Name: שיטות חריפה subacute Murine Hindlimb איסכמיה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: למדו שיטות ליצירת איסכמיה תת-חריפה בגפיים האחוריים של עכברים באמצעות מחנקי אמרואיד על עורק הירך. פרוטוקול זה מאפשר מחקר מבוקר של מחלת עורקים היקפית ואנגיוגנזה במודלים חייתיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענקי NIH R21HL118661, R56HL124444 ו-R01HL124444 ל-CDK, ועל ידי מענקי NIH R00HL103797 ו-R01HL125695 ל-JMM.

כל הניסויים בבעלי החיים בוצעו על פי פרוטוקול שאושר על ידי ועדת הטיפול בבעלי החיים המוסדית הדיוק והשימוש. עכברי זכרים שמשו במחקר זה, למרות שכל אחד מהמינים יכולים לשמש כמצוין לצורך המדעי של המחקר. הסרת שיער 1. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפני אינדוקציה של הרדמה, להקים אזור הכנת טרום ניתוחית המורכב כרית חימום מכוסה נקבע על 37 מעלות צלזיוס, יציאת nosecone מחובר זרימה רציפה של isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בתא אינדוקציה הרדמה. הגדר את מד זרימת O 2 עד 1 ליטר / דקה ו isoflurane ל 3 - 1%. הערה: הרדמה בדרך כלל מושרת עכבר 25 גרם עם 2% isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את גירוי התגובה של העכבר על ידי נדנדת התא בעדינות ולשמור על היעדר רפלקס ליישר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את החדר עם O 2 כדי לנקות את isoflurane לפני הפתיחה. במהירות להזיז את העכבר אל p חימוםהמודעה ולחבר אותו isoflurane דרך nosecone. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את isoflurane ל -1.5%. בדוק את הגירוי תגובה על ידי רפלקס דוושת (קמצוץ הבוהן). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל סיכה עיניים בנדיבות על שתי העיניים כדי למנוע התייבשות במהלך הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את השיער משני הגפיים האחוריים באמצעות גוזם חשמלי קטן. מתח את העור בזמן הגילוח, כדי למנוע קרע את העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל קרם להסרת שיער מחומם מראש ולתת לשבת במשך דקות 1. נגב בעדינות משם באמצעות פד גזה לחה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הליך כירורגי במועד מאוחר יותר, לכבות את isoflurane להזיז את העכבר כדי כלוב התאוששות ריק נייר מצופה מגבת כדי להבטיח את העכבר לא לשאוב מצעים בכלוב. צג את החיה עד שהוא מסוגל לשמור על שכיבה sternal. אחרת, להזיז את העכבר אל שולחן הניתוחים. הערה: תהליך הסרת השיער יכול לגרות את העור על מדידות זלוף. מומלץ לחכות 1 - 2 ימים לאחר הסרת השיער של בעלי החיים לפני performing סריקה זלוף טרום ניתוחית או ביצוע ניתוחים. </li></ol> 2. הכנה טרום כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בכלים הבאים במהלך הליך זה; מספרי כירורגיות ישרים קטנים, 2 קנס שקצו מלקחי זווית, מלקחיים גרפו קטנים, מלקחי נהג מחט, 3 כתיבה, מספריים באביב קטנים, צמר גפן קנס שקצו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל הכלים באמצעות חיטוי לפני תחילת הניתוח. השתמש מעקר חם חרוז לפני ובין כל הליך כירורגי, עד 5 חיות. לעקר מנות כלי כירורגיות לניתוחים של קבוצות גדולות מ -5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן שדה כירורגי סטרילי מורכב כרית חימום מכוסית יציאת isoflurane. בצע את כל העבודה תחת מיקרוסקופ לנתיחה 10 סטריאו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים ולהכין את העכבר כמתואר בשלבים 1.1 1.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק כי העכבר הוא מסומם לגמרי ומניחים לתנוחת שכיבה על שולחן הניתוחים. Secure שתי הרגליים באמצעות פלסטר. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם באמצעות כרית חימום מבוקר טמפרטורה, לצרף את בדיקת הטמפרטורה ומאובטח אותו לבסיס של הפלטפורמה כירורגית באמצעות פלסטר כדי לוודא שהוא לא יהיה שלף בטעות במהלך ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את אתר החתך באמצעות מגבוני povidone- יוד ואלכוהול חילופין 3. כסה את בעל החיים עם וילון ניתוח סטרילי וחותכים חור לחשוף את האתר החתך. </li></ol> 3. אינדוקציה של לימב איסכמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש אזמל לעשות חתך ראשוני לאורך במרכז הירך המדיאלי, ריצה מהברך כלפי הבטן, וכן להאריך את החתך כ 1 סנטימטר עם מספריים בסדר (איור 1 א). </li></ol><img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig1.jpg" /> איור 1. אתר כירורגי ציוני דרך אנטומיים דם עבור עכבר Hindlimb איסכמיה כירורגיה. (א) מראה חיצוני שלhindlimb של עכבר במצב שכיבה. השורה בקע מציינת את אתר החתך כדי לבצע את הליכי איסכמיה hindlimb כראוי. (ב) צפייה של כלי דם hindlimb העכבר הפרוקסימלי. סוף הפרוקסימלי של עורק הירך (FA) נובע מתחת הרצועה מפשעתי (IL). בקצה הדיסטלי של FA ממוקם ההסתעפות שלה לתוך עורק popliteal (PA) עורק saphenous (SA). העורקים בטחונות הגדולים הנחה של FA הם עורקים ירך גג לרוחב (LCFA), עורק ירך הזנב הפרוקסימלית (PCFA), ואת העורק ברום בטן הזנב השטחי (SCEA). וריד הירך (ע&quot;ע) פועל בצמוד FA, וענפי ורידים ניתן לראות במקביל לסניפי העורקים המרכזיים. כוכביות (*) יציין את אתרי הפרוקסימלית ומ דיסטלי עבור מיקום של נחשי ameroid או ליגטורות, תלוי אם subacute או איסכמיה חריפה יהיה מושרה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig1large.jpg" target="_blank">אנא CLI</a>CK כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו. <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת מלקחיים, פתח את החתך ולחשוף את הקרום המכסה את רקמת השומן מפשעתי (IFT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש-מלקחיים סגורים, פירס דרך הממברנה אל תוך ההפרדה בין IFT ואת הבטן. בעדינות לשחרר את הלחץ על מלקחיים כדי להפריד את IFT מן שרירי הבטן, לחשוף את צרור העצבים וכלי הדם מתחת. שים את הפרוקסימלי וענפי זנב שטחיים כציוני דרך אנטומיים חשובה (איור 1B). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מפשק ולמשוך את רקמת בטן proximally לחשוף את האתר הכווץ או קשירת ameroid הפרוקסימלי, רק הפרוקסימלי עורק הירך גג לרוחב (איור 1 ב). עורק הגג לרוחב שקרים על 5 מ&quot;מ הפרוקסימלי הפרוקסימלי ועורק זנב שטחי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכניסו שתי כתיבה יותר לתוך החלק הדיסטלי של החתך, המדיאלי אחד לרוחב, כדי למשוך את IFT distally הרחקאתר כירורגית כדי להרחיב את שדה הניתוח. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בשני במלקחיים בסדר להסיר את הקרום החיצוני המכסה את צרור העצבים וכלי הדם. הכנס בעדינות מחצית קצה מלקחיים בסדר בין הוורידים והעורקים, הזזה קצה מלקחיים תחת קרום שקושר אותם יחד. סגור את המלקחיים בעדינות לקרוע את הקרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס את קצה מלקחיים הסגור שבין הוורידים והעורקים וליצור פער ביניהם על ידי שחרור הלחץ על מלקחיים. חזור על הטכניקה הזו כדי ליצור פער בין העורק והעצב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור איסכמיה איבר subacute, למקם הכווץ ameroid על עורק הירך הפרוקסימלית (איור 2). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתקין את הכווץ ameroid הפרוקסימלי, להחליק את קצה מלקחיים תחת עורק הירך לבודד אותה מהחבילה העצבים וכלי הדם. השתמש סט שני של מלקחי angled- לאחוז בשולי הכווץ ולהדריך אותו תחת עורק הירך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את עורק הירך לתוך היםהרבה של הכווץ. חזור על הכווץ דיסטלי, מיקומה מיד הפרוקסימלי הסתעפות של עורק הירך לתוך העורק popliteal ועורקים saphenous (איור 2). </li></ol></li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/54166/54166fig2.jpg" /> איור 2. מיקום של Ameroid נחשים ו ליגטורות. (א) דוגמא של שני נחשים ameroid דגש על עורק הירך לגרום איסכמיה hindlimb subacute. הכווץ הפרוקסימלי מושם רק הפרוקסימלי עורק הירך גג לרוחב (LCFA). הכווץ דיסטלי מושם רק הפרוקסימלי הסתעפות של popliteal (PA) ועורקים saphenous (SA). נחשים מותקנים עם החריץ פונה כלפי מעלה על מנת להבטיח את העורק מוגדר כראוי בתוך הכווץ. (ב) דוגמא של קשירות של עורק הירך לגרום איסכמיה hindlimb החריפה. Ligatures (חיצים צהובים) ממוקם כך שהם לאגף את עמדת הנחשים בלוח (B), ואת עורק הירך הוא transected בין כל סט של שנייה ליגטורה (כוכביות). בר, 1 מ&quot;מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54166/54166fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור איסכמיה איבר חריפה, ולקשור ו transect עורק הירך הפרוקסימלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי transect עורק הירך, חוט 7 - O תפר מתחת העורק רק הפרוקסימלי עמדת הכווץ הפרוקסימלית (ראה שלב 3.7) ולקשור. לקשור ליגטורה שני על דיסטלי 1 מ&quot;מ עד הראשון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במספריים באביב כדי transect העורק בין שתי ליגטורות. עבור חיתוך רוחב עורקי דיסטלי, לחזור על שלבים אלה, נחת שתי ליגטורות על 1 מ&quot;מ זה מזה, רק הפרוקסימלי ההסתעפות של עורק הירך לתוך עורק popliteal ועורק saphenous אלא בהבטחה שהם דיסטלי caud השטחיתאל העורק ברום הבטן (ראה איור 1) </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך באמצעות קטע 5 - O התפרים vicryl. </li></ol> 4. הדמיה זלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזיז את העכבר כדי כרית חימום 37 ° C להגדיר מתחת תרמי זלוף דופלר לייזר (LDPI) ולחבר באמצעות nosecone למקור isoflurane. אם אין לעקוב אחר הטמפרטורה זמין, לאפשר 5 דקות עבור בעכבר כדי להתחמם עד 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפעל את תרמי ופתח את התוכנה לכידת תמונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הסמל &#39;רווקה תמונה חדשה&#39; כדי לפתוח את החלון &#39;סורק ההגדרה&#39;. הגדר את &#39;גודל סריקה&#39; ל &#39;גדולים&#39; ו &#39;מהירות סריקה&#39; ל &#39;4 ms / פיקסל&#39;. הגדר את אזור הסריקה על ידי שינוי ערכי x ו- y תחת בחלונית &#39;שטח סריקה (יחידות) &quot;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הכרטיסייה &#39;וידאו המרחק&#39; כדי להציג את הזנת וידאו, ולסדר את העכבר כדי להתאים לאזור הסריקה שמציין מתאר אדום. לחץ על &#39;מרחק אוטומטי&#39; כדי לכיילהמרחק בין לייזר לנושא. לחץ על &#39;הבא&#39; כדי לפתוח את החלון &#39;פרטי נושא&#39;. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזן את המידע הנושא וכל הערות רלוונטיות. לחץ על כפתור &quot;הבא&quot; כדי להמשיך הלאה אל חלון הסריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחצו על כפתור &quot;התחל מדידה &#39;כדי לפתוח את&#39; אישור או בטל סריקה מרחק &#39;הדו-שיח. לחץ על &#39;אישור&#39; כדי לאשר מרחק סריקה. שים את תהליך הסריקה להתחיל ולרוץ 4 - 8 דקות, בהתאם לגודל של אזור הסריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהסריקה הושלמה, להתבונן בחלון &#39;שמירה בשם&#39;. תן שם לקובץ ושמור אותו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כבה את isoflurane להזיז את העכבר כדי כלוב התאוששות ריק ולפקח עד שהחיה היא מסוגלת לשמור על שכיבה sternal. אין למקם עכבר מתאושש מההרדמה לכלוב עם עכברים אחרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את תוכנת ניתוח תמונה. לחץ על הסמל &#39;Open&#39; ולעיין כדי לפתוח את קובץ התמונה לניתוח. בחלון הקובץ, לקיים את השטף,תמונות צילום, והצבע של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לסמן את האזור של עניין (ROI) על התמונה השטף, לחץ על הסמל &#39;הצג ROIs&#39;. הבא לחץ על לחצן &#39;הוסף מצולע&#39; וגרור את הסמן סביב הגפה לא ניתוחי לצייר את ההחזר על ההשקעה. לחץ לחיצה ימנית כדי לסגור את הצורה. בחר &#39;הוסף מצולע&#39; שוב לצייר ROI התאמת סביב הגפה כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הסמל &#39;הסטטיסטיקה&#39; כדי לפתוח את &#39;תמונת תוצאות הסטטיסטיות ROIs (PU)&#39; חלון. לראות את הבדל אחוזי השטף בעמודת &#39;שטף% &quot;. הערה: ROI הראשונים הערוכים ישמש כנקודת התייחסות. הערה: לפני כל סריקת זלוף הבאה פעלה לפי השלבים המפורטים בסעיף 1 כדי להרדים את העכבר ב צעדי 4.1 ל 4.11 לתמונת החיה. </li></ol>

