Name: זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 23 s
Description: למדו שיטת צנתור טרנסאורתרלי לזכרי עכברים לחקר זיהומי דרכי השתן והשוואת תגובות חיסוניות בין זכרים לנקבות. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של פתולוגיות שלפוחית השתן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ד ר מתיו רוסו על קריאה ביקורתית של כתב היד את המעבדה של דנדריטים Immunobiology עבור שלהם תובנות מועילות במהלך פיתוח פרוטוקול והפרוייקט הזה. עבודה זו נתמך בחלקה על ידי מימון מהפעולה האיחוד האירופי השביעי מסגרת תכנית מארי קירי (PCIG11-GA-2012-3221170, LabEx חיסונית-אונקולוגיה (מאי).

עכבר ניסויים נערכו בהתאם לאישור פרוטוקול מספר 2012-0024 מאת Comité d'éthique-en-expérimentation-animale מרכז פריז et Sud (ועדת האתיקה על ניסויים בבעלי חיים), ביישום של אירופה דירקטיבה 2010/63 האיחוד האירופי.
1. הכנת קטטרים
<ol><li>להכין אחת בצינורית ורידי-גישה לילדים עבור כל קבוצה של עכברים נגועה. באמצעות מנגנון קפיץ מובנה, מעצמכם כל בצינורית של המחט, שהומלץ על ידי היצרן. למחוק את המחטים, לשמר רק את הצינורית תוך ורידי פלסטיק.</li>
	<li>לחטא קטטרים ב תא למינארי למחזור אחד סגול (לעיניים), בדרך כלל 25-30 דקות. הערה: קטטר יכול לשמש עכבר אחד או יותר, אולם צנתר החדש אמור לשמש בין קבוצות הניסוי, המינים או זני חיידקים.</li>
</ol>2. הכנה של Uropathogenic e. coli זיהום
<ol><li>לפחות יומיים לפני זיהום, באמצעות לולאה חיסון סטרילי, פס UPEC של מניה חיידקי קפוא על צלחת אגר מרק לוריא (LB), המכילה אנטיביוטיקה במידת הצורך. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. ניתן לאחסן צלחות ב 4 ° C עד לשבוע אחד.</li>
	<li>בבקבוקון 100 מל Erlenmeyer סטרילי, לחסן 10 מ ל LB, המכיל אנטיביוטיקה במידת הצורך, עם מושבה בודדת מהצלחת ליברות, דגירה שעמד ב 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה (כ hr 16-18). הערה: עמידה תרבויות היתר הביטוי של סוג pili 1, אשר נחוצים עבור זיהום23. תרבויות גדל רועד יהיה ביטוי pili פחות יעילה, ולכן המחירים לא עקבי של זיהום.</li>
	<li>מודדים את צפיפות אופטית (OD)600 של התרבות לילה, לחשב את מספר החיידקים לכל ml באמצעות עקומת גדילה שנקבע מראש. כמו לדוגמה, לזן UPEC UTI89, כמנת600 = 0.35 שווה ל 2 x 108 CFU לכל מל ', לפיכך, תרבות לילה עם יתר600 = 2.4 יהיה שקול ל- 13.7 x 108 CFU למ מ ל מדעית לקבוע את היחס בין OD600 וחיידקים קיימא עם כל זן חדש מועסק על זיהום.</li>
	<li>
לקבוע כמות החיידקים שתתבקש על-ידי בהתחשב מספר החיות להיות נגועים, כי כל עכבר צריך לקבל כ 107 המושבה יוצרי יחידות (CFU) ב- 50 μl PBS. לכלול בחישוב נפח מת ~ 130 µl של בבלוטה קטטר, מזרק, 100 µl נחוץ כדי לקבוע את inoculum.
	<ol>
<li>ספין ההשעיה חיידקי ב microcentrifuge שולחן ב- 17,000 g x עבור 1 דקות, resuspend בגדר חיידקים הנוצרת ב 2 x 108 CFU לכל מ ב- PBS. לדלל באופן סדרתי של aliquot של זו השעיה, צלחת על אגר ליברות, עם אנטיביוטיקה במידת הצורך לקבוע את inoculum המדויק עבור כל זיהום.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לצייר את inoculum חיידקיים לתוך מזרק 1 מ"ל ולצרף את הקטטר עד הסוף של המזרק. הקש על המזרק כדי להסיר את כל האוויר, את הבוכנה כדי למלא את החלל דממת שידור הקטטר לפני שמתחילים את ההתקנה.</li>
</ol>3. הכנה של עכברים
<ol><li>עזים ומתנגד עכברים באמצעות בקרום הבטן הזרקה של 100 מ"ג/ק"ג קטמין ו- 5 מ"ג/ק"ג חריגות השירותים הווטרינריים. ניתן לספק חום משלימה.</li>
	<li>ודא כי כל עכבר הוא תרופות הרגעה לוחצת לו על טביעות רגל עם לחץ בינוני. עכברים הם הרגעה כאשר הם לא מגיבים, דורשים 3-5 דקות כדי להגיע למצב זה.</li>
	<li>מקום עכברים פרקדן והפעילו לחץ בינוני אל הבטן התחתונה כדי לרוקן את שלפוחית השתן. מלא שלפוחיות מרגיש כמו אפונה מתחת לעור בין crests ileac. הערה: איזופלוריין בשאיפה שימש כדי catheterize15,עכברים נקבה22, עם זאת, זה לא נבדק אם עכברים זכרים הם מספיק ומורדמת באמצעות איזופלוריין בשאיפה עבור הליך זה.</li>
</ol>4.-transurethral החדרה של עכברים הנשי
<ol><li>בעזרת היד האחרת, הניחו את האגודל על הזנב ואת האצבע של היד אותו על הבטן של העכבר והפעילו לחץ עדין שהתנגדותם כיוונים כדי להחזיק את העכבר בחוזקה במקום.</li>
	<li>
מקם את קצה הקטטר בניצב העכבר-פתח השופכה. עם לחץ עדין, החלק את הצנתר לתוך השופכה, עד ה-hub פוגש את פתח השופכה, תוך כדי הנמכת בו זמנית את המזרק, כך שזה מקביל משטח העבודה. הקטטר דורש אין שימון. אין לדחוף או לכפות את הצנתר לתוך השופכה. הקטטר עליך החלק וחלקה לתוך השופכה, עם מעט התנגדות.
	<ol>
<li>לפני החדרת את inoculum (שלב 4.3), פעם הצנתר הוא במקום, מאוד בעדינות משיכה בעור בטן אל הראש של העכבר עם האצבע מן הלא-הדומיננטי. תן את זה כבר על הבטן של העכבר (שלב 4.1). אם הצנתר הוא של השופכה, הרקמה להלחין את פתח השופכה לא יזוז, ואילו אם הצנתר מושם באופן שגוי בתוך הנרתיק, הרקמה מעביר המשפט ולהרחיקו. בדיקה מהירה זו צריכה להתבצע על כל העכבר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>כאשר ה-hub של הקטטר פוגש את פתח השופכה, לאט לוותר על 50 µl של inoculum חיידקים. קצב איטי החדרה ממזער ריפלוקס vesicoureteral לתוך הכליה. הסר את הצנתר כדי למנוע דליפה, ספירה של 5. הצב עכברים בכלובים שלהם במצב פרקדן.</li>
</ol>5.-transurethral החדרה של עכברים זכרים
<ol><li>הניחו שתי מלקחיים האגודל cranially ואת הקליפה אל איברי המין החיצוניים של העכבר. . משכי את העורלה כדי לחשוף באופן מלא את הפין העטרה. ברגע הפין ממוקם באופן חיצוני, לשחרר את המלקחיים האגודל.</li>
