Name: מודל פגיע ראש החוזרים מזעזע של עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: למדו כיצד ליצור מודל עכברים עם פגיעות ראש חוזרות ומזעזעות באמצעות מערכת אימפקט אלקטרומגנטית. שיטה זו מאפשרת חקר השפעות פגיעות מוח טראומטיות קלות על תפקוד המוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מימון ממענק בריאות פלורידה (קרן מחקר לפגיעות מוח וחוט שדרה) (KKW).

כל הנהלים בוצעו תחת פרוטוקולים # 201207692 אושרה על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש של אוניברסיטת פלורידה ובהתאם ה- National Institutes of Health מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. 1. טיפול בבעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש זכר בן 3-4 חודשים C57BL / 6J. לספק מצעים, חומר קינון, מזון כרצונך מים. שמור על העכברים בטמפרטורות סביבה מבוקרות בטמפרטורה של 20 - 22 מעלות צלזיוס עם אור 12-hr קבוע / מחזורים כהים 12-hr. </li></ol> 2. טרום impaction כן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף טיפ מתכת מצופי גומי סיליקון מחוייט מכשיר השפעת stereotaxic אלקטרומגנטית. ודא התחתי השטוחה של הקצה מקביל פני השטח של הקצה החללי (איור 1 א). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם isoflurane 4% ואחריו הרדמה תחזוקה של isoflurane 2.5%. בדוק את ההרדמה באמצעות מד הזרימה. monitor רמת ההרדמה עד שהחיה מגיעה לרמה של הרדמה כירורגית על ידי הצגת אובדן רפלקס דוושת נסיגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את העכבר אפרקדן על כרית חימום. השתמש חרטומו בצורת משפך כדי לשמור על העכבר בהרדמה. לגמרי לגלח את הראש באמצעות גוזם. השתמש במשחה וזלין עיניים על העיניים של העכבר כדי למנוע יובש לאחר הרדמה. </li></ol> הגדרת 3. פרמטרי השפעה הערה: מערכת ההשפעה כוללת תיבת בקרה כדי להגדיר פרמטרי השפעה, גידול מפעיל כדי לבצע את הנעיצה ואת מסגרת דיגיטלית stereotactic עם 3-תנועת גרזנים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום להגדיר את המהירות של מכשיר ההשפעה עד 4 מ &#39;/ שני וישב זמן 240 msec על תיבת הבקרה. </li></ol> 4. למקם את מרכז ההשפעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים כרית חימום רכה מתחת לגוף של החיה כדי לשמור על טמפרטורת הגוף ליד 39 מעלות צלזיוס. הר העכבר בתוך מסגרת stereotactic בתוך pronעמדת דואר עם סורגי אוזן הבוטה לקצה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנמיכים את קצה השפעה קרוב לראש של העכבר על ידי הזזת נהג Z. התאם את קצה השפעה שטוח (9 מ&quot;מ קוטר) על ידי הזזת ה- X ו- Y-נהגים באמצע הדרך אל היעד קואורדינטות מעל תפר sagittal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא קצה אחד של קצה ההשפעה אנכית מקבילים לקו אופקי דמיוני הנמשך בין שתי האוזניים (תרשים 1C). מרכז ההשפעה תואם את באמצע דרך תפר sagittal המרכזי בין תפרי interfrontal ו lambdoid (interaural 9 מ&quot;מ עד interaural 0 מ&quot;מ, לרוחב 4.5 מ&quot;מ). </li></ol> 5. הגדרת עומק השפעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להגדיר את עומק ההשפעה כהלכה, השתמש קצה חללית נוסף כדי להחליף את הסיליקון המבודד מצופי גומי טיפ השפעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לוודא שאין שינוי של מרכז ההשפעה לאחר טיפי מיתוג, להגדיר את X ו- Y ערוץ בלוח הבקרה הדיגיטלי stereotaxic לאפס לפני מעבר העצות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את probטיפ דואר למרכז של אזור ההשפעה ידי הזזת X-Y-הכוננים ידניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיישן מגע קליפ הזנב של העכבר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את impactor (כונן Z) כלפי מטה עד הקצה החללי נוגע פני השטח של אתר ההשפעה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את ערוץ Z בלוח הבקרה stereotaxic לאפס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזיז את קצה ההשפעה חזרה לאזור ההשפעה על ידי התאמת X- ידני ו- Y-נהגים (לא אפס כפתורים בלוח הבקרה stereotaxic דיגיטלי) עד X ו- Y-הנהגים הם אפס (בהתאם קצה השפעה הוצב בעבר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחזור בו מפעיל על ידי העברת המתג לחזור על תיבת הבקרה. באופן ידני להעביר את impactor למטה (נהג Z) על ידי 4 מ&quot;מ. </li></ol> השפעת 6. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעורר את ההשפעה על ידי לחיצה על מתג ההשפעה על הקופסה המלאה להשיג עומק עיוות של 4 מ&quot;מ. </li></ol> 7. לאחר impaction <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדדו את הזמן מן ההשפעה עד נשימתו הראשונה של העכבר באמצעות טיימר. </li><li&gt; הסר את החיה מן המכשיר ומניח אותם על משטח חם כדי לשמור על טמפרטורת הגוף שלהם. אין להשאיר את החיה ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאפשר התאוששות לפני חזרת החיה חזרה לכלוב נקי. אל תחזור חיה לחברה של בעלי חיים אחרים עד התאושש לחלוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקפד לשקול את העכברים מדי יום. אם העכברים להראות סימנים של כאב, intraperitoneally להזריק בהם Meloxicam ל 1 - 2 מ&quot;ג / ק&quot;ג כל 12 - 24 שעות. </li></ol> 8. Impaction חוזרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן העכברים לפגיעות נוספות ב -4 ימים, 7, ​​ו -10 לאחר הפציעה הראשונית (72 מרווח hr בין השפעות). </li></ol> 9. אימונוהיסטוכימיה (IHC) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זלוף Transcardial <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים בזריקה intraperitoneal עם 200 מ &#39;/ pentobarbital ק&quot;ג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך ולהבטיח הרדמה כירורגית-המטוס על ידי קמצוץ הבוהן. secיור העכבר במצב שכיבה על ידי הקשה על הרגליים הקדמיות בעדינות כפותיו האחוריות למשטח עבודה קלקר בתוך במנדף כימי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עושים חתך דרך העור לאורך קו האמצע החזי מהנקודה שמתחת לתהליך xiphoid אל עצם הבריח. לעשות שני חתכים בעור נוספים על תהליך xiphoid והמשך לאורך הבסיס של בית חזה הגחון רוחבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתח את חלל בית החזה ולחשוף את הלב על ידי חיתוך דרך השרירים ואת בית החזה החזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אבטח את הלב הפועם עם מלקחיים בוטים ולעשות 1 - חתך מ&quot;מ 2 של החדר השמאלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד להכניס מחט פרפר לתוך העלייה הימנית. בגין העירוי של תמיסת מלח 20ml ידי דחיפת המזרק באיטיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור מהמצב מלוח paraformaldehyde 4%. המשך זלוף עם 20ml של paraformaldehyde. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף את העכבר להסיר את העור עם מספריים. לבודד את המוח מהגולגולת באמצעות חותך עצם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cryostat חתך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות המוח שבץ חיתוך הטמפרטורה האופטימלית (OCT) ניסוח ולהקפיא ב -80 ° C. מניחים את המוח ב cryostat בכיוון sagittal. חותכים חלקים במוח 5 מיקרומטר עבה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הַכתָמָה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את החלקים הקפואים בטמפרטורת חדר למשך שעה 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה השקופיות עם 100 μl של בסרום 2% עיזים 0.1% Triton X-100 ב בופר פוספט (PBS) במשך שעה 1 ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השקופיות 3 פעמים עם 300 μl של PBS. ואז דגירה שקופיות עם אנטי GFAP (1: 200) או נוגדנים נגד פריטין (1: 200) בנפרד במשך הלילה על 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השקופיות 3 פעמים עם 300 μl של PBS. ואז דגירה את השקופיות עבור 2 שעות בטמפרטורת החדר עם נוגדנים משני מצומדות ביוטין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השקופיות 3 פעמים עם 300 μl של PBS. ואז דגירה שקופיות עם מורכבות ביוטין avidin (ABC) פתרון (1:50) בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl">שטפו את השקופיות 3 פעמים עם 300 μl של PBS. ואז דגירה 3,3&#39;-diaminobenzidine (DAB) פתרון המצע (50 מ&quot;ל PBS, 10 μl H 2 O 2, 10 מ&quot;ג גלולת DAB, מסנן לפני השימוש) עבור 5 - 8 דקות. שים את השקופיות תחת מיקרוסקופ עד להופיע התא החיובי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את השקופיות במי ברז איטי בריצה במשך 5 דקות. מגלשות נקיות עם מעבדת לנגב. ואז להרכיב את החלקים עם בינוניים coverslip גובר. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Baugh, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+traumatic+encephalopathy%3A+neurodegeneration+following+repetitive+concussive+and+subconcussive+brain+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Imaging+Behav%22%5BJournal%5D)">Chronic traumatic encephalopathy: neurodegeneration following repetitive concussive and subconcussive brain trauma.</a> Brain Imaging Behav. 6 (2), 244-254 (2012).</li>
<li>McKee, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+traumatic+encephalopathy+in+athletes%3A+progressive+tauopathy+after+repetitive+head+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Chronic traumatic encephalopathy in athletes: progressive tauopathy after repetitive head injury.</a> J. Neuropathol Exp Neurol. 68 (7), 709-735 (2009).</li>
