקציות immunoregulatory שלהם. כדי להתגבר על בעיה זו, DCS בדיל מונוציטים משמש מודל במבחנה לחקר תפקוד תאים דנדריטים. יש DCs במבחנה אלה קולטנים פונקציות דומות לעומת in vivo DCs. השוואה מפורטת של in vivo DCS ו ב DCs נגזר מונוציטים שנוצר במבחנה (moDCs) נחקרות על ידי מעבדות אחרות 13, 14, 15. הוא דיווח גם כי moDCs ו- CD1c + DCs היו מקביל ב אנטיגן בהצגת גרימת תפקוד תא T 15. במאמר זה, אנו מתארים שיטה להפקת moDCs בשלה מן מונוציטים בדם ההיקפי ולאחר מכן הבחנה אותם DCs immunogenic ו tolerogenic. מונוציטים נגזרים אלה תאים דנדריטים (moDCs) מאופיינים סמני פני השטח שלהם, פרופיל ציטוקינים, פונקציות immunoregulatory ומדינות מטבולית. תאים דנדריטים immunogenic ו tolerogenic לייצר ציטוקינים שונים אשר לגרום להתרחבות או של תאי T אלוגנאית או תאי T רגולטוריים. במאמר זה, פרופיל ציטוקינים מבוצע עם מערכות בטכנולוגיית זמנית. מדיום של תאי צמיחה מודגרת עם חרוזים בצבעים משותק נוגדן ולקרוא מנתח קומפקטי. מדינות מטבולית של DCs מנותחות באמצעות מנתחי שטף תאיים המודדים שיעור צריכת חמצן, אינדיקטור נשימה תאית, וקצב החמצה תאי משקף glycolyticשטף בתאים דנדריטיים. מדידת שיעורי bioenergetics אלה מספקת אמצעי כדי לעקוב אחר השינויים המטבוליזם תאי שחיוניים בפיתוח תאים דנדריטים ותפקוד.

<table><tbody><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-03</td> מזרק <td>בידוד PBMC</td></tr><tr><td></td><td>בקטון, דיקינסון</td><td>302832</td><td>בידוד PBMC</td></tr><tr><td>1.5 מ"ל צינור צנטריפוגה</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td>בידוד PBMC</td></tr><tr><td>15 מ"ל שפופרת פלקון</td><td></td><td>352096</td><td>PBMC בידוד</td></tr><tr><td>50 מ"ל שפופרת פלקון</td><td></td><td>352070</td><td>PBMC בידוד</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td>PBMC בידוד</td></tr><tr><td>0.2 ומיקרו; m filter</td><td>Sartorius stedim biotech</td><td>17597</td><td></td></tr><tr><td>PBMC בידוד MACs ערכת</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-201</td><td>העשרת מונוציטים</td></tr><tr><td>מפריד MiniMACS</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-102</td><td>העשרת מונוציטים</td></tr><tr><td>תרבית תאים בדרגת תרבית תאים</td><td>Invitrogen, Life Technologies</td><td></td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11875-093</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30070103</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15140</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>פוספט Buffered Salt</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>10010-031</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>NEAA</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11140-040</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>GibcoLife Technologies</td><td>15575</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15630-080</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>נתרן פירובט</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>11360-070</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>GM-CSF</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-868</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>IL-4</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-093-924</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>ויטמין D3</td><td>Sigma</td><td>D1530</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>דקסמתזון</td><td>Sigma</td><td>D2915</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma</td><td>l2755</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>trypan blue</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15250-061</td><td>תרבית תאים</td></tr><tr><td>HLADR מצומד PerCP&nbsp;</td><td>BioLegend</td><td>307628</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד PE CD80</td><td>BD Biosciences</td><td>557227</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד PE CD83&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>556855</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד PE CD86&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>555665</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד APC CD11c</td><td>BD Biosciences</td><td>340544</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד PE CD14&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-242</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד PE BDCA3&nbsp;</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-514</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד APC ILT3&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>12-5139-73</td><td>איזוטיפ ציטומטריה</td></tr><tr><td>תואם PerCP- מצומד Mab</td><td>BioLegend</td><td>400250</td><td>איזוטיפ ציטומטריה</td></tr><tr><td>תואם PE- מצומד Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-835</td><td>איזוטיפ ציטומטריה</td></tr><tr><td>תואם APC- מצומד Mab</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-091-836</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>BD LSR II ציטומטר זרימה</td><td>BD Pharmingen</td><td>BD LSR II&nbsp;</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>ציטופיקס / ציטופרם</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>APC / CY7 מצומד CD25</td><td>BD פארמינגן</td><td>557753</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>PE / CY7 מצומד CD4</td><td>Biolegend</td><td>300512</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>מצומד PerCP CD3</td><td>Biolegend</td><td>300428</td><td>ציטומטריה</td></tr><tr><td>EasySep ערכת העשרת תאי T CD4 + אנושי</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>19052</td><td>מחקר Alloreaction</td></tr><tr><td>מגנט EasySep&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>18000</td><td>מחקר Alloreaction</td></tr><tr><td>עקבות תאים ערכת התפשטות תאים CFSE</td><td>בדיקות מולקולריות</td><td>C34554</td><td>מחקר Alloreaction</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>14025092</td><td>מחקר Alloreaction</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647-conjugated FoxP3</td><td>BD Biosciences</td><td>560889</td><td></td></tr><tr><td>Milliplex MAP Human Cytokine/Chemokine לוח חרוזים מגנטי</td><td>Millipore</td><td>HCYTOMAG-60K</td><td>ניתוח ציטוקינים</td></tr><tr><td>5 מ"ל צינור פוליסטירן</td><td>פלקון</td><td>352058</td><td>ניתוח ציטוקינים</td></tr><tr><td>נוזל נדן לומינקס&nbsp;</td><td>Millipore</td><td>SHEATHFLUID</td><td>ניתוח ציטוקינים</td></tr><tr><td>FLEXMAP מערכת תלת מימד עם תוכנת xPONENT</td><td>Luminex Corporation</td> FLEXMAP ניתוח <td>ציטוקינים</td><td>תלת מימד</td></tr><tr><td>MitoTracker אדום CMXRos</td><td>איתות תאים</td><td>9082</td><td>פעילות מיטוכונדריאלית</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D2650</td><td>פעילות מיטוכונדריאלית</td></tr><tr><td>XF בדיקה בינונית (OCR)</td> <td>Seahorse Bioscience</td><td>102352-000</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr><tr><td>גלוקוז&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8769</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr><tr><td>XF בסיס בינוני (ECAR)</td> <td>Seahorse Bioscience</td><td>102353-100</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>25030-081</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr><tr><td>קליברנט</td><td>סוסון ים Bioscience</td><td>100840-000&nbsp;</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr><tr><td>ערכת מתח XF Cell Mito</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>103015-100</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr><tr><td>XF ערכת מתח גליקוליזה</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>103020-100</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr><tr><td>סוסון ים&nbsp;</td><td>Seahorse Bioscience</td><td>XFe96</td><td>הסתגלות מטבולית</td></tr></tbody></table>