	<li>מיקום מחדש של המלקחיים לייצב את הפין בולט בניצב החיה, מחזיק את האיבר בעדינות אבל tautly. לדמיין את meatus השופכה, בזהירות להציג את הצנתר לתוך הפתח קטן בקצה איבר המין. מדריך בעדינות את הצנתר לתוך הפין, לכיוון הגוף של העכבר, שמירה על מתח עדין עם המלקחיים. הקטטר דורש אין שימון. לא להכריח את הצנתר לתוך הפין; הקטטר עליך החלק בצורה חלקה לתוך השופכה, המציין את המיקום הנכון.</li>
	<li>לאחר ה-hub של הקטטר פוגש את קצה הפין, לאט מאוד לוותר על 50 µl של inoculum, תוך שמירה על מיקומו של הפין. ניתן לציין את האיכות של החדרה בשלב זה על פי ניקוד איכות החדרה קבועה מראש, כגון זו המוצגת באיור2.</li>
	<li>משכי את הצנתר לאט, על ספירה של 5, כדי למנוע דליפה של inoculum. הצב עכברים בכלובים שלהם במצב פרקדן. בעלי חיים כדאי להתחיל לשחזר 30-45 דקות בעקבות ניהול של ההרדמה.</li>
</ol>6. קביעת CFU באיברים נגועים
<ol><li>זמן קבוע מראש-נקודות, הקרבה עכברים באמצעות אישור נהלי (למשל, נקע בצוואר הרחם או יתר פחמן דו-חמצני). להרטיב את הבטן ביסודיות עם 70% אתנול כדי לצמצם זיהום על ידי פרווה.</li>
	<li>אעשה חתך לרוחב השליש התחתון של הבטן של העכבר לפחות 2 ס מ בעזרת מספריים, גילוח ורחיצה כירורגית להסיר את שלפוחית השתן ואת אחרים איברים הרצוי, כולל אך לא מוגבל, הכליות, testis, vesicles הזרע או בבלוטות preputial, לתוך מ צינורות כובע הצמד פוליפרופילן המכיל PBS עקר 1 מ"ל. שמור כל דוגמאות על קרח.</li>
	<li>Homogenize האיברים עם מהמגן כף-יד עד נשאר כמעט אין רקמת מוצק, כ 15-60 שניות בהתאם לאיבר. שומן לא homogenize טוב, קל לזיהוי כמו רקמות בז-לבן מבריק. להתעלם המגון שמנה לפני או הבאים. לשטוף את מהמגן אתנול ואחריו PBS בין כל ניסיוני או איברים בקבוצה. הערה: בדרך כלל, משתמשים לטקס כף-יד או חרוז מיל לטקס. בעוד כל אחת ממערכות אלה הניבו תוצאות דומות, כפי שנקבע על ידי השוואה ישירה של חיידקי CFU-24 שעות לאחר הפגיעה, לתנאים אופטימליים homogenize רקמות הפונדקאי תוך שמירה על יכולת הקיום חיידקי צריך להיות נחוש מדעית לפני מבצע פרוטוקול זה באופן שגרתי.</li>
	<li>ביצוע דילולים טורי של המתלים איברים הומוגני. צלחת דילולים על פלטות אגר ליברות, אנטיביוטיקה בעת הצורך, ואת דגירה לילה (hr ~ 15) ב 37 º C. זני UPEC יש פעמים הכפלה מהירה מאוד, בתור שכזה, צריך לקחת כדי לא דגירה הלוחות אגר מידי כי זה יפריע את היכולת לספור מושבות בודדות.</li>
</ol>7. ניתוח Cytometric תזרים של רקמה בשלפוחית השתן
<ol><li>להכין את מערכת העיכול מאגר המכיל collagenase-34 יחידות/mL ו- DNase ב 100 µg/mL, ב- PBS. לשמור על הקרח. להכין שפופרת אחת של חרוט 15 מ"ל לכל בעל חיים כדי להיות מנותח aliquot 1 מ"ל מאגר העיכול למחזור.</li>
	<li>ב timepoints מראש, הקרבה עכברים באמצעות אישור נהלי (למשל, נקע בצוואר הרחם או יתר פחמן דו חמצני). להרטיב את הבטן ביסודיות עם 70% אתנול כדי לצמצם זיהום על ידי פרווה.</li>
	<li>
אעשה חתך לרוחב השליש התחתון של הבטן של העכבר לפחות 2 ס מ בעזרת מספריים ולהסיר כל שלפוחית השתן. האוהב היטב עם מספריים, חיתוך שלפוחית השתן לתוך 2-3 מ מ2 בגודל חתיכות, בדרך כלל בערך 8 חתיכות.
	<ol>
<li>הוסף אחד טחון השלפוחית למחזור המכיל מאגר לעיכול. מנערים כדי לשטוף את השלפוחית טחון רקמות למאגר לעיכול. שמור על הקרח עד שלפוחיות כל גזור, טחון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>דגירה שלפוחיות טחון 60-75 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, נמרצת ייבוש בעבודת יד 5 s כל 15 דקות. כאשר הרקמה יש מראה שקוף מזוגגות, הדומה ממחטת נייר רטוב, עיכול הושלמה. עיכול ממושך תסיר חלבונים פני שטח התאים הדרושה הזיהוי, יש להימנע.</li>
	<li>בטל את אנזימי העיכול על-ידי הוספת 2-3 מ"ל של מאגר cytometry זרימה כקרח (PBS המכיל 2% סרום שור עוברית (FBS) ו- 0.2 מ מ EDTA) ומערבבים בעדינות. במקום צינורות על קרח.</li>
	<li>כדי להבטיח השעיה תא בודד, כדי להסיר את כל רקמת חיבור, להעביר את תוכנו של הצינור דרך מסנן 100 מיקרומטר הניח צינור חרוטי 15 מ"ל. לחץ בעדינות כל רקמות הנותרים דרך המסנן עם סוף פומפה מזרק. לשטוף את המסנן עם מאגר cytometry זרימה mL 2 נוספים. לשמור דגימות על קרח.</li>
	<li>לשטוף את דגימות על ידי צנטריפוגה במשך 7 דקות ב- 200 x גרם, 4 מעלות צלזיוס. Resuspend כדורי בבלוק 100 µL לזרום cytometry מאגר המכיל Fc, מדולל 5 µg/mL, העברת 96-ובכן סביב הצלחת התחתונה. לאחר 10-15 דק ', להוסיף 100 קוקטייל נוגדן µL הרצוי כל דגימה. דגירה בדגימות למשך 30-45 דקות, על קרח, מוגן מפני אור. הערה: Fc בלוק הוא תגובה כימית המשמשת כדי למנוע את הכריכה של החלק Fc של נוגדנים לתאי המבטאים קולטנים Fc. מטרתו היא כדי למזער את איגוד נוגדן ספציפי. הנחישות של נוגדנים להשתמש יהיו תלויים ההשערה במקצועות הניסוי, יש לבחור עם קלט מן הספרות. איור 3, למדוד חדירה תא החיסון באופן כללי, נוגדן anti-CD45 הועסק, אשר הוא חלבון פאן-החיסון התא.</li>
	<li>לשטוף את דגימות על ידי צנטריפוגה במשך 7 דקות ב- 200 x גרם, 4 מעלות צלזיוס. Resuspend תא כדורי במאגר cytometry זרימה µL 200 ולהעביר דגימות דרך מסננת תא 40 µm על שפופרת 5 מ ל פוליסטירן בדיוק לפני רכישה על cytometer זרימה.</li>
	<li>לאסוף את הדגימה כולה על cytometer הזרימה. עיכול טובה תניב 200,000-400,000 תאים, עם 8,000-10,000 CD45+ התאים החיסוניים מ שלפוחיות בעכבר נאיבי, בעוד האיברים הנגועים יכיל יותר תאים16 (איור 3). הערה: אין אפשרות להשתמש דגימות מוכן לניתוח cytometric זרימה כדי להעריך CFU. לא מומלץ לפצל שלפוחית השתן לשני חלקים אין הוכחה קיימת כדי להדגים את מושבת UPEC או תא החיסון הסתננות הוא אחיד לאורך כל הרקמה.</li>
</ol>

