עצב שׁוֹקִיתִי השיטה פגיעה: A Assay אמין כדי לזהות מבחן הגורמים תיקון Neuromuscular הצומת

המטרה הכוללת של שיטת פגיעה עצבית היקפית זו היא לבחון באופן אמין צמתים עצביים-שריריים מתחדשים בעכברים. שיטה זו תעזור לנו לזהות את השינויים המולקולריים, התאיים והתפקודיים הקשורים לחידוש צמתים עצביים-שריריים. היתרון העיקרי של הליך זה הוא שניתן להשוות באופן אמין את קצב התחדשות הצומת העצבי-שרירי בין קבוצות ניסוי, בעיקר בהיעדר שינויים מיוגניים.

מי שידגים את ההליך יהיה ויליאם דאלקין, סטודנט לרפואה במעבדה שלי. לפני תחילת ההליך, השתמש באתנול 80% כדי לנקות את אתר הניתוח, הלוח והמכשירים, ולאחר מכן חיטוי עם פובידון-יוד. לאחר מכן, הנח את העכבר על לוח הניתוח ואשר חוסר תגובה לצביטה בבוהן.

יישר את הגפיים בתוך המעצורים עם הגפה האחורית המטרה במצב טבעי מבחינה אנטומית ומפרקי הברך מורחבים מעט ללא סיבוב פנימי או חיצוני. לאחר מכן, העבירו את החיה תחת מיקרוסקופ כירורגי והתאימו את הלוח עד שמפרק הברך הגרמי והרכס בין שרירי השוקה הקדמית לשרירי הגסטרוקנמיוס נראים דרך המטרה. בעזרת אזמל ומלקחיים, בצע חתך של כשלושה סנטימטרים דרך העור, בניצב למהלך הבסיסי של העצב הסיבי המשותף.

המשך את החתך דרך הפאשיה השטחית וחושף את שרירי הזרוע הדו-ראשיים ואת שרירי ה-vastus lateralis, ואחריו חתך של סנטימטר עד שניים דרך הפאשיה העמוקה המחברת כדי להפריד בין השרירים. לאחר מכן, השתמש במחזירים מכניים כדי לסגת את שריר הזרוע הדו-ראשי בזנב כדי לחשוף את העצב הסיבי המשותף. עקוב אחר העצב באופן קרוב עד למציאת הצטלבותו עם גיד הראש הצדדי של שריר הגסטרוקנמיוס.

לאחר מכן, השתמש במלקחיים עדינים כדי לתפוס את העצב מיישר את הקצוות במקביל לגבול הצדדי של גיד הגסטרוקנמיוס והפעל לחץ יציב ומרוכז למשך חמש שניות כדי לרסק את העצב הסיבי המשותף. החזיקו את המלקחיים בניצב לסיב, אחזו ברקמה עם האזור ממש מאחורי קצה המלקחיים, והפעילו לחץ יציב אך עדין לריסוק נקי ולינארי של העצב לאורך גבול הגיד. בדוק חזותית את העצב דרך המיקרוסקופ הכירורגי כדי לאשר ריסוק מוחלט של הרקמה.

העצב ייראה שקוף במקום הפציעה. אם משתמשים בעכברים המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים באקסונים ההיקפיים, הקרינה תיעלם ממקום הפציעה. אם העצב נפגע מספיק, הסר את המחזירים ויישר מחדש את השרירים במיקומים האנטומיים שלהם.

לאחר מכן, השתמש בתפרי משי 6-0 כדי לסגור את מקום החתך עם תפר אחד עד שלושה תפרים קטועים פשוטים והנח את העכבר על כרית חימום בכלוב נקי עם ניטור עד להתאוששות מלאה. דחיסת העצב למשך חמש שניות באמצעות מלקחיים עדינים מביאה להיעלמות YFP ממקום הפציעה. האפינוריום נשאר רציף, ומשמש כצינור להתחדשות מדויקת של אקסונים למטרותיהם המקוריות.

בעכברים נקבות בנות 70 יום, הפגיעה העצבית מספיקה כדי לגרום לניוון של כל המקטעים האקסונליים הדיסטליים מהסומה העצבית, ארבעה ימים לאחר הריסוק. עד שבעה ימים לאחר הריסוק, קצות העצבים מאכלסים מחדש באופן פעיל את האתרים הפוסט-סינפטיים שפונו. ביום ה-12, קצות העצבים ממשיכים להתמיין לאתרים פרה-סינפטיים והצמתים העצביים-שריריים מתעצבים במלואם.

יש שונות מועטה בין עכברים שעברו ניתוק עצבים במשך אותו פרק זמן, מה שמדגים כי ריסוק עצב סיבי יכול לשמש כמבחן להשוואת חידוש השרירים בין בעלי חיים באותו גיל ומין. כצפוי, מספר שינויים מתרחשים באקסונים המוטוריים אלפא כשהם מחזירים את סיבי השריר. חרוטי הצמיחה האקסונליים מתרחבים ומסתעפים כשהם באים במגע עם אתרים פוסט-סינפטיים, גדלים על פני אזורים ספציפיים של הפוסט-סינפסה, ומגיעים לשיאם בסמיכות כמעט מוחלטת של הקצוות האקסונליים, עם האתרים הפוסט-סינפטיים.

כפי שהודגם על ידי PCR כמותי, גנים הקשורים לצומת עצבי-שרירי גדלים בעקבות ניתוק עצבים ויורדים ככל שהצמתים העצביים-שריריים מתעצבים מחדש. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 15 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בזמן שאתה מנסה הליך זה, חשוב לזכור לקחת את הזמן, לדמיין את כל המבנים ולבדוק שוב שהושג ריסוק מלא.

בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו QPCR כדי לענות על שאלות נוספות לגבי אילו גנים מווסתים למעלה או למטה. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הנוירוביולוגיה לחקור התחדשות סינפטית בעכברים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע ריסוק עצבי סיבי כדי לבחון את שיעורי החזרת הצומת העצבי-שרירי בעכברים.