Name: גישה ניתוחית עבור העורקים התיכון ספיגה מוחין ושבץ reperfusion מושרה של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: חקור את שיטת לונגה ליצירת איסכמיה בעורק המוחי התיכון בעכברים C57BL/6. שיטה זו מסייעת בחקר שבץ ובזיהוי מטרות טיפוליות חדשות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי המכון הלאומי לבריאות, המכון הלאומי ללב, ריאות ודם (NIH ו-NHLBI; HL125572-01A1) וקרן הסטארט-אפ LSUHSC-S ל-F.N.E. Gavins.

פרוטוקול זה והניסויים שדווח וידאו אושרו על ידי LSUHSC-S מוסדיים בעלי חיים לטיפול ושימוש הוועדה עומדות בהנחיות של NIH. הערה: זכר C57BL / 6 עכברים במשקל 25 - 29 גרם שימשו במחקר זה. העכברים היו מתוחזקים על דיאטה גלולה צ&#39;או רגילה עם גישה חופשית למים, תחת מחזור 12 שעות אור / חושך בכלובים מאווררים בנפרד. ההליך יבוצע בתנאים סטריליים באמצעות טכניקות סטרילי (למשל, כפפות סטריליות, בכלים סטריליים). תכשירי 1. טרום ניתוחיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות הרדמה באמצעות שילוב של קטמין (150 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו xylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) מוזרק intraperitoneally (IP). צג עומק ההרדמה ברגל קמצוץ בתחילה כל 3 - 5 דקות וכל 10 דקות פעם מושגת ההרדמה. בעוד החיה בהרדמה, לנהל משחה עינית סטרילי כדי למנוע יובש. המינון הראשוני של קטמין / xylazine נמשך בדרך כלל abמתוך 30-40 דקות. מנה נוספת יכולה להינתן במידת הצורך, אשר מאומתים על ידי התגובה של החיה כדי קמצוץ רגל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עכברים במצב שכיבה על מחצלת חום מוסדר טמפרטורה לשמור על טמפרטורת הגוף על 36.5 ± 0.1 מעלות צלזיוס, אשר מאומתת באמצעות בדיקה רקטלית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הצוואר ולחטא את העור עם כוהל אתילי 70%. </li></ol> 2. ספיגה של MCA (איור 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך בצוואר קו אמצע באמצעות מספריים ישר איריס לסגת (באמצעות כתיבה) הרקמות הרכות כדי לחשוף את הכלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את CCA ואת ECA מן הרקמה הסובבת באמצעות מלקחיים דומון מבלי לפגוע העצב התועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך תפר זמני על ידי קשירת קשר רופף סביב המרכז לאמנות עכשווית באמצעות משי 6-0. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך תפר קבע ברחבי ECA והכלים הקטנים המשתרעים אותו בחוזקה ligating הכלי (דיסטלי אל ההסתעפות של CCA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ערכו Aro תפרund הפרוקסימלי ECA אל הסתעפות המרכז לאמנות עכשווית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים קליפ microvessel סביב עורק התרדמה הפנימי (רשפ&quot;ת) ואת העורק pterygopalatine (PPA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך קטן ECA באמצעות מיקרו לנתח מספריים האביב והכניסו monofilament סיליקון שקצהו 180 מיקרומטר. עובר את הסינון קרוב התפר קבע ככל האפשר עבור מניפולציה קלה יותר של הנימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדק את התפר הזמני סביב ECA עם הנימה המוכנסת ולהסיר את הקליפ microvessel. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את ECA בין תפר קבע, דיסטלי ואת נקודת כניסה של נימה באמצעות מיקרו לנתח מספריים האביב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדריך הנימה באמצעות הרשפ&quot;ת עד התנגדות מורגשת (כ 9 -. 10 מיקרומטר מעבר ההסתעפות של CCA) של MCA. הערה: במקרה גם בהתנגדות רבה מורגשת בעוד שרוב הנימה עדיין גלוי, הנימה ייתכן נכנסה PPA. אם זה יקר, למשוך את חוט הלהט בחזרה אל ההסתעפות, בעדינות מוגליתh קדימה לתוך מלקחי דומון באמצעות הרשפ&quot;ת, ולהתקדם הנימה עד שניתן דמיינו הרשפ&quot;ת. </li></ol> Reperfusion 3. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תקופת חסימה של 30 דקות, להסיר את הנימה באמצעות משיכה עדינה אותו בחזרה באמצעות מלקחי דומון ולאבטח את התפר סביב הקצה הפתוח של ECA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר תפר זמני סביב המרכז לאמנות עכשווית על ידי שחרור ליגטורה בזהירות באמצעות זרימת מלקחיים דומון ודם יתחדש דרך המרכז לאמנות עכשווית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגירת החתך עם תפר כירורגים רציף. סגירת העור יכולה להתבצע על ידי אחד תפרים רציפים או מופרעים. סיכות עור הן גם שיטה מקובלת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק עכברים עם 1 מ&quot;ל של תת-עורית מלוחים כמו חידוש נפח עם carprofen כאבים (5 מ&quot;ג / ק&quot;ג, SC) לשיכוך כאבים ואי נוחות מן ההליך הכירורגי, סימנים המעידים לשיכוך כאבים נוסף נדרש כוללות רכון לאחור, מעיל ungroomed, ירידה בפעילות, לא נורמליפוזה, וירידה בתיאבון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימו עכברים במהלך ההתאוששות מן ההרדמה בכלוב C מחוממת 30 מעלות באמצעות מנורת החום מוסדר באמצעות בקר טמפרטורה ומניחים צ&#39;או מחית בצלחת פטרי על רצפת הכלוב כדי לעודד אכילה. העכברים ישוכנו אחד בכל כלוב בתקופת reperfusion. </li></ol> 4. ניתוח דמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים כפופים לאותם ההליך ללא החדרת monofilament. </li></ol> 5. ציוני נוירולוגיות לאחר ניתוח (טבלה 1; איור 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מבחינת נוירולוגית להעריך עכברים לאחר תקופת reperfusion המתאימה באמצעות שיטת ניקוד 18 נקודות בהערכת הכללי; מָנוֹעַ; חוּשִׁי; פרופריוספציה. ציון נוירולוגיות גבוה תואם לירידה בתפקוד הנוירולוגי. הערה: עכברים נשפטים מגיב מסוגל ללכת יהיה מורדמים. קריטריונים נוספים להמתת חסד אנושי יכללו הרזיה של יותר מ -20%, די נשימהמתח, ודלקת סביב אזור הניתוח. בתא 2 CO ישמש להמתת חסד והשיטה הפיסית כדי לאשר מוות יהיה נקע בצוואר רחם או פתיחת בית חזה. </li></ol> מדידת 6. נפח המוחי (איור 3) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות הרדמה באמצעות שילוב של קטמין (150 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו xylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) מוזרק עומק צג ה- IP של הרדמה על ידי צביטה ברגל בתחילה כל 3 - 5 דקות וכל 10 דקות פעם מושגת הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עכברים במצב שכיבה וחותכים את העור מהבטן לצוואר ואחריו הצפק באמצעות איריס מספריים ישר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרימו את עצם החזה באמצעות מלקחיים דומון לחתוך את הצלעות כדי לחשוף את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח שמאל בצד ימין של החזה באמצעות שני זוגות hemostats, חושף את הלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מחט 26 G מצורף מזרק 5 מ&quot;ל לתוך החדר השמאלי וחתך את אטריום ימין. Perfuse עם מלח רגיל בטמפרטורת החדר או phosphate שנאגר מלוח (PBS) עד שהנוזל הופך ברורות (בדרך כלל 3 - 5 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את הגולגולת בזהירות מן המוח באמצעות איריס מספריים ישר מלקחיים דומון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את נורות חוש הריח ואת המוח הקטן באמצעות סכין גילוח כך שהמוח יתאים במטריצה. השתמש מטריצה ​​זו כדי לחתוך את המוח לתוך אפילו מגזרים. צ&#39;יל המטריצה ​​לפני השימוש כדי לשמור על הרקמה מגניבה. מניחים את המוח לתוך המטריצה ​​ולהגדיר אותו על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פורס את המוח למקטעי עטרת 2 מ&quot;מ באמצעות שני סכיני גילוח. הפוך את החתך הראשון באמצעות סכין גילוח החל מיום 2 מ&quot;מ מהחלק העליון ולהשאיר סכין גילוח זה במקום. לעשות עוד 2 מ&quot;מ חתך מאחורי הראשון. הסר את סכין הגילוח הראשון עם הרקמות מצורפות. חזור על תהליך זה עד שכל הרקמה כבר פרוסה. הערה: צריך להיות 4 - 5 מגזרים בסיום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את פלחי לתוך צלחת 24 היטב המכיל 2% כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazalium (TTC), אשר ממוקם אז באמבט מים רדודיםt 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. מיקומה של כל מגזר לתוך באר פרט עוזר לשמור אותם בסדר שבו הם נחתכו. ודא כי פתרון TTC מכסה לחלוטין את קטעי הרקמה. לאחר 10 דקות להפוך את כל הפרוסות על פני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כמות קטנה של פורמלין 10% לתוך הבארות של צלחת 24 באר חדשה ולהעביר המגזרים לצלחת זה הסדר שבו הם נחתכו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סרוק את הפלחים לתוך המחשב ולנתח את גודל האוטם כאחוז של פרוסת המוח כולו 6 באמצעות תוכנת ניתוח ImageJ (תוכנת 1.57 תמונה NIH) 6. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התווה את האזור האוטם כדי ליצור מדידת שטח. הבא למדוד בחצי הכדור הנגדי כולו כדי לקבוע את האזור. מחלק את האזור אוטם ע&quot;י השטח של האונה הנגדית ולהתרבות על ידי 100 כדי לקבוע את עוצמת הקול האוטמת. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Go, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2014+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2014 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 129 (3), e28-e292 (2014).</li>
<li>Marks, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patients+with+acute+stroke+trated+with+intravenous+tPS+3-6+hours+after+stroke+onset%3A+correlations+between+MR+angiography+findings+and+perfusion-+and+diffusion-weighted+imaging+in+the+DEFUSE+study%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Patients with acute stroke trated with intravenous tPS 3-6 hours after stroke onset: correlations between MR angiography findings and perfusion- and diffusion-weighted imaging in the DEFUSE study.</a> Radiology. 249 (2), 614-623 (2008).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema%2C+I%3A+a+new+experimnetal+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema, I: a new experimnetal model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. (8), 1-8 (1986).</li>
<li>Smith, H. K., Russell, J. M., Granger, D. N., Gavins, F. N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+differences+between+two+classical+surgical+approaches+for+middle+cerebral+artery+occlusion-induced+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Meth%22%5BJournal%5D)">Critical differences between two classical surgical approaches for middle cerebral artery occlusion-induced stroke in mice.</a> J Neurosci Meth. 249, 99-105 (2015).</li>
<li>Gavins, F. N., Dalli, J., Flower, R. J., Granger, D. N., Perretti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+annexin+1+counter-regulatory+circuit+affords+protection+in+the+mouse+brain+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Activation of the annexin 1 counter-regulatory circuit affords protection in the mouse brain microcirculation.</a> FASEB J. 21 (8), 1751-1758 (2007).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atorvastain+induction+of+VEGF+and+BDNF+promotes+brain+plasticity+after+stroke+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Atorvastain induction of VEGF and BDNF promotes brain plasticity after stroke in mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 25 (2), 281-290 (2005).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrastriatal+transplantation+of+bone+marrow+nonhematopoietic+cells+improves+functional+recovery+after+stroke+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Intrastriatal transplantation of bone marrow nonhematopoietic cells improves functional recovery after stroke in adult mice.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 20 (9), 1311-1319 (2000).</li>
<li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+systemic+immune+alterations+after+murine+focal+ischemia%3B+the+immunodepression+versus+immunomodulation%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The spectrum of systemic immune alterations after murine focal ischemia; the immunodepression versus immunomodulation.</a> Stroke. 40 (8), 2849-2858 (2009).</li>
<li>Beckmann, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+magnetic+resonance+angiography+non-invasively+reveals+mouse+strain+differences+in+the+cerebrovascular+anatomy+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Magn+Reson+Med%22%5BJournal%5D)">High resolution magnetic resonance angiography non-invasively reveals mouse strain differences in the cerebrovascular anatomy in vivo.</a> Magn Reson Med. 44 (2), 252-258 (2000).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13 (4), 683-692 (1993).</li>