<ol><li>Hooton, T. M., Stamm, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+treatment+of+uncomplicated+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Dis+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and treatment of uncomplicated urinary tract infection.</a> Infect Dis Clin North Am. 11 (3), 551-581 (1997).</li>
<li>Harper, M., Fowlis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+urinary+tract+infections+in+men%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Urology%2C+Gynaecology+%26+Sexual+Health%22%5BJournal%5D)">Management of urinary tract infections in men.</a> Trends in Urology, Gynaecology & Sexual Health. 12 (1), 30-35 (2007).</li>
<li>Foxman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Urol%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of urinary tract infection.</a> Nat Rev Urol. 7 (12), 653-660 (2010).</li>
<li>Lipsky, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+tract+infections+in+men.+Epidemiology%2C+pathophysiology%2C+diagnosis%2C+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Urinary tract infections in men. Epidemiology, pathophysiology, diagnosis, and treatment.</a> Ann Intern Med. 110 (2), 138-150 (1989).</li>
<li>Conway, L. J., Carter, E. J., Larson, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+Factors+for+Nosocomial+Bacteremia+Secondary+to+Urinary+Catheter-Associated+Bacteriuria%3A+A+Systematic+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Nurs%22%5BJournal%5D)">Risk Factors for Nosocomial Bacteremia Secondary to Urinary Catheter-Associated Bacteriuria: A Systematic Review.</a> Urol Nurs. 35 (4), 191-203 (2015).</li>
<li>Markle, J. G., Fish, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SeXX+matters+in+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">SeXX matters in immunity.</a> Trends Immunol. 35 (3), 97-104 (2014).</li>
<li>Yu, C. Y., Whitacre, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex%2C+MHC+and+complement+C4+in+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Sex, MHC and complement C4 in autoimmune diseases.</a> Trends Immunol. 25 (12), 694-699 (2004).</li>
<li>Castelao, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender-+and+smoking-related+bladder+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Gender- and smoking-related bladder cancer risk.</a> J Natl Cancer Inst. 93 (7), 538-545 (2001).</li>
<li>Donsky, H., Coyle, S., Scosyrev, E., Messing, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+incidence+and+mortality+of+bladder+and+kidney+cancers%3A+national+estimates+from+49+countries%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Sex differences in incidence and mortality of bladder and kidney cancers: national estimates from 49 countries.</a> Urol Oncol. 32 (1), 40-e31 (2014).</li>
<li>Garg, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+Disparities+in+Hematuria+Evaluation+and+Bladder+Cancer+Diagnosis%3A+A+Population-Based+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Gender Disparities in Hematuria Evaluation and Bladder Cancer Diagnosis: A Population-Based Analysis.</a> J Urol. , (2014).</li>
<li>Dobruch, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+and+Bladder+Cancer%3A+A+Collaborative+Review+of+Etiology%2C+Biology%2C+and+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Urol%22%5BJournal%5D)">Gender and Bladder Cancer: A Collaborative Review of Etiology, Biology, and Outcomes.</a> Eur Urol. , (2015).</li>
<li>Hsu, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+tumorigenesis+and+mortality+from+bladder+cancer+in+mice+lacking+urothelial+androgen+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Decreased tumorigenesis and mortality from bladder cancer in mice lacking urothelial androgen receptor.</a> Am J Pathol. 182 (5), 1811-1820 (2013).</li>
<li>El Behi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+essential+role+for+decorin+in+bladder+cancer+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">An essential role for decorin in bladder cancer invasiveness.</a> EMBO Mol Med. 5 (12), 1835-1851 (2013).</li>
<li>Foxman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+urinary+tract+infections%3A+incidence%2C+morbidity%2C+and+economic+costs%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of urinary tract infections: incidence, morbidity, and economic costs.</a> Am J Med. 113, Suppl 1A. 05S-13S (2002).</li>
<li>Ingersoll, M. A., Kline, K. A., Nielsen, H. V., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((G-CSF+induction+early+in+uropathogenic+Escherichia+coli+infection+of+the+urinary+tract+modulates+host+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">G-CSF induction early in uropathogenic Escherichia coli infection of the urinary tract modulates host immunity.</a> Cell Microbiol. 10 (12), 2568-2578 (2008).</li>
<li>Mora-Bau, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+Subvert+Adaptive+Immunity+to+Urinary+Tract+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Macrophages Subvert Adaptive Immunity to Urinary Tract Infection.</a> PLoS Pathog. 11 (7), e1005044(2015).</li>
<li>Oliveira, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+Report%3A+Technique+of+Bladder+Catheterization+in+Female+Mice+and+Rats+for+Intravesical+Instillation+in+Models+of+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22%28Conference+Title%2939th+Scand-LAS+and+ICLAS+Joint+Meeting%22%5BJournal%5D)">Technical Report: Technique of Bladder Catheterization in Female Mice and Rats for Intravesical Instillation in Models of Bladder Cancer.</a> (Conference Title)39th Scand-LAS and ICLAS Joint Meeting. 36, 5-9 (2009).</li>
<li>Seager, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravesical+delivery+of+rapamycin+suppresses+tumorigenesis+in+a+mouse+model+of+progressive+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Prev+Res+%28Phila%29%22%5BJournal%5D)">Intravesical delivery of rapamycin suppresses tumorigenesis in a mouse model of progressive bladder cancer.</a> Cancer Prev Res (Phila). 2 (12), 1008-1014 (2009).</li>
<li>Hagberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascending%2C+unobstructed+urinary+tract+infection+in+mice+caused+by+pyelonephritogenic+Escherichia+coli+of+human+origin%29%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin).</a> Infect Immun. 40 (1), 273-283 (1983).</li>
<li>Olson, P. D., Hruska, K. A., Hunstad, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgens+Enhance+Male+Urinary+Tract+Infection+Severity+in+a+New+Model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Androgens Enhance Male Urinary Tract Infection Severity in a New Model.</a> J Am Soc Nephrol. , (2015).</li>
<li>Knipper, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-4+Receptor+alpha+Signaling+in+Myeloid+Cells+Controls+Collagen+Fibril+Assembly+in+Skin+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Interleukin-4 Receptor alpha Signaling in Myeloid Cells Controls Collagen Fibril Assembly in Skin Repair.</a> Immunity. 43 (4), 803-816 (2015).</li>
<li>Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A murine model of urinary tract infection.</a> Nat Protoc. 4 (8), 1230-1243 (2009).</li>
<li>Wright, K. J., Seed, P. C., Hultgren, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+intracellular+bacterial+communities+of+uropathogenic+Escherichia+coli+depends+on+type+1+pili%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of intracellular bacterial communities of uropathogenic Escherichia coli depends on type 1 pili.</a> Cell Microbiol. 9 (9), 2230-2241 (2007).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

