Name: Assay העדפות טעם למבוגרים תסיסנית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 31 s
Description: למדו שיטת מעבדה פשוטה להערכת העדפות טעם ב-Drosophila מבוגרים באמצעות מבחן בליעה. שיטה זו מאפשרת לחקור את הבסיס הגנטי של בחירת טעמים מתוקים ומרים ללא ציוד מיוחד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

ברצוננו להודות לחברי מעבדת טסייה על הקריאה הביקורתית של כתב היד הזה ועל הצעות מועילות במהלך הכנת פרוטוקול זה.

1. רעב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן לטוס בקבוקונים רעבים על ידי להרוות כדור צמר גפן עם 18.2 MΩ מים בתחתית בקבוקון זבוב סטנדרטי. לחלופין, בדומה להרוות רצועה קטנה של נייר סינון עם 18.2 MΩ מים ומקום בזווית בתוך הבקבוקון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף זבובים לתוך סטים של ~ 100 בעלי חיים על כרית CO 2 ולאחר מכן להוסיף את הזבובים כדי בקבוקון מוכן. הערה: התוצאות הטובות ביותר מושגות עם חיות כי הם פחות מ 5 ימים. עם זאת, את הגיל המדויק של החיות ניתן לשלוט כמשתנה ניסיוני לקבוע לשינויים בהעדפות הטעם לאורך זמן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש פקק כדור או קצף כותנה להבטחת הבקבוקונים סגורים. מניחים צלוחיות לצידם באינקובטור נשלט לסביבה. לשמור על טמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס, ואת לחות מעל 70%. השאירו בקבוקונים כפי שהיא למשך 24 שעות. </li></ol> 2. Assay העדפות טעם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את כל tastants עבור assay באותו יוםבדיקות s. הערה: tastants המדויק לשמש ישתנה בהתאם שאלת ניסוי שהתבקש. להלן tastants למשל בשימוש בפרוטוקול זה. ראו סעיף 4 עבור אופטימיזציות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מלאה tastant (1 מ&quot;מ סוכרוז) על ידי שילוב 10 μl של פתרון סוכרוז 100 מ&quot;מ, 13 μl של צבע מאכל אדום, ו 977 μl של 18.2 MΩ מים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן tastant ניסיוני (סוכרוז 5 מ&quot;מ) על ידי שילוב 50 μl של 100 מ&quot;מ תמיסת סוכרוז, 10 μl של צבע מאכל כחול, 940 μl של 18.2 MΩ מים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך תאי assay באמצעות צלחת פטרי פלסטיק רגיל 100 מ&quot;מ x 15 מ&quot;מ ערוכים באופן הבא: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים שלושה 10 טיפות μl שליטה tastant הקרוב שולי הצלחת בשעה 12 ועוד 3 טיפות בשעה 6. ודא כי המרווח בין טיפות דומה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים שלושה 10 טיפות μl של tastant ניסיוני הקרוב שולי הצלחת ב -3 בבוקר,3 אחרים טיפות בשעה 9. ודא כי המרווח בין טיפות דומה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.2.1 ו 2.2.2 עבור רבים משכפל כרצונכם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקבוקון 1 ריק זבובים ~ 100 מורעבים על כרית CO 2 רק מספיק זמן כדי להרדים את כל החיות (כ -10 שניות). מבריש את החיות לאמצע בתא assay מוכן וכסו מכסת הצלחת. הערה: ארוכה יותר בתקופות של חשיפת CO 2 יש להימנע כדי לשפר את זמן התאוששות והפרעת גבול עם התנהגות האכילה. חשיפת הקרח (~ 5 דקות) ניתן להשתמש הרדמה כדי למנוע תופעות התנהגותיות CO 2 שיכולים לנבוע גם חשיפה מוגבלת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החדר assay בקופסת קרטון אטום. הקפד לתייג את מחוץ לקופסא עם המצב ואת הגנוטיפ נבדקת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את ההתקנה כולה (קאמרי assay בתוך ארגז קרטון של שלב 2.4) לתוך C חממת 25 ° עם לחות של 70% לפחות 2 שעות. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.3 דרך 2.5 לכל משכפל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 2 שעות, במקום לתאי assay, עדיין בתוך קופסאות קרטון, ישירות לתוך המקפיא -20 ° C עד מוכן לכמת. </li></ol> כימות Assay 3. טעם העדפות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר בתא assay יחיד להתחמם לטמפרטורת החדר (כ 5 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ לנתיחה, בעזרת מברשת או זוג מלקחיים, חיות קבוצה המבוססת על צבע של הבטן שלהם: אדום, כחול, סגול או ברורה (איור 1). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשמו את מספר בעלי החיים בכל קיבוץ. שקול חיות ברורות שלא השתתפו assay ולכן אינו כולל אותם בכל חישובים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חשב את מדד העדפה על פי אחת המשוואות הבאות: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם tastant עניין ניסיוני מתווסף צבע אדום, ולאחר מכן להשתמש (אדום N + 0.5N סגול) / (אדום N + N purpl כחול + Nה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם tastant ניסיוני מתווסף צבע כחול, ולאחר מכן להתאים את המשוואה (N כחול + 0.5N סגול) / (N כחול + N אדום + N סגול). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על החישובים עבור כל תנאי הניסוי ו המשכפלת. </li></ol> 4. אופטימיזציה של Assay העדפות טעם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן אמפירי לקבוע את הריכוז של אינדיקטורים צבעי מאכל לשמש כך צבעי מאכל אינו משפיעים על התוצאה של assay הטעם, כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן 4 tastants באמצעות באותו מתחם הבסיס (למשל 5 סוכרוז מ&quot;מ) כמצוין בשלב 2.1, אך השמט את צבעי מאכל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף צבע מאכל אדום 1.3% לאחת tastants. הפוך את 3 tastants הנותרים עם צבע מאכל כחול של ריכוזים שונים בצינור אחד (למשל 0.6%, 1%, ו -1.3%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרוטוקול מלא צעדי 2.2 דרך 3.4 עבור כל זוג tastant: מול אדום 1.3% 0.6% כחולים; 1.3% אדום לעומת 1% כחול1.3% אדומים לעומת 1.3% כחולים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 4.1.1-4.1.3 עם אחוזים שונים של צבע מאכל הכחול עד ממוצעי מדד העדפת ערך של 0 (איור 2). הערה: כנקודת מוצא, צבע מאכל אדום 1.3% בשילוב עם צבעי מאכל כחול 1% בדרך כלל מניב תוצאות טובות. אם אין ריכוז משביע רצון של צבע מאכל הכחול ניתן להתאים צבע 1.3%, ולאחר מכן צעד 4.1.1 דרך 4.1.3 ניתן לחזור עם ריכוזים שונים של צבע אדום וריכוז מתמיד של צבע מאכל הכחול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את כל התנאים כדי להיבדק עם ריכוזי הצבעים מאכלים אותו מותאמים. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Herrero, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fruit+fly+behavior+in+response+to+chemosensory+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Peptides%22%5BJournal%5D)">Fruit fly behavior in response to chemosensory signals.</a> Peptides. 38 (2), 228-237 (2012).</li>
<li>Vosshall, L. B., Stocker, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+architecture+of+smell+and+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Molecular architecture of smell and taste in Drosophila.</a> Annu Rev Neurosci. 30, 505-533 (2007).</li>
<li>Harris, D. T., Kallman, B. R., Mullaney, B. C., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Representations+of+Taste+Modality+in+the+Drosophila+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Representations of Taste Modality in the Drosophila Brain.</a> Neuron. 86 (6), 1449-1460 (2015).</li>
<li>Hong, E. J., Wilson, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+encoding+of+odors+by+channels+with+diverse+sensitivity+to+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Simultaneous encoding of odors by channels with diverse sensitivity to inhibition.</a> Neuron. 85 (3), 573-589 (2015).</li>
<li>Kain, P., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+taste+neurons+that+convey+sweet+taste+and+starvation+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Secondary taste neurons that convey sweet taste and starvation in the Drosophila brain.</a> Neuron. 85 (4), 819-832 (2015).</li>
<li>Masek, P., Worden, K., Aso, Y., Rubin, G. M., Keene, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dopamine-modulated+neural+circuit+regulating+aversive+taste+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A dopamine-modulated neural circuit regulating aversive taste memory in Drosophila.</a> Curr Biol. 25 (11), 1535-1541 (2015).</li>
<li>Charlu, S., Wisotsky, Z., Medina, A., Dahanukar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acid+sensing+by+sweet+and+bitter+taste+neurons+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Acid sensing by sweet and bitter taste neurons in Drosophila melanogaster.</a> Nat Commun. 4, 2042(2013).</li>
<li>Clyne, P. J., Warr, C. G., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candidate+taste+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Candidate taste receptors in Drosophila.</a> Science. 287 (5459), 1830-1834 (2000).</li>