הדור של בוגר, בוגרת tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

תוצאות תגובה חיסוניות של יחסי גומלין מורכבים בין מערכת החיסון המולדת הלא-specific antigen והמערכת החיסונית אדפטיבית אנטיגן ספציפי. המערכת החיסונית היא איזון מתמיד בשמירה סבילה מולקולות עצמיות ותגובה במהירות לפתוגנים. תאי דנדריטים (DCS) הם תאי מציגי אנטיגן מקצועיים חזקים מקשרים מערכת החיסון המולדת למערכת חיסון אדפטיבית ולאזן את התגובה מסתגלת בין העצמי שאינו עצמי. בהתאם אותות התבגרות, תאים דנדריטים בשלים יכול להיות מגורה באופן סלקטיבי להתמיין DCs immunogenic או tolerogenic. תאי דנדריטים immunogenic לספק אותות התפשטות לתאי T אנטיגן ספציפי עבור שיבוטים; תוך התאים הדנדריטים tolerogenic להסדיר סובלנות על ידי אנטיגן ספציפי T-cell המחיקה או הרחבת המשובטים של תאי T רגולטוריים. בשל מאפיין ייחודי זה, תאים הדנדריטים הם בקשו במיוחד לאחר סוכנים טיפוליים כמו לסרטן dise אוטואימוניותases. תאים דנדריטים ניתן לטעון עם אנטיגנים ספציפיים במבחנה מוזרק לגוף האדם לעלות תגובה חיסונית ספציפית הן immunogenic ו tolerogenic. עבודה זו מציגה אמצעי ליצירת במבחנה מן מונוציטים, תאים דנדריטים בשלים נגזר מונוציטים (moDCs), tolerogenic ו moDCs בוגרת, הנבדלים זה מזה ביטוי סמן פני השטח, פונקציה פנוטיפים מטבוליים.