החדרה-transurethral של עכברים זכרים מציעה אפשרויות רבות מחקר חדש לתוך השפעתה של סקס על המחלה הרירית שלפוחית השתן, אלא גם מציג מספר אתגרים. בראש ובראשונה, מגבלה אחת היא כי החדרה בתחילה עשויה להיות קשה מבחינה טכנית, והתוצאה היא דלקת מופרזת במהלך הכניסה קטטר. שיפור הטכניקה יכולה להיות מושגת על ידי החדרה עכברים מתים עם פתרון צבעוניים, כגון צבע כחול אוונס. כדי לאשר ההתקנה הוא מוצלח, שלפוחיות צריך להיבדק באופן חזותי הנפח של נוזלים מושתל יכול להיות מוערך על ידי מיצוי עם מזרק טוברקולין. לא ניתן להפריז את החשיבות של תנועות עדינות...

דלקות בדרכי השתן (UTI) הם אחד הזיהומים הנפוצים ביותר במדינות המפותחות1. זיהום המחירים דומים בין נקבות וזכרים בין neonates את הקשישים2. נשים בגיל המעבר למבוגרים, אולם, יש שיעור מוגבר מאוד של UTI רכשה הקהילה לעומת גברים2,3. נתון כי מחלה זו משפיעה בעיקר על נשים, מחקר קליני מהותי באופן גורף התמקדה UTI אצל נקבות. אולם, UTI בגברים הוא אתגר הבריאות understudied ומשמעותית4. אכן, בגלל UTI אצל גברים משויכים תחלואה גבוהה יותר, זיהומים אלו באופן שגרתי מוגדרים מסובך4,5.
ההבנה שלנו על התפקיד המרכזי של סקס הטיות פיזיולוגיה, פתולוגיה מתפתח, שיטות חדשות נדרשים לבחון היבט שלא טופלו בעבר זה של המחלה. המיניים שלהם תפקיד חיוני חסינות, דלקת; נקבות יש שכיחות גבוהה יותר של מחלות אוטואימוניות, בעוד הזכרים רגישים יותר לזיהומים מסוימים, כגון שחפת, מלריה, איידס6,7. סרטן שלפוחית השתן, פתולוגיה אורולוגית אחר, הוא באופן משמעותי נפוץ יותר אצל גברים מאשר אצל נשים, מספר מחקרים הראו תפקיד עבור אנדרוגנים להתפתחות ממאירות8,9,10,11 ,12. ראוי לציין, עם זאת, החקירה של intravesical טיפולים בסרטן שלפוחית השתן מתבצע אך ורק בבעלי הנשי, בשל חוסר היכולת שוב ושוב catheterize עכברים זכר13.
המחקר של UTI פתוגנזה מסתמכת במידה רבה על מודלים מכרסם של זיהום (למשל, עכברים וחולדות). מודלים מאתר של UTI עשויה להשתמש uropathogens במקור מבודד מן האדם זיהומים, כגון uropathogenic e. coli (UPEC), קלבסיאלה, Enterococcus, Staphylococcusאו פרוטאוס14. בדרך כלל, חיידקים הם הציגו לתוך שלפוחית השתן באמצעות צנתור של השופכה. ניתן להסיר בעקבות זיהום, שלפוחיות והכליות להערכת פרמטרים ספציפיים של זיהום, כגון מושבת חיידקים, נזק לרקמות או מארח התגובה החיסונית15,16. אוניברסלי, עם זאת, רק נקבה בעלי חיים משמשים למחקר UTI. ואכן, מחקרים רבים ציינו כי, בגלל סיבות אנטומיות, צנתור של עכברים זכר אינו אפשרי13,17,18,19. לאחרונה, בגישה כירורגית החדרה זכר שתיארנו, אשר הבטן נפתח, שלפוחית השתן היא חיצונית שנעקרו על ידי הפעלת לחץ עדין על הפתח בבטן, חיידקים מוזרקים לתוך שלפוחית השתן20. גישה זו מאפשרת זיהום זכר, במחיר של התערבות כירורגית. לפיכך, אזהרה העיקריים של גישה זו כוללת את ההשפעה של דלקת, על התוצאה של זיהום הפוטנציאל לגרום אנטי דלקתיות ריפוי פצע מענה החתך21. האינטרסים שלנו לכלול הבנה הסקס נטאי בתגובה המחלה, פיתחנו שיטה של החדרה intravesical חיידקי בעכברים זכרים שתתאים בצורה טובה יותר ותיקה ניתוחי-transurethral לגישת בחולדות הנשי22 .
המודל שלנו מתבססת על מתודולוגיה הוקמה, מספק את היכולת להשוות ישירות התגובה החיסונית מארח UTI בבעלי חיים נשי. שיטה זו להתיר ניתוח המבוסס על סקס הבדלים זיהום, פוטנציאל להציע רמזים מולקולרית, תאית ההבדלים בולטת רגישות ותגובה לזיהום בין המינים. בנוסף, מודל זה יש ערך מעבר מחקרים UTI, המאפשר הקמת מודלים לחקור הקשורים לשלפוחית השתן מחלות אחרות, כגון סרטן שלפוחית השתן, prostatitis, תחת - או over - active שלפוחית השתן תסמונת דלקת שלפוחית השתן interstitial.

<table><tbody><tr><td>BD Insyte Autoguard Shielded IV צנתרים 24 גרם, קוטר חיצוני 0.7 מ"מ, אורך 14 מ"מ</td><td>BD Medical</td><td>381811 או 381411*</td><td>* מספר קטלוגי הוא לולאת חיסון תלויה במדינה</td></tr><tr><td></td><td>Greiner Bio-One</td><td>731171</td><td></td></tr><tr><td>LB Miller מרק</td><td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>LB Miller agar</td><td>Difco</td><td>244520</td><td></td></tr><tr><td>Cuvettes</td><td>Bio-rad</td><td>223-9955</td><td></td></tr><tr><td>מזרקים</td><td>B בראון</td><td>9166017V</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים אגודל (אדסון)</td><td>Fine Science</td><td>Tools 11006-12</td><td></td></tr><tr><td>צינורות 5 מ"ל, פוליפרופילן</td><td>פלקון</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>רקמות Ruptor בדיקות חד פעמיות</td><td>Qiagen</td><td>990890</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות כובע הפוך</td><td>Thermo Scientific</td><td>362694</td><td></td></tr><tr><td>DNAse</td>יש לצטט את <td>Invitrogen</td><td>18047019</td><td></td></tr><tr><td>Liberase TM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5401119001</td><td>ולאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות; C כדי למנוע הקפאה והפשרה חוזרת ונשנית</td></tr><tr><td>100 ומיקרו; מסננות חכמות M MACS&nbsp;</td><td>Miltenyi</td><td>130-098-463</td><td>תואם לשפופרות של 15 מ"ל, מועדף</td></tr><tr><td>100 ומיקרו; מסנני תאי M&nbsp;</td><td>Falcon</td><td>352360</td><td>תואם לצינורות של 50 מ"ל, אם מסננות חכמות של MACS אינן זמינות</td></tr><tr><td>צלחת 96 באר</td><td>Falcon</td><td>353077</td><td></td></tr><tr><td>Fc block</td><td>BD Pharmingen</td><td>553142</td><td>נוגדן CD16/CD32</td></tr><tr><td>נגד עכבר CD45 נוגדן</td><td>BD Biosciences</td><td>561487</td><td>אפשרויות צימוד פלואורסצנטיות רבות ושונות זמינות</td></tr><tr><td>צינורות 5 מ"ל פוליסטירן עם מכסה מסנן</td><td>פלקון</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין</td><td>352235 Terumo</td><td>BS05M2913</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר כף יד</td><td>Qiagen</td><td>9001272</td><td>TissueRuptor</td></tr><tr><td>זרימה ציטומטר</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>Fortessa SORP&nbsp;</td></tr><tr><td>תוכנת ציטומטריית זרימה</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>Diva</td></tr></tbody></table>

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-transurethral של זכר ונקבה עכברים

Urinary Tract Infection in a Small Animal Model: Transurethral Catheterization of Male and Female Mice

דלקות בדרכי השתן (UTI) הם מאוד נפוצים ברחבי העולם, גביית תחלואה משמעותית והוצאות בריאות הקשורות. מודלים בעלי חיים קטנים, אשר מתאר את הקמת המחלה והתקדמות, היתר דיסקציה של פתוגן-פונדקאי אינטראקציות, מהדור חסינות לזיהום. בעכברים, intravesical החדרה של uropathogenic e. coli, סוכן סיבתי של יותר מ 85% של הקהילה רכשה UTI, recapitulates בשלבים של זיהום נצפתה אצל בני אדם רבים. עד לאחרונה, עם זאת, UTI יכולה רק להיות המודל בבעלי חיים נשית. מגבלה זו יש הפריע חקר הבדלים הקשורים למין UTI, כמו גם אחרים פתולוגיות בשלפוחית השתן, כגון סרטן. כאן, אנו מתארים שיטה להשריש עכברים זכרים המאפשר השוואה ישירה בין בעלי חיים נשי ולספק פרוטוקול נתונים היסטוריים כדי להעריך רקמה בשלפוחית השתן על ידי cytometry זרימה כדי להבין טוב יותר את התגובות מארח זיהום. יחד, גישות אלה יסייעו בזיהוי גורמים מארח שתורמים הטיות סקס שנצפתה UTI ומחלות אחרות הקשורות שלפוחית השתן.

