איתור מולקולרית ראפיד והבחנה א נגיפי שפעת A ו- B
30 בינואר 2017
אנו מתארים assay מהיר, מולקולרי מבוסס השפעת A ו- B. שפעת assay מזהה כל מטרה בתוך 15 דקות על ידי העסקת הגברת בידוד תרמית עם פריימרים ספציפי שפעת ואחריו איתור יעד עם בדיקות משואה מולקולריות. שפעת A ו- B assay הוא ידידותי למשתמש ונזקק ידות על מינימאליות זמן לבצע.
המטרה הכוללת של בדיקה זו היא לאבחן או לשלול זיהום בנגיף השפעת בחולים המציגים מערכות נשימה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האבחון הקליני כגון אבחון גורמים מרכזיים לזיהומים בדרכי הנשימה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שמדובר בשיטה מהירה שניתן להשתמש בה במסגרת טיפול מינוי.
מי שידגים את ההליך יהיה סם קפלן, טכנאי מהמעבדה שלנו. כדי לאסוף דגימת ספוגית אף, הכנס את המקלון לנחיר שיש לו את הניקוז הגלוי ביותר או הצפוף ביותר. בסיבוב עדין, דחפו את הספוגית לתוך הנחיר עד להתנגדות וסובבו מספר פעמים כנגד דופן האף לפני הוצאתם לאט מהנחיר.
לאחר מכן, אחסן את הספוגית והובל אותה בבקבוקון המכיל שלושה מיליליטר של אמצעי הובלה ויראליים. לאחר מכן, הביאו את הדגימה ואת מקלט הדגימה הכחול לטמפרטורת החדר לפני הבדיקה. ניתן לבדוק את בסיס הבדיקה הכתום ללא צורך בחימום לטמפרטורת החדר.
השאירו את כל חלקי הבדיקה בנייר כסף עד מיד לפני השימוש. לאחר מכן הפעל את המכשיר, הזן את מזהה המשתמש ולחץ OK.To להתחיל בתהליך הבדיקה, גע בהפעלת בדיקה במסך המכשיר. לאחר מכן הזן את מזהה המטופל באמצעות המקלדת או סורק הברקוד שעל המסך ולחץ על אישור. לאחר מכן פתח את המכסה והכנס את צינור הבדיקה הכתום למחזיק בסיס הבדיקה הכתום.
ודא שהבדיקה הנכונה מוצגת על המסך ולחץ על אישור. לאחר מכן הכנס את מקלט הדגימה הכחול למחזיק מקלט הדגימה הכחול והמתן עד שמקלט הדגימה יתחמם. לאחר מכן, הסר את החותם המסוכל על ידי הנחת שתי אצבעות על קצה מקלט הדגימה כדי להבטיח שהוא יישאר במקומו. לאחר מכן הנח את המקלון של המטופל לבדיקה במקלט הדגימה.
מערבבים במרץ את הספוגית והנוזל למשך 10 שניות ולוחצים את ראש הספוגית על הצד של מקלט הדגימה כדי לעזור להוציא את הדגימה מהמטוש. אם ספוגיות הבדיקה מאוחסנות במדיום הובלה ויראלי, מערבל את אמצעי ההובלה הנגיפי למשך 10 שניות והוסף 200 מיקרוליטר ממנו למקלט הדגימה. לאחר מכן לחץ על אישור כדי להמשיך.
לאחר מכן, לחץ על מחסנית ההעברה הלבנה לתוך מקלט הדגימה הכחול. המשך ללחוץ על מקלט הדגימה עד שהמחוון הכתום יעלה. לאחר מכן הרם וחבר את מחסנית ההעברה לבסיס הבדיקה.
המחוון הכתום אמור לרדת ברגע שהעברת המחסנית מחוברת כהלכה. סגור את המכסה ואל תפתח עד להופעת מסך התוצאות. כעת גע בהפעל בדיקת QC במסך הבית.