טיהור מונוציטים ו התמיינות תאים דנדריטים מונוציטים היו מטוהרים מן PBMCs ידי צנטריפוגה צפיפות של דם ההיקפי (איור 1 א), ואחריו CD14 + הפרדה מגנט סלקציה חיובית (איור 1B) ו בתרבית בינונית מלא בנוכחות GM-CSF ו- IL-4 להשיג תאי דנדריטים בשלים ( איור 2 א). תוספת של ויטמין D3 ו dexamethasone פוסט GM-CSF ו- IL-4 הביא את הבידול של moDCs בשלה לתוך moDCs tolerogenic (איור 2 ב). LPS התווסף לגרום להבשלת moDCs בשלה להבשיל moDCs (איור 2 ג) ו moDCs tolerogenic היו מגורה עם LPS לאמת עמידות התבגרות (איור 2 ד). דגימות הדם המשמשות בעבודה זו התקבלו מתורמים בריאים עם קודם הודיעו<html> הַסכָּמָה. אפיון moDC Surface מרקר אפיון על ידי cytometry זרימה ניתוח של סמני משטח DC הראה כי moDCs הבוגרת הביעה את הרמות הגבוהות ביותר של סמני התבגרות HLA-DR, CD83 ו CD86 לעומת moDCs tolerogenic שטופל LPS, moDCs tolerogenic ו moDCs המפותח (איור 3). תוצאות אלו הראו כי moDCs tolerogenic היו עמידים התבגרות לעומת moDCs בשלה בעקבות גירוי LPS. בנוסף, LPS שטופלו moDCs tolerogenic ו moDCs tolerogenic מוצג ביטוי מוגבר של CD14, BDCA3 (CD141) ותעתיקים אימונוגלובולין דמוי (ILT) 3 לעומת moDCs בשלה ובוגרת. MoDCs tolerogenic זה שעוררו כאן עולה בקנה אחד עם דיווחים קודמים 23. יפ-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; אפיון פונקציונלי של moDCs moDCs המושרה על התבגרות להיות immunogenic ולשחרר ציטוקינים המקדמים התפשטות של CD4 + T-תאי. החוקרים העריכו את immunogenicity של תת moDC השונה על ידי מדידת ההתפשטות של תאי T שיתוף תרבותי. MoDCs Tolerogenic היו גרוע immunogenic לעומת moDCs הבוגרת, כפי שמוצג על ידי alloproliferation הנמוך של CD4 + T-תאי (איור 4 א). MoDCs Tolerogenic מאופיין IFN-Γ, נמוך IL-12p40, וגבוה IL-10 ציטוקין ייצור הנמוך שלהם alloreaction שיתוף תרבויות עם CD4 + T לתאים (איור 4B). יתר על כן, הגדלת מספר moDCs tolerogenic ב שיתוף תרבויות של moDCs בוגרת המושרה allospecific CD4 + T-תאים הגדילו את תדירות Foxp3 גבוהה CD25 + תאי T רגולטוריים (איור 4C). <pclass = &quot;jove_content&quot; FO: keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; ניתוח של פעילות מיטוכונדריאלי האדום CMXRos משמש כדי לשקף את פעילות המיטוכונדריה לנתח את רמות פוטנציאל הממברנה של המיטוכונדריה ב moDCs. MoDCs Tolerogenic נצפה להיות פעילות המיטוכונדריה גבוהה בהשוואה תת הבדיל moDC האחר (איור 5 א). לאחר מכן, שיעור צריכת חמצן המיטוכונדריה (OCR) נבחן עבור תת-הסוגים השונים moDC באמצעות bioanalyzer. מדידות OCR לאפשר תובנה ברזולוציה גבוהות על הפרופיל המטבולי, מתן מידע כולל אך לא מוגבל נשימה בסיסית, קיבולת נשימת חילוף, דליפת פרוטון ונשימה הלא המיטוכונדריה. מדידת OCR מספק אמצעי כדי להעריך את היכולת של התאים להגיב ללחץ. התאים מוטרדים מבחינת מטבולית על ידי התוספת של שלוש תרכובות שונות ברציפות. הזריקה הראשונה היא Oligomycin (מצמד ATP) אשר מעכב V המורכבת של שרשרת העברת אלקטרונים (ETC), מעכב סינתזת ATP. צעד זה שמייחד את אחוז החמצן הנצרך לסינתזת ATP ואחוז החמצן נצרך להתגבר דליפת פרוטון על פני קרום המיטוכונדריה הפנימי. הזריקה השנייה היא FCCP (ETC מאיץ) משבש סינתזת ATP על ידי העברת יוני מימן על פני הקרום המיטוכונדריה במקום דרך ערוץ הפרוטון של V. קומפלקס קריסת פוטנציאל הממברנה של המיטוכונדריה מובילה לצריכה מהירה של אנרגיה וחמצן, ללא דור של ATP. טיפול FCCP ניתן להשתמש כדי לחשב את קיבולת הנשימה חילוף של תאים. תחזוקה של קיבולת הנשימה חילוף בתנאי קיצון היא קריטית להישרדות התא. יכולת זו נקבעת על ידי מספר גורמים, לרבות הזמין של מצע היכולת התפקודית של האנזימים מעורבים וכו הזריקה השלישית היא שילוב של Rotenone, Complלשעבר הייתי מעכב, ו Antimycin A, מעכב III מורכב. שילוב זה נכבה נשימת המיטוכונדריאלי ו- OCR הוא ציין להקטין כתוצאה