בפיתוח של פרוטוקול זה, גדודים של עכברים C57Bl/6 נשים וגברים בגילאי 6 עד 8 שבועות היו נטל מושתל, חיידקי מוערכים ב שלפוחיות בנקודות זמן החל 1שעות עד 30 ימים. התוצאות ממחקרים אלה מפורטים במקום אחר (Zychlinsky Scharff. et al., תלוי ועומד). כאן, אנו מציגים נתונים נציג מדלקות 24 שעות ביממה. ראוי לציין, חיידקי הנטל היה מקביל בין זכר ונקבה עכברים-24 שעות לאחר הפגיעה (איור 1). גרסא חדשה בחיידקיים נטל נצפתה בתוך כל קבוצה 24 שעות לאחר הפגיעה, הדומה מה שדווח ב עכברים נקבה<su...

הדגם הוקמה של צנתור-transurethral של עכברים מאפשרת לימוד פתולוגיות בשלפוחית השתן, כולל זיהום בדרכי השתן, אך ניתן לבצע רק אצל נקבות. מודל חדש של זכר החדרה-transurethral, המובאים כאן, יאפשר מחקר באזור המסומן חזקה קליניים ואפידמיולוגיים ההבדלים בין המינים.

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים

Urinary tract infections (UTI) are extremely common worldwide, incurring significant morbidity and healthcare-associated expenses. Small animal models, ...