<li>Burk, J., Burggraf, D., Vosko, M., Dichgans, M., Hamann, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+cerebral+microvasculature+after+moderate+hypothermia+following+experimental+focal+cerebral+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Protection of cerebral microvasculature after moderate hypothermia following experimental focal cerebral ischemia in mice.</a> Brain Res. (1226), 248-255 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthemia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthemia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Shin, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Richter, S. H., Garner, J. P., Würbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+standardization%3A+cure+or+cause+of+poor+reproducibility+in+animal+experiments%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Environmental standardization: cure or cause of poor reproducibility in animal experiments?</a> Nat Methods. 6 (4), 257-261 (2009).</li>
<li>Holloway, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+MC1+and+MC3+receptors+provide+protection+from+cerebral+ischemia-reperfusion-induced+neutrophil+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Both MC1 and MC3 receptors provide protection from cerebral ischemia-reperfusion-induced neutrophil recruitment.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35, (2015).</li>
<li>Vandeputte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+inflammatory+response+in+a+photothrombotic+stroke+model+by+MRI%3A+implications+for+stem+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the inflammatory response in a photothrombotic stroke model by MRI: implications for stem cell transplantation.</a> Mol Imaging Biol. 13 (4), 663-671 (2010).</li>
<li>Iwae, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+cell-mediated+deterioration+and+repair+of+the+nervous+system+after+traumatic+brain+injury+in+a+rat+model+as+assessed+by+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Glial cell-mediated deterioration and repair of the nervous system after traumatic brain injury in a rat model as assessed by positron emission tomography.</a> J Neurotrauma. 27 (8), 1463-1475 (2010).</li>
<li>Morris, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developments+of+a+water-maze+procedure+for+studying+spatial+learning+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat.</a> J Neurosci Methods. 11 (1), 47-60 (1984).</li>
<li>Mouzon, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+a+mouse+model+produces+learning+and+memory+deficits+accompanied+by+histological+changes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Repetitive mild traumatic brain injury in a mouse model produces learning and memory deficits accompanied by histological changes.</a> J Neurotrauma. 29 (18), 2761-2773 (2012).</li>
<li>Fleming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+progressive+sensorimotor+anomalies+in+mice+overexpressing+wild-type+human+%CE%B1-synuclein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and progressive sensorimotor anomalies in mice overexpressing wild-type human α-synuclein.</a> J Neurosci. 24 (42), 9434-9440 (2004).</li>
<li>Sedelis, M., Schwarting, R. K. W., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Behav Brain Res. 125 (1-2), 109-125 (2001).</li>
<li>Toon, L., Silva, M., D'Hooge, R., Aerts, J. M., Berckmans, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+gait+analysis+in+the+open-field+test+for+laboratory+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Res+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated gait analysis in the open-field test for laboratory mice.</a> Behav Res Methods. 41 (1), 148-153 (2009).</li>
<li>Lubjuhn, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+testing+in+a+mouse+stroke+model+induced+by+occlusion+of+the+distal+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional testing in a mouse stroke model induced by occlusion of the distal middle cerebral artery.</a> J Neurosci Methods. 184 (1), 95-103 (2009).</li>
<li>Bouët, V., Freret, T., Toutain, J., Divoux, D., Boulouard, M., Schumann-Bard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensorimotor+and+cognitive+deficits+after+transient+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Sensorimotor and cognitive deficits after transient middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Exp Neurol. 203 (2), 555-567 (2007).</li>
<li>Freret, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+deficits+after+distal+focal+cerebral+ischemia+in+mice%3A+usefulness+of+adhesive+removal+test%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: usefulness of adhesive removal test.</a> Behav Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).</li>
<li>Zhan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficient+neuron-microglia+signaling+results+in+impaired+functional+brain+connectivity+and+social+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deficient neuron-microglia signaling results in impaired functional brain connectivity and social behavior.</a> Nature Neurosci. 17, 400-406 (2013).</li>
<li>Balkaya, M., Kröber, J. M., Rex, A., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow. 33, 330-338 (2012).</li>
<li>Wiessner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-nogo-a+antibody+infusion+24+hours+after+experimental+stroke+imporved+behavioral+outcome+and+corticospinal+plasticity+in+normotensive+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Anti-nogo-a antibody infusion 24 hours after experimental stroke imporved behavioral outcome and corticospinal plasticity in normotensive and spontaneously hypertensive rats.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 23, 154-165 (2003).</li>
<li>Schaar, K. L., Brenneman, M. M., Savitz, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessments+in+the+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Transl+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Functional assessments in the rodent stroke model.</a> Exp Transl Stroke Med. 2 (13), (2010).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