במיטוכונדריה לקויה (איור 5 ג). MoDCs Tolerogenic גילה רמות OCR בסיס גבוהות moDCs הבוגרת (5D איור). בנוסף, tolerogenic, LPS-tolerogenic, ו moDCs בשלה והראו גדילת קיבולת נשימת חילוף לעומת moDCs הבוגרת (איור 5E). אפיון מטבולית של moDCs בגלל חומצה לקטית ופרוטונים משתחררים מתאי במהלך הגליקוליזה, ניתחנו את הפעילות glycolytic של moDCs על ידי ביצוע ניתוח בזמן אמת של שיעור החמצה תאיים (ECAR) (איור 6). בנוכחות גלוקוז, שיעור glycolytic של כל moDCs גדל לעומת השלב הבסיסי, עםmoDCs הבוגרת מפגין שיעור glycolytic גבוה moDCs המפותח (6D איור). Tolerogenic ו moDCs בשלה הציגו הגליקוליזה מקסימלי גבוהה (הנגרמת על ידי oligomycin בנוכחות גלוקוז) לעומת moDCs שטופל LPS (איור 6). קיבולת glycolytic של moDCs tolerogenic ובלתי הבשל הייתה גבוהה יותר מאשר moDCs הבוגרת (איור 6E). בניגוד שיעור glycolytic הגבוהה שלהם, מילואים glycolytic היה הנמוך ביותר מזה moDCs בוגרת (איור 6F). <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig1.jpg" /> איור 1:. טיהור מונוציטים מן הדם היקפי (א) 25 מיליליטר של דם מצוי בשכבה בזהירות על 15 מיליליטר של Ficoll לכל 50 מ&quot;ל צינור לפני צנטריפוגה. PBMCs מרוכזים בשכבה מתחת פלזמה לאחר צנטריפוגה צפיפות. (ב) PBMCs מודגרת עם microbeads כי הם conj<html> ugated כדי monoclonal antibodies CD14 האדם (אלוטיפ: עכבר IgG2a). ולאחר מכן הועמסו על עמודה אשר ממוקם בשדה המגנטי של מפריד לבודד CD14 + מונוציטים <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig2.jpg" /> איור 2: אפיון מורפולוגי של moDCs. (א) 200 ng / ml של GM-CSF ו- IL-4 מתווסף מונוציטים CD14 + מטוהרים ביום 0, 4 ו -6 כדי ליצור moDCs בשלה; ו- (ב) צעד נוסף של גירוי עם 100 ננומטר ויטמין D3 ו -10 ננומטר dexamethasone ביום 5 מייצר moDCs tolerogenic. MoDCs בשלה moDCs tolerogenic מגורה עם 1 מיקרוגרם / מ&quot;ל LPS ביום 6 שיש להפיק (C) להבשיל moDCs ו (ד) moDCs LPS-tolerogenic.ttps: //www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <img alt="איור 3" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig3.jpg" /> איור 3:. אפיון מרקר Surface ידי cytometry זרימה רמות הביטוי של סמנים משטח HLA-DR, CD80, CD83, CD86, CD11, CD14, BDCA3 ו LT3 ב tolerogenic (ירוק), LPS-tolerogenic (שחור), לא בוגר (אדום), בוגרת (כחול) moDCs. שולטת אלוטיפ מוצגים באפור. היסטוגרמה אישי לכל סוג תא זמם עם ספירת תאי ציר Y נגד יומן ציר ה- X של עוצמת fluorophore ומצופית. כל היסטוגרמות מייצגים ארבעה ניסויים בלתי תלויים. נתון זה יש הבדל בין J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10.4049 / jimmunol.1303316 (1 ביוני 2015). לשכפל ו מחדש עם בעלי הזכויות. כל הזכויות שמורות 2015. האגודה האמריקאית שלאימונולוגים, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig4.jpg" /> איור 4: אפיון פונקציונלי של moDCs. (א) כימות תדירות alloproliferation של CD4 + T-תאי המושרה על ידי שיתוף תרבות עם מספר גדל והולך של tolerogenic (TOL; ירוק), LPS-tolerogenic (L-TOL; שחור), לא בוגר (IMM; אדום) ובוגרת (MAT ; כחול) moDCs. הנתונים אספו מארבעה ניסויים בלתי תלויים; כלומר הבדלים סטטיסטיים SEM + בין כל moDCs לעומת moDCs בוגרת נותחו על ידי ANOVA דו סטרי עם ניתוח ציטוקין שלאחר מבחן השוואה מרובות Dunnett. (B) של IFN-Γ (פאנל משמאל), IL-12p40 (פאנל באמצע) ו אִי- 10 (בחלונית הימניתיא) supernatants מן alloreactions בין CD4 + T-תאי שיתוף תרבותי עם מספר גדל והולך של מי tolerogenic (ירוק), לא בוגר (אדום) או (כחול) moDCs בוגרת. נתונים היו נקווים משישה ניסויים בלתי תלויים; ממוצע ± SEM (ג) CD4 + T-cell alloproliferation והרחבת תאי T רגולטוריים המושרה על ידי שיתוף התרבות עם moDCs בוגרת בנוכחות של מספר גדל והולך של moDCs tolerogenic. ציר Y שמאלי, תדירות