המטרה הכוללת של גישה ניסויית זו היא לחקור את התגובה החיסונית לזיהום בדרכי השתן, ולמנוע השוואה ישירה בין בעלי חיים זכרים ונקבות. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח של אימונולוגיה רירית הקשורות לאופן שבו זכרים ונקבות מגיבים לדלקת בדרכי השתן. היתרון העיקרי הוא שהזיהום נוצר באמצעות השורש הטבעי.לראשונה עלה לנו הרעיון לשיטה זו לאחר שציינו באיזו תדירות נאמר, כי התקנת שלפוחית השתן של העכברים הזכרים אינה אפשרית. למרות ששיטה זו תספק תובנה לגבי זיהום בדרכי השתן, ניתן ליישם אותה גם במחקרי מחלות אחרים, כגון סרטן שלפוחית השתן. כדי להתחיל, הכינו צינורית גישה תוך-ורידית אחת לילדים לכל קבוצת עכברים שתידבק.באמצעות מנגנון הקפיץ המובנה, הסר כל צינורית מהמחט שלה לפי הוראות היצרן. השליכו את המחטים, ושמרו רק על הצינורית התוך-ורידית מפלסטיק. עקר את הצנתרים במכסה זרימה למינרי למשך מחזור UV אחד של כ-25 עד 30 דקות.לאחר תרבית לילה של אי קולי אורופתוגני, או UPEC, על פי פרוטוקול הטקסט, סובב את תרחיף החיידקים במיקרו-צנטריפוגה שולחנית ב-17,000 פעמים גרם למשך דקה אחת, והשהה מחדש את כדור החיידקים שנוצר ב-2 כפול 10 עד ה-CFU השמיני למיליליטר ב-PBS. יש לדלל באופן סדרתי כמות גדולה של תרחיף, ולפלוט על אגר LB עם אנטיביוטיקה במידת הצורך, כדי לקבוע את החיסון המדויק לכל זיהום. משוך את החיסון החיידקי למזרק של מיליליטר אחד, והצמד את הקטטר לקצה המזרק.הקש על המזרק כדי להוציא אוויר, ולחץ על הבוכנה כדי למלא את חלל האוויר המת בצנתר לפני תחילת ההחדרה. לאחר הרדמת עכברה על פי פרוטוקול מאושר, הניחו את החיה על הבטן, והפעילו לחץ בינוני על הבטן התחתונה כדי לרוקן את שלפוחית השתן משתן. שלפוחית השתן המלאה מרגישה כמו אפונה מתחת לעור, בין פסגות הכסל.כאשר שלפוחית השתן ריקה, בעזרת היד הלא דומיננטית, הניחו את האגודל על הזנב ואצבע של אותה היד על בטן העכבר, והפעילו לחץ עדין בכיוונים מנוגדים כדי להחזיק את העכבר בחוזקה במקומו. לאחר מכן, הנח את קצה הקטטר בניצב לעכבר בפתח השופכה, ולאחר מכן, בלחץ עדין, החלק את הקטטר לתוך השופכה עד שהרכזת פוגשת את פתח השופכה, ובמקביל הורד את המזרק כך שיהיה מקביל למשטח העבודה. לאחר שהקטטר נמצא במקומו, השתמש באצבע מהיד הלא דומיננטית המונחת על בטן העכבר כדי למשוך בעדינות רבה את עור הבטן לכיוון ראש העכבר.שימו לב שפתח השופכה לא יזוז. עם זאת, אם הצנתרים נמצאים בנרתיק, הרקמה תנוע למעלה והרחק מהקטטר. כאשר רכזת הקטטר כנגד פתח השופכה, יש להוציא לאט 15 מיקרוליטר של החיסון החיידקי.קצב התקנה איטי ממזער ריפלוקס שלפוחית השתן לכליה. הסר לאט את הקטטר כדי למנוע דליפה. לאחר מכן הניחו את החיה בכלוב שלה במצב שכיבה.כדי לחסן עכברים זכרים, הנח שני מלקחיים באגודל בצורה גולגולתית וזנבית לאיברי המין החיצוניים של העכברים. החזר את הקדם כדי לחשוף את איבר המין של הבלוטה במלואו. לאחר מכן, לאחר שהפין ממוקם חיצונית, שחרר את מלקחיים האגודל.מקם מחדש את המלקחיים כדי לייצב את הפין הבולט בניצב לבעל החיים, החזק את האיבר בעדינות אך מתוח. לאחר מכן דרך הפתח הקטן בקצה בשר השופכה, הכניסו בזהירות את הקטטר והובילו אותו בעדינות לתוך הפין באמצעות מלקחיים כדי לשמור בעדינות על מתח. ברגע שרכזת הצנתרים פוגשת את קצה הפין, יש להוציא לאט מאוד 50 מיקרוליטר מהחיסון, תוך שמירה על מיקום הפין.שימו לב לאיכות ההחדרה על פי ציון איכות החדרה שנקבע מראש, כמו זה שמוצג כאן. החזר את הקטטר לאט במשך חמש שניות כדי למנוע דליפה של החיסון. הנח את העכבר בכלוב שלו במצב שכיבה.בעל החיים אמור להתחיל להתאושש 30 עד 45 דקות לאחר מתן חומר ההרדמה. לאחר הקרבת עכברים על פי פרוטוקול מאושר, השתמש ב-70% אפינל כדי להרטיב את הבטן ביסודיות כדי למזער את הזיהום על ידי הפרווה. בעזרת מספריים, בצע חתך של שני סנטימטרים על פני השליש התחתון של בטן העכברים, והסר באופן אספטי את שלפוחית השתן וכל איבר רצוי אחר.