<li>Petraglia, A. L., Dashnaw, M. L., Turner, R. C., Bailes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+mild+traumatic+brain+injury%3A+translation+of+physiological+and+anatomic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Models of mild traumatic brain injury: translation of physiological and anatomic injury.</a> Neurosurgery. 75 Suppl (4), S34-S49 (2014).</li>
<li>Goldstein, L. E., McKee, A. C., Stanton, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+animal+models+of+blast-related+traumatic+brain+injury+and+chronic+traumatic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Alzheimers+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Considerations for animal models of blast-related traumatic brain injury and chronic traumatic encephalopathy.</a> Alzheimers Res Ther. 6 (5), 64(2014).</li>
<li>Gold, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessment+of+long-term+deficits+in+rodent+models+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22RegenMed%22%5BJournal%5D)">Functional assessment of long-term deficits in rodent models of traumatic brain injury.</a> RegenMed. 8 (4), 483-516 (2013).</li>
<li>Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Animal models of traumatic brain injury.</a> Nat Rev Neurosci. 14 (2), 128-142 (2013).</li>
<li>Luo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+cognitive+impairments+and+pathological+alterations+in+a+mouse+model+of+repetitive+mild+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurol%22%5BJournal%5D)">Long-term cognitive impairments and pathological alterations in a mouse model of repetitive mild traumatic brain injury.</a> Front Neurol. , 5-12 (2014).</li>
<li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+MRI+characterization%2C+neurobiochemical+and+neurobehavioral+changes+in+a+mouse+repetitive+concussive+head+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Temporal MRI characterization, neurobiochemical and neurobehavioral changes in a mouse repetitive concussive head injury model.</a> Sci Rep. 10 (5), 11178(2015).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+monoacylglycerol+lipase+prevents+chronic+traumatic+encephalopathy-like+neuropathology+in+a+mouse+model+of+repetitive+mild+closed+head+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Inhibition of monoacylglycerol lipase prevents chronic traumatic encephalopathy-like neuropathology in a mouse model of repetitive mild closed head injury.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 35 (3), 443-453 (2015).</li>
<li>Petraglia, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+spectrum+of+neurobehavioral+sequelae+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury%3A+a+novel+mouse+model+of+chronic+traumatic+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">The spectrum of neurobehavioral sequelae after repetitive mild traumatic brain injury: a novel mouse model of chronic traumatic encephalopathy.</a> J Neurotrauma. 31 (13), 1211-1224 (2014).</li>
<li>Lumpkins, K. M., Bochicchio, G. V., Keledjian, K., Simard, J. M., McCunn, M., Scalea, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+fibrillary+acidic+protein+is+highly+correlated+with+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">Glial fibrillary acidic protein is highly correlated with brain injury.</a> J Trauma. 65 (4), 778-782 (2008).</li>
<li>Yang, Z., Wang, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial+fibrillary+acidic+protein%3A+from+intermediate+filament+assembly+and+gliosis+to+neurobiomarker%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glial fibrillary acidic protein: from intermediate filament assembly and gliosis to neurobiomarker.</a> Trends Neurosci. 38 (6), 364-374 (2015).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+expression+of+ferritin+in+cerebral+cortex+after+human+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Increased expression of ferritin in cerebral cortex after human traumatic brain injury.</a> Neurol Sci. 34 (7), 1173-1180 (2013).</li>
<li>Jordan, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+spectrum+of+sport-related+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">The clinical spectrum of sport-related traumatic brain injury.</a> Nat Rev Neurol. 9 (4), 222-230 (2013).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרס כלכלי לחשוף.