הפצת CD4 + T-cell. ציר Y ימני, תדירות Foxp3 גבוהה CD25 + התאים מגודרים על שגשוג CD4 + T-תאי. הנתונים היו נקווה משלושה ניסויים עצמאיים; ממוצע ± SEM הבדלים סטטיסטיים בין נוכחות מול העדר נוכחות של moDCs tolerogenic נותחו על ידי ANOVA חד כיווני עם שיתוף שלאחר מבחן השוואה מרובות Dunnett. (ד) CD4 + T-cell alloproliferation (שמאל) ותדירות CD25highFoxP3 + תאים (מימין) הנגרמת על ידי תרבות עם moDCs tolerogenicבנוכחות של מספר גדל והולך של moDCs הבוגרת. הנתונים היו נקווים משניים לשלושה ניסויים בלתי תלויים; ± SEM מתכוון הבדלים סטטיסטיים בין הנוכחות מול עדר נוכחות של moDCs הבוגרת נותחו על ידי דו כיוונית ANOVA עם השוואה מרובה Dunnett שלאחר בדיקה. נתון זה יש הבדל בין J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10.4049 / jimmunol.1303316 (1 ביוני 2015). לשכפל ו מחדש עם בעלי הזכויות. כל הזכויות שמורות 2015. האגודה האמריקאית של אימונולוגים, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig5.jpg" /> איור 5: ניתוח של מיטוכונדריאלי פעילות של moDCs. (א) רמות של פוטנציאל הממברנה של המיטוכונדריה (CMXRos האדום) ב moDCs התקבלו על ידי fניתוח cytometric נמוך. הנתונים של ארבעה ניסויים בלתי תלויים היו נקווה. ממוצע ± SEM (ב) ייצוג סכמטי של נשימה המיטוכונדריאלי בזמן אמת. OCR ניתוח החל נשימת בסיס, לאחר התוספת של oligomycin (עיכוב V מורכב), FCCP (אינדוקצית נשימה מקסימלי), ו rotenone / antimycin תערובת (שרשרת העברת אלקטרונים [ETC] עיכוב). המיטוכונדריה SRC (basal המקסימלי מופחתות נשימה מקסימלי) נגזרת מעקום OCR. (C) מחקר הקינטית נציג של המיטוכונדריה OCR (pmol / min) ב tolerogenic (TOL, ירוק), LPS-tolerogenic (L-TOL, שחור) , לא בוגר (IMM, אדום) ובוגרת (MAT, כחול) moDCs ידי שימוש בחיבור רציף של oligomycin (OLIG), FCCP, ו rotenone / antimycin A (רוט-AA). (ד) כימות OCR הנשימה הבסיס של moDCs ו ( E) לחסוך קיבולת הנשימה של moDCs. הנתונים היו נקוו מחמישה ניסויים בלתי תלויים. ממוצע ± SEמ נתון זה יש הבדל בין J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10.4049 / jimmunol.1303316 (1 ביוני 2015). לשכפל ו מחדש עם בעלי הזכויות. כל הזכויות שמורות 2015. האגודה האמריקאית של אימונולוגים, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 6" src="/files/ftp_upload/54128/54128fig6.jpg" /> איור 6: אפיון מטבולית של moDCs. (א) ייצוג סכמטי של הגליקוליזה בזמן אמת. ניתוח ECAR מתחיל מ ECAR הבסיס, שבה התאים הודגרו בתקשורת גלוקוז ללא ואחריו תוספת של גלוקוז (אינדוקציה הגליקוליזה), oligomycin (אשר גורם הגליקוליזה תא מקסימלי ועיכוב V מורכבות), ולבסוף 2-deoxy-D- גלוקוז(עיכוב הגליקוליזה). שיעור glycolytic (האינדוקציה הגליקוליזה המופחתת עבור ECAR הבזליים), קיבולת glycolytic (הגליקוליזה מקסימלי המופחתת עבור ECAR הבזליים), ובמילואי glycolytic (מופחתי הגליקוליזה מקסימלי לזירוז הגליקוליזה) נגזרים מעקום ECAR. (ב) מחקר הקינטית נציג של הגליקוליזה תלויה ECAR (mPH / min) ב tolerogenic (TOL, ירוק), LPS-tolerogenic (L-TOL, שחור), לא בוגר (IMM, אדום), ובוגרת (MAT, כחול) moDCs ידי שימוש בחיבור רציף של גלוקוז (Gluc), oligomycin (OLIG), ו -2 DG. (C) ברים מראים רמות ECAR הבזליים (ד) שיעור glycolytic (E) קיבולת glycolytic, ו- (F) שמורת glycolytic של moDCs. הנתונים היו נקווה משלושה ניסויים עצמאיים; כלומר 6 SEM. הבדלים סטטיסטיים נותחו על ידי ANOVA חד כיווני עם פוסט-מבחן השוואה מרובה Tukey. נתון זה יש הבדל בין J Immunol 194 (11), 5174-5186, doi: 10.4049 / jimmunol.1303316 (1 ביוני 2015). לשכפל ו מחדש עם בעלי הזכויות. כל הזכויות שמורות 2015. האגודה האמריקאית של אימונולוגים, Inc. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54128/54128fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

