Name: פגיעת גיד מכופף Murine וכירורגיה תיקון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: למדו את תהליך הריפוי של גידים מכופפים בעכברים באמצעות ניתוח תיקון מדויק. שיטה זו מאפשרת לחקור את התרומה התאית ליצירת צלקות ולזהות מטרות ביולוגיות לשיפור תוצאות הריפוי בטיפול בפגיעות יד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי האגודה האמריקאית לכירורגיה של פרס פיילוט יד ו- NIH / NIAMS 1K01AR068386-01 (כדי AEL) ו NIAMS / NIH P30AR061307.

<html> ועדת אוניברסיטת על בעלי חיים למחקר באוניברסיטת רוצ&#39;סטר אישר את כל הניסויים בבעלי חיים. עשרה-12 בשבוע C57BL נקבה בת / 6J שמש. 1. הכנת בעלי חיים לכירורגיה גיד מכופף (~ 15 דקות) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירי ניתוח חיטוי לעקר, ללבוש כפפות סטריליות במהלך, ולשמור על שדה הפעלה סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר באמצעות זריקה intraperitoneal (IP) עם נפח של קטמין (80 מ&quot;ג / ק&quot;ג) ו xylazine (10 מ&quot;ג / ק&quot;ג) המתאים למשקל הגוף. אשר עומק הרגעה באמצעות העדר רפלקס הבוהן קמצוץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נהל שיכוך כאבים מנע (עצירות, 0.05-0.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג) באמצעות זריקה תת עורית. החל משחת עיניים כדי למנוע את העיניים מהתייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכין את האתר כירורגית על ידי גזירה את הפרווה על הגפיים האחוריים כולו. לעקר את העור על ידי שפשוף ברצף עם יוד povidone, ואחריו אתנול 70%, ושוב עם יוד povidone. </li></ol>ילדה = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. Murine מכופף פגיעה גיד וכירורגיה תיקון (~ 10 דקות) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצא את longus digitorum המכופף (FDL) הגיד, ראה שטחי בהיבט המדיאלי של העגל. באמצעות אזמל, לעשות חתך 0.5-1 ס&quot;מ קטן בעור עם מספריים מיקרו לחשוף את הגיד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש במלקחיים כדי להפריד את גיד FDL מן הרקמה שמסביב ואת עקבות אותו עד לצומת myotendinous. חותך את הגיד בצומת זה במספריים באביב כדי לשחרר אותו, מקפיד להימנע עורק הטיביאלי האחורי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את העור עם 5-0 תפרי ניילון. הערה: חיתוך רוחב ותיקון FDL (שלבים 2.4) צריך להתבצע באמצעות סטראו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצוע חתך 3 מ&quot;מ מעל היבט posterolateral של הכף האחורית באמצעות באביב-מספרי מייקרו. בעדינות לחזור בו רקמות שריר הרכות שמסביב עם מלקחיים, והקפד למזער נזק לרקמות, ולזהות את גיד FDL. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להעלות את גיד FDL והוא לחלוטין transect אותו באמצעות מיילהקרו-מספריים. לתפור את הקצוות של FDL יחד גיד בדפוס קסלר שונה עם 8-0 תפרים, הימנעות ייבוש של גיד באמצעות הרטבתה עם מי מלח מעת לעת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלף רקמות שריר רכים מעל הגיד, ואז לסגור את החתך עם 5-0 תפרי ניילון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עכברים בשקופית סט חם עד 37 מעלות צלזיוס, כדי לשמור על טמפרטורת הגוף עד התאושש מן ההרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צג עכברים שלאחר ניתוח עבור סימנים לירידת ערך או זיהום כוללים בדיבור מוגבר ופרווה פרועה. להזריק עצירות (50 μl / עכבר) כמו משכך כאבים כל 12 שעות עד העכברים כבר לא מראים סימנים של כאב או מצוקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר עכברים לרפא לתקופה של 10 ימים שלאחר ניתוח לפני שתמשיך אל השלבים הבאים. הערה: תאים ניתן לקצור בכל עת נקודות שלאחר ניתוח. הנה, 10 ימים הם נבחרו ניסויי נציגים אלה בהתחשב cellularity הגבוהה יחסית של הרקמה בשלב זה. </li></ol> 3. Labeling של תאי רכיבה על אופניים (~ 10 דקות) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן EDU (5-ethynyl-2&#39;deoxyuridine) פתרון (10 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​ב בופר פוספט סטרילי [PBS] + 1% דימתיל sulfoxide [DMSO] להגדיל מסיסות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק עכברים עם 100 μl EDU (50 מ&quot;ג / ק&quot;ג) באמצעות הזרקה IP 24 שעות לפני להקריב. </li></ol> 4. קציר תאים ציטולוגיה צנטריפוגה (2.5 שעות, ~ 30 hands-on דקות זמן) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 3 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​collagenase אני PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים העכבר באמצעות מחנק פחמן דו חמצני בקצב זרימה של לא יותר מ -3 ליטר / דקה, ולבצע נקע בצוואר הרחם כאמצעי משני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר את הגיד לתקן אותה בעזרת צעד 2.4 לעיל, ולבודד רקמת גיד ידי קיצוץ של כ 2 מ&quot;מ משני צדי במקום פציעה עם מספרי מייקרו. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמת בשר טחון עם אזמל בצלחת פטרי עם 1 מ&quot;ל של 3 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​collagenase, ולאחר מכן להעביר התערובת דרך מחט G 18 מספר פעמים כדי לשבור את הרקמה. אסוף התערובת לתוך צינור 1.5 מ&quot;ל צנטריפוגות. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקציר רקמת גיד במשך שעה 1 ב 37 מעלות צלזיוס עם רעד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין רקמות למטה (300 XG במשך 5 דקות), collagenase לשאוב, ואז התאים resuspend / רקמות עם 500 μl 3% אלבומין בסרום שור (BSA) ב- PBS על ידי pipetting מעלה ומטה מספר פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תא ההשעיה סינון דרך מסננת תא 70 מיקרומטר להסיר פסולת חתיכות גדולות של גיד, ומניחים בצד בתוך 37 ° C חממה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים רקמות גיד לתוך צינור צנטריפוגות 1.5 מ&quot;ל אחר, ולרענן עם פתרון collagenase 1 מ&quot;ל, pipetting מעלה ומטה כדי לערבב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה רקמת עוד שעה על 37 מעלות צלזיוס עם רעד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין למטה רקמת גיד מתעכל (300 XG במשך 5 דקות), resuspend אז BSA 500 μl 3% ב PBS על ידי pipetting מעלה ומטה מספר פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן השעית תא דרך מסננת תא 70 מיקרומטר, לשלב עם ההשעיה מבודדת 4.3.3, ואז לספור תאים עם hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו תאים פעם נוספת עם 3% BSA ב PBS, ואז resuspend 3-6x 10 4/100 μl. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף משפך ציטולוגיה לשקופית בעלי מטען חשמלי חיובי וכלא לתוך המוביל שקופית. הכנס את המנגנון כולו לתוך צנטריפוגות ציטולוגיה ולהוסיף 100 השעית תא μl אל המשפך. צנטריפוגה XG ב 300 במשך 5 דקות כדי לפזר את התאים על לשקופית. </li></ol> 5. Immunocytochemistry כדי זיהוי edu (2 hr, ~ 45 hands-on דקות זמן) הערה: כל שלבי הדגירה צריכות להתבצע בחושך להגביל photobleaching של fluorophores. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים מעגל עם עט מחסום הידרופובי למזער הפתרון הנדרש עבור השלבים הבאים, ולאחר מכן מיד לתקן עם 150 μl paraformaldehyde 3% ב 15 דקות PBS בטמפרטורת החדר (RT). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו פעמיים במשך 5 דקות עם BSA 150 μl 3% ב PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Permeabilize עם 0.5% Triton-X 100 ב 20 דקות PBS ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב לשטוף חזור כמו 5.1.1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן cockt תגובת eduail בהתאם להוראות ערכה לא יותר מ -30 דקות לפני השימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 150 μl קוקטייל כל שקופית, דגירה 30 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלב לשטוף חזור כמו 5.1.1. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה עם 150 μl גרעיני counterstain Hoechst33342 בדילול 1: 2,000 ב 30 דקות PBS ב RT. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו פעמיים במשך 5 דקות עם 150 μl 1x PBS. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 1-2 טיפות לדעוך אנטי הרכבה בינונית לתאים, ואז coverslip התחתון לאט כדי למנוע בועות. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר הרכבה בינונית לרפא לילה בחושך ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ברור לק כדי לאטום את coverslip לשקופית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שקופיות תמונה בהגדלה 40X באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד מסנני עירור / פליטה של ​​מסוגלים גילוי DAPI (Hoeschst33342), וטקסס אדומה (אלקסה פלואוריד 594). </li></ol>