<ol><li>Criqui, M. H., Aboyans, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1509-1526 (2015).</li>
<li>Thukkani, A. K., Kinlay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endovascular+intervention+for+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Endovascular intervention for peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1599-1613 (2015).</li>
<li>Vartanian, S. M., Conte, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+intervention+for+peripheral+arterial+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Surgical intervention for peripheral arterial disease.</a> Circ. Res. 116, 1614-1628 (2015).</li>
<li>Bonaca, M. P., Creager, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+treatment+and+current+management+of+peripheral+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Pharmacological treatment and current management of peripheral artery disease.</a> Circ. Res. 116, 1579-1598 (2015).</li>
<li>Conte, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+rationale+of+the+PREVENT+III+clinical+trial%3A+edifoligide+for+the+prevention+of+infrainguinal+vein+graft+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Vasc+Endovascular+Surg%22%5BJournal%5D)">Design and rationale of the PREVENT III clinical trial: edifoligide for the prevention of infrainguinal vein graft failure.</a> Vasc Endovascular Surg. 39, 15-23 (2005).</li>
<li>Pomposelli, F. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decade+of+experience+with+dorsalis+pedis+artery+bypass%3A+analysis+of+outcome+in+more+than+1000+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">A decade of experience with dorsalis pedis artery bypass: analysis of outcome in more than 1000 cases.</a> J. Vasc. Surg. 37, 307-315 (2003).</li>
<li>Willigendael, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smoking+and+the+patency+of+lower+extremity+bypass+grafts%3A+a+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Smoking and the patency of lower extremity bypass grafts: a meta-analysis.</a> J. Vasc. Surg. 42, 67-74 (2005).</li>
<li>Schillinger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balloon+angioplasty+versus+implantation+of+nitinol+stents+in+the+superficial+femoral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Balloon angioplasty versus implantation of nitinol stents in the superficial femoral artery.</a> N. Engl. J. Med. 354, 1879-1888 (2006).</li>
<li>Marmagkiolis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((12-month+primary+patency+rates+of+contemporary+endovascular+device+therapy+for+femoro-popliteal+occlusive+disease+in+6%2C024+patients%3A+beyond+balloon+angioplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Catheter.+Cardiovasc.+Interv%22%5BJournal%5D)">12-month primary patency rates of contemporary endovascular device therapy for femoro-popliteal occlusive disease in 6,024 patients: beyond balloon angioplasty.</a> Catheter. Cardiovasc. Interv. 84, 555-564 (2014).</li>
<li>Rosenfield, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trial+of+a+Paclitaxel-Coated+Balloon+for+Femoropopliteal+Artery+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Trial of a Paclitaxel-Coated Balloon for Femoropopliteal Artery Disease.</a> N. Engl. J. Med. 373, 145-153 (2015).</li>
<li>Tepe, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-coated+balloon+versus+standard+percutaneous+transluminal+angioplasty+for+the+treatment+of+superficial+femoral+and+popliteal+peripheral+artery+disease%3A+12-month+results+from+the+IN.PACT+SFA+randomized+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Drug-coated balloon versus standard percutaneous transluminal angioplasty for the treatment of superficial femoral and popliteal peripheral artery disease: 12-month results from the IN.PACT SFA randomized trial.</a> Circulation. 131, 495-502 (2015).</li>
<li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of angiogenesis.</a> Am. J. Pathol. 152, 1667-1679 (1998).</li>
<li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine model of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li>
<li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
<li>Rivard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+impairment+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Age-dependent impairment of angiogenesis.</a> Circulation. 99, 111-120 (1999).</li>
<li>Hazarika, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+angiogenesis+after+hindlimb+ischemia+in+type+2+diabetes+mellitus%3A+differential+regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1+and+soluble+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+1%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Impaired angiogenesis after hindlimb ischemia in type 2 diabetes mellitus: differential regulation of vascular endothelial growth factor receptor 1 and soluble vascular endothelial growth factor receptor 1.</a> Circ. Res. 101, 948-956 (2007).</li>
<li>Couffinhal, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+collateral+vessel+development+associated+with+reduced+expression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+ApoE-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Impaired collateral vessel development associated with reduced expression of vascular endothelial growth factor in ApoE-/- mice.</a> Circulation. 99, 3188-3198 (1999).</li>
<li>Tang, G. L., Chang, D. S., Sarkar, R., Wang, R., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+gradual+or+acute+arterial+occlusion+on+skeletal+muscle+blood+flow%2C+arteriogenesis%2C+and+inflammation+in+rat+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">The effect of gradual or acute arterial occlusion on skeletal muscle blood flow, arteriogenesis, and inflammation in rat hindlimb ischemia.</a> J. Vasc. Surg. 41, 312-320 (2005).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+mechanism+regulating+blood+flow+recovery+in+acute+versus+gradual+femoral+artery+occlusion+are+distinct+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular mechanism regulating blood flow recovery in acute versus gradual femoral artery occlusion are distinct in the mouse.</a> J. Vasc. Surg. 48, 1546-1558 (2008).</li>
<li>Litvak, J., Siderides, L. E., Vineberg, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+experimental+production+of+coronary+artery+insufficiency+and+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">The experimental production of coronary artery insufficiency and occlusion.</a> Am. Heart J. 53, 505-518 (1957).</li>
<li>Bredee, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+ameroid+constrictor.+Preliminary+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">An improved ameroid constrictor. Preliminary communication.</a> J. Surg. Res. 9, 107-112 (1969).</li>
<li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subacute+limb+ischemia+induces+skeletal+muscle+injury+in+genetically+susceptible+mice+independent+of+vascular+density%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Subacute limb ischemia induces skeletal muscle injury in genetically susceptible mice independent of vascular density.</a> J. Vasc. Surg. , (2015).</li>
<li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Vasc.+Endovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 40, 796-803 (2010).</li>
<li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+arterial+anatomy+of+the+murine+hindlimb%3A+functional+role+in+the+design+and+understanding+of+ischemia+models%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Characterization of the arterial anatomy of the murine hindlimb: functional role in the design and understanding of ischemia models.</a> PloS one. 8, e84047(2013).</li>
</ol>

