הקלטה בו זמנית של Electroretinography ופוטנציאלים חזותיים מעוררים אצל חולדות הרדימו

המטרה הכוללת של הליך זה היא למדוד בו זמנית את האלקטרורטינוגם ואת הפוטנציאל המעורר החזותי בחולדה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום מדעי המוח של סדקים. כגון האם השפעת ההזדקנות או המחלות משפיעה על רכיבים מסוימים במסלול הראייה.

היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת הערכה מקיפה של תפקוד הרשתית והשפעתה במעלה הזרם על תפקוד קליפת המוח המעוררת חזותית. כדי להתחיל בהליך זה, הכינו מראש את האלקטרודות הלא פעילות של ERG בהתאמה אישית על ידי חיתוך חוט כסף באורך 70 מילימטר ויצירת לולאה בקוטר שמונה מילימטרים כדי להקיף את עין העכברוש. הכן עיגול אחיד והתאם את גודל הלולאה על ידי עיצובו על קצה ראש צינור של מילימטר אחד.

זה חשוב מכיוון שטבעת קטנה מדי עלולה להעלות בטעות את הלחץ הפנימי, כאשר טבעת גדולה מדי יכולה להגביר את השונות של האותות. לאחר מכן, הכינו מראש את האלקטרודה הלא פעילה VEP בהתאמה אישית על ידי חיתוך כסף באורך 70 מילימטר. ויצירת אליפסה בקוטר שמונה מילימטרים כדי להתחבר לחותכות החולדה.

לאחר מכן, הכינו מראש את האלקטרודות האקטיביות של ERG בהתאמה אישית על ידי חיתוך חוט כסף באורך 30 מילימטר ויצרו לולאה קטנה בקוטר של כמילימטר עד שני מילימטר המשמשת למגע עדין עם קרנית החולדה עם מינימום שפשופים בקרנית. לאחר מכן, חבר היטב את האלקטרודות למוליכי האלקטרודה על ידי שזירת הכסף עם החוט הפנימי החשוף. בידוד עודפי מתכת חשופה עם נייר דבק כדי להפחית חפצים פוטו-וולטאיים.

עבור האלקטרודות האקטיביות של ERG, ניתן למרוח שכבות נוספות של מסקינגטייפ כדי להשיג עטיפה עבה וקשיחה יותר כך שיהיה קל יותר להחזיק את האלקטרודה עם מיקרו-מניפולטור. על כל אלקטרודה לא פעילה של ERG, הדביקו חתיכה קטנה של אטב וו ולולאה לסרט המסקינגטייפ כדי לאפשר חיבור יציב לרצועת צוואר המכרסם. לאחר מכן, עבור כל אלקטרודה פעילה של VEP, חבר קליפ תנין לחוט הפנימי של מוביל האלקטרודה.

מיד לפני ההקלטות, יש לצבוע את המשטחים החשופים של חוטי הכסף בכלוריד כדי לשפר את הולכת האות. לשם כך, חבר את הקתודה למסוף השלילי של הסוללה וטבל את הקצה השני במי המלח. לאחר מכן, טבלו את קצה הכסף על חוט האנודה לתוך מלח רגיל וחברו את הקצה השני של חוט האלקטרודה הזה, למסוף החיובי של סוללת תשעה וולט.

נתק אותם לאחר 20 שניות וקצה הכסף של חוט האלקטרודה צריך להיות מצופה באופן שווה בלבן. חזור על הליך הכלור עבור כל אלקטרודות הכסף ERG ו-VEP. בהליך זה יש לחטא את האזור המגולח של בעל חיים מורדם עם 10% יוד פובידון שלוש פעמים.

בצע חתך סגיטלי לאורך קו האמצע של הראש בעזרת אזמל וכרת מעגל של רקמת עור בקוטר 20 מילימטר כדי לחשוף את עצם הגולגולת. לאחר מכן, הסר את הפריאוסטאום הבסיסי על ידי גירוד וייבוש בגזה, כדי לחשוף את תפרי הגולגולת העטרתיים והסגיטליים. קדחו שני חורים דרך הגולגולת בשתי ההמיספרות.

הברג ברגי נירוסטה לתוך שני החורים המוכנים מראש עד לעומק של מילימטר אחד כדי לאפשר עיגון יציב. לאחר מכן, הכינו את אזור הניתוח לאמלגם דנטלי על ידי ייבוש עצם הגולגולת בגזה והחזרת העור בשני תפרים. לאחר מכן, מורחים את האמלגם הדנטלי על הגולגולת החשופה כדי להדק את אלקטרודות הבורג במקומן ולהבטיח שכ-1.5 מילימטרים מהברגים חשופים להקלטה.