העבירו את האיברים לתוך צינורות פוליפרופילן בנפח חמישה מיליליטר, המכילים מיליליטר אחד של PBS סטרילי ושמרו את כל הדגימות על קרח. בעזרת הומוגנייזר כף יד, הומוגניזציה של האיברים עד שכמעט ולא נותרה רקמה מוצקה. השליכו כל רקמת שומן מבריקה בצבע בז'-לבן שאינה הומוגנית היטב.לאחר מכן, השתמש ב-Epinal, ואחריו PBS כדי לשטוף את ההומוגנייזר בין כל קבוצת ניסוי או איברים. לאחר הכנת דילולים סדרתיים של תרחיף איברים הומוגניים, דילול צלחות על צלחות אגר LB, עם אנטיביוטיקה במידת הצורך, ודגירה ב-37 מעלות צלזיוס למשך הלילה. כדי לבצע ציטומטריית זרימה על רקמת שלפוחית השתן, לאחר בידוד שלפוחית השתן כפי שהודגם קודם לכן בסרטון זה, השתמש במספריים כדי לטחון היטב את הרקמה.הוסף שלפוחית טחון אחת לכל צינור המכיל מאגר עיכול. לאחר מכן יש לנער את הצינור כדי לשטוף את הרקמה הטחונה במאגר העיכול, ולשמור אותו על קרח עד שכל שלפוחית השתן מנותחת ונטחנת. דגרו על שלפוחית השתן הטחונה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, למשך 60 עד 75 דקות עם ניעור נמרץ ביד למשך חמש שניות, כל 15 דקות.כאשר לרקמה יש מראה שקוף זכוכית הדומה לנייר טישו רטוב, העיכול הושלם. השבת את אנזימי העיכול על ידי הוספת שניים עד שלושה מיליליטר של מאגר ציטומטריה בזרימה קרה כקרח, וערבב בעדינות. לאחר מכן הניחו את הצינורות על קרח.כדי להבטיח תרחיף של תא בודד, וכדי להסיר כל רקמת חיבור, העבירו את תכולת הצינור דרך מסנן של 100 מיקרומטר המונח בצינור חרוטי של 15 מיליליטר. לאחר מכן, עם קצה בוכנת מזרק, לחץ בעדינות על כל הרקמה שנותרה דרך המסנן. שטפו את המסנן עם שני מיליליטר נוספים של מאגר ציטומטריית זרימה, ושמרו את הדגימות על קרח.יש לשטוף את הדגימות בצנטריפוגה בטמפרטורה של 200 פעמים גרם וארבע מעלות צלזיוס, למשך שבע דקות. השעו מחדש את הכדורים ב-100 מיקרוליטר של מאגר ציטומטריית זרימה המכיל בלוק Fc, מדולל לחמישה מיקרוגרם למיליליטר, והעבירו לצלחת תחתונה עגולה של 96 באר. לאחר 10 עד 15 דקות מוסיפים 100 מיקרוליטר מקוקטייל הנוגדנים הרצוי לכל דגימה.לאחר מכן דגרו את הדגימות על קרח מוגן מאור למשך 30 עד 45 דקות. שוטפים את הדגימות על ידי צנטריפוגה בטמפרטורה של 200 פעמים גרם וארבע מעלות צלזיוס למשך שבע דקות. לבסוף, השעו מחדש את כדורי התא ב-200 מיקרוליטר של מאגר זרימה ציטומטרית, והעבירו את הדגימות דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר על צינור פוליסטירן של חמישה מיליליטר, ממש לפני הרכישה על ציטומטר זרימה.איור זה מציג נתונים מייצגים של עכברים שנדבקו במשך 24 שעות. עומס החיידקים היה שווה ערך בין עכברים זכרים ונקבות 24 שעות לאחר ההדבקה. כדי לקבוע אם אובדן החיסון בזמן ההדבקה השפיע על התבססות ההדבקה, כל הזרקה קיבלה ציון בסולם של 1 עד 5, כאשר אחד היה האופטימלי ביותר.קולוניזציה של חיידקים נקבעה 24 שעות לאחר ההדבקה. לא נמצאו הבדלים מובהקים סטטיסטית בין ה-CFU שהתקבלו מבעלי חיים עם ציוני החדרה שונים כפי שהוערכו על ידי מבחן Kruskal-Wallis לא פרמטרי, המשווה את הדירוג הממוצע של כל עמודה עם הדירוג הממוצע של כל עמודה אחרת, ותיקון השוואות מרובות באמצעות מבחן דאן. ניתן להסיק כי החדרות לא אופטימליות, וכתוצאה מכך דליפה משמעותית של חיסון חיידקי במהלך ההדבקה, אינן משפיעות באופן משמעותי על קולוניזציה של חיידקים לאחר 24 שעות.חשוב לציין, תדירות ההחדרה הלא אופטימלית תפחת עם התרגול. לבסוף, בעוד שמספר תאי החיסון החיוביים ל-CD45, הקיימים בבעלי חיים נאיביים, לא היה שונה בין עכברים נקבות לזכרים, הייתה עלייה מובהקת סטטיסטית בחדירה לשלפוחית השתן של עכברים נקבות נגועות. בזמן ניסיון צנתור, חשוב להשתמש בתנועות איטיות ועדינות.עם התפתחותה, הטכניקה הזו סייעה לנו לחקור הבדלים מבוססי מין בחסינות בשלפוחית השתן של חיות זכרים ונקבות.

urinary-tract-infection-small-animal-model-transurethral

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה ידגים שיטות להשראת זיהומים בדרכי השתן של עכברים בדרך התסתתית (transurethrally) ולכימות היקף הזיהומים שנוצרו.