ניתן להתמיין באופן סלקטיבי לתאים דנדריטיים טולרוגניים או בוגרים כדי לווסת את האיזון בין חסינות לסבילות. עבודה זו מציגה אמצעי ליצירת תאים דנדריטיים לא בשלים שמקורם במונוציטים (moDCs), moDCs טולרוגניים ובוגרים במבחנה הנבדלים זה מזה בפנוטיפים מטבוליים.

הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לייצר תאים דנדריטיים טולרוגניים ובוגרים ממונוציטים לצורך ניסויים או פיתוח חיסונים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האימונולוגיה על ידי מתן מודל לחקר ההתפתחות, ההתבגרות והצגת האנטיגן של תאים דנדריטיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת יצירת מספר רב של תאים דנדריטיים במבחנה לצורך ניסויים.התחל בהעשרת מונוציטים על ידי ערבוב של 20 מיקרוליטר של תאים חד-גרעיניים בדם היקפי שהוכנו בעבר, או תרחיף תאי PBMC עם 20 מיקרוליטר של טריפאן כחול, כדי לספור את מספר התאים החיים באמצעות ציטומטר. לאחר מכן, צנטריפוגה את תרחיף התא. שאפו את הסופרנטנט לחלוטין, והשעו מחדש את כדור התא לריכוז של 80 מיקרוליטר של מאגר צביעה למשך 10 עד התאים השביעי.הוסף 20 מיקרוליטר של חרוזי מיקרו CD-4 לכל 10 לתאים השביעיים. מערבבים היטב ומדגרים את התאים למשך 15 דקות בארבע מעלות צלזיוס. שטפו את התאים עם מיליליטר אחד של מאגר מכתים לכל 10 לתאים השביעיים, וצנטריפוגה את התאים.שאפו את הסופרנטנט לחלוטין, והשעו מחדש את כדור התא. השג עמודה בינונית לכל היותר פעמיים 10 עד התאים הכוללים השמיניים, והנח את העמודה בשדה המגנטי של המפריד. לאחר מכן, שטפו את העמוד עם 500 מיקרוליטר של מאגר מכתים.הצמיד את מתלה התא אל העמוד, ואסוף את התאים הלא מסומנים העוברים דרך העמוד בצינור של 15 מיליליטר. החלף צינור חדש של 15 מיליליטר מתחת לעמוד ושטוף את העמוד שלוש פעמים עם 500 מיקרוליטר של מאגר מכתים. ודא שמאגר העמודים ריק לפני הוספת מאגר מכתים חדש בין כביסות.הסר את העמוד מהמפריד והניח אותו על צינור טרי של 15 מיליליטר. פיפט מיליליטר אחד של מאגר מכתים על העמוד, ושטוף מיד את התאים המסומנים מגנטית על ידי דחיפה חזקה של הבוכנה לתוך העמוד. לאחר מכן, חזור על שלבי ההפרדה המגנטית באמצעות השבר המאויר בעמודה חדשה כדי להגביר את הטוהר של תאי CD14 פלוס.זרע ארבע קבוצות של CD14 בתוספת מונוציטים בריכוז של נקודת אפס שלוש עד נקודת אפס חמש פעמים 10 עד השישית למיליליטר של מדיום תרבית תאים של IL-4 בשש צלחות באר. דגרו את התאים בחממת תרבית רקמה ב-37 מעלות צלזיוס עם חמישה אחוזי CO2. ביום הרביעי, הסר 850 מיקרוליטר מדיום מהתרבית, והצנטריפוגה.שאפו את הסופרנטנט והשעו מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של מדיום תרבית תאים. מוסיפים את תערובת התאים בחזרה לתרבית. ביום החמישי, הוסף מיקרוליטר אחד של ציר ויטמין D3 ומיקרוליטר אחד של ציר דקסמתזון לליטר אחד של בינוני עד שניים מהסטים, כדי ליצור moDCs טולרוגניים.ביום השישי, הוסף 200 ננוגרם למיליליטר של GMCSF ו-200 ננוגרם למיליליטר של IL-4 לכל הסטים. הוסף מיקרוגרם אחד למיליליטר של LPS לאחת מהערכות שטופלו רק ב-GMCSF ו-IL-4 כדי ליצור moDCs בוגרים. הוסף מיקרוגרם אחד למיליליטר של LPS לקבוצה אחת של moDCs טולרוגניים כדי ליצור moDCs טולרוגניים של LPS.לבסוף, ביום השביעי, קצרו את הסוגים השונים של moDCs על ידי שטיפת צלחת התרבות עם PVS EDTA. ה-moDCs הלא בשלים נוצרו על ידי הוספת GMCSF ו-IL-4 ל-CD-14 מטוהר בתוספת מונוציטים בימים אפס, ארבע ושש. תוספת של ויטמין D3 ודקסמתזון לאחר GMCF ו-IL-4 הביאה להתמיינות של moDCs לא בשלים ל-moDCs טולרוגניים.LPS נוסף כדי לגרום להבשלה של moDCs לא בשלים ל-moDCs בוגרים. ו-moDCs טולרוגניים עוררו עם LPS כדי לוודא עמידות להתבגרות. ניתוח של סמני משטח DC גילה כי מודיקים בוגרים מבטאים את הרמות הגבוהות ביותר של סמני התבגרות HLA-DR, CD80, CD83 ו-CD86.לעומת זאת, moDCs טולרוגניים הראו ביטוי מוגבר של CD14, BDCA3 ותעתיקים דמויי אימונוגלובולין בהשוואה ל-moDCs לא בשלים ובוגרים. באמצעות CMXRos אדום כדי לשקף פעילות מיטוקונדריאלית, נצפו moDCs טולרוגניים בעלי פעילות מיטוקונדרית גבוהה יותר בהשוואה לתת-סוגים אחרים של moDC. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום האימונולוגיה לחקור תכונות מטבוליות בתאים דנדריטיים לפיתוח חיסונים ואימונותרפיה.