מאז ראשיתה לפני 20 שנים, מודל MCAo לשבץ אדם מעורב החדרת חוט להט נעשה שימוש מספר עצום של מחקרים. זאת בעיקר בשל העובדה כי זה מחק מה קורה קליני הצורה הנפוצה ביותר של שבץ (כלומר, שבץ איסכמי). הסטריאטום הוא יותר רגיש לאיסכמיה מ קליפת המוח, וככזה, את משך הזמן איסכמי יתורגם אם הן הסטריאטום ואת קליפת דורסולטרלי תושפע, או רק את הסטריאטום. פעמים האוטם ו reperfusion שניהם יכולים להיות מגוונים בהתאם, ואת זה מציע החוקר את היכולת להיות מסוגל ללמוד תופעות פתולוגיות הקשורות התקפות איסכמי...

שבץ מוחי הוא הגורם החמישי המוביל למוות ברחבי העולם, עם אדם אחד מת מהמחלה בכל 4 דקות. מעל 800,000 אמריקאים סובלים משבץ בכל שנה, אשר לא הרסני רק עבור המטופל, אך גם עבור משפחותיהם. שבץ מוחי הוא הגורם העיקרי למוגבלות מבוגרות ואת ההוצאה השנתית מוערכת בסדר גודל של 36.5 מיליארדים $ 1 למרות אפשרויות טיפול מעט מאוד להיות זמין. מפעיל רקמות plasminogen (tPA) הוא מנהל המזון והתרופות רק (FDA) מורשה תרופה לשבץ איסכמי. עם זאת, הוא יעיל רק אם ניתן לחולים תוך 3-6 שעות מתחילת האירוע המוחי, ובמקרים אלה הם פועלים לטובת רק 4% מהחולים 2. לכן, קיים הכרח כי במודלים של בעלי חיים לשחזור, משמעות קלינית של שבץ משמשים כדי לסייע בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות וטיפולים למחלה זו. חשוב לציין כי במבחנה </em&gt; מודלים, תוך שימושי דוגמנות היבטים מסוימים של תפקוד מוחי, אינם מסוגל משחזר את האינטראקציות פיסיולוגיות המורכבות המתרחשות במוח לפריפריה בעקבות שבץ. כתוצאה מכך, in vivo מודלים חיוניים. הסוג הנפוץ ביותר של שבץ איסכמי הוא במקורו, והיווה 87% ממקרי שבץ הכולל. משיכות אחרות הן דימום תוך-מוחי (9%) ודימום תת-עכבישי (4%), ו נגרמות לרוב על ידי תסחיפים אל עורק המוח האמצעי (MCA). זהו המיוחס העקום הבולט בשורש MCA, מה שגורם זרימת דם למינרית הנכנס למוח כדי להיות מופרות. MCA נובעת עורק התרדמה הפנימי (רשפ&quot;ת) ומסלולים לאורך מענית לרוחב, שם סניפים ופרויקטים בגרעיני הבסיס ואת משטחים לרוחב של חזיתית, הקודקודית האונה הטמפורלית, כולל המנוע הראשוני בקליפה המוטורית. המעגל ויליס נוצר על ידי מעורקים אחוריים להיותמחובר אל עורקי המוח ועורקי תקשורת האחוריים. מודל הנימה או תפר intraluminal של MCAo הוא אחד הנפוץ ביותר במחקר שבץ. עם זאת, יש כמה וריאציות שונות מודל זה, ואלה המבוססים על אם microfilament מוכנס לתוך העורק הראשי החיצוני (ECA, כינה את שיטת Longa) 3, או אם זה מוכנס לתוך ICA (כינה את קואיזומי שיטה) 4. בשיטה של קואיזומי, עורק התרדמה המשותף (CCA) בצד של הניתוח חייב להיות קשור באופן קבוע אם נימה מוסר כדי למנוע דימום מן החתך של המרכז לאמנות עכשווית, ואילו שיטת Longa הוא ECA כי חייב להיות קשור באופן קבוע 5 . הנה שיטת Longa תשמש אנחנו מרגישים את זה הוא עדיף בהרבה ומודל כירורגית רלוונטי יותר קליני של שבץ איסכמי. יתר על כן, השימוש של monofilament הטה-סיליקון, במיוחד עם שיטת Longa, מייצר מאוד<html> לשחזור MCAo בניגוד monofilaments-הקהה להבה, אשר לעתים קרובות לייצר חסימה חלקית ו / או דימום תת-עכבישי 6. שיטת נימת intraluminal יכולה לשמש כמודל של 4,6 חסימה קבועה או חולף. כדי לבצע את המודל החולף, הנימה יוסרה לאחר תקופה של איסכמיה (למשל, 30 דקות, 60 דקות, או שעה 2), ו reperfusion מותר לקרות. מודל זה, במידה מסוימת, המדמה את ששבת זרימת דם לאחר התערבות ספונטנית או טיפולית (למשל, ממשל tPA) כדי lyse קריש תרומבואמבוליים בבני אדם. עבור הדגם הקבוע, הנימה נשארת פשוט במקום במשך פרק זמן מסוים (למשל, 24 שעות), ולכן אין reperfusion מתרחשת. יתרון נוסף של שיטת נימת intraluminal הוא העובדה כי craniotomy לא צריך להתבצע, המאפשר הגולגולת כדי להיות שלמה שמאל והימנעות מכל שינויים בלחץ תוך גולגולתי וטמפרטורה. = ילדה &quot;jove_content&quot;&gt; בסרטון הזה אנחנו מדגימים כיצד לבצע את שיטת נימת intraluminal Longa לגרום MCAo ו reperfusion. כמו כן, אנו מראים כיצד לבצע את ציון נוירולוגיות 18 נקודות וכן לקבוע את ההיקף האוטם באמצעות כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazalium מכתים (TTC).

