דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

המטרה הכוללת של הליך זה היא לפתח מודל אורתוטופי של עכבר של סרטן לבלב פלואורסצנטי שניתן לנטר באופן לא פולשני בבעל חיים חי. מודל זה מאפשר מחקר לא פולשני של ההשפעות של תרופה ספציפית מעניינת על גידול ראשוני והגרורות שלו בבעל חיים חי. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לראות בקלות את השפעות הטיפולים באתרם.

התחל בהפשרת כמות של מטריג'ל בריכוז גבוה בהתאם להוראות היצרן. לאחר מכן, שטפו כל בקבוק תאים עם חמישה מיליליטר DPBS, וקצרו את התרביות עם טריפסין. לאחר הוספת מדיום RPMI, העבירו את מתלי התאים המתקבלים לצינורות של 15 מיליליטר וסובבו את התאים.

בתום הצנטריפוגה, העבירו את התאים לארון בטיחות ביולוגית ותלו מחדש את הכדורים ב-10 מיליליטר DPBS טריים עם פיפטינג עדין. לאחר הספירה, יש לצנטריפוגה שוב של התאים ולדלל את תרחיפי התאים לריכוז של שלוש פעמים 10 עד התאים השישיים לכל 50 מיקרוליטר של מדיום קר כקרח, נטול סרום ומטריג'ל, קרום מטריצת מרתף בריכוז גבוה. לאחר מכן, מערבל בעדינות את הדגימות והניח אותן על קרח.

כדי להשתיל את התאים, יש למרוח תחילה משחה על עיני העכבר המורדם ולהניח את החיה על כרית חימום מכוסה בווילון סטרילי. לאחר מכן, יש לחטא בעדינות את צד החיה עם שלושה קרצוף יוד, ולאחר מכן שלוש שטיפות אתנול של 70%. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטה בבוהן, טען כ -200 מיקרוליטר מהתאים המוכנים למזרק שחפת מקורר מראש של מיליליטר המצויד במחט בגודל 18.

החלף את המחט בגודל 18 במחט בגודל 27 והנח את התאים בחזרה על הקרח. לאחר מכן, אתר את האזור הכללי של הטחול ברבע השמאלי העליון של הבטן. בעזרת מלקחיים צובטים את העור מעל הטחול ומבצעים חתך של כסנטימטר אחד ליצירת כיס.

לאחר מכן, צבט את השריר החלק על גבי הטחול וחתוך את הרקמה כדי לגשת לחלל הצפק. לאחר מכן, תפסו בעדינות את קצה הזנב של הטחול ושלפו אותו מחלל הגוף. בעזרת צמר גפן רטוב וסטרילי, מורחים את הלבלב המחובר לקצה הטחול כדי לאתר את זנב הלבלב.

העבירו 50 מיקרוליטר מהתאים לזנב הלבלב, ואז סובבו לאט את המחט החוצה מהלבלב. השתלה מוצלחת תיראה כמו בועה שטחית ללא דליפות. החזירו את האיברים לחלל הצפק וסגרו הכל עם השריר והעור.

לאחר מכן, השתמש בתפר 6-0 כדי לסגור את החתך. לאחר מכן, הזריקו לבעלי החיים קטופרופן ועקבו אחריהם עד שהם יתאוששו לחלוטין. בנקודת הזמן הניסוי המתאימה, השתמש במערכת הדמיה מסחרית של בעלי חיים קטנים כדי לדמות את גידול הגידול בבעל חיים חי תחת הרדמה ובחר את מסנני העירור והפליטה המתאימים.

לאחר מכן, קבל תמונה ראשונית באמצעות אור לבן בלבד. שמירה על החיה באותו מיקום, עבור למסנני GFP ורכוש תמונה שנייה. כדי לנתח את צמיחת הגידול, הניחו את התמונות הלבנות והפלואורסצנטיות כדי להעריך את האזור הפלואורסצנטי ואת עוצמת תאי הגידול.

זיהוי אות פלואורסצנטי ירוק בין שבועיים לשלושה לאחר ההשתלה מספק רמז חזותי לאישור קיומו של גידול סרטן לבלב מתפתח, מכיוון שבעלי החיים שאינם מפתחים גידולים אינם מציגים אות GFP. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת ניטור לא פולשני של התקדמות גידול הגידול, עם עלייה באות ה-GFP שנצפתה לאורך זמן ככל שגודל הגידול גדל. ניתן לאשר גרורות של הגידול לאיברים ספציפיים עם הסרת הרקמות המעניינות להמשך הדמיה פלואורסצנטית ex vivo.

לאחר השליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך שש עד שמונה דקות וניתן להשתמש בה כדי לחקור את ההשפעות של חומרים כימותרפיים שונים על סרטן הלבלב והגרורות שלו. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לשמור את המטריגל בקרח, אחרת יהיה קשה להזריק את הג'ל. כמו כן, חשוב לזכור להשתמש בטכניקות אספטיות ולעקוב אחר כל רמות ההרדמה בכל עת.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לייצר מודל אורתוטופי של סרטן הלבלב בעכברים. אל תשכח שעבודה עם קווי תאים סרטניים אנושיים עלולה להיות מסוכנת, וכי יש לנקוט באמצעי זהירות כגון לבישת ציוד מגן וסילוק נכון של פסולת ביולוגית, בכל עת.