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

אולי הצעד הכי מאתגר בהליך זה הוא ההפרדה של העורק הפמורלי מ וריד הירך. הקוטר הגדול קירות דקים של וריד הירך בהשוואה לאלו של העורק להגדיל את הרגישות שלו לנקב וקורע במהלך מניפולציה כירורגית. הסבירות של שיבוש וריד יכול להיות מופחת על ידי שמירה על הפצע לח באמצעות ספוגית סטרילית טבולה PBS. כמו כן, חשוב להבטיח כי כל המלקחיים מתחדדים מיושרת ונטול הפסקות כדי לאפשר מניפולציה מדויקת של כלי רקמות סובבות. במקרה דימום מתרחש, להפעיל לחץ על האזור עם גזה סטרילי עד שהדימום נפסק. הערות כירורגית מפורט...

מחלת עורקים היקפיים (PAD) הוא גורם מוביל לתחלואה ותמותה קרדיו-וסקולרית במדינות מפותחות 1. תוצאות PAD מחסימה טרשתית של העורקים ההיקפיים שמוביל איסכמיה איבר עם כאב exertional או שאר כתוצאה וכיבים שאינו נרפא מדי פעם נמק המחייבים מכריתת גפיים. טיפולי מיקוד PAD מכוונים בעיקר כלפי endovascular 2 או רה-ווסקולריזציה כירורגית 3, שהוא במהותו לא לטיפולים רפואיים יעילים קיימים 4. למרבה הצער, revascularization הוא לעתים קרובות של תועלת מוגבלת, כמו שתלי מעקף יש שיעור כישלון גבוה (עד 50% תוך 5 שנים) 5, גרועים באוכלוסיות מסוימות (למשל, מעשנים, נשים, שתל וריד הלא saphenous) 6,7. גישות Endovascular, כגון אנגיופלסטיקה ו סטנט, נפגמו גם על ידי תעריפים restenosis גבוהה (מעל 50% בתוך שנה 1), particulary in femoropopliteal מחלה 8, אם כי שימוש בלונים סטנטים סמי משחררים השתפר תוצאות במקצת 9-11. על מנת לפתח טיפולים חדשים עבור PAD זה הכרחי כדי לפתח מודלים של בעלי חיים כי לשחזר את המחלה האנושית באופן מהימן. נכון להיום, המודל הנפוץ ביותר של PAD הוא המודל איסכמיה hindlimb (HLI), אשר רוב מבוצע לעתים קרובות בעכברים 12,13. בדמותו הנפוצה ביותר שלה, המודל כרוך קשירת כירורגית של עורק הירך הפרוקסימלית ומ דיסטלי ו-הענפים בצד התערבותה ואחריו כריתה של כלי השיט, וכתוצאה מכך חסימה של זרימת הדם ואת אינדוקציה של איסכמיה איבר חריפה. HLI נעשה ברוב המקרים ללמוד תגובות angiogenic ו arteriogenic ברקמת שריר איבר פריפריה ואת ההשפעות של טיפולים שונים (למשל, תרופות, למסירת הגן, תאי גזע) על התגובות הללו. לאחרונה, הקבוצה שלנו השתמשה במודל זה כדי לבחון את התפקיד של תאי שריר שלד in התגובה אחר ענף איסכמיה ואת ההשפעות של הבדלים גנטיים על תוצאות 14. מודל HLI יש להקל ההבנה הנוכחית שלנו שהתגובות וסקולרית ושרירים לאיסכמיה תלויות בגנטיקה (כלומר, זן מולד) 15, גיל 16, ואת קיומו או אי קיומו של מחלות אחרות או בתנאים המתייחסים טרשת עורקת, כוללים סוכרת 17 היפרכולסטרולמיה 18. עם זאת, על חולשה מהותית של מודל HLI המסורתי היא שזה מודל של איבר איסכמיה חריפה 12,13, בעוד PAD האנושי גורם איסכמיה כרונית כתוצאה של ההתפתחות ההדרגתית של טרשת עורקי occlusive בעורקים ההיקפיים. בניסיון לעקוף את החולשה הזאת, טאנג והעמיתים בתחילה פתחו מודל עכברוש של חסימת עורקית ירך הדרגתית באמצעות נחשי ameroid 19, ואת אותה הקבוצה ובהמשך ד20 eveloped במודל של עכברים דומה. נחשי Ameroid תוארו בתחילה בשנת 1950 במודל כלבים של איסכמיה לבבית כרונית 21,22. להתקנים אלה יש שרוול מתכת חיצוני העוטף שכבה פנימית של חומר היגרוסקופי, בדרך כלל קזאין, וכאשר להציב סביב עורק הוא לגרום לחסימת כלי הדרגתית כפי שהוא לספוג לחות מכל הרקמות הסובבות. ב השינוי שלהם של המודל, ואח יאנג. להציב נחשים הוא הפרוקסימלית ומ עורק ירך הדיסטלי באתרים מקבילים באתרי הקשירה כירורגית, והם ligated ענפים בצד של עורק הירך, כמו במודל המסורתי. לעומת HLI החריף, איסכמיה הכווץ הנגרמת ameroid מביע תחתון של גני מתח תלוי דלקתיים גזירה, שחזור זרימת דם נמוך 4 - 5 שבועות לאחר ניתוח, ופחות שרירים נימק 20. בהתבסס על תצפיות אלה, זה הורגש כי חסימת עורקית הדרגתית עשויה לספק מודל של PAD יותר רלוונטי המחלה האנושית. יש לציין, כי הדו&quot;ח המקורי, ההשפעות של איסכמיה ameroid הנגרמת הכווץ נבדקו רק C57BL / 6 עכברים 19, אשר עמידים יחסית נמק שריר-induced איסכמיה 15. אנחנו לאחרונה שונים מודל איסכמיה ההדרגתי נוספים ובחנו השפעותיו זן עכבר BALB / ג איסכמיה-רגישה יותר 23. בשנת הביטוי הראשון של המודל, מיקמנו נחשי הן הפרוקסימלית ומ עורק הירך הדיסטלי אבל עזבו את כל-הענפים בצד פגע. בשנת מודיפיקציה שנייה, מתונה יותר, מקמנו הכווץ אחת בלבד על עורק הפרוקסימלי ירך ושוב השארתי את כל תופעות braches של העורק ללא פגע. בשני השינויים של מודל זה, מצאנו כי עכברי BALB / c, אבל לא C57BL / 6 עכברים, מוצג נימק שריר רב, למרות שיש זרימת דם דומה וצפיפות כלי דם. בדומה למחקר הקודם שלנו 14, ממצאים אלו הוכיחו כי שריר איברפציעה אינה מושפעת אך ורק על ידי זרימת דם, אבל היא בחלקה תלויה רקע גנטי. יתר על כן, מצאנו כי זרימת הדם באיבר נפל לשפל תוך 3 ימים, ובכך המודל שנראה יותר אחד &#39;subacute&#39; ולא איסכמיה איבר הדרגתית. בהתבסס על מחקרים קודמים אלה, נראה ברור כי שיטה אחת גרימת איסכמיה hindlimb ואינו מתאים בכל המקרים. בגלל מגוון רחב של מצבים (למשל, הבדלים גנטיים קיומו או אי קיומו של תנאי שיתוף חולני) שפעה הוא כלי הדם ותגובות שרירים ספציפיים שלד, שחוקרים מוצאים לנכון לשנות את הכרוניות ו / או חומרת איסכמיה hindlimb הטובה ביותר לצרכיהם. יתר על כן, תיאורים מראש של המודל בדרך כלל חסרים ציונים דרך אנטומיים מתאימים כדי להקל שחזור הבין-חוקר אמין של הטכניקה. במאמר זה, שיטות גרימה או איסכמיה hindlimb חריפה או subacute בתוך העכברמתוארים, והם סיפקו לו ציוני דרך אנטומיים מדויקים.

<table><tbody><tr><td>Dumont #5/45 מלקחיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11251-35</td><td>Dumoxel</td></tr><tr><td>Dumont Style 5 מיני מלקחיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11200-14</td><td>Inox</td></tr><tr><td>Extra Fine Bonn מספריים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>7 - 0 תפר משי</td><td>Sharpoint</td><td>DA-2527N</td><td></td></tr><tr><td>5 - 0 תפר ויקריל מצופה</td><td>Ethicon</td><td>J463G</td><td></td></tr><tr><td>Graefe מלקחיים</td><td>Fine Science Tools</td><td>11053-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas מספריים אביב</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>קרעים מלאכותיים משחה</td><td>מעבדות רוגבי</td><td>0536-6550-91</td><td></td></tr><tr><td>סרט כירורגי</td><td>3M</td><td>1530-0</td><td></td></tr><tr><td>ספוגיות כותנה עדינות</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה</td><td>Physitemp</td><td>TCAT-2DF</td><td></td></tr><tr><td>Ameroid Constrictors</td><td>מכשירי מחקר SW</td><td>MMC-0.25 x 1.00-SS</td><td></td></tr><tr><td>מעקר</td><td></td><td></td><td></td>חרוזים</tr><tr><td>חמים Deltaphase כרית איזותרמית</td><td>Braintree Scientific</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>נהג מחט</td><td>Fine Science כלים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>Moor LDPI</td><td>Moor Instruments</td><td>moorLDI2</td><td></td></tr><tr><td>moorLDI תוכנת מדידה</td><td>Moor Instruments</td><td>v. 6.0</td><td></td></tr><tr><td>קרם להסרת שיער</td><td>Nair</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות חריפה subacute murine hindlimb איסכמיה