בחר את מבחן ה-QC להפעלה. לאחר מכן אשר את סוג הבדיקה כך שיתאים לדגימת ה-QC המיועדת לבדיקה על ידי לחיצה על אישור וביצוע ההנחיות שעל המסך להשלמת הבדיקה. לאחר השלמת ריצת הבדיקה, צפו בתוצאות הבדיקה המוצגות על המסך עם פרשנויות לנוכחות שפעת A, B או תת-סוגים לא ידועים וחזרו על הבדיקה לקבלת תוצאות לא חוקיות.
לאחר מכן נקו את המכשיר ואת אזור הספסל שמסביב עם תמיסת אתנול 70% או 10% אקונומיקה. איור זה מציג את ערכי ה-CT הממוצעים שנקבעו על ידי בדיקת RP עבור הדגימות החיוביות והשליליות עבור כל תת-סוג שפעת. התוצאות מראות כי הדגימות השליליות השגויות שנקבעו על ידי בדיקת שפעת A ו-B נבעו מדגימות עומס נגיפי נמוך.
לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 15 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור שבעת ההגדרה הראשונית של הבדיקה, יש לחבר את מחסנית ההעברה לבסיס הבדיקה עד שייכנסו למקומן בנקישה. אם שני החלקים הללו אינם מאובטחים כראוי, הריצה תיכשל ויהיה צורך לחזור עליה מההתחלה.
לאחר צפייה בסרטון זה אתה אמור להבין היטב כיצד לבצע בדיקת אבחון זו לשפעת. אל תשכח שעבודה עם דגימות מטופלים שעלולות להיות נגועות בשפעת עלולה להיות מסוכנת ביותר ויש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון לבישת ציוד מגן אישי מתאים, בעת ביצוע הליך זה.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
סקירה כללית
מאמר זה מתאר בדיקה מולקולרית מהירה לזיהוי נגיפי Influenza A ו-B. הבדיקה משתמשת בהגברה איזותרמית ובגששי Molecular Beacon, המאפשרים קבלת תוצאות תוך 15 דקות בלבד.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- אבחון קליני
- ביולוגיה מולקולרית
- מחלות זיהומיות
רקע
- נגיפי שפעת הם גורמים משמעותיים לזיהומים בדרכי הנשימה.
- אבחנה מהירה היא קריטית לניהול יעיל של המטופל.
- שיטות קיימות עשויות לדרוש זמני עיבוד ארוכים יותר.
- בדיקה זו שואפת לספק תוצאות מהירות בפורמט ידידותי למשתמש.
מטרת המחקר
- פיתוח בדיקה מהירה לאבחון זיהומים בנגיף השפעת.
- שיפור היעילות של האבחון הקליני במחלות דרכי הנשימה.
- סיוע בקבלת החלטות טיפוליות בזמן במסגרות בריאותיות.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- הגברה איזותרמית באמצעות פריימרים ספציפיים לשפעת.
- זיהוי מטרות באמצעות גשושים מסוג molecular beacon.
- איסוף דגימות באמצעות מטוש נזאלי.
- זמן עבודה ידני מינימלי הנדרש לבדיקה.
תוצאות עיקריות
- הבדיקה מספקת תוצאות תוך 15 דקות.
- הליך ידידותי למשתמש המתאים למסגרות קליניות.
- מזהה ביעילות את נגיפי Influenza A ו-B.
- מודגם על ידי טכנאי מעבדה.
מסקנות
- הבדיקה היא כלי מהיר ויעיל לאבחון שפעת.
- היא יכולה לשפר משמעותית את הטיפול בחולים עם זיהומים בדרכי הנשימה.
- מחקרים נוספים עשויים להרחיב את יישומה באבחון קליני.
שאלות נפוצות
רלוונטיות תעשייתית למנהלים
גילוי מולקולרי מהיר של נגיפי שפעת תומך בקבלת החלטות אבחנתיות מוקדמות בניהול מחלות נשימתיות. זמן התוצאה של הבדיקה, העומד על 15 דקות, מאפשר מיון בזמן אמת בסביבות נקודת טיפול (point-of-care), ובכך מפחית את השהיית האבחון. יכולת זו מסייעת בהפחתת הסיכונים בפיתוח תרופות אנטי-ויראליות בשלבים מוקדמים על ידי אספקת נתונים מהימנים על סטטוס הזיהום.