<li>Scott, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemosensory+gene+family+encoding+candidate+gustatory+and+olfactory+receptors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A chemosensory gene family encoding candidate gustatory and olfactory receptors in Drosophila.</a> Cell. 104 (5), 661-673 (2001).</li>
<li>Kim, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+TRPA1+channel+mediates+chemical+avoidance+in+gustatory+receptor+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila TRPA1 channel mediates chemical avoidance in gustatory receptor neurons.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (18), 8440-8445 (2010).</li>
<li>Koh, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+IR20a+clade+of+ionotropic+receptors+are+candidate+taste+and+pheromone+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The Drosophila IR20a clade of ionotropic receptors are candidate taste and pheromone receptors.</a> Neuron. 83 (4), 850-865 (2014).</li>
<li>Zhang, Y. V., Ni, J., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+attractive+salt-taste+coding+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for attractive salt-taste coding in Drosophila.</a> Science. 340 (6138), 1334-1338 (2013).</li>
<li>Zhang, Y. V., Raghuwanshi, R. P., Shen, W. L., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Food+experience-induced+taste+desensitization+modulated+by+the+Drosophila+TRPL+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Food experience-induced taste desensitization modulated by the Drosophila TRPL channel.</a> Nat Neurosci. 16 (10), 1468-1476 (2013).</li>
<li>Liman, E. R., Zhang, Y. V., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+coding+of+taste%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Peripheral coding of taste.</a> Neuron. 81 (5), 984-1000 (2014).</li>
<li>Rodrigues, V., Cheah, P. Y., Ray, K., Chia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((malvolio%2C+the+Drosophila+homologue+of+mouse+NRAMP-1+%28Bcg%29%2C+is+expressed+in+macrophages+and+in+the+nervous+system+and+is+required+for+normal+taste+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">malvolio, the Drosophila homologue of mouse NRAMP-1 (Bcg), is expressed in macrophages and in the nervous system and is required for normal taste behaviour.</a> EMBO J. 14 (13), 3007-3020 (1995).</li>
<li>Tanimura, T., Isono, K., Yamamoto, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+sensitivity+to+trehalose+and+its+alteration+by+gene+dosage+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Taste sensitivity to trehalose and its alteration by gene dosage in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 119 (2), 399-406 (1988).</li>
<li>Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+basis+of+bitter+taste+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular basis of bitter taste in Drosophila.</a> Neuron. 69 (2), 258-272 (2011).</li>
<li>French, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+mechanism+for+bitter+avoidance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dual mechanism for bitter avoidance in Drosophila.</a> J Neurosci. 35 (9), 3990-4004 (2015).</li>
<li>Deshpande, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+Drosophila+food+intake%3A+comparative+analysis+of+current+methodology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantifying Drosophila food intake: comparative analysis of current methodology.</a> Nat Methods. 11 (5), 535-540 (2014).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תארנו פרוטוקול פשוט אך יעיל לקביעת העדפה לטעם תסיסנית. גרסאות של assay זה משמשים באופן שגרתי ניסויים כדי לקבוע את תרומתם של קולטנים התעורר אצלם (GRS) כדי לתפוס את איכויות שונות (מר, מתוק, חמוץ, מלוח, umami) של תרכובות טעם. הגנום תסיסנית מכיל כ 60 גנים המקודדים 68 קולטנים gustatory מזוהה על ידי שחבור חלופי 8,9. עם זאת, חלבונים אחרים כגון קולטני גלוטמט ionotropic וערוצי TRP גם הוכחו לשחק תפקיד בטעם 10-13. לכן, יש מגוון נרחב בכח המפלה של טעם חר...