<table><tbody><tr><td>זכר C57BL/6 עכברים</td><td>מעבדת ג'קסון, בר הרבור, ME</td><td>#000664</td><td></td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד</td><td>מוריס & דיקסון, שריבפורט, LA</td><td>67457-108-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn, Inc, לייק פורסט, IL</td><td>NADA # 139-236</td><td></td></tr><tr><td>מערכת בקרת טמפרטורה DC</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>מיני תרמיסטור רקטלי</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-80-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-2-06</td><td></td></tr><tr><td>קליפרס</td><td>אמזון, Bellevue, WA</td> <td>#64800</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td>מוצרים רפואיים ברחבי העולם, בריסטול, פנסילבניה</td> <td>#51011023</td><td></td></tr><tr><td>ניתוח מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס, סנטר ואלי, PA</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td>מספריים איריס (ישר)</td><td>כלי מדע משובחים, פוסטר סיטי, קליפורניה</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של דומונט (45 מעלות; קצה כפוף)</td><td>כלי מדע עדין, פוסטר סיטי, קליפורניה</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>קליפ מיקרו כלי</td><td>Fine Science Tools, פוסטר סיטי, קליפורניה</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים לניתוחי מיקרו (ישר)</td> <td>כלי מדע משובחים, פוסטר סיטי, קליפורניה</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>מחזירים (בוטים)</td> <td>כלי מדע משובחים, פוסטר סיטי, קליפורניה</td><td>18200-11 (הלן השתמשה 17022-13)</td><td></td></tr> <tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה</td><td>פישר סיינטיפיק, וולת'אם, MA</td><td>23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>ספוגי גזה</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td> <td>#9023</td><td></td></tr><tr><td>7-0 תפר כירורגי קלוע משי</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>SUT-S103</td><td></td></tr><tr><td>0.9% נתרן</td><td>כלורי מוריס & דיקסון, לייק פורסט, IL</td><td>0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>6-0 תפר MCAO בינוני (מונופילמנט מצופה גומי סיליקון)</td><td>Doccol Corporation, שרון, MA</td><td>6023PKRe</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk 6-0 משי קלוע מצופה סיליקון</td><td>Covidien, מנספילד, MA</td><td>SUT-14-1</td><td></td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>פייזר, ניו יורק, ניו יורק</td><td>NADA# 141-199</td><td></td></tr><tr><td>Puralube</td><td>Dechra, נוריץ', בריטניה</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה Physitemp</td><td>מכשיר הרווארד, הוליסטון, MA</td><td>TCAT-2AC</td><td></td></tr><tr><td>מנורת חום</td><td>מכשיר הרווארד, הוליסטון, MA</td><td>HL-1</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת דופלר לייזר</td><td>AD Instruments, קולורדו ספרינגס, CO</td><td>MSP100XP</td><td></td></tr><tr><td>צלחות 24 בארות</td><td>פישר סיינטיפיק, וולת'אם, MA</td><td>#353226</td><td></td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח (PBS)</td><td>Life Technologies, קרלסבד, קליפורניה</td><td>20012-050</td><td></td></tr><tr><td>סכיני גילוח חד קצה</td><td>פישר סיינטיפיק, וולת'אם, MA</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazalium chloride (TTC)</td><td>סיגמא אולדריץ', סנט לואיס, MO</td><td>T8877-50G</td><td></td></tr><tr><td>פורס מטריצת מוח עכבר</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>VWR, רדנור, פנסילבניה</td><td>#182</td><td></td></tr><tr><td>10% פורמלין</td><td>סיגמא אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי</td><td>HT501128-4L</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת ניתוח ImageJ</td><td>NIH, Bethesda, MD</td><td>להורדה</td><td></td>בחינם</tr><tr><td>רכישת מכשור רפואי Retractor, ניוקאסל, CA</td><td>MP-740</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