יישומים אסטרטגיים במו"פ של ביו-פארמה
גילוי מוקדם ותיקוף מטרה
- ערך מדעי: מאפשר אישור של סטטוס זיהום בשפעת במודלים פרה-קליניים, ובכך תומך במחקרי תיקוף של מטרות (target validation).
- ערך תפעולי: מספק קריאה מהירה במערכת סגורה, המפחיתה את זמן העבודה הידנית ואת הסיכון לזיהום.
סריקה ופיתוח בדיקה
- ערך מדעי: ייצור אותי זיהוי כמותיים באמצעות גששי molecular beacon לצורך אופטימיזציה של הבדיקה.
- ערך תפעולי: אספקת תוצאות הניתנות לשחזור על פני דגימות נזאליות-לועיות קפואות ומאורכבות, התומכת בחסון הבדיקה.
מחקר תרגומי ופרה-קליני
- ערך מדעי: מאפשר ניטור אורך של העומס הנגיפי במערכות הרלוונטיות למחלה, ובכך מסייע בהפחתת סיכונים מכניסטיים.
- ערך תפעולי: מאפשר סנכרון בין-תחומי בין צוותי הווירולוגיה והטוקסיקולוגיה באמצעות פלט סטנדרטי.
שילוב תהליכי עבודה וצנרת עיבוד (Pipeline)
הבדיקה מתאימה לתהליכי עבודה של שלבי הגילוי המוקדמים, שבהם נדרש אישור מהיר של מצב הזיהום לפני המעבר לאופטימיזציה של המולקולות המובילות (lead optimization).
- ביולוגיה של הגילוי: תומך בבדיקת היפותזות על ידי הבחנה בין זיהום של שפעת A ו-B בקוהורטות ניסיוניות.
- סריקה: מאפשר הכנה של דגימות ביולוגיות סטנדרטיות לצורך סריקה אנטי-ויראלית בהמשך התהליך.
- אנליזה: מספק תוצרי איכותיים וחצי-כמותיים המסייעים בהשוואת יעילות אנטי-ויראלית בין תנאים שונים.
- מחקר תרגומי: מקשר בין זיהוי מוקדם של זיהום לרציפות פרה-קלינית באמצעות זיהוי ויראלי עקבי.
- שימוש חוזר ארגוני: מהווה מודול אבחנתי לשימוש חוזר עבור מחקרי נגיפי נשימה בפרויקטים מרובים.
השפעה תפעולית וארגונית
- ערך מדעי: מפחית עמימות מכניסטית במודלים של זיהום על ידי אספקת בידול ברור בין תתי-סוגים של שפעת.
- ערך תפעולי: מבטיח סטנדרטיזציה והדירות באמצעות תפעול במערכת סגורה ללא שימוש בפיפט.
- ערך אסטרטגי: משפר החלטות של go/no-go בתוכניות אנטי-ויראליות על ידי מתן אפשרות לאישור מהיר של הזיהום.
- השפעה על הפורטפוליו: תומך בתיעדוף של תרכובות מותאם-סיכון בהתבסס על נתוני מעורבות מטרה (target engagement) בזמן אמת.
שיקולי יישום
- דורש הכשרה באיסוף תמרורי נזאל-בלעומי ובטיפול בדגימות בתוך מדיום להעברת נגיפים.
- תלוי בתחזוקת המכשיר וביציבות הרכיבים (reagents) להשגת ביצועים עקביים.
- מצריך תיאום פרוטוקולים בין צוותים למעקב אחר דגימות ופירוש תוצאות.
- חייב להביא בחשבון רגישות מופחתת בדגימות עם עומס נגיפי נמוך, כפי שנצפה בהשוואות של דגימות קפואות.
- נהנה מבקרות סביבתיות למניעת זיהום של אמפליקונים (amplicons) בסביבות של תפוקה גבוהה.