בעלי חיים להשתמש chemosensation להבחין תנאי יתרון מלבד תנאים נחותים. תפיסה זו יכולה להיות קריטית עבור דברים כגון קביעת מקור המזון הטוב ביותר, הימנעות חומרים רעילים או קביעת שותף הזדווגות מיטב 1. Chemosensation מחולקת לעתים קרובות לשני מרכיבים חושיים: חושי חוש ריח וחושים התעוררו אצלם. מאפיין מבדיל עיקרי של חושים אלה הוא כי חוש ריח (ריח) משמש כדי לדגום את הסביבה הכימית גזים שמסביב בעוד gustation (טעם) דורש מגע פיזי עם מצע בלתי נדיף. שני אופנים חושיים לעורר תגובות נוירולוגיות שעוברים עיבוד מפוענח במוח כדי לגרום לפעולת 2 דוחה או המושך המתאים. חושים אלה הם אפוא קריטיים להישרדות חיה. זבוב הפירות תסיסנית הוא אורגניזם מודל אשר ממשיכה לצבור פופולריות לשימוש להביןing איך חרקים תופסים ריח וטעם. זבובי פירות להציע יתרונות עצומים על פני מערכות מודל אחר בשל שפע של כלים גנטיים זמין לנתיחה של מסלולים מולקולריים, הסלולר, והתנהגותיים. עבודה במשך 15 השנים האחרונות כבר סייע במיוחד באפיון הזהויות התאיות הספציפיות, קולטנים עצביים, ואיתות מנגנונים מעורבים בשני ריח וטעם. עכשיו, את הכוח של גנטיקה תסיסנית נמצא בשימוש כדי להבהיר עוד כמה תהליכים אלה מסומלים על המעגל נוירון בודד יחיד ברמה 3-6. לכן, מבחנים המספקים בקלות הבקיע מונה המציין שינויי מסלולים חושיים חיוניים מראש המתמשך של שדות אלה. בעוד הרבה ידוע על איך אותות הריח מסומלים ומעובד במוח, הרבה פחות מובן על מנגנונים דומים במסלול התעורר אצלם. אנו מתארים כאן פרוטוקול אשר ניתן להשתמש בהם כדי לברר preferen טעםce תסיסנית. תסיסנית, כמו יונקים, בדרך כלל מעדיף תרכובות טעימות מתוקות בניגוד תרכובות טעימות מרות. כל שילוב של מקורות מזון אלה יכול להיות מנוצל בעיצוב ניסיוני זה כדי לקבוע כיצד שינויים גנטיים ידועים להשפיע על בחירת טעם. בנוסף, אסטרטגיות התערבות פרמקולוגית ניתן להעריך באופן דומה השפיעו על העדפת הטעם של חיות. הקלות והגמישות של assay זה עושה את זה פרדיגמה שימושי להבנת אופי בחוש הטעם תסיסנית.