generation-immature-mature-tolerogenic-dendritic-cells-with-differing

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

וידאו זה מדגים את נוהל המבדילים תאים דנדריטים מיאלואידית ממח העצם העכבר. בידוד של השוקה העכבר הירך, ועיבוד של מח העצם הם הפגינו. תמונות הוכחת מורפולוגיה תא לפני ואחרי בידול, דמויות המתארות פנוטיפ התא IL-12 בייצור התבגרות הבאות באמצעות CPG מוצגים.

התרבות של תאים דנדריטים מיאלואידית מ מבשרי מח עצם

מצגת Antigen באיברים הלימפה משני על ידי התאים הדנדריטים הוא קריטי עבור ייזום של תא T בתיווך תגובה חיסונית אדפטיבית. כאן אנו מדגימים את התרבות של מוח העצם נגזר תאים דנדריטים Murine, הפעלה, וסימון עבור הדמיה 2-פוטון.

הדור של מח עצם נגזר תאים דנדריטים Murine לשימוש 2-פוטון הדמיה

סרטון זה מדגים את יצירתם של תאים דנדריטיים לא בוגרים, בוגרים וסובלוגניים, או DCs, ממונוציטים אנושיים. הדגירה של מונוציטים עם גורמי גדילה וציטוקינים מובילה לייצור DCs לא בוגרים. בתגובה למולקולות ויסות חיסוניות, DCs לא בשלים מתמיינים ל-DCs סובלרוגניים ובוגרים.