אינדוקציה Transurethral של דלקת בדרכי השתן עכבר

מקור: Luyts, N., ואחרים. מעקב אורך של זיהומים בדרכי השתן וטיפול בהם בעכברים באמצעות הדמיית ביולומינצנציה. J. Vis. Exp. (2021).הסרטון הזה מדגים את ההשראה והמעקב אחר זיהום בדרכי השתן במודל עכבר באמצעות E. coli ביולומינסנציוני שהוזרק לשלפוחית השתן, שם מתרחשים הידבקות, פלישה ושכפול תוך-תאי של חיידקים. האור הנפלט מהאופרון הביולומינצנטי משמש כסמן בזמן אמת לעומס חיידקים במהלך התקדמות הזיהום.

המחשה של זיהום בדרכי השתן במודל עכבר באמצעות ביולומינסצנציה

מקור: קונובר, מ. ס. ואחרים, ג'. הקמה ואפיון של דלקות בדרכי השתן ו-CAUTI במודל עכבר. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים את ההליך להרכבה והשתלת קטטר טרנס-שופכה בעכבר, ולאחר מכן חיסון חיידקי כדי לקבוע זיהום בדרכי השתן הקשור לקטטר ולחקור אינטראקציות בין מארח לפתוגן המתווכת על ידי ביופילם.

זיהום בדרכי השתן הקשור לקטטר במודל עכבר

בסרטון זה, אנו מתארים את הטכניקה לניהול תוך שלפוחית של חיידקים אורופתוגניים כדי ליצור מודל זיהום בדרכי השתן בעכברים. מודל זה יכול לשמש להבנת התפשטות זיהום חיידקי אורופתוגני בתוך מערכת השתן ואת המנגנונים הקובעים רגישות לזיהומים בדרכי השתן.

מודל יצירת דלקת בדרכי השתן: טכניקה למתן חיידקים אורופתוגניים בעכבר לפיתוח מודל דלקת בדרכי השתן

סרטון זה מדגים את ביסוס זיהום Escherichia coli אורופתוגני בשלפוחית השתן של עכבר נקבה באמצעות החדרת קטטר טרנס-שופכתי. החיידקים המוזרקים מצליחים לבסס זיהום בדרכי השתן בתוך שלפוחית השתן, ומספקים פלטפורמה רבת ערך לחקר מחלות הקשורות לבריאות הקשורות לדרכי השתן.

צנתור דרך השופכה וחיסון חיידקי ליצירת מודל דלקת בדרכי השתן בעכברים זכרים

הקמת מודל של דלקת בדרכי השתן בעכברות

סרטון זה מדגים טכניקה להערכת הפעילות האנטי-סרטנית של חלבון מפעיל נויטרופילים הליקובקטר פילורי, או HP-NAP, במודל סרטן שלפוחית השתן של עכבר. HP-NAP מקיים אינטראקציה עם נויטרופילים של תאי גידול כדי לייצר ציטוקינים מעודדי דלקת, וגורם להתמיינות של תאי T נאיביים לפנוטיפים של תאי T מסוג 1 (Th1) וציטוטוקסיים מסוג 1 (Tc1). תאי Th1 ו-Tc1 מפרישים אינטרפרון-גמא, מעכבים אנגיוגנזה של הגידול ומקדמים הרס גידול בתיווך תאי T ציטוטוקסיים, תוך הפחתת נפח הגידול.

הערכת היעילות האנטי-סרטנית של חלבון אימונומודולטורי חיידקי במודל מורין

היכולת למדל דלקות בדרכי השתן (UTI) היא חיונית על מנת להיות מסוגל להבין פתוגנזה חיידקית ולהוליד פיתוח של טיפולים חדשים. מטרת עבודה זו היא להדגים מודלים עכבריים של UTI ניסיוני ודלקת בדרכי השתן הקשורה לצנתר המסכמים ומנבאים ממצאים שנראו בבני אדם.

ההקמה ואפיון של UTI וCAUTI במודל עכבר

החדרה-transurethral תהליך מאתגר, לא טוב תואר בספרות. מטרתו של כתב יד זה הוא לתיאור טכניקה עבור החדרת צנתר למסירה intravesical של נוזלים עם חומרים פעילים אל תוך שלפוחית השתן ו/או הערמונית בעכברים זכרים בוגרים של-transurethral.

הליך ההתקנה-transurethral עכבר זכר בוגר

מודל עכברי של חיסון אורופתוגני E. coli (UPEC) טרנס-urethral כדי ליצור מאגרי שלפוחית שתן תוך-תאיים סמויים וחשיפה שלפוחית השתן לאחר מכן ל - G. vaginalis כדי לגרום ל- UPEC UTI חוזר ונשנה מודגם. כמו כן הודגמו ספירה של חיידקים, ציטולוגיה של שתן, וקיבוע ועיבוד שלפוחית השתן באתרם לסריקת מיקרוסקופיית אלקטרונים.

זיהום חוזר בדרכי השתן של Escherichia coli שנגרם על ידי גרדנרלה וגינליס חשיפה לשלפוחית השתן בעכברים

כתב יד זה מתאר את הניהול התוך-עבזי של חיידקים אורופתיוגניים עם לוקס אופרון כדי לגרום לדלקת בדרכי השתן בעכברים ואת אורך האורך שלאחר מכן בניתוח vivo של העומס החיידקי באמצעות הדמיית ביו-לומינציה.

מעקב אורך של דלקות בדרכי השתן והטיפול שלהם בעכברים באמצעות הדמיית ביו-לומינציה

למדו שיטת צנתור טרנסאורתרלי לזכרי עכברים לחקר זיהומי דרכי השתן והשוואת תגובות חיסוניות בין זכרים לנקבות. שיטה זו מאפשרת מחקר מדויק של פתולוגיות שלפוחית השתן.

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים

גלה סרטונים נוספים