<table><tbody><tr><td>צבע מאכל כחול (מים, פרופילן גליקול, FD& C כחול 1 ואדום 40, פרופילפרבן)</td><td>מקורמיק</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>קופסאות קריו/מקפיא ללא חוצצים</td><td>פישר</td><td>03-395-455</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>כלים מדעיים עדינים</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית קרחונית</td><td>פישר</td><td>BP2401-500</td><td></td></tr><tr><td>Leica S6 E Stereozoom 0.63X-4.0X מיקרוסקופ</td><td>W. Nuhsbaum, Inc.</td><td></td><td>צלחת</td></tr><tr><td>פטרי 10446294 (100 מ"מ x 15 מ"מ)</td><td>BD Falcon</td><td>351029</td><td>לשימוש חוזר אם נשטף ומיובש היטב</td></tr><tr><td>Quick-Snap Microtubes</td><td>Alkali Scientific Inc.</td><td>C3017</td><td></td></tr><tr><td>צבע מאכל אדום (מים, פרופילן גליקול, FD& C Reds 40 and 3, Propylparaben)</td><td>McCormick</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>IBI Scientific</td><td>IB37160</td><td></td></tr></tbody></table>

assay העדפות טעם למבוגרים<em&gt; תסיסנית</em

Taste Preference Assay for Adult Drosophila

תפיסת הריח והטעם של הסביבה חיונית להישרדות בעלי חיים. היישום הברור ביותר של כימותרפיה זו הוא היכולת להבחין בין מקורות מזון טובים למקורות מזון שעלולים להיות מסוכנים. גוסטיישן דורש מגע פיזי עם תרכובת כימית המסוגלת לאותת באמצעות קולטני טעם המתבטאים על פני השטח של נוירונים. אצל חרקים, תאי העצב הטעמיים האלה יכולים להיות ממוקמים על פני גוף החיה, מה שמאפשר לטעם למלא תפקיד חשוב בהתנהגויות רבות ושונות. חרקים מעדיפים בדרך כלל תרכובות המכילות סוכרים, בעוד שתרכובות הנחשבות בעלות טעם מר נמנעות. בהתחשב בחשיבותו הביולוגית הבסיסית של הטעם, יש עניין רב בהבנת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס אופן חושי זה. אנו מתארים בדיקת טעם של דרוזופילה בוגרת המשקפת את העדפת בעלי החיים לתרכובת טסטנט נתונה. ניתן ליישם בדיקה זו על בעלי חיים מכל רקע גנטי כדי לבחון את העדפת הטעם לתרכובת מסיסה רצויה.

כמה תוצאות אופייניות מבחני העדפה לטעם מוצגות להלן. ברוב הניסויים שונים כלשהי עוצמת צביעת בטן יהיה לראות (איור 1). כל צביעה בבטן אם אינטנסיבי או חלש נחשבת בליעה חיובית. לכן מומלץ לחוקרים להבקיע בעלי חיים תוך עיוור תנאי הניסוי כדי להגביל כל הטיות פוטנציאליות. כמו כן, חשוב לבחור ריכוזי צבע מאכל אשר אינו משפיע על התוצאה של assay ההעדפה...

טעם הוא תהליך חושי חשוב המאפשר משיכה לחומרים מועילים והימנעות מחומרים רעילים. פרוטוקול זה מתאר מבחן בליעה פשוט לקביעת העדפת טעם של דרוזופילה לתרכובת כימית נתונה.

Assay העדפות טעם למבוגרים<em&gt; תסיסנית</em

Olfactory and gustatory perception of the environment is vital for animal survival.  The most obvious application of these chemosenses is to be able to ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לקבוע את העדפתם היחסית של זבובי Drosophila בוגרים לחומר טעם כימי אחד על פני אחר. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הטעם ב-Drosophila, כגון אילו גנים נחוצים לבחירה בין תרכובות מתוקות לבין תרכובות מרות שעלולות להיות רעילות.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא פשוטה ואינה דורשת מכשור מיוחד. את הפרוצדורה ידגים אנדרו בנטל, טכנאי מהמעבדה שלי. כדי להתחיל בניסוי, הַרווְה כדור צמר במים בתחתיתו של מבחנה סטנדרטית לזבובים.בשלב הבא, אספו זבובים בקבוצות של 100 בעלי חיים על פד CO2 ולאחר מכן העבירו את הזבובים למבחנה מוכנה. השתמשו בכדור צמר כדי לאטום את המבחנות. לאחר מכן, הניחו את המבחנות על צדן בתוך אינקובטור בעל בקרת סביבה.הכינו את חומר הטעם (tastant) הבקרה בריכוז של 1 millimolar sucrose, על ידי ערבוב של 10 µL של תמיסת 100 millimolar sucrose,‏ 13 µL של צבע מאכל אדום ו-977 µL של מים. לאחר מכן, הכינו את חומר הטעם הניסויי בריכוז של 5 millimolar sucrose. לאחר מכן, צרו את תאי הבדיקה על ידי שימוש בצלחת פטרי מפלסטיק בגודל 100 mm על 15 mm, והניחו טיפות של 3 µL מחומר הטעם של הבקרה קרוב ככל האפשר לקצה הצלחת במיקום של השעה 12.במיקום השעה שלוש, הניחו שלוש טיפות של 10 µL של חומר הטעם הניסויי קרוב ככל האפשר לקצה הפלטה. הניחו שלוש טיפות נוספות של חומר הטעם הביקורת במיקום השעה שש. לאחר מכן, הניחו שלוש טיפות נוספות של חומר הטעם הניסויי במיקום השעה תשע.בשלב הבא, רוקנו מבחנה אחת המכילה 100 זבובים שהורעבו אל על פלטת CO2, למשך זמן קצר מספיק כדי להרדימ את כל בעלי החיים. העבירו את בעלי החיים בעזרת מברשת למרכז תא בדיקה שהוכן מראש, וכסו אותו במכסה הצלחת. הניחו את תא הבדיקה בתוך קופסת קרטון אטומה לאור.לאחר מכן, סמנו את החלק החיצוני של הקופסה עם התנאי והגנוטיפ הנבדקים. העבירו את כל המערך אל תוך אינקובטור. לאחר שעתיים, העבירו את תאי הבדיקה, שעדיין נמצאים בתוך קופסאות הקרטון, ישירות למקפיא בטמפרטורה של 20- מעלות צלזיוס עד למועד הכימות.המתינו עד שתא בדיקה בודד יתחמם לטמפרטורת החדר. תחת מיקרוסקופ דיסקציה, השתמשו במברשת כדי לקבץ את בעלי החיים על סמך צבע הבטן שלהם: אדום, כחול או סגול.יש לרשום את מספר בעלי החיים בכל קבוצה. גרף זה מציג את ההשפעות של ריכוזים משתנים של צבע כחול, תוך שמירה על ריכוז קבוע של צבע אדום, וחושף שילוב אופטימלי של 1.3% אדום ל-1.0% כחול. זבובים מסוג Drosophila נמשכים באופן טבעי לריכוזי סוכרוז גבוהים, כפי שניכר מערך מדד העדפה הקרוב לאחד, כאשר הם ניצבים בפני בחירה בין סוכרוז בריכוז five millimolar לסוכרוז בריכוז one millimolar.העדפה זו הופכה באמצעות חומצה, שהורידה את מדד ההעדפה לקרוב לאפס. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לבדוק את תוספי צבע המאכל, האם הייתה להם השפעה על בדיקת ההעדפה? לריכוזים של כל צבע לא אמורה להיות השפעה על מדד הביצועים.

taste-preference-assay-for-adult-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

זחלי תסיסנית מסוגלים לשייך גירויי ריח בתגמול בטעם. כאן אנו מתארים הפרדיגמה התנהגות פשוטה המאפשרת הניתוח של למידה אסוציאטיבית אפטטיבית הרחה.

למידה אסוציאטיבית הרחה באפטטיבית<em&gt; דרוזופילה</em&gt; זחלים

סרטון זה מתאר בדיקת האכלה לזבובי פירות שבה משתמשים במזון צבעוני כדי לפקח על האכלה ועל ההשפעה שעשויה להיות לתרכובות נוספות על פעילות ההאכלה. הפרוטוקול לדוגמה בודק את ההשפעות של מספר כימיקלים משבשים אנדוקריניים (EDC).

מבחן האכלה: הערכת העדפות האכלה בדרוזופילה מלנוגסטר

סרטון זה מתאר את מבחן העדפות הטעם, שיטה התנהגותית המשמשת למדידת משיכה או הימנעות כלפי תמיסות צבעוניות שטעמן שונה על ידי הערכת צבע הבטן של הזבוב לאחר בליעת החומר המועדף. הפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך המשמש למדידת העדפת זבובים לתמיסות בריכוזי סוכרוז משתנים.

בדיקת העדפות טעם: שיטה למדידת התנהגות האכלה בדרוזופילה

סרטון זה מתאר את CApillary FEeder, או CAFE, assay, שיטה התנהגותית המודדת צריכת מזון והעדפה של זבובי פירות בלתי מרוסנים. הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לבצע את הבדיקה עם אידוי מינימלי מהנימים המלאים בנוזל המשמשים להעברת המזון ולעקוב אחר צריכתו.

בדיקת CApillary FEeder (CAFE): שיטה למעקב אחר צריכת מזון והעדפתו בדרוזופילה

נקבות דרוזופילה בוחרות בין מצעים ובוחרות אתרים אטרקטיביים להטלת ביצים. סרטון זה מתאר בדיקה התנהגותית שבוחנת את קבלת ההחלטות שלהם, הנקראת בדיקת העדפת הטלת ביצים. הסרטון המוצג מדגים את ההליך עם מערך שנבנה בהתאמה אישית, המאפשר לחוקרים לא רק לבחון את התנהגותן של נקבות רבות בו זמנית, אלא גם תואם להקלטת וידאו והגדרות אופטוגנטיות.

דרוזופילה בדיקת העדפת הטלת ביצים: שיטה לבדיקת קבלת החלטות בזבובים

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

אנו מציגים מבחן אמריקאי כדי לחשוף את ההשפעה של ניחוחי על התנהגות דרוזופילה באמצעות assay Y-מבוך.

בדיקה<em&gt; דרוזופילה</em&gt; Olfaction עם Assay Y-מבוך

פרוטוקול זה מתאר בדיקת תפוקה גבוהה לבדיקת העדפות הטלת ביצים של Drosophila melanogaster ברזולוציה של בעל חיים יחיד.  בדיקה זו מספקת פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ורכיבי מעגלים השולטים בתהליך קבלת החלטות פשוט.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

אנו מתארים פרוטוקול גרימת מתגמל nonrewarding חוויות בזבובי פירות (תסיסנית) באמצעות צריכת אתנול מרצון כאמצעי לשינויים במדינות גמול.

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

בדיקת FEeder (CAFE) היא שיטה פשוטה, ידידותית לתקציב ואמינה ביותר לחקירת מנגנונים העומדים בבסיס צריכת מזון. בשימוש עם אורגניזם המודל הגנטי הרב-תכליתי Drosophila melanogaster, הוא מספק אמצעי רב עוצמה להשגת תובנות חדשות לגבי מנגנוני ויסות צריכת מזון.

את assay נימי מזין מודד צריכת המזון ב<em&gt; תסיסנית</em

אנחנו מציגים פרוטוקול לבדיקת האכלה של שתי אפשרויות לזבובים. מבחני האכלה אלה מהירים וקלים להפעלה ומתאימים לא רק למחקר מעבדה בקנה מידה קטן, אלא גם למסכים התנהגותיים בעלי תפוקה גבוהה בזבובים.

מבחני העדפת מזון מהירה בדרוסופילה

למדו שיטת מעבדה פשוטה להערכת העדפות טעם ב-Drosophila מבוגרים באמצעות מבחן בליעה. שיטה זו מאפשרת לחקור את הבסיס הגנטי של בחירת טעמים מתוקים ומרים ללא ציוד מיוחד.

Assay העדפות טעם למבוגרים

גלה סרטונים נוספים