יצירת תאים דנדריטיים לא בוגרים, בוגרים וסובלניים ממונוציטים

סרטון זה מדגים שיטה להמרת תאים דנדריטיים (DCs) ל-DCs סובלרוגניים (TolDCs) באמצעות סוכן תרופתי אימונומודולטורי. המרה זו מאושרת על ידי הערכת הפונקציה TolDC באמצעות ההשפעה החיסונית שלהם על תאי CD4+ T.

השפעת סוכן פרמקולוגי אימונומודולטורי על האינטראקציה בין תאים דנדריטיים ותאי T CD4+

השיטה הנפוצה ביותר להפקת כמויות גדולות של תאים דנדריטים אוטולוגי (DCS) לשימוש באימונותרפיה גידול מתוארת. השיטה משתמשת IL-4 ו-GM-CSF להבדיל מDCs מונוציטים. את DCs הבוסר הוא גירוי לבוגרת ולאחר מכן נטען עם אנטיגנים לפני שהם מוזרקים חזרה לחולה.

הכנת תאים דנדריטים גידול Antigen טעון בוגרים לחיסוניים

תאי מח עצם שגודלו עם גורם מגרה מושבת מקרופאגים גרנולוציטים (GM-CSF) מייצרים תרבית הטרוגנית המכילה מקרופאגים ותאים דנדריטיים (DCs). שיטה זו מדגישה שימוש בקשירת MHCII והיאלורונן (HA) כדי להבדיל בין מקרופאגים ל-DCs בתרבית GM-CSF. למקרופאגים בתרבות זו יש קווי דמיון רבים למקרופאגים המכתשית.

דור וזיהוי GM-CSF נגזר מכתשיים דמוי מאקרופאגים דנדריטים תאי עכבר מח עצם

כאן אנו מספקים שיטה לזיהוי ובידוד מספר גדול של GM-CSF מונע התאים מיאלואידית באמצעות מיון תא במהירות גבוהה. ניתן לזהות חמש אוכלוסיות נפרדות (אבות מיאלואידית נפוצות גרנולוציט/מקרופאג אבות, ומונוציטים, נגזר מונוציט מקרופאגים, נגזר מונוציט DCs) מבוסס על הביטוי Ly6C ו- CD115.

דור מספר גדול של תאים מיאלואידים אבות ו מבשרי תא דנדריטי ממח העצם מאתר באמצעות תא הרומן מיון אסטרטגיה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לפתח, איפיון תאים דנדריטים tolerogenic (TolDCs), להעריך את השירות immunotherapeutic שלהם.

פיתוח ואפיון פונקציונאלי של תאים דנדריטים מאתר Tolerogenic

כאן אנו מספקים פרוטוקול לסינון גורמי שעתוק פוטנציאליים המעורבים בפיתוח של תא דנדריטי (DC) באמצעות transduction lentiviral של shRNA כדי להשיג קווי תא נוק-אאוט יציבים עבור בידול במבחנה DC.

מחקר של התפתחות תאים דנדריטיים על ידי קצר סיכות ראש RNA מתווך RNA נוקאאוט גזע הגבעול Hematopoietic וקו תא האב הקדמה במבחנה

מוצג פרוטוקול ייחודי ומקיף ליצירת תאים דנדריטיים אנושיים שמקורם במונוציטים אנושיים (mo-DCs) מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים מבודדים (PBMCs) באמצעות טיפול בסיאלידאז. יתר על כן, מתוארות שיטות להערכת האפיון הפנוטיפי והפונקציונלי של mo-DCs ולהעריך כיצד טיפול בסיאלידאז משפר את רמת ההתבגרות של mo-DCs.

יצירת תאים דנדריטיים שמקורם במונוציטים עם פנוטיפים סיליליים שונים

אנו מתארים הליך להערכת היכולת של חומרים פרמקולוגיים לייצר תאים דנדריטיים טולרוגניים מתאים דנדריטיים נאיביים שמקורם במונוציטים במבחנה ולאמת את עוצמתם על ידי יצירת תאי T רגולטוריים אוטולוגיים.

שיטה פשוטה ויעילה לבדיקת חומרים אימונומודולטוריים ליצירת תאים דנדריטיים טולרוגניים ממונוציטים CD14+ אנושיים

למד ליצור תאי דנדריטים טולרוגניים ובוגרים ממונוציטים לחקר אימונולוגיה ופיתוח חיסונים. השיטה מאפשרת ייצור מספרים גבוהים של תאים מבודדים עם תכונות מטבוליות שונות.

הדור של בוגר, בוגרת Tolerogenic דנדריטים תאים, עם שינוי פנוטיפים מטבולית

גלה סרטונים נוספים