לאחר מכן, הסר את תפרי הנסיגה. עבור הקלטות סקוטופיות, כל ההליכים מבוצעים בחדר חשוך. למטרות המחשה, מיקום האלקטרודות מתבצע כאן בתאורת חדר רגילה.

החיה הייתה חשוכה מותאמת לפני 12 שעות והורדמה עם קטמין וקסילזין. לאחר הרחבת האישונים והרדמה מקומית, חבר את אלקטרודת ה-VEP הלא פעילה סביב החותכות התחתונות. לאחר מכן, הניחו את החיה על פלטפורמת ה-ERG מול קערת גנצפלד הממוקמת בכלוב פאראדיי.

אבטח את החיה לפלטפורמה עם רצועת אטב וו ולולאה המונחת היטב אך לא בחוזקה סביב העורף. לאחר מכן, מקם את האלקטרודות הלא פעילות של ERG על ידי הקפת טבעת הצלרה בצורה לא פולשנית סביב קו המשווה של העיניים. כשלושה מטרים מאחורי הלימבוס.

ייצב זאת על ידי הצמדת האלקטרודה לרצועת הידוק הקרס והלולאה סביב העורף. חזור על ההליך לעין נגדית. כעת, הדק את האלקטרודות הפעילות VEP על ידי הצמדת תפסי תנין לברגי הנירוסטה, שהושתלו מראש על הגולגולת.

לפני מיקום האלקטרודה הפעילה של ERG, הנח טיפה קטנה של נתרן 1% קרבוקסימתיל צלולוז על האלקטרודה כדי לשפר את איכות האות. מקם את האלקטרודות הפעילות של ERG כדי לגעת קלות במשטח הקרנית המרכזי באמצעות מניפולטור מיקרו המחובר לזרוע הסטריאוטקסית שנבנתה בהתאמה אישית. ודא שהנתרן הקרבוקסימתיל צלולוז נוגע רק בקרנית ולא בסקלרה על ידי ניגוב עודפי נוזלים.

לאחר מכן הכנס שניים עד חמישה מילימטרים של אלקטרודת המחט הקרקעית מנירוסטה, תת עורית לזנב. החלק את הפלטפורמה קרוב יותר לקערת Ganzfeld וודא שעיני החיות מתיישרות עם פתח הקערה כדי לאפשר תאורה אחידה של שתי הרשתית. לאחר מכן, סגור את כלוב פאראדיי כדי להפחית רעש זר.

באמצעות הפרוטוקול לעיל, ניתן להקליט ערימה של צורות גל ERG בתגובה למגוון גירויים כאשר ההבזק העמום ביותר מוצג בתחתית והבהיר ביותר בחלק העליון. ברמות אור עמומות מאוד, ניתן לרשום תגובות סף סקוטופיות. עם הגדלת בהירות הגירוי, צורות הגל נשלטות על ידי גל B ואז גל A השלילי מופיע בגירויים הבהירים ביותר.

ניתן למדוד את פונקציית קולטני האור של המוט על ידי שימוש ב-P3 כדי לדגמן את גל A. איור זה מראה כי משרעת P2 גדלה עם הגדלת אנרגיית הגירוי. ניתן למדוד את תפקוד התא הדו-קוטבי של המוט על ידי מידול תיאוריות תגובת העוצמה של המוט P2 עם פונקציית נאקה ראשטין.

תפקוד תאי הגנגליון ברשתית נבדק באנרגיות זוהרות עמומות ומכומת על ידי משרעת השיא והתזמון של pSTR. תפקוד התא הדו-קוטבי של החרוט נוצר עם פרדיגמת הבזק מזווג ומכומת על ידי משרעת השיא והתזמון של חרוט P2. ניתוח משרעת של ה-VEP נלקח כשיא הטרופ והטרוף למשרעת שיא מה שנותן את התזמון של תגובות אלה.

המשרעת של צורות גל ה-VEP גדלה עם הגדלת אנרגיית הגירוי. כאשר שולטים בה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך כ-30 עד 45 דקות, לא כולל זמן הכנת האלקטרודה והנחת האלקטרודה והאדאקציה. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב במיוחד לשים לב עד כמה מדויק אתה ממקם את האלקטרודות ולאפשר מספיק זמן לאדאקציה

לאחר הליך זה, ניתן לבצע הליכים אחרים כגון שינוי מחלה או טיפולים כדי לענות על שאלות ספציפיות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להכין ולמקם את האלקטרודות וכן כיצד להקליט ולנתח את צורות ה-ERG וגלי ה-VEP.