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

מחלת עורקים היקפיים (PAD) הוא גורם מוביל לתחלואה ותמותה קרדיווסקולארית במדינות מפותחות, במודלים של בעלי החיים כי באופן מהימן לשחזר את המחלה האנושית נחוצים כדי לפתח טיפולים חדשים למחלה זו. המודל איסכמיה העכבר hindlimb כבר בשימוש נרחב למטרה זו, אך בפועל רמת גרימת איסכמיה איבר חריפה על ידי קשירת עורק הירך יכול לגרום נמק רקמות משמעותית, להתפשר על היכולת של החוקרים ללמוד את התגובות של כלי הדם ואת רקמת שריר השלד לאיסכמיה . גישה חלופית כדי קשירת עורק הירך היא אינדוקציה של חסימה בעורק הירך הדרגתית באמצעות נחשי ameroid. כאשר הניח סביב עורק הירך במיקומים זהים או שונים כמו באתרי של קשירת עורק הירך, התקנים אלה לחסום את העורק מעל 1 - 3 ימים, וכתוצאה מכך איסכמיה הדרגתית יותר, subacute. התוצאה היא נמק רקמות משמעותית פחות שריר השלד, which יכול לחקות באופן הדוק יותר את התגובות לראות PAD האדם. בגלל השפעות רקע גנטיות ותוצאות בשני הדגמים איסכמיה החריפים subacute, השיקול של זן העכבר נלמד חשוב בבחירת המודל הטוב ביותר. מאמר זה מתאר את ההליך הנכון ומיקום האנטומי של קשירות או נחשי ameroid על עורק עכבר הירך לגרום subacute או איסכמיה hindlimb החריפה בתוך העכבר.

זיהוי נכון של כלי דם hindlimb העכבר הוא קריטי כדי להבטיח שחזור של הטכניקות להשרות את שני subacute ו איסכמיה hindlimb החריפה, כפי שמתואר כאן. בנוסף השוני הפנימי במחקרים בבעלי חיים, גורמים אחרים יכולים להציג השתנות הדמיה זלוף דופלר לייזר (LDPI), כולל סוג של הרדמה, עמדה של בעל החיים (לעומת שכיבה נוטה), ואת טמפרטורת הגוף (ראה איור 3). בנוסף, מודל איסכמיה hindlimb subacute תלוי באיכות של נחשי ameroid, אשר יכול להשתנות במידה רבה...

אינדוקציה כירורגית של איסכמיה של הגפיים האחוריות בעכבר שימושית לבחינת אנגיוגנזה, אולם זה נפגע בזני עכברים מסוימים המולדים המציגים נמק רקמות המושרה על ידי איסכמיה. מתוארות שיטות לגרימת איסכמיה תת-חריפה בגפיים באמצעות מכווצים אמרואידים כדי לעקוף בעיה זו באמצעות אינדוקציה של חסימת עורקים הדרגתית.