גישה ניתוחית עבור העורקים התיכון ספיגה מוחין ושבץ reperfusion מושרה של עכברים

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

שבץ מוחי הוא גורם מוביל למוות ברחבי העולם וממשיך להיות אחד הגורמים העיקריים של מוגבלויות הבוגרת לטווח ארוך. כ -87% ממקרי השבץ הם איסכמיים במקורו להתרחש בשטח של עורק המוח האמצעי (MCA). כיום מינהל המזון והתרופות רק (FDA) אישר תרופה לטיפול המחלה ההרסנית הזאת הוא מפעיל plasminogen רקמות (tPA). עם זאת, tPA יש חלון טיפולי קטן עבור הממשל (3 - 6 שעות), והוא יעיל רק ב 4% מהחולים שבאמת לקבלו. המחקר הנוכחי מתמקד בהבנת הפתופיזיולוגיה של שבץ כדי למצוא מטרות טיפוליות פוטנציאליים. לפיכך, מודלים אמינים הם קריטיים, ואת חסימת MCA (MCAo) המודל (המכונה גם מודל הנימה או intraluminal תפר) נחשב למודל כירורגית הרלוונטי ביותר מהבחינה הקליני של שבץ איסכמי, והיא די פולשני לשחזור בקלות. בדרך כלל מודל MCAo משמש עם מכרסמים, במיוחד עם עכברים בשללכל הווריאציות הגנטיות זמינות עבור מין זה. כאן אנו מתארים (ובהווה בסרטון) כיצד לבצע את מודל MCAo בהצלחה (עם reperfusion) בעכברים כדי להפיק נתונים אמינים לשחזור.

עכברים שעברו איסכמיה 30 דקות הנגרמת MCAo (איור 1) ואחריה תקופה של רה-פרפוזיה (24 שעות ו 1 wk מוצגים כאן, אבל האורך reperfusion יכול להיות מגוון). התמותה במהלך MCAo הייתה מינימאלית (כ -2%). איסכמיה הודעה, שיעור התמותה (בתוך 24 השעות הראשונות) היה כ -26%. Flowmetry דופלר לייזר שימש כדי לאשר זלוף זרימת הדם בשטח MCA לפני ואחרי MCAo / r...

על מנת להבין את פתופיזיולוגיה של שבץ, חשוב להשתמש במודלים אמינים. מאמר זה יתאר את אחד דגמי שבץ הנפוצים ביותר בשימוש בעכברים, כינה את חסימת עורק המוח האמצעי (MCAo) המודל (המכונה גם נימת intraluminal או מודל תפר) עם reperfusion.

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

המטרה הכוללת של שיטת Longa היא לשחזר איסכמיה בשורש העורק המוחי האמצעי, או MCA, כיוון ששבכים איסכמיים בבני אדם מתרחשים לרוב בשל חסימה של ה-MCA. שיטה זו יכולה לסייע לנו במתן מענה לשאלות מפתח בתחום השבץ, כגון כיצד למצוא מטרה טיפולית מתאימה לטיפול במחלה זו. היתרון המרכזי של שיטת Longa לעומת טכניקות חלופיות הוא שיעור ההישרדות.בטכניקה זו קיימת גם עלייה באינטראקציות בין לוקוציטים לתאי אנדותל ובנפח האוטם. את הפרוצדורה זו תדגים שנטל ויטאל, מנהלת המעבדה שלי. לאחר השראת הרדמה בעכבר זכר מסוג C57 black six בהתאם לפרוטוקול הכתוב, יש לנטר את עומק ההרדמה באמצעות צביטה בכף הרגל ולמרוח משחה עינית סטרילית כדי למנוע התייבשות.לאחר מכן, גדלו את עור צווארו של בעל החיים. מקמו את העכבר בתנוחה גבנית (supine) על משטח בעל בקרה תרמית, והכניסו גרב רקטלית לניטור ושמירה על טמפרטורת גוף של 36.5 פלוס או מינוס 0.1 °C. לאחר מכן, השתמשו ב-70% ethyl alcohol לחיטוי העור.בשלב הבא, בעזרת מספרי Iris ישרים, בצעו חתך בקו הג운데 והסיטו את הרקמות הרכות כדי לחשוף את כלי הדם. בעזרת פינצטת Dumont, בצעו דיסקציה של העורקי השיהון המשותף (common carotid artery, או CCA) ושל העורקי השיהון החיצוני (external carotid artery, או ECA) מהרקמה שמסביב, ללא פגיעה בעצב הוואגוס. בעזרת חוט משי 7-0, צרו תפר זמני על ידי קשירת קשר רפוף סביב ה-CCA.לאחר מכן, בצעו תפר קבוע סביב ה-ECA והכלי דם הקטנים יותר העוברים ממנו על ידי ליגציה הדוקה של כלי הדם. כעת, בצעו תפר סביב ה-ECA פרוקסימלית למסעף של ה-CCA. לאחר מכן, הניחו תסביך מיקרו-כלי דם (microvessel clip) סביב העורק הקרוטידי הפנימי, או ICA, וסביב העורק הפטריגופלטיני, או PPA.באמצעות מספרי קפיץ למיקרו-דיסקציה, בצעו חתך קטן ב-ECA קרוב ככל האפשר לתפר הקבוע והחדירו מונופילמנט עם קצה סיליקון בעובי 180 מיקרומטר. כאשר הפילמנט מוחדר, הדקו את התפר הזמני סביב ה-ECA והסירו את תליב המיקרו-כלי דם. השתמשו במספרי הקפיץ למיקרו-דיסקציה כדי לחתוך את ה-ECA בין התפר הדיסטלי הקבוע לנקודת הכניסה של הפילמנט.הנח את הפילמנט דרך ה-ICA עד להרגשת התנגדות ב-MCA. לעיון בפרטים נוספים, פנה לפרוטוקול הטקסט. לאחר תקופת חסימה של 30 דקות, הסר את הפילמנט באמצעות פינצטת Dumont על ידי משיכה עדינה לאחור, ואבטח את התפר סביב הקצה הפתוח של ה-ECA.הסיר את התפר הזמני סביב ה-CCA על ידי שחרור זהיר של הליגטורה כדי לאפשר לזרם הדם להספיק שוב דרך ה-CCA. הסר את המרחיבים (retractors), ולאחר מכן השתמש בתפר כירורגי רציף לסגירת החתך. הזרק לעכבר מיליליטר אחד של סליין באופן תת-עורי להשלמת הנפח, ואת משכך הכאב carprofen להקלה על כאב ואי-נוחות הנובעים מההליך הכירורגי.יש לעקוב אחר העכבר לאורך כל תקופת ההתאוששות מההרדמה בכלוב ייעודי המחומם ל-30 °C, ולהניח מזון (chow) מעוך בתוך צלחת פטרי על רצפת הכלוב כדי לעודד אכילה. יש להעריך נוירולוגית את העכברים לאחר תקופת reperfusion מתאימה באמצעות מערכת דירוג של 18 נקודות, תוך הערכת מדדי התפקוד הכללי, המוטורי, התחושתי והפרופריוצפציה. ציון נוירולוגי גבוה יותר מעיד על ירידה בתפקוד הנוירולוגי.כדי למדוד את נפח השבץ המוחי, לאחר השראת הרדמה וניטור עומקה בהתאם לפרוטוקול הכתוב, הנח את העכבר במצב גב (supine) והשתמש במספרי Iris ישרים כדי לחתוך את העור מהבטן ועד לצוואר לפני החיתוך דרך הפריטונאום. בעזרת פינצטות Dumont, הרם את עצם הгруד (sternum) וחתוך את הצלעות. לאחר מכן, השתמש בשני זוגות של תפסני המוסטט (hemostats) כדי לפתוח את הצד השמאלי והימני של בית החזה, ובכך לחשוף את הלב.החדירו מחט בכיול 26-gauge המחוברת למזרק של 5 מיליליטר אל תוך החדר השמאלי וגזרו את העלייה הימנית. לאחר מכן, בצעו פרפוזיה ללב באמצעות תמיסת סליין נורמלית או PBS בטמפרטורת החדר, עד שהנוזל הופך שקוף. בעזרת מספרי Iris ישרים ופינצטה, הסירו את ראש בעל החיים והוציאו בזהירות את המוח מהגולגולת.לאחר מכן, השתמשו בלהב תער כדי לחתוך ולהסיר את הפקעת הריחית ואת המוח הקטן, כך שהמוח יתאים לתבנית. לאחר קירור התבנית, הניחו את המוח בתוכה והניחו אותה על קרח. לאחר מכן, בעזרת להב תער, בצעו חתך ראשון במוח במרחק של שני מילימטרים מהחלק העליון והשאירו את הלהב במקומו.באמצעות להב תער שני, בצעו חתך נוסף של שני מילימטרים מאחורי החתך הראשון. לאחר מכן, הסירו את להב התער הראשון עם הרקמה הדבקה בו. חזרו על תהליך זה עד שכל הרקמה נפרסה.הניחו כל מקטע, לפי סדר החיתוך, לתוך באער אחת של פלטת 24 באערים המכילה 2% triphenyltetrazolium chloride, או TTC, והניחו את הפלטה באמבט מים רדוד בטמפרטורה של 37 °C למשך 20 דקות. לאחר דגירה של 10 דקות, הפכו את הפרוסות. לאחר מכן, העבירו כמות קטנה של 10% formalin לבאערים של פלטת 24 באערים חדשה, והעבירו את המקטעים לבאערים עם ה-formalin לפי סדר החיתוך.לאחר סריקת הפלחים למחשב, השתמש בתוכנת הניתוח ImageJ כדי לנתח את גודל השחול (infarct) כאחוז משטח פלח המוח כולו, על ידי סימון תבליל של האזור השחול ליצירת מדידת שטח. לאחר מכן, מדוד את כל ההמיספירה הנגדית (contralateral hemisphere) כדי לקבוע את השטח שלה. לבסוף, חלק את שטח השחול בשטח ההמיספירה הנגדית והכפל ב-100 כדי לקבוע את נפח השחול.כפי שמוצג כאן, נעשה שימוש במדידת זרימה בשיטת לייזר דופלר כדי לאשר את פרפוזיית הדם באזור ה-MCA לפני ואחרי reperfusion של ה-MCA. כאשר קשירת ה-CCA הזמנית משוחררת לאחר 30 דקות של איסכמיה לצורך הסרת הפילמנט והשגת reperfusion, חלה עלייה חדה בפרפוזיה שהגיעה למעט פחות מ-100% מהפרפוזיה הבסיסית חמש דקות לאחר תחילת ה-reperfusion. בטבלה זו מפורטים המדדים הנוירולוגיים הנוגעים להערכת גירעונות כלליים, תחושתיים, מוטוריים ופרופריוצפטיביים.גרף זה ממחיש כי הציון עבור 27 עכברים בנקודת הזמן של 24 שעות היה 12.56 פלוס או מינוס 0.7, ונותר גבוה שבוע לאחר מכן בערך של 11.50 פלוס או מינוס 1.5. ציון נוירולוגי גבוה יותר מעיד על ירידה בתפקוד הנוירולוגי. נפחי השבץ (Infarct volumes) הראו דפוסים דומים לציון הנוירולוגי בנקודת הזמן של 24 שעות.כפי שמוצג כאן, 24 שעות לאחר MCAo, בעכברים נצפו נפחי אינפארקט גדולים אשר החמירו שבוע לאחר השבץ. ברגע שהטכניקה נלמדת, ניתן לבצע אותה תוך 15 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לשמור על טמפרטורה של 36.5 °C.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע גם שיטות אחרות כגון קשירה וניקור של העצור (cecal ligation and puncture). הדבר מאפשר לנו לענות על שאלות נוספות, כגון השפעותיה של אלח דם (sepsis) לפני ואחרי שבץ מוחי. לאחר צפייה בסרטון זה, תגיעו להבנה טובה של אופן השראת איסכמיה על ידי החדרת מונופילמנט לעורק המוחי האמצעי והוצאתו כדי לאפשר רפירפוזיה.זכרו כי עבודה עם מכשירים כגון מספרי איריס (Iris scissors) ופינצטות עלולה להיות מסוכנת ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות.