כדי לחקות פגיעות מוח מורפולוגית דומה המצב הקליני, הסימפטומים הפוסט-זעזוע מוח צפויים. סימפטומים פוסט-זעזוע המוח בדרך כלל כוללים כאבי ראש, סחרחורות, סחרחורת, עייפות, בעיות זיכרון ושינה, קושי להתרכז, כמו גם חרדה, מצב רוח דכאוני. מאז סימפטומים גופניים לא יכול עדיין להיות מדיד במודלים של בעלי חיים, השינויים של מנוע ותפקוד קוגניטיבי וטיפול התנהגותי רגשי משמשים קריטריונים להערכת זעזוע מוח רציונלי במודלים של בעלי חיים. במחקר דיווח קודם, זה היה מראה כי במודל עכבר rCHI גורם גירעונות למידה מ...

זעזוע, המכונית גם פגיעה מוחית טראומטית קלה (mTBI), הוא התופעה המתמשכת ביותר של פגיעה מוחית טראומטית (TBI) ופוגע במיליוני אנשים ב ארצות הברית. זעזוע מוח יכול להיות מסובך לאבחן אין תרופה ספציפית עבור זעזוע מוח. יש הכרה גוברת וראיות כמה שטראומה מכאנית קלה שנגרמה מפציעות ספורט, לחימה צבאית, עיסוקים אחרים ומרתקים פיסיים עלולה להיות השלכות נוירולוגיות מצטברות וכרוני 1,2. עם זאת, יש עדיין חוסר הידע לגבי זעזועי מוח והשפעותיהם. המתודולוגיה הנוכחית מגבילה את המחקרים של פתולוגיה וטיפול בבני אדם מאז הערכה נוירולוגית והערכה הדמיה בלבד זמינים לאבחון קליני. במודלים של בעלי החיים לספק אמצעי ללמוד זעזועי מוח בצורה יעילה, קפדנית, ומבוקר עם בתקווה אבחנה נוספת וטיפול mTBI. מחקרים מותאמים מסורתית TBIמודלים כגון השפעת קליפת מוח מבוקר (CCI), השפעה נוזלת-כלי קשה (FPI), פגיעת ירידה במשקל, פגיעת פיצוץ לבצע mTBI וממריצים חומרות פגיעה נמוכות על ידי שינוי פרמטרי פציעה. מודלים אלה מועילים לשימוש בשל יכולתם לשכפל טראומה מוחית מורפולוגית דומה המצב הקליני; עם זאת, הם גם יש מגבלות משלהם. חומרת הפציעה המושרה על ידי (ירידה במשקל) פציעה האצה היא לעתים קרובות משתנה מאוד. שתי התוצאות של CCI קלה - דימום תת-עכבישי ו contusion מוקדי - אינם בני השוואה זעזועי מוח אנושי טיפוסי. CCI ו FPI דורשים craniotomy, אשר אינו רלוונטי מבחינה קלינית, תוך פגיעה הפיצוץ הוא מודל היותר שנויים במחלוקת לגבי המדידות עמדה בלחץ שיא חשיפה שונות, כמו גם פגיעה משנית משתנה במהלך החשיפה 3-6. במודל חיה המזעזע מעודכנת כי יכול לתרגם מחקר פרה-קליני לתוך setti הקליניng יש צורך במחקר. שאלת מפתח דוגמנות TBI הקלה היא להגדיר את חומרת פציעה ניסיון, אשר הצמוד ביותר משכפלת את הפגיעה בסביבה קלינית. לאחרונה, קבוצות מחקר שונות פתחו את פגיעת הראש הסגורה או פגיעת ראש מזעזע 7-10 מודל (CHI). CHI הוא שינוי של CCI ללא פתיחת גולגולת, אבל זה עדיין משתמש במערכת השפעה מגנטית אלקטרונית מסורתית לייצר שפעת ראש. צ&#39;י יכול לגרום זעזוע מוח החל קלה עד מתונה על