שיטות חריפה subacute Murine Hindlimb איסכמיה

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

המטרה הכללית של פרוטוקול זה היא לדמות מחלה של עורקים פריפריים בבני אדם על ידי השמה של תפרים או מחסומי אמרואיד (ameroid constrictors) בעורק הפמוראלי של העכבר, לצורך השראה של איסכמיה חריפה או תת-חריפה בגפה התחתונה, בהתאמה. מחלה של עורקים פריפריים היא בעיה קלינית משמעותית, וטכניקות אלו המשתמשות במודלים של בעלי חיים פותחו כדי לייצג טוב יותר את המחלה בבני אדם. היתרון המרכזי של טכניקות אלו הוא שניתן לשלוט בחומרת ובמועד תחילת האיסכמיה בגפה על ידי החוקר.מי שיהדגים את הפרוצדורה הוא מייק פאג'ט, טכנאי מהמעבדה שלי. יום או יומיים לפני הפרוצדורה, יש לוודא שהעכבר נמצא תחת הרדמה מלאה באמצעות בדיקה של היעדר תגובה לצביטה באצבע, ולמרוח משחה לעיניים. לאחר מכן, השתמשו במכונת גילוח חשמלית קטנה כדי לגלח את הפרווה משתי הרגליים האחוריות.לאחר שכל השיער גוזם, יש למרוח קרם להסרת שיער שחומם מראש. לאחר דקה אחת, יש להסיר בעדינות את הקרם בעזרת פד גזה לח. לאחר מכן, יש להניח את העכבר בכלוב התאוששות מרופד בנייר סופג עד שיהיה מסוגל לשמור על שכיבה על הבטן (sternal recumbency).ביום הניתוח, הניחו את העכבר המורדם באופן מלא תחת מיקרוסקופ סטריאו לדיסקציה של חברת Technic בעמדת שכיבה על הגב (supine), ואבטחו את שתי הרגליים בעזרת סרט הדבקה כירורגי. אם נעשה שימוש במחמם עם בקרת טמפרטורה, חברו את חיישן הטמפרטורה ואבטחו אותו לבסיס פלטפורמת הניתוח בעזרת סרט הדבקה כירורגי. לאחר מכן, השתמשו בשלושה ניגובים לסירוגין של פובידון יוד ואלכוהול כדי לנקות את אזור הניתוח, וכסו את בעל החיים בסדין כירורגי סטרילי עם חור במיקום החתך.בעזרת סקלפל, בצעו חתך ראשוני לאורך מרכז הירך המדיאלית, מהברך לכיוון הבטן. לאחר מכן, השתמשו במספריים עדינים כדי להרחיב את החתך לאורך של כסנטימטר אחד. בעזרת פינצטה, פתחו את החתך כדי לחשוף את הקרומי העוטף את רקמת השומן המפקירית.לאחר מכן, השתמשו בפינצטה סגורה כדי לנקב את הממברנה, אל תוך החלל שבין רקמת השומן לבטן. שחררו בעדינות את הלחץ מהפינצטה כדי להפריד את רקמת השומן משרירי הבטן, ובכך לחשוף את הצרור הנוירו-וסקולרי. קריטי לזהות כראוי את כלי הדם המרכזיים ואת ענפיהם לפני הנתיחה של הצרור הנוירו-וסקולרי.שינויים במיקום המצמצמים (constrictors) או באתרים של הקישירה (ligation) עלולים לשנות באופן משמעותי את חומרת האיסכמיה, ולהוביל לשונות ניכרת בתוצאות. הכניסו רטראקטור (מתפשט) לתוך החתך, ומשכו את רקמת הבטן לכיוון ראש החיה כדי לחשוף את מיקום המצמצם האמרואיד (ameroid constrictor) הפרוקסימלי, שנמצא מיד פרוקסימלית לעורק הירך המקיפי הצדי (lateral circumflex femoral artery). לאחר מכן, הכניסו רטראקטור מדיאלי אחד ורטראקטור לטרלי אחד לחלק הדיסטלי של החתך כדי להרחיב את שטח הניתוח, תוך משיכת רקמת השומן המפשעת לכיוון כף הרגל והרחקה מאזור הניתוח.ניתן לצפות בקלות בענפים הזנביים הפרוקסימליים והשטחיים של העורק הפמורלי. העורק הפמורלי הצידי המקיף (lateral circumflex femoral artery) ממוקם כחמישה מילימטרים פרוקסימלית לענפים הזנביים, וייתכן שיהיה מוסתר על ידי קרומים. כעת, החלק בעדינות את קצה אחת הפינסות תחת הקרומים הקושרים את כלי הדם יחדיו, כדי להחדיר חצי מקצה הפינסטה בין הווריד לעורק.לאחר מכן, סגרו את הפינצטה וקרעו בעדינות את הקרום. כאשר כל הקרום הוסר, הכניסו את קצה הפינצטה הסגורה בין הווריד לעורק, ושחררו את הלחץ על הפינצטה כדי ליצור מרווח בין כלי הדם. עבור איסכמיה של גפה בתהליך תת-חריף, החליקו את קצה הפינצטה מתחת לעורק הפמורלי כדי לבודד את כלי הדם מאגודה העצבית-כלי הדם.השתמשו בסט שני של פינצטות זוויתיות כדי לתפוס את קצה המconstrictor, והנחו את ה-constrictor מתחת לעורק הפמורלי. לאחר מכן, הניחו את העורק לתוך חריץ ה-constrictor. בשלב הבא, מקמו את ה-constrictor הדיסטלי על העורק הפמורלי, מיד פרוקסימלית לנקודה שבה העורק מתפצל לעורקי הפופליטי והספנוס, והניחו את העורק הפמורלי לתוך חריץ ה-constrictor.עבור איסכמיה חריפה של הגפה, השחילו תפר 7-0 מתחת לעורק באותו מיקום של המצמצם הפרוקסימלי, וקשרו את העורק. לאחר מכן, קשרו ליגטורה שנייה במרחק של כמילימטר אחד דיסטלית לראשונה, והשתמשו במספרי קפיץ כדי לחתום את העורק בין שתי הליגטורות. עבור חיתוך העורק הדיסטלי, מקמו את הליגטורות במרחק של כמילימטר אחד זו מזו, מיד פרוקסימלית לנקודה שבה העורק הפמורלי מתפצל לעורקים הפופליטלי והספנוס.לאחר מכן, סגרו את החתך באמצעות תפרי תפרים מקטעים מסוג vicryl 5-0, והעבירו את העכבר למשטח חימום בטמפרטורה של 37 °C מתחת למערכת דימוי ביצועי זרימה בלייזר דופלר (laser doppler perfusion imager). כעת הפעילו את המדמיין והפעילו את תוכנת לכידת התמונות. לחצו על סמל "New Single Image" כדי לפתוח את חלון הגדרות הסורק, וקבעו את גודל הסריקה ל-large ואת מהירות הסריקה ל-4 milliseconds per pixel.שנו את ערכי ה-X וה-Y תחת פאנל היחידות של אזור הסריקה (Scan Area) לערכים המתאימים, לאחר מכן לחצו על לשונית הווידאו והמרחק (Video and Distance), וסדרו את שתי הגפיים האחוריות בתוך אזור הסריקה. לחצו על מרחק אוטומטי (Auto Distance), ולאחר מכן לחצו על הבא (Next) כדי לפתוח את חלון פרטי הנבדק, והזינו את פרטי הנבדק. לחצו על הבא (Next) כדי לעבור לחלון הסריקה.לאחר מכן, לחצו על כפתור Start Measurement כדי לפתוח את תיבת הדיאלוג Confirm or Override Scan Distance, ולחצו על OK כדי להתחיל את תהליך הסריקה. עם השלמת הסריקה, העבירו את העכבר לכלוב התאוששות ריק עם ניטור עד להחלמה מלאה. בנוסף לשונות המובנית במחקרי בעלי חיים, גורמים אחרים עלולים להחדיר שונות להדמיית זרימה בשיטת Doppler laser, כולל טמפרטורת הגוף ומנח בעל החיים.מודל האיסכמיה התת-חריפה של הגפיים האחוריות תלוי באיכותם של המהלקי האמרואיד (ameroid constrictors), אשר עשויים להשתנות במידה ניכרת בתוך סדרה מסוימת. יש לבצע הדמיית זרימה במיפוי לייזר דופלר מיד לאחר הפרוצדורה, בעוד בעל החיים עדיין תחת הרדמה, כדי להדגים את השפעות הניתוח ולקבוע רמת זרימה בסיסית לאחר הניתוח. לאחר השראה של איסכמיה חריפה של הגפה, יש לצפות לאובדן מלא של זרימת הדם בגפיים האחוריות, בעוד שבמודל התת-חריף, לאחר הנחת המהלק האמרואיד, נצפית בדרך כלל רק ירידה קלה בזרימה.נהלים אלה מאפשרים לבחון את ההשפעות של דרגות שונות של איסכמיה על רמיodeling וסקולרי ועל התחדשות שריר שלד בעכבר, המשמש כמודל למחלה פריפרית של העורקים בבני אדם. לאחר השליטה בטכניקה, ניתן להשלים את הפרוצדורות הללו בערך ב-15 דקות אם הן מבוצעות בצורה נכונה. במהלך הניתוחים, חשוב לזכור לנטר באופן רציף את טמפרטורת הגוף ואת מידת יעילות ההרדמה של בעל החיים.על ידי התאמת מיקום הליגטורות או המהלקים, ניתן לשנות את חומרת הפגיעה האיסכמית, דבר שעשוי להוות משתנה חשוב בהתאם לרקע הגנטי של בעל החיים או לנוכחות של גורמי סיכון קרדיווסקולריים. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה מעמיקה לגבי הדרך להשראת איסכמיה חריפה ותת-חריפה בגפה התחתונה של עכבר, ולגבי הגדרת האנטומיה של כלי הדם כדי להבטיח תוצאה תקינה והדירות של הפרוצדורה.

methods-for-acute-and-subacute-murine-hindlimb-ischemia

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

ההליך הכירורגי לזירוז של איסכמיה hindlimb החד צדדית באה לידי ביטוי, עם אישור של איסכמיה על ידי הדמיה זלוף דופלר לייזר.

דגם Murine של איסכמיה Hindlimb

מניפולציות גנטיות רבות ו / או זריקות intramyocardial של גנים, חלבונים, תאים, ו / או biomaterials באים על גבי מימד הזמן במחקרים של פגיעה איסכמיה / reperfusion חריפה שיפוץ כרונית בעכברים. וידאו זה ממחיש את הליכי microsurgical עבור איסכמיה / reperfusion, קשירת עורק כלילי קבע, ומחקרים הזרקת intramyocardial.

קשירת עורקים כלילית לבין הזרקת Intramyocardial ב מודל Murine של אוטם

אנחנו מציגים את שיטה כירורגית כדי לגרום לאיסכמיה / reperfusion הניסיוני (I / R) פציעה כדי לדמות אוטם שריר הלב (MI) בעכברי מודל, המאפשר ליותר בהירות במיצוב של קשירה בעורק השמאלי הקדמי יורד (LAD) כדי להגדיל את שחזור ניסויים MI בעכברים.

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

כאן אנו מתארים את ההליך המפורט של reperfusion איסכמיה מעיים בעכברים שתוצאתה הפגיעה לשחזור ללא תמותה לעודד סטנדרטיזציה של טכניקה זו על פני השדה. מודל זה של פגיעת איסכמיה-רה-פרפוזיה במעי יכול להיות מנוצל כדי לחקור את המנגנונים התאיים ומולקולריים של פציעה והתחדשות.

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

אנו מתארים הליך כירורגי המשמש כדי לגרום איסכמיה היקפית בארנבים עם היפרליפידמיה וסוכרת. ניתוח זה משמש כמודל טרום קליני לתנאים המנוסים במחלות עורק היקפי בחולים. אנגיוגרפיה מתואר גם אמצעי כדי למדוד את היקף הוכנסו איסכמיה והתאוששות של perfusion.

המודל הקליני של איסכמיה הגפיים האחוריות בארנבים סוכרתית

כאן, המודל הניסיוני הטיפולי איסכמיה מוצג ואחריו סוללה של פונקציונלי, בדיקות היסטולוגית ומולקולרית כדי להעריך את האפקטיביות של טיפולים אנגיוגנטית.

הערכת אנגיוגנזה תרפויטי במודל של מורטין של איסכמיה החוצה

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המדגים את הטכניקה ואת הפקדים הדרושים עבור הדמיית זלוף דופלר לייזר כדי למדוד את זרימת הדם בעכבר hindlimb.

הדמיית זלוף דופלר לייזר בעכבר הינדלימב

מאמר זה מדגים גישה כירורגית יעילה ליצירת איסכמיה חריפה בעכברים עם חתך קטן. גישה זו יכולה להיות מיושמת על ידי רוב קבוצות המחקר ללא כל שדרוגי מעבדה.

מודל כירורגי מותאם של איסכמיה בגפיים אחוריות ב- ApoE-/- עכברים באמצעות חתך מיניאטורי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל ייחודי ורלוונטי מבחינה קלינית של מחלת עורקים היקפית המשלב עורק הירך ואלקטרו-קרישת ורידים עם ניהול מעכב סינתאז תחמוצת החנקן כדי לגרום לנמק אחורי בעכברים FVB. זלוף תוך-לבבי DiI משמש לאחר מכן להדמיה תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה של כלי הדם של משטח כף הרגל.

הדמיה תלת מימדית ברזולוציה גבוהה של כלי הדם של משטח כף הרגל במודל נמק הינדלימב מורין

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6J ומעריכים את ההתנהגות הנוירולוגית והתכונות ההיסטופתולוגיות שלאחר מכן.

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

למדו שיטות ליצירת איסכמיה תת-חריפה בגפיים האחוריים של עכברים באמצעות מחנקי אמרואיד על עורק הירך. פרוטוקול זה מאפשר מחקר מבוקר של מחלת עורקים היקפית ואנגיוגנזה במודלים חייתיים.

שיטות חריפה subacute Murine Hindlimb איסכמיה

גלה סרטונים נוספים