surgical-approach-for-middle-cerebral-artery-occlusion-reperfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

אנו מדגימים את הוידאו שיטה לייצור באמצע חסימה בעורק המוח בעכברים בוגרים באמצעות monofilament intraluminal. כמו כן, אנו מראים כיצד להעריך את מידת אוטם מוחי על ידי מכתים 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

אנו מתארים מודל עכבר של שבץ מוחי הנגרם על ידי חסימה של עורק המוח האמצעי באמצעות תפר מצופה סיליקון. ניתן ליישם את הפרוטוקול כדי לגרום לחסימה קבועה או איסכמיה זמנית, ואחריה רפרפוזיה.

אינדוקציה של שבץ איסכמי ו איסכמיה reperfusion בעכברים באמצעות הטכניקה ויזואליזציה ספיגות עורקים התיכונים של אזור האוטם

Intraluminal סגר נימה של עורק המוח התיכון הוא הדגם הנפוצות ביותר בשימוש ב- vivo של שבץ ניסויים בחולדות. גישה כירורגית חלופיים כדי לאפשר תיקון עורק הראש נפוצות מתבצע כאן, מה שמאפשר את פגיעה reperfusion של עורק תרדמני, של פגיעה reperfusion מלא אל השטח עורק המוח התיכון.

חסימה בעורק האמצעי המאפשר פגיעה Reperfusion באמצעות תיקון עורק הראש נפוצות בעכברים

דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion הוקמה כדי לחקור הפתופיזיולוגיה של שבץ. אנו יש מאתרים ומפסיקים את עורק המוח התיכון נכון ולא נכון עורק תרדמני, להחזיר את זרימת הדם לאחר 10 או 40 דקות של איסכמיה.

שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

הפרוטוקול נועד לספק שיטות לאנצפלומיוסיננגיוזיס - השתלה של דש שריר טמפורליס וסקולרי על פני השטח של רקמת מוח איסכמית - לטיפול בשבץ איסכמי שאינו מויאמויה. יעילות הגישה בהגברת אנגיוגנזה מוערכת באמצעות מודל חסימה חולף של עורק מוחי אמצעי בעכברים.

מודל לטיפול באנצפלומיוסיננגיוזיס לאחר שבץ מוחי הנגרם על ידי חסימת עורקים מוחיים באמצע בעכברים

פרוטוקול זה מדגים מודל שבץ עכבר ייחודי עם אוטם בגודל בינוני ושיעור הישרדות מצוין. מודל זה מאפשר לחוקרי שבץ פרה-קליניים להאריך את משך האיסכמיה, להשתמש בעכברים מזדקנים ולהעריך תוצאות תפקודיות ארוכות טווח.

מודל שונה של חסימת עורק מוחי אמצעי טרנס-גולגולתי לחקר תוצאות שבץ מוחי בעכברים מזדקנים

פרוטוקול זה מתאר את המודל של איסכמיה מוחית מוקדית חולפת בעכברים באמצעות חסימה תוך לומינלית של עורק המוח האמצעי. בנוסף, דוגמאות להערכת תוצאות מוצגות באמצעות הדמיית תהודה מגנטית ומבחני התנהגות.

מודל חולף של חסימת עורק מוחי אמצעי חולף

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6J ומעריכים את ההתנהגות הנוירולוגית והתכונות ההיסטופתולוגיות שלאחר מכן.

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

פרוטוקול זה מתאר את תהליך ההכנה לרפרפוזיה של חסימת עורק המוח התיכון דרך עורק התרדמה המשותף.

הכנת מודל שונה עבור זילוח חסימת עורק מוחי אמצעי

חקור את שיטת לונגה ליצירת איסכמיה בעורק המוחי התיכון בעכברים C57BL/6. שיטה זו מסייעת בחקר שבץ ובזיהוי מטרות טיפוליות חדשות.

גישה ניתוחית עבור העורקים התיכון ספיגה מוחין ושבץ reperfusion מושרה של עכברים

גלה סרטונים נוספים