Name: מגן היעילות ריאתי החיסונית בתגובה תת עורי ואת אפי BCG מינהל עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: חקור תגובות חיסון ריאתיות לאחר התחסנות נגד שחפת בעכברים, ושווה בין נתיבי מתן תת-עורי ותוך-אפי של חיסון BCG. גלה את תפקיד IL17 בהגנה החיסונית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי "משרד הכלכלה והתחרותיות הספרדי" [מספר מענק BIO2014-5258P], "הנציבות האירופית" על ידי תוכניות H2020 [מספרי מענק TBVAC2020 643381].

<ol><li>Zumla, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+WHO+2014+global+tuberculosis+report--further+to+go%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Glob+Health%22%5BJournal%5D)">The WHO 2014 global tuberculosis report--further to go.</a> Lancet Glob Health. 3 (1), e10-e12 (2015).</li>
<li>Mangtani, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+by+BCG+vaccine+against+tuberculosis%3A+a+systematic+review+of+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Protection by BCG vaccine against tuberculosis: a systematic review of randomized controlled trials.</a> Clin Infect Dis. 58 (4), 470-480 (2014).</li>
<li>Aguilo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+Mycobacterium+bovis+BCG+vaccination+confers+dose-dependent+superior+protection+compared+to+that+of+subcutaneous+vaccination%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary Mycobacterium bovis BCG vaccination confers dose-dependent superior protection compared to that of subcutaneous vaccination.</a> Clin Vaccine Immunol. 21 (4), 594-597 (2014).</li>
<li>Chen, L., Wang, J., Zganiacz, A., Xing, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+intranasal+mucosal+Mycobacterium+bovis+BCG+vaccination+confers+improved+protection+compared+to+subcutaneous+vaccination+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Single intranasal mucosal Mycobacterium bovis BCG vaccination confers improved protection compared to subcutaneous vaccination against pulmonary tuberculosis.</a> Infect Immun. 72 (1), 238-246 (2004).</li>
<li>Giri, P. K., Verma, I., Khuller, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+efficacy+of+intranasal+vaccination+with+Mycobacterium+bovis+BCG+against+airway+Mycobacterium+tuberculosis+challenge+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect%22%5BJournal%5D)">Protective efficacy of intranasal vaccination with Mycobacterium bovis BCG against airway Mycobacterium tuberculosis challenge in mice.</a> J Infect. 53 (5), 350-356 (2006).</li>
<li>Lagranderie, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BCG-induced+protection+in+guinea+pigs+vaccinated+and+challenged+via+the+respiratory+route%5BTitle%5D)+AND+%22Tuber+Lung+Dis%22%5BJournal%5D)">BCG-induced protection in guinea pigs vaccinated and challenged via the respiratory route.</a> Tuber Lung Dis. 74 (1), 38-46 (1993).</li>
<li>Gopal, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-17-dependent+CXCL13+mediates+mucosal+vaccine-induced+immunity+against+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Interleukin-17-dependent CXCL13 mediates mucosal vaccine-induced immunity against tuberculosis.</a> Mucosal Immunol. 6 (5), 972-984 (2013).</li>
<li>Khader, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-23+and+IL-17+in+the+establishment+of+protective+pulmonary+CD4%2B+T+cell+responses+after+vaccination+and+during+Mycobacterium+tuberculosis+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-23 and IL-17 in the establishment of protective pulmonary CD4+ T cell responses after vaccination and during Mycobacterium tuberculosis challenge.</a> Nat Immunol. 8 (4), 369-377 (2007).</li>
<li>Aguilo, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+but+Not+Subcutaneous+Delivery+of+BCG+Vaccine+Confers+Protection+to+Tuberculosis-Susceptible+Mice+by+an+Interleukin+17-Dependent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Pulmonary but Not Subcutaneous Delivery of BCG Vaccine Confers Protection to Tuberculosis-Susceptible Mice by an Interleukin 17-Dependent Mechanism.</a> J Infect Dis. , (2015).</li>
<li>Middlebrook, G., Cohn, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteriology+of+tuberculosis%3A+laboratory+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Public+Health+Nations+Health%22%5BJournal%5D)">Bacteriology of tuberculosis: laboratory methods.</a> Am J Public Health Nations Health. 48 (7), 844-853 (1958).</li>
<li>Brosch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+evolutionary+scenario+for+the+Mycobacterium+tuberculosis+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A new evolutionary scenario for the Mycobacterium tuberculosis complex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99 (6), 3684-3689 (2002).</li>
<li>Kaushal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+vaccination+with+attenuated+Mycobacterium+tuberculosis+induces+strong+central+memory+responses+and+protects+against+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mucosal vaccination with attenuated Mycobacterium tuberculosis induces strong central memory responses and protects against tuberculosis.</a> Nat Commun. 6, 8533(2015).</li>
<li>Lochhead, J. J., Thorne, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intranasal+delivery+of+biologics+to+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Intranasal delivery of biologics to the central nervous system.</a> Adv Drug Deliv Rev. 64 (7), 614-628 (2012).</li>
<li>Lochhead, J. J., Wolak, D. J., Pizzo, M. E., Thorne, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+transport+within+cerebral+perivascular+spaces+underlies+widespread+tracer+distribution+in+the+brain+after+intranasal+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Rapid transport within cerebral perivascular spaces underlies widespread tracer distribution in the brain after intranasal administration.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 35 (3), 371-381 (2015).</li>
<li>Griffiths, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholera+toxin+enhances+vaccine-induced+protection+against+Mycobacterium+tuberculosis+challenge+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cholera toxin enhances vaccine-induced protection against Mycobacterium tuberculosis challenge in mice.</a> PLoS One. 8 (10), e78312(2013).</li>
<li>Hirota, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+Th17+cells+in+Peyer%27s+patches+is+responsible+for+the+induction+of+T+cell-dependent+IgA+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Plasticity of Th17 cells in Peyer's patches is responsible for the induction of T cell-dependent IgA responses.</a> Nat Immunol. 14 (4), 372-379 (2013).</li>
<li>Jaffar, Z., Ferrini, M. E., Herritt, L. A., Roberts, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+lung+mucosal+Th17-mediated+responses+induce+polymeric+Ig+receptor+expression+by+the+airway+epithelium+and+elevate+secretory+IgA+levels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: lung mucosal Th17-mediated responses induce polymeric Ig receptor expression by the airway epithelium and elevate secretory IgA levels.</a> J Immunol. 182 (8), 4507-4511 (2009).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

למרות שהחיסון הנוכחי נגד שחפת, BCG, הוא החיסון הנפוץ ביותר בהיסטוריה, שחפת נותרה אחד הגורמים המובילים למוות ותחלואה ממחלות זיהומיות ברחבי העולם. פרדוקס זה מוסבר על ידי היעדר ההגנה של חיסון זה מפני שחפת ריאתית, צורת ההדבקה האחראית. יש צורך דחוף בגישות חיסון חדשות היעילות נגד צורות ריאתיות של המחלה, מכיוון שתהיה להן ההשפעה הגדולה ביותר על העברת המחלה ברחבי העולם.
הנתונים שלנו מראים בבירור ששינוי בדרך מתן BCG כדי לחקות את המסלול הטבעי של ההדבקה יכול להיות אסטרטגיה מוצלחת למניעת שחפת ריאתית. התוצא...

שחפת (TB) היא אחת המחלות הזיהומיות המובילים בגרימת מותם מזוהה יותר HIV בעולם בשילוב עם העלייה הגואה של זנים עמידים multidrug גורם שחפת בעיה בריאותית עולמית מדאיגה 1. כלי אבחון חדשים, תרופות יעילות יותר ופחות רעילות, וחיסוני TB בטוחים ויעילים חדשים הם צורך דחוף, במיוחד במדינות המתפתחות. לחיות Bacille Calmette-גרן מוחלשים (BCG) היא כיום חיסון מורשה רק נגד שחפת, אשר כבר מנוהל intradermally בלידה מאז 1970 ברחבי העולם. BCG נחשב יעיל במניעת צורות חמורות של המחלה (דלקת קרום המוח שחפת miliary) בילדים, אך הראה יעילות עולה בקנה אחד נגד שחפת ריאתית אחראית של העברת מחלות 2. חיסון ריאתי, אשר מחק מסלול טבעי של זיהום שחפת, מייצג גישה אטרקטיבית עבור תחול תגובה מקומי חיסון של פונדקאיים. בהקשר זה, יצירות פרה-קליניים שונים במודלים של בעלי חיים TB רלוונטיים שונים הוכיחו יעילות החיסון יותר בעקבות חיסון ריאתי כפי בהשוואה לתוואי תת עורית או תוך-3-6. עם זאת, מנגנוני ההגנה מופעלים על ידי חיסון ריאתי אינם מובנים היטב. בשנים האחרונות, כמה יצירות הצביעו לעבר בתגובה בתיווך IL17 כגורם חשוב של תגובה חיסונית ברירית ספציפית TB, כמו במודלים של עכברים לוקים עבור יעילות מגן עקב חיסון רירי IL17 נפגע 7,8. לאחרונה הראינו לראשונה כי אפי ממשל BCG מוגן DBA / 2 עכברים, זן עכבר מאופיין בהיעדר הגנה לאחר תת עורית BCG חיסון 9. תוצאות אלו הראו כי חיסון TB נשימה יכול להיות יעיל יותר בהפחתת שיעור השחפת במדינות אנדמיות, שבו BCG תוך-עורית נחשב יעיל נגד pulmonTB האר&quot;י.

<table><tbody><tr><td>מרק מידלברוק 7H9 BD</td><td></td><td>271310</td><td></td></tr><tr><td>מידלברוק ADC העשרה</td><td>BD</td><td>211887</td><td></td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Scharlau</td><td>TW00800250</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי זכוכית בקוטר 3 מ"מ</td><td>Scharlau</td><td>038-138003</td><td></td></tr><tr><td>Middlebrook 7H10 Agar</td><td>BD</td><td>262710</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל 26GA 0.45 x 10 מ"מ</td><td>BD</td><td>301358</td><td></td></tr><tr><td>דיסוציאטור GentleMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>צינורות C</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>M צינורות</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-236</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז D</td><td>Roche</td><td>11088882001</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI</td><td>Applichem</td><td>A3778,0100</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 70 &micro; m מסננת תאים</td><td>קורנינג</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Sigma</td><td>R0883</td><td></td></tr><tr><td>מאגר ליסינג תאי דם אדומים</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>תוסף GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td>100x</td></tr><tr><td>תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין</td> מרוכזת <td>Sigma</td><td>P4333</td><td>100x מרוכז</td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי</td><td>ביולוגי תעשיות</td><td>04-001-1A</td><td></td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>Sigma</td><td>M3148-25ML</td><td></td></tr><tr><td>שרביט 2.0 כף יד אוטומטי מונה תאים</td><td>Millipore</td><td>PHCC20040</td><td></td></tr><tr><td>חיישני מונה תאי שרביט, 40 ומיקרו; m</td><td>Millipore</td><td>PHCC40050</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium Tuberculosis - Tuberculin PPD</td><td>Statens Serum Institut (SSI)</td><td>2390</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IFN-&gamma; ערכת פיתוח ELISA&nbsp;</td><td>ערכת פיתוח עכבר Mabtech</td><td>3321-1H</td><td></td></tr><tr><td>IL17A ELISA&nbsp;</td><td>Mabtech</td><td>3521-1H</td><td></td></tr><tr><td>Brefeldin A</td><td>Sigma</td><td>B7651</td><td></td></tr><tr><td>FITC חולדה נגד עכבר CD4</td><td>BD</td><td>553047</td><td></td></tr><tr><td>BD ציטופיקס/ערכת ציטופרם</td><td>BD</td><td>555028</td><td></td></tr><tr><td>APC-Cy7 חולדה נגד עכבר IL-17A</td><td>BD</td><td>560821</td><td></td></tr><tr><td>APC עכבר נגד עכבר IFNg</td><td>BD</td><td>554413</td><td></td></tr><tr><td>LACHRYMAL OLIVE LUER LOCK 0.60 x 30 מ"מ. 23G x 1 1/4 אינץ'</td><td>UNIMED</td><td>27.134</td><td>משמש כצינורית קנה הנשימה עבור</td></tr><tr><td>פוליסטירן קושר חלבון גבוה BAL צלחות שטוחות עם תחתית שטוחה 96 בארות MAXISORP</td><td>NUNC</td><td>430341</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין, מסרום בקר</td><td>Sigma</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>עז אנטי-עכבר IgA (&אלפא ספציפי לשרשרת) ומינוס; נוגדן פרוקסידאז</td><td>Sigma</td><td>A4789</td><td></td></tr><tr><td>3,3&prime;,5,5&prime;-Tetramethylbenzidine (TMB)&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T0440</td><td></td></tr><tr><td>MyTaq DNA פולימראז</td><td>ביוליין</td><td>BIO-21107</td><td>הערכה כוללת מאגר 5x</td></tr></tbody></table>

מגן היעילות ריאתי החיסונית בתגובה תת עורי ואת אפי bcg מינהל עכברים

Protective Efficacy and Pulmonary Immune Response Following Subcutaneous and Intranasal BCG Administration in Mice

למרות הכיסוי העולמי של חיסון BCG תוך עורי, שחפת נותרה אחת המחלות הזיהומיות הנפוצות ביותר בעולם. נתונים פרה-קליניים עודדו חיסונים נגד שחפת ריאתית כאסטרטגיה מבטיחה למניעת מחלת ריאות, האחראית להעברה. בעבודה זו, אנו מתארים את המתודולוגיה ששימשה להדגמת מודל העכבר את היתרונות של חיסון BCG תוך-אף בהשוואה לתת-עורית. הנתונים שלנו חשפו יעילות הגנה גדולה יותר לאחר מתן BCG תוך-אף. בנוסף, התוצאות שלנו מצביעות על כך שחיסון ריאתי מעורר תגובה חיסונית גבוהה יותר בריאות, כולל תגובות Th1 ו-Th17, כמו גם עלייה בריכוז האימונוגלובולין A (IgA) בדרכי הנשימה. הנתונים שלנו מראים מתאם בין יעילות ההגנה לנוכחות תאים המייצרים IL17 בריאות לאחר אתגר מיקובקטריום טוברקולוזיס, מה שמרמז על תפקיד לציטוקין זה בתגובת ההגנה שמעניק חיסון ריאתי. לבסוף, אנו מפרטים את זרימת העבודה הגלובלית שפיתחנו כדי לחקור חיסון נשימתי במודל העכברים, שניתן להסיק על חיסוני שחפת אחרים, מלבד BCG, המכוונים לתגובה הרירית או דרכי מתן ריאתיות אחרות כגון תוך-קנה הנשימה או אירוסול.

עבודה זו מתארת ​​את ההשוואה של שני מסלולים של ממשל של BCG: תת עורי אף. מסלול תת עורי ניתן להשוות את intradermal, המהווה את הציר הקליני הנוכחי עבור BCG ברחבי העולם. מסלול אפי חיסון שואף לחקות את הקו הטבעי של זיהום של M. שחפת, במטרה להשרות תגובה חיסונית ישירות לריאות, איבר היעד העיקרי של הפתוגן. איור 1 מתאר את זרימת העבודה א...

אנו מפרטים כאן את המתודולוגיה שננקטה כדי להשוות את יעילות ההגנה והתגובה החיסונית של הריאות הנגרמת על ידי חיסון תוך-אף ותת עורי עם BCG במודל עכבר. התוצאות שלנו מראות את היתרונות של חיסון ריאתי ומצביעות על תפקיד לתגובה בתיווך IL17 בהגנה הנגרמת על ידי חיסון.

מגן היעילות ריאתי החיסונית בתגובה תת עורי ואת אפי BCG מינהל עכברים

Despite global coverage of intradermal BCG vaccination, tuberculosis remains one of the most prevalent infectious diseases in the world. Preclinical data ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לחקור תגובות חיסוניות בריאות לאחר חיסון נגד שחפת, כולל היעילות ההגנתית של החסון מול אתגר תוך-נחיר והתגובה החיסונית המקומית בריאות המושרה על ידי החסון. מתודולוגיה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות המפתח שלנו בתחום החסונים לשחפת, כולל זיהוי התגובות החיסוניות ההגנתיות בריאות המופעלות על ידי חסונים ריאתיים לצורך הגנה חיסונית אופטימלית של הריאות. יתרון אחד של מתודולוגיה זו הוא שהתגובה החיסונית בריאות מכל בעל חיים מוערכת באופן פרטני ובמקביל ליעילות ההגנתית.מה שמאפשר את זיהוי הפרמטרים החיסוניים הספציפיים המתואמים עם הגנה. למתן תת-עורי של חיסון BCG, ראשית, מלאו מזרק של מיליליטר אחד, המצויד במחט בדרגת עובי (gauge) 26, במיליליטר אחד של תרחיף חיסון BCG, והסִירו את בועות האוויר. לאחר מכן, הניחו עכבר שהורדם בתנוחה הפוכה (prone) בתוך מטאבקס (Laminar flow hood), והחדירו לבעל החיים תת-עורית 100 מיקרוליטרים של חיידקים באזור השוק האחורי.עבור מתן תוך-אפי, טענו מיקרו-פיפט עם 20 µL של תמיחת ה-BCG, והניחו את העכבר המורדם בתנוחה גבהית (supine) בתוך המכסה. ניתן את התמיסות בטיפות בין שתי הנחיריים עד להזרקת כל נפח ה-20 µL, תוך השארת זמן בין הטיפות כדי לאפשר לעכבר לשאוף את התמיחה. לאחר מכן, טענו שנית את המיקרו-פיפט עם 20 µL נוספים של חיידקים וחזרו על פעולת המתן.עבור אתגר תוך-נחרי עם זן ה-microbacterium tuberculosis H37Rv, בנקודת הזמן הניסויית המתאימה לאחר החיסון, חסנו את בעלי החיים באמצעות מתן תוך-נחרי של 40 microliters של תרחיף חיידקי H37Rv כפי שהודגם זה עתה. כדי להשיג דגימת שטיפת ברונכואלוולרית או דגימת כדור, השתמשו תחילה בפינצטה ובמספריים סטריליים כדי לחשוף את הקנה. לאחר מכן, בצעו חתך קטן בקנה, תוך הקפדה לא להסיר את הרקמה לחלוטין, והכניסו קנולה המחוברת למזרק סטרילי של 1 mL, המכיל 800 microliters של PBS קר מאוד.כאשר הקנולה במקומה, מלאו בזהירות את הריאות ב-PBS, ולאחר מכן משכו לאט את הבוכנה כדי לשאוב לפחות 500 עד 600 microliters של נוזל שטיפה. העבירו את הנוזל למבחנה של 1.5 mL על קרח, ואשרו שהסספנסיה חסרת צבע, דבר המעיד על היעדר זיהום של דם. אחסנו את הדגימות על קרח עד לעיבוד הנוזלים.כדי לקבוע את העומס החיידקי ואת התגובה החיסונית בריאות, קבעו את העכבר באמצעות מחטים במצב שכיבה גב על משטח שטוח ומחטא בתוך מCב Laminar flow hood, ובצעו חתך בעור העליון מעל החזה. לאחר מכן, קלפו את העור כדי לחשוף את אזור בית החזה, ופתחו את הריאות. השתמשו במספריים ופינצטה סטריליים כדי לאסוף את הריאות והלב, והניחו את האיברים על משטח נקי.לאחר מכן, הסירו את הלב, הקנה ורקמת החיבור. העבירו כל ריאה למבחנה נפרדת של 1.5 mL עם 1 mL של מים דה-יוניים על קרח, לצורך קביעה עתידית של העומס הבקטריאלי ותגובות חיסוניות תאיות. בהשוואה למסלול תת-עורי, מסלול חיסון תוך-אפי תופס יעילות הגנה גבוהה בהרבה בריאות.ניתוח של מספר מייצג של מושבות מקבוצת חיסון ה-BCG התוך-נחרית באמצעות PCR ספציפי לאזור הגנומי RD9 הוכיח כי כל המושבות הניבו מקטע של 0.4 kilo-base-pairs שתואם ל-H37Rv. חיסון BCG תוך-נחרי מעורר רמות גבוהות יותר של IL17 והפרשת interferon gamma בריאות, מה שמעיד על מתאם בין היעילות ההגנתית המוענקת על ידי חיסון BCG תוך-נחרי לבין התגובה החיסונית שהושרה על ידי החיסון בריאות לפני החשיפה, המתבטאת בריכוז גבוה יותר הן של ה-IgA הכולל והן של ה-IgA הספציפי לנגזרת חלבון מטהרת של H37Rv בדגימות השטיפה שנצפו אצל מקבלי החיסון התוך-נחרי. ניתוח נוסף של תאים מייצרי ציטוקינים בריאות לאחר החשיפה לשחפת גילה כי בעוד שתאים מייצרי interferon gamma נמצאו בכל הקבוצות המודבקות, תאי CD4+ מייצרי IL17A נמצאו רק בקבוצת ה-BCG התוך-נחרית, מה שמעיד על מתאם משמעותי בין נוכחות IL17 לבין הפחתה בעומס החיידקי בריאות.בעקבות נוהל זה, ניתן להשוות את התגובות החיסוניות המקומיות בריאות בעת שימוש בחיסוני שחפת בעלי גיוון ביולוגי, כמו גם בדרכי הזרקה שונות ובנקודות זמן שונות לאחר חשיפה לנפתוגן. בנוסף, ניתן להשתמש במתודולוגיה זו להערכת האימוניציות הנובעות מהחיסון לאחר חשיפה, דבר שעשוי לאפשר זיהוי של התגובות החיסוניות המתואמות עם הגנה.חשוב לציין כי עבודה עם Mycobacterium Tuberculosis מחייבת מעבדות שאינן בדרגת בטיחות ביולוגית (BCL-free), ויש לנקוט תמיד באמצעי הזהירות המתאימים בעת ביצוע פרוצדורה זו.

protective-efficacy-pulmonary-immune-response-following-subcutaneous

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול לבדיקת יעילותו של חיסון שעלת אצלולרי נגד זיהום שעלת בורדטה בעכברים. לאחר החיסון, העכברים היו נתונים לזיהום, וההומוגנט הרקמתי שלהם תורבת כדי לנתח את מושבות החיידקים כקריאה של חסינות ההגנה הנגרמת על ידי החיסון.

הערכה של חסינות הנגרמת על ידי חיסון מפני זיהום חיידקי במודל עכבר

סרטון זה מדגים חיסון BCG תוך-אפי בעכברים, המפעיל תגובות חיסוניות מולדות ונרכשות, מה שמוביל להתפתחות תאי זיכרון T שוכני ריאות ותאי B משפיעים, ובכך משפר את ההגנה מפני זיהומי מיקובקטריום.

חיסון תוך אפי עם BCG במודל עכבר

חיסון המניעה והטיפולי לעתים קרובות לא מצליח לעורר תגובה חיסונית חזקה בשל ניקוז שבוע של החיסון לבלוטות הלימפה ומעורבות עניות וכתוצאה מכך של תאים חיסוניים. על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות הלימפה, הזרקת intralymphatic כביכול, יעילות חיסון ניתן לשפר מאוד וניתן להפחית מינוני חיסון.

Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

העבודה הנוכחית ממחישה את הנוחות של שימוש באימונותרפיה תת-לשונית כדי להגביר את התגובה החיסונית המולדת בריאות ולהעניק הגנה מפני דלקת ריאות פנאומוקוקית חריפה בעכבר.

אימונותרפיה תת לשונית כחלופה ללהשרות הגנה מפני זיהומים בדרכי הנשימה חריפים

assay Immunospot לטווח ארוך אינטרפרון-γ התרבותי צמוד אנזים משמש כמדד לתגובות זיכרון מרכזיים וקורלציה עם תגובות חיסון נגד mycobacterial מגן. עם assay זה, תאי דם היקפי mononuclear הם מגורה עם אנטיגנים mycobacterial וinterleukin-2 במשך 14 ימים, מה שמאפשר בידול והתרחבות של תאי T הזיכרון מרכזיים.

יישום של assay Immunospot לטווח ארוך אינטרפרון-γ התרבותי אנזים צמוד להערכת תגובות תא מפעיל וזיכרון T בבקר

טכניקה הרומן לתצוגה מהירה אנטיגן על משטח חיידקי מוצג, שיכלול משטח biotinylation ואחריו חשיפה חלבונים עניין בפיוז'ן עם אבידין monomeric. טעינת BCG עם אנטיגנים שנבחר בהצלחה משפר את immunogenicity שלה, רומז כי הקליגרפיות יכול להחליף את הגישות המסורתיות גנטי.

ביטוי של אנטיגנים אקסוגני חיסון ה-BCG Mycobacterium חיידקי סטרפטקוקוס בוביס דרך קישוט משטח שאינו גנטי עם מערכת אבידין-ביוטין

הפיתוח של אינטרפרון-גמא ELISpot וזמינותו של שפן PBMCs מאפשרת אפיון T-cell תגובות במודל זה מאוד רלוונטי ללימוד מחלות זיהומיות. לנו יש להחיל וזמינותו כדי למדוד את תא T תגובות המשויכות intradermal משלוח של חיסונים DNA.

אופטימיזציה אינטרפרון-גמא ELISpot Assay מידה תגובות תא T במודל שפן לאחר החיסון

כאן אנו מציגים פרוטוקול אלגנטי ויוו הערכה של חיסון היעילות ומנחה תגובות מערכת החיסון. פרוטוקול זה ניתן להתאים מודלים חיסון ללמוד ויראלי, חיידקי, או טפילים פתוגנים.

הערכה של פתוגן-פונדקאי תגובות והיעילות החיסון בעכברים

פרוטוקול זה מפרט את ההעשרה של שלפוחיות חוץ-תאיות מיקובקטריאליות (mEVs) מקוריות מתרביות אקסניות של Mycobacterium smegmatis (Msm) וכיצד ניתן לתכנן ולהעשיר MsmEV רקומביננטי המכיל mCherry (כתב פלואורסצנטי אדום). לבסוף, הוא מאמת את הגישה החדשנית עם העשרה של MsmEV המכילים את חלבון EsxA של Mycobacterium tuberculosis.

העשרה של שלפוחיות חוץ-תאיות מקומיות ורקומביננטיות של מיקובקטריה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול חלופי לגרימת אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית בעכברי C57BL/6, תוך שימוש בגליקופרוטאין מיאלין אוליגודנדרוציטים (MOG)35-55 אפיטופ אימונוגני המושהה באדג'ובנט של פרוינד המכיל את תת-המין Mycobacterium avium  paratuberculosis שהומת בחום.

פעילות אדג'ובנטית של Mycobacterium paratuberculosis בשיפור האימונוגניות של אוטואנטיגנים במהלך אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

קביעת יחידות יוצרות מושבות (CFU) היא הטכניקה הסטנדרטית לכימות חיידקים, כולל Mycobacterium tuberculosis אשר יכול לקחת שבועות כדי ליצור מושבות גלויות. כאן אנו מתארים מיקרו-CFU לקביעת CFU עם יעילות זמן מוגברת, שטח מעבדה מופחת ועלות מגיב, ומדרגיות לניסויים בתפוקה בינונית וגבוהה.

בדיקת יחידה להקמת מושבות מיקרו להערכת יעילות חיסונים נגד שחפת

חקור תגובות חיסון ריאתיות לאחר התחסנות נגד שחפת בעכברים, ושווה בין נתיבי מתן תת-עורי ותוך-אפי של חיסון BCG. גלה את תפקיד IL17 בהגנה החיסונית.

מגן היעילות ריאתי החיסונית בתגובה תת עורי ואת אפי BCG מינהל עכברים

גלה סרטונים נוספים