<ol><li>Lin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanics+of+tendon+inury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Biomechanics of tendon inury and repair.</a> J Biomech. 37, 865-877 (2004).</li>
<li>Strickland, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+flexor+tendon+surgery%3A+twenty-five+years+of+progress%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+%5BAm%5D%22%5BJournal%5D)">Development of flexor tendon surgery: twenty-five years of progress.</a> J Hand Surg [Am]. 25, 214-235 (2000).</li>
<li>Bunnell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+tendons+in+the+fingers+and+description+of+two+new+instruments%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Gynecol+Obstet%22%5BJournal%5D)">Repair of tendons in the fingers and description of two new instruments.</a> Surg Gynecol Obstet. 26, 103-110 (1918).</li>
<li>Aydin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-stage+flexor+tendoplasty+in+the+treatment+of+flexor+tendon+injuries%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Orthop+Traumatol+Turc%22%5BJournal%5D)">Single-stage flexor tendoplasty in the treatment of flexor tendon injuries.</a> Acta Orthop Traumatol Turc. 38, 54-59 (2004).</li>
<li>Gelberman, R. H., Steinberg, D., Amiel, D., Akeson, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+chemotaxis+after+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Fibroblast chemotaxis after tendon repair.</a> J Hand Surg Am. 16, 686-693 (1991).</li>
<li>Lundborg, G., Rank, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+intrinsic+healing+of+flexor+tendons+based+upon+synovial+fluid+nutrition%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Experimental intrinsic healing of flexor tendons based upon synovial fluid nutrition.</a> J Hand Surg Am. 3, 21-31 (1978).</li>
<li>Aoki, M., Kubota, H., Pruitt, D. L., Manske, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+and+histologic+characteristics+of+canine+flexor+tendon+repair+using+early+postoperative+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Biomechanical and histologic characteristics of canine flexor tendon repair using early postoperative mobilization.</a> J Hand Surg Am. 22, 107-114 (1997).</li>
<li>Kim, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+and+biological+modifications+for+enhanced+flexor+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hand+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">Technical and biological modifications for enhanced flexor tendon repair.</a> J Hand Surg Am. 35, 1031-1037 (2010).</li>
<li>Aoki, M., Manske, P. R., Pruitt, D. L., Kubota, H., Larson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Work+of+flexion+after+flexor+tendon+repair+according+to+the+placement+of+sutures%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop+Relat+Res%22%5BJournal%5D)">Work of flexion after flexor tendon repair according to the placement of sutures.</a> Clin Orthop Relat Res. , 205-210 (1995).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Award+for+Outstanding+Orthopaedic+Research%3A+Engineering+flexor+tendon+repair+with+lubricant%2C+cells%2C+and+cytokines+in+a+canine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Orthop+Relat+Res%22%5BJournal%5D)">Award for Outstanding Orthopaedic Research: Engineering flexor tendon repair with lubricant, cells, and cytokines in a canine model.</a> Clin Orthop Relat Res. 472, 2569-2578 (2014).</li>
<li>Wong, J., Bennett, W., Ferguson, M. W., McGrouther, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+and+histological+examination+of+the+mouse+hindpaw+digit+and+flexor+tendon+arrangement+with+3D+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Microscopic and histological examination of the mouse hindpaw digit and flexor tendon arrangement with 3D reconstruction.</a> J Anat. 209, 533-545 (2006).</li>
<li>Katzel, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Smad3+loss+of+function+on+scarring+and+adhesion+formation+during+tendon+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Orthop.+Res%22%5BJournal%5D)">Impact of Smad3 loss of function on scarring and adhesion formation during tendon healing.</a> J. Orthop. Res. 29, 684-693 (2011).</li>
<li>Loiselle, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow-derived+matrix+metalloproteinase-9+is+associated+with+fibrous+adhesion+formation+after+murine+flexor+tendon+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Bone marrow-derived matrix metalloproteinase-9 is associated with fibrous adhesion formation after murine flexor tendon injury.</a> PloS one. 7, e40602(2012).</li>
<li>Lee, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+1-34+enhances+extracellular+matrix+deposition+and+organization+during+flexor+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone 1-34 enhances extracellular matrix deposition and organization during flexor tendon repair.</a> J Orthop Res. 33, 17-24 (2015).</li>
<li>Geary, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+EP4+Inhibition+Increases+Adhesion+Formation+in+a+Murine+Model+of+Flexor+Tendon+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Systemic EP4 Inhibition Increases Adhesion Formation in a Murine Model of Flexor Tendon Repair.</a> PloS one. 10, e0136351(2015).</li>
<li>Loiselle, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+antisense+oligonucleotide+%28ASO%29+technology+against+Tgf-beta+signaling+to+prevent+scarring+during+flexor+tendon+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Development of antisense oligonucleotide (ASO) technology against Tgf-beta signaling to prevent scarring during flexor tendon repair.</a> J Orthop Res. 33, 859-866 (2015).</li>
<li>Orner, C. A., Geary, M. B., Hammert, W. C., O'Keefe, R. J., Loiselle, A. E. Low-dose and short-duration Matrix Metalloproteinase 9 Inhibition does not affect adhesion formation during murine flexor tendon healing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOrner%2C+CA+%22Plast+Reconstr+Surg%22">Plast Reconstr Surg</a>. , (2016).</li>
<li>Loiselle, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+of+murine+intrasynovial+tendon+adhesions+following+injury%3A+MMP+and+neotendon+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Remodeling of murine intrasynovial tendon adhesions following injury: MMP and neotendon gene expression.</a> J Orthop Res. 27, 833-840 (2009).</li>
<li>Tsubone, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+TGF-beta+inducible+early+gene+deficiency+on+flexor+tendon+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of TGF-beta inducible early gene deficiency on flexor tendon healing.</a> J Orthop Res. 24, 569-575 (2006).</li>
<li>Beason, D. P., Kuntz, A. F., Hsu, J. E., Miller, K. S., Soslowsky, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+multiple+tendon+injury+models+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of multiple tendon injury models in the mouse.</a> J Biomech. 45, 1550-1553 (2012).</li>
<li>David, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tendon+repair+is+compromised+in+a+high+fat+diet-induced+mouse+model+of+obesity+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Tendon repair is compromised in a high fat diet-induced mouse model of obesity and type 2 diabetes.</a> PloS one. 9, e91234(2014).</li>
<li>Wong, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cellular+biology+of+flexor+tendon+adhesion+formation%3A+an+old+problem+in+a+new+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The cellular biology of flexor tendon adhesion formation: an old problem in a new paradigm.</a> Am J Pathol. 175, 1938-1951 (2009).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים

הליך כירורגי עבור מודל Murine של חיתוך רוחב מלא ותיקון של גיד longus digitorum מכופף מוצג במחקר זה. בנוסף יישום רומן לרכז אוכלוסיות תאים קטנות עם צנטריפוגות ציטולוגיה מודגם, המאפשר ניתוח immunocytochemical כמוני של הסביבה הסלולר במהלך ריפוי גיד מכופף. מודל זה של תיקון גיד מכופף מדגים תגובת הריפוי לשחזור, אשר ניתן להשתמש בהם כדי להעריך שינויים בתהליך הריפוי באמצעות מודלים בנוקאאוט או עם התערבות פרמקולוגית. לאחר הניתוח, תגובה דלקתית מתחיל תוך 24 שעות, שבמהלכו התאים מגויסים לאתר הפגי...

גידים מכופפים בעבודת היד בתיאום עם השרירים המכופפים של אמת נדנים דיגיטליים כדי לאפשר כיפוף של הספרות ותפקוד אחיזה של היד. גידים מכופפים לרוץ לאורך היבט Palmar של היד; יחסית שטחית במיקום זה לעתים קרובות תוצאות פציעות בגידים המכופפים במהלך טראומה אל היד. גידים לרפא באמצעות תגובת צלקת רקמות ולא התחדשות של גיד נורמלי רקמות 1. בעוד רקמת צלקת זה מספקת המשכיות לגיד, פונקציה דרמטית פחת יחסית גיד בריא. מרוכבים רקמת גיד-צלקת מאופיינים תכונות מכניות לקוי 1, טיוח הגידים לתיקון סביר יותר להתפקע. בנוסף, רקמת צלקת חסרה את הארגון של מבנה סיבי קולגן גיד הילידים, וכתוצאה מכך לעלייה בגודל גיד וצובר. בהתחשב במגבלות האנטומי של יחידת-נדן הגיד, אפילו עלייה מתונה גודל גיד יכול דרסטי אדוםתחיקת פונקצית הגלישה של הגיד, ולכן טווח ספרה של תנועה ותפקוד יד. לפני של פציעות 1960 עד הגידים המכופפים, בעיקר אלו המופיעות Zone II של היד, לא תוקנו באופן שיגרתי עקב הסיבוכים החמורים בריפוי שהתעוררו עם תיקונים אלה 2. אזור זה של היד כונה &quot;שטח הפקר&quot; 3. עם זאת, שיפורים בטכניקות הכירורגיות, דפוסי תפר ופרוטוקולים שיקום פיזיותרפיה השתפרו באופן דרמטי התוצאות של תיקונים גיד מכופף 2. למרות ההתפתחויות הללו, עד 40% של תיקונים לגרום להיווצרות הדבקה מספיק כדי לעכב ביד פונקציה 4. לכן, גישה ביולוגית נדרשה לשפר את הריפוי. למרבה הצער, מעט מאוד ידוע על תהליך ריפוי הגיד ברמה התאית ומולקולרית. לכן, המטרה הייתה לפתח מודל בעכברים שיכולים לשמש כדי לשפר את מבין מה היסודגרם של רכיבים התאיים ומולקולריים של ריפוי גיד מכופף ותגובת היווצרות הצלקת, כאמצעי לזיהוי מטרות טיפוליות חדשניות כדי לשפר את הריפוי. גדולים יותר במודלים של בעלי חיים כבר סייעו לקדם הבנה של תהליך ריפוי הגיד המכופף. מחקרים בכלבי ארנב הוכיחו הוא את יכולת הריפוי הפנימית וחיצונית של גידים מכופפים 5,6, את החשיבות של תנועה פסיבית מבוקרת מוקדם מזעור ביחס היווצרות הידבקות לחוסר מעש 7, כמו גם את ההשפעות של דפוסי תפר שונים על תהליך הריפוי 8 , 9. בנוסף, מודל הכלבים כבר שימושי בבדיקת גישות רקמות הנדסת translational כדי לשפר את הריפוי 10. עם זאת, ישנם מספר יתרונות חשובים באמצעות קרוב משפחה במודל Murine מודל חיה גדולה, כולל בעלות היחסית, זמינות של ריאגנטים ספציפיים בעכברים, ואת הקלות של יצירת knoc העולמיk-outs או בונת מחיקה / ביטוי יתר רקמות ספציפיות. יתר על כן, את הדמיון התפקודי בין אדם ועכברים ביחס גידים מכופפים 11 מצביע על התועלת הפוטנציאלית בפיתוח מודל בעכברים. פיתוח של מודל Murine של מחקת תיקון חיתוך רוחב ו גיד מכופף היבטים רבים של ריפוי קליני, כוללים ההיווצרות של רקמת צלקתית שופעת תכונות מכאניות לקויות. המודל המתואר כאן אינו ששחזור אמיתי של פרקטיקה קלינית עקב חיתוך רוחב של FDL בצומת myotendinous כדי להגן על האתר לתקן. יתר על כן, מודל זה אינו לוקח בחשבון את התרומה של תאי נדן סינוביאלי לתגובת הריפוי, כפי שאין נדן סינוביאלי כיסוי החלק באמצע של הגיד שבו התיקון מתרחש. למרות מגבלות אלה, מודל זה יש את היתרון של מגוון המניב של הידבקויות הגבלת תנועה, אשר טרם הוכיח במודלי Murine שיותר קלואיליי להיות קרובים ככל האפשר תרחיש הקליני. מודל זה נעשה שימוש כדי להעריך מודלים עכבר נוק-אאוט 12,13, וכדי לבחון גישות פרמקולוגיות שונות כדי לשפר את הריפוי 14-17. היסטולוגית מנתח של מודל זה, באמצעות אימונוהיסטוכימיה ו הכלאה באתרו, יכול לספק תובנות חשובות ל לוקליזציה של גנים מפתח וחלבונים במהלך הריפוי. עם זאת, היסטולוגיה מספק רק ניתוח מרחבי חתך ואינו מאפשר כימות ברחבי הרקמה כולה. Cytometry זרימה מייצגת גישה כמותית יותר, אך רק מספר מצומצם מאוד של תאים יכול להיות מבודד רקמת גיד ריפוי במודל העכבר, ומספר זה ירד עוד יותר במהלך שלבי קיבעון, permeabilization, ואת כביסה. אם תיקח את זה לחשבון, cytometry זרימה הופך גישה ישימה בשל מספר בעלי החיים אשר יידרש. שיטה חלופית יש צורך לשמר את רוב האוכלוסייה תא קטן זה כדיעוד לאפיין את סביבת הריפוי. השיטה המשמשת להשגת יעד זה, המוצג כאן, כרוך ריכוז של תאים בודדים באמצעות צנטריפוגה ציטולוגיה לשקופית זכוכית, ואחריו immunocytochemistry. במחקר הנוכחי EDU (5-ethynyl-2&#39;deoxyuridine, אנלוגי thymidine) התאגדות התיוג הבא שמשה כדי לקבוע את מצב השגשוג היחסי של תאים באתר הריפוי. גישה זו ניתן ליישם על מנת לבחון את היעילות של טיפול תרופתי על התפשטות תאים, גני נוק-אאוט או ביטוי יתר, או לזהות ולכמת אוכלוסיות תאים שונות.

<table><tbody><tr><td><תכשיר כירורגי חזק></חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J עכברים&nbsp;</td><td>מעבדות ג'קסון</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>קטמין</td><td>הוספירה</td><td>NDC# 0409-2051-05</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>לויד בע"מ</td><td>NDC# 61311-482-10</td><td></td></tr><tr><td>בופרנורפין</td><td>פאר פרמצבטיקה בע"מ</td><td>NDC# 42023-179-10</td><td></td></tr><tr><td>0.9% נתרן כלורי השקיה</td><td>Hospira</td><td>NDC# 0409-6138-03</td><td>להכנת תמיסות קטמין/קסילזין ובופרנורפין</td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>30 גרם מחט</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת פובידון-יוד</td><td>Aplicare</td><td>82-226</td><td></td></tr><tr><td>70% אתנול</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>משחה אופטית וטרינרית Puralube</td><td>Dechra מוצרים וטרינריים</td><td>NDC# 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>שם</td><td>חברה</td><td>מספר קטלוגי</td><td>תגובות</td></tr><tr><td>כלים כירורגיים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portable איזון 200 גרם</td><td>Ohaus</td><td>SP202</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיציים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15124-12</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>11251-30</td><td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחטים</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>91201-13</td><td></td></tr><tr><td>מספריים קפיצים מיקרו</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>מחזיקי מחטים מיקרו</td><td>כלי מדע עדינים</td><td>12061-02</td><td></td></tr><tr><td>5-0 תפרי ניילון</td><td>Ethicon</td><td>668G</td><td></td></tr><tr><td>8-0 מיקרו-כירורגיה תפרי ניילון</td><td>Ethicon</td><td>2808G</td><td></td></tr><tr><td>Lab-Line היסטולוגיה מחמם שקופיות</td><td>Barnstead International</td><td>26025</td><td></td></tr><tr><td>שם<</td><td>strong>חברה</td><td>מספר קטלוגי</td><td>Comments</td></tr><tr><td><שיטת >strongCytospin</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type I, ליופיליזציה</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>1700-017</td><td></td></tr><tr>טכנולוגיות <td>איתות תאי</td><td>אלבומין בסרום בקר</td><td>9998S</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Thermo Fisher</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>משפכי ציטולוגיה</td><td>Fisher HealthCare</td><td>10-354</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ HistoBond+</td><td>VWR</td><td>16005-110</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה ציטוספין 2</td><td>שנדון</td><td>SH-CYTO2</td><td></td></tr><tr><td>name</td><td>Company</td><td>Catalog Number</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Immunocytochemistry</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Slide מגש צביעה עם מכסה שחור</td><td>IHC World</td><td>M920-2</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT Plus EdU Imaging Kit</td><td>Life Technologies&nbsp;</td><td>C10639</td><td>כולל EdU ו-&nbsp; Hoeschst 33342</td></tr><tr><td>Immedge עט מחסום הידרופובי</td><td>מעבדות וקטור</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>ProLong יהלום הרכבה בינונית</td><td>תרמו פישר</td><td>P36970</td><td></td></tr><tr><td>כיסויי זכוכית 24 x 50 מ"מ #1.5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>לק</td><td></td><td></td><td></td> שקוף</tr></tbody></table>

פגיעת גיד מכופף murine וכירורגיה תיקון

Murine Flexor Tendon Injury and Repair Surgery

גיד מתחבר שרירים ועצמות השלד, הקלת התנועה של כמעט את כל הגוף. ביד, גידים מכופפים (FTS) לאפשר כיפוף האצבעות ותפקוד יד בכלל. פציעות FTS נפוצות, וריפוי משביע רצון לעתים קרובות נפגע בשל רקמת צלקתית עודפי הידבקויות בין גיד הרקמה שמסביב. עם זאת, מעט מאוד ידוע על הרכיבים המולקולריים התאיים של תיקון FT. לשם כך, מודל Murine של תיקון FT כי משחזר היבטים רבים של ריפוי בבני אדם, כולל מגוון לקוי של תנועה וירידה תכונות מכניות, פותחה שתואר לעיל. הנה הדגמה מעמיקה של הליך כירורגים זה מסופקת, מעורב חיתוך רוחב והתיקון הבא של longus digitorum המכופף (FDL) גיד הכף האחורית בעכברים. טכניקה זו יכולה לשמש כדי לבצע ניתוח שושלת של תאים מסוגים שונים, להעריך את ההשפעות של רווח גן או פסד של פונקציה, וכדי לבדוק את האפיםcacy של התערבויות תרופתיות בתהליך הריפוי. עם זאת, ישנן שתי מגבלות עיקריות מודל זה: i) גיד FDL באמצע החלק של הכף האחורית בעכברים, שבו חיתוך הרוחב והתיקון להתרחש, אינו מוקף נדן סינוביאלי. לכן מודל זה אינו לוקח בחשבון את התרומה הפוטנציאלית של הנדן לתהליך היווצרות צלקת. ii) כדי להגן על היושרה של אתר התיקון, FT הוא שוחרר בצומת myotendinous, ומקטין את הכוחות המכאניים של הגיד, תורם סביר היווצרות צלקת מוגברת. בידוד של תאים מספיק מן הרקמה פרור של FT במהלך תהליך הריפוי עבור ניתוח תזרים cytometric הוכיח מאתגר; צנטריפוגה ציטולוגיה להתרכז תאים אלה היא שיטה חלופית בשימוש, ומאפשר הדור של ההכנות התא שעליו תיוג immunofluorescent יכול להתבצע. באמצעות שיטה זו, כימות של תאים או חלבונים בעלי עניין במהלך ריפוי FT הופכת אפשרית.

Longus digitorum מכופף השרירים (FDL), הממוקמים העגל, פועל כדי להגמיש את הספרות של הכף האחורית עכבר באמצעות הגיד המכופף (התווה בכחול באיור 1A, והראה היסטולוגית באיור 2 א), אשר פועלת proximally מן myotendinous צומת של דבר הוא מגיע הפלנגות דיסטלי. במודל זה של ריפוי גיד מכופף, גיד FDL הוא transected ותקן על אמצע הרגל, בקרבה ההסתעפות אל הספרות של הכפה האחורית (חצים אדומים, איור 1 א). כדי למנוע קרע של הת...

גידים מכופפים ביד נפצעים נפוץ, מה שמוביל פונקצית יד לקויה. עם זאת, תגובת ריפוי צלקת הרקמות אינה מאופיינת היטב. מודל Murine של ריפוי גיד מכופף מודגם כאן. מודל זה יכול לשפר את ההבנה הכוללת של תהליך הריפוי ולהעריך גישות טיפוליות כדי לשפר את הריפוי.

פגיעת גיד מכופף Murine וכירורגיה תיקון

Tendon connects skeletal muscle and bone, facilitating movement of nearly the entire body. In the hand, flexor tendons (FTs) enable flexion of the fingers ...

המטרה הכוללת של הליך כירורגי זה היא לשפר את ההבנה של התהליכים התאיים והמולקולריים של היווצרות צלקות והדבקות במהלך ריפוי גיד הכופף. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח לגבי תהליך ריפוי גיד הכופף, כגון אילו סוגי תאים תורמים להיווצרות צלקות ולתיקון. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן להשתמש בעכברים טרנסגניים וב[]> (knock out) כדי להבין טוב יותר את תהליך הריפוי.טכניקה זו עשויה לזהות יעדים ביולוגיים פוטנציאליים לשיפור תוצאות ההחלמה של גיד הכופף, שכן היא מאפשרת את חקירת אוכלוסיות התאים המוגדרות באופן דל אלו התורמות להיווצרות צלקות. לאחר וידוא של היעדר תגובה לצביטה באצבע, מרחו פומדת עינית לעיני בעלי החיים, וגזרו את הפרווה מכל הגפה האחורית. סטריליזו את אזור הניתוח באמצעות קרצוף רציף של פובידון יוד ו-70% ethanol, ואתרו את ה-flexor digitorum longus, או את גיד ה-FDL, בחלק המדיאלי של התאש.בשלב הבא, בצעו חתך של 0.5 עד 1 סנטימטר בעור כדי לחשוף את הגיד. השתמשו בפינצטה כדי להפריד את גיד ה-FDL מהרקמה הסובבת ועקבו אחר הגיד עד לחיבור המיאו-גידי (miotendinous junction). באמצעות מספרי קפיץ, שחררו את הגיד בחיבור, תוך הקפדה להימנע מפגיעה בעורק השוק האחורי (posterior tibial artery).לאחר מכן, סגרו את העור באמצעות תפרי nylon 5-0. כעת העבירו את העכבר תחת מיקרוסקופ סטריאו והשתמשו במיקרו-מספריים בעלי

murine-flexor-tendon-injury-and-repair-surgery

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מקור: Dalkin, W., et al. שיטת הפגיעה בעצב הסיבי: בדיקה אמינה לזיהוי ובדיקת גורמים המתקנים צמתים עצביים-שריריים. J. Vis. Exp. (2016)סרטון זה מדגים הליך כירורגי לגרימת פגיעה עצבית סיבית בעכבר כדי לחקור התחדשות של צומת עצבי-שרירי (NMJ). ההליך כולל חשיפת העצב הסיבי, הפעלת לחץ מבוקר כדי לגרום לפציעה, והבטחת האפינוריום נשאר שלם כדי לתמוך בהתחדשות אקסונלית. עם הזמן, מקרופאגים מפנים פסולת אקסונלית, מה שמקל על תיקון עצבים והקמה מחדש של NMJs.

גרימת פגיעה עצבית סיבית בעכבר כדי לחקור התחדשות צומת עצבי-שרירי

פרוטוקול זה מתאר מודל העכבר של כירורגיה אורתופדית, שבו נעשה שימוש כדי לחקור מנגנונים של neuroinflammation לאחר הניתוח, שינויים התנהגותיים, וכאשר בשילוב עם parabiosis, ללמוד התחדשות רקמות במהלך ההזדקנות.

דגם העכבר של כירורגיה אורתופדית ללמוד לאחר הניתוח בתפקוד הקוגניטיבי ו התחדשות רקמות

במאמר זה, אנו מציגים במבחנה ובפרוטוקול במקום כדי לתקן פער גידים של עד 1.5 ס"מ על ידי מילויו בשתל קולגן מהונדס. זה בוצע על ידי פיתוח טכניקת תיל שונה לקחת את העומס המכני עד השתל מתבגר לתוך הרקמה המארחת.

טכניקת תפירת טנורהאפי חדשנית עם שתל קולגן מהונדס רקמה לתיקון פגמים גדולים בגיד

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לתאר טכניקה מינימלית פולשנית לקראת מפרק הברך במודל חולדה. פרוטוקול זה, המהווה מבסס על הפרדה בין השריר לבין מודוס ומיומנות החתך המיני, מתאים ללימוד המנגנון המולקולרי הבסיסי של החוזה המשותף שנרכש.

מיני פולשנית שיטה פנימית ללמידה בברך שנגרמה כתוצאה מצמצום בחולדות

כאן, אנו מציגים את הטכניקה "Q" תפר כי ניתן לבצע תיקון גיד השפעותיו על היווצרות הפער ואת חוזק מתיחה של הגידים לתיקון. תפר Q מוצג יעיל בשיפור ההתנגדות מתיחה כוח תיקון גיד.

באמצעות תפר Q כדי לשפר את ההתנגדות היווצרות פער חוזק מתיחה של הגידים כופף לתיקון

הפרוטוקול הנוכחי מדגים שיטה להערכת התכונות הביופיזיקליות של תיקוני גידים ex vivo. חומר תפר פוליטטרה-פלואוראתילן (PTFE) הוערך בשיטה זו והושווה לחומרים אחרים בתנאים שונים.

פוליטטרה-פלואוראתילן (PTFE) כחומר תפר בניתוחי גידים

המפרק המורכב של הקרסול (ASCJ) הוא ליבת כף הרגל וממלא תפקיד מפתח בבקרת שיווי המשקל בפעילויות יומיומיות. פציעות ספורט מובילות לעיתים קרובות לחוסר יציבות במפרק זה. כאן, אנו מתארים מודל עכברי של חוסר יציבות הנגרמת על ידי טראנסקציה של הרצועה של ASCJ.

מודל עכברי של אי יציבות מפרקים מורכבים בקרסול-סובטאלרי

מחקר זה מפרט נהלים לביסוס פגיעה כרונית בשרוול מסובב ארנב (RC). באופן ספציפי, הפציעה נוצרת ביחידה תת-סקפולארית (SSC) של גיד-שריר/מיוטנדי כדי לחקות אנטומיה ופתופיזיולוגיה של RC אנושי, כולל ניוון שומן שרירי חמור (FD). פרוטוקול זה יכול להיות מיושם כדי לחקור פציעות RC ולהעריך טיפולים רגנרטיביים.

פיתוח מודל פגיעה בשרוול מסובב דמוי ארנב כרוני לחקר פיברוזיס וניוון שומן שרירי

אנו מציגים פלטפורמה ניסיונית מותאמת אישית ופרוטוקול תרבית רקמה המשחזר שינוי פיברוקרטילגיני המונע על ידי פגיעה בהחדרת גיד אכילס בצמחי גפיים אחוריות מורין עם כדאיות תאים מתמשכת, ומספק מודל מתאים לחקר המכנוביולוגיה של פגיעה בגידים.

מודל צמח הגפיים האחוריות של מורין לחקר המכנוביולוגיה של פגיעה בגיד אכילס

נתאר שתי שיטות בדיקה מישוש חושיות לתקופות חריפה או כרונית של פגיעה בחוט השדרה של חולדות. נהלים אלה תוקף יכול לזהות פיתוח ותחזוקה של allodynia כמו תחושות.

אקוטי וכרוני בדיקה חושי טקטילי לאחר פגיעה בחוט השדרה של חולדות

למדו את תהליך הריפוי של גידים מכופפים בעכברים באמצעות ניתוח תיקון מדויק. שיטה זו מאפשרת לחקור את התרומה התאית ליצירת צלקות ולזהות מטרות ביולוגיות לשיפור תוצאות הריפוי בטיפול בפגיעות יד.

פגיעת גיד מכופף Murine וכירורגיה תיקון

גלה סרטונים נוספים