ידי התאמת הפרמטרים השפעה. אובדן ההכרה (לוק) ניתן להבחין מייד לאחר השפעה ידי איתור ירידת קצב הנשימה או הסיום החולף של נשימה. תקופת LOC משמש כדי לקבוע את חומרת הפציעה. מאמר זה כולל גרסה משופרת ומעודכנת מעט של מודל חוזר צ&#39;י (rCHI) בעכברים, יחד עם פרוטוקול צעד אחר צעד מפורט ותוצאות נציג. א אסטרטגיות מחקר מודל rCHIמחדש מועיל בקביעת ההשפעות mTBI וטיפולים פוטנציאליים, במיוחד מאחר ואין במודל חיה הפרט מסוגל לחקות כל שינויים פתולוגיים הנגרמת זעזוע מוח.

<table><tbody><tr><td>מכונת הרדמה</td><td>Eagle Eye Anesthesia, Inc</td><td>דגם 150&nbsp;</td><td>הרדמה</td></tr><tr><td>אימפקטור אלקטרומגנטי</td><td>Leica Biosystems</td><td>Impact One Stereotaxic Impactor</td><td>לבצע אימפקט</td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקסי דיגיטלי</td><td>Leica Biosystems</td><td>39462501</td><td>הרכבה של עכבר וקצות מיקום</td></tr><tr><td>קצה מתכת מצופה גומי Sicilone Precision</td><td>Tool & הנדסה, Gainesvill FL</td><td>קצה אימפקט</td><td>בהתאמה אישית</td></tr><tr><td>גוזם ליתיום יון All-in-One WAHL</td><td>מוצרים ביתיים</td><td>9854-600</td><td>מהדקי נייר שיער עכבר גילוח</td></tr><tr><td></td><td>קצה בדיקה בהתאמה</td><td></td><td>אישית</td></tr><tr><td>אפליקטורים עם קצה כותנה</td><td>MEDLINE</td><td>ראש</td><td>קרצוף MDS202055 עם</td></tr><tr><td>רקמות מלח Tek O.C.T.</td><td>ASKURA FINETEK USA INC</td><td>4583</td><td>הטמעת רקמות</td></tr><tr><td>אנטי-GFAP</td><td>Dako</td><td>CA93013</td><td>נוגדן עבור IHC</td></tr><tr><td>אנטי פריטין</td><td>Sigma</td><td>F6136</td><td>נוגדן עבור IHC</td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC&nbsp; ערכת</td><td>מעבדות וקטור</td><td>PK-6100</td><td>IHC מערכת זיהוי</td></tr><tr><td>Permount הרכבה בינונית</td><td>פישר מדעי</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Aperio XT סורק ScanScope</td><td>Leica Microsystems Inc,שקופיות</td><td></td> <td>סריקת</td></tr><tr><td>Leica AutoStainer XL</td><td>Leica חברת הפתולוגיה</td><td>ST2010</td><td>H& מכתים</td></tr><tr><td>E DAB&nbsp;</td><td>מערכת זיהוי סיגמא</td><td>D3939</td><td>IHC</td></tr></tbody></table>

מודל פגיע ראש החוזרים מזעזע של עכברים

A Repetitive Concussive Head Injury Model in Mice

אף על פי שזעזוע מוח / פגיעה מוחית טראומטית קלה (mTBI) היא התופעה השכיחה ביותר של פגיעה מוחית טראומטית, עדיין יש חוסר ידע על הפגיעה והשפעותיה. כדי לפתח הבנה טובה יותר של זעזועי מוח, משתמשים לעתים קרובות בחיות מכיוון שהן מספקות מודל מבוקר, קפדני ויעיל. מחקרים התאימו מודלים מסורתיים של חיות לביצוע mTBI כדי לעורר חומרת פציעה קלה על ידי שינוי פרמטרי הפציעה. מודלים אלה שימשו מכיוון שהם יכולים לייצר פגיעות מוח דומות מורפולוגית למצב הקליני ולספק ספקטרום של חומרת הפציעה. עם זאת, הם מוגבלים ביכולתם להציג את המאפיינים הזהים של פציעות בחולים. באמצעות מערכת פגיעה מסורתית, מודל פציעת זעזוע מוח חוזרת (rCHI) יכול לגרום לזעזוע מוח קל עד בינוני דמוי אדם. ניתן לקבוע את דרגת הפגיעה על ידי מדידת תקופת אובדן ההכרה (LOC) עם סימן להפסקת נשימה חולפת. מודל rCHI מועיל לשימוש בשל הדיוק והפשטות שלו בקביעת השפעות mTBI וטיפולים פוטנציאליים.

במודל זה (איור 1 AC), היו תקופות קצרות של האנחות האלה נשימות רדודות. איבוד הכרה (שלא מדעת) מוגדר כירידה את קצב הנשימה או ההפסקה חולפת של נשימה לפני בשיבת נשימה נורמלית. השפעה על מרכז הראש שנגרם חוסר הכרה לזמן קצר (7.5 ± 4.7, 7.8 ± 5.5, 10.2 ± 8.8, 9.5 ± 8.0 שניות בכל השפעה בנפרד, 1D איור). המוח עכבר הראה מורפולוגיה נורמלית על ידי מכתים היסטולוגית H &amp; E, אשר לא הצביעו על נזק נגעים או רקמות מבניים ברור הנובע <str...

זעזוע מוח מציג את הסוג הנפוץ ביותר של פגיעה מוחית טראומטית. לכן, מודל של בעלי חיים עם זעזוע מוח חוזר, המשכפל את המאפיינים החשובים של פציעה במטופלים, עשוי לספק אמצעי לחקר זעזוע מוח בצורה קפדנית, מבוקרת ויעילה.

Despite the concussion/ mild traumatic brain injury (mTBI) being the most frequent occurrence of traumatic brain injury, there is still a lack of ...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא להקים מודל עכבר לזעזועים חוזרים באמצעות מערכת פגיעה מסורתית. עכברים אלו יכולים לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום המידול של פגיעות ראש טראומטיות קלות, או TBI, בנוגע להשפעת זעזועים על תפקוד המוח. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שמערכת פגיעה מגנטית אלקטרונית ניתנת לתפעול פשוט, והתהליך ניתן לבקרה לצורך הטרטפת הפגיעות.התחילו בחיבור קצה מתכתי מותאם אישית מצופה בגומי סיליקון למכשיר פגיעה סטריאוטקסי אלקטרומגנטי, תוך הקפדה שחלקו התחתון והשטוח של הקצה המצופה יהיה מקביל לפניו של קצה הגשש של מכשיר הפגיעה. לאחר מכן, הניחו עכבר מורדם בתנוחת שכיבה על הבטן על פד חימום, ואשרו היעדר תגובה לצביטה של בהונות. לאחר מכן, השתמשו במכונת גילוח כדי לגלח לחלוטין את הראש, ומרחו פומדה על עיני בעל החיים.כאשר בעל החיים מוכן, הגדירו מראש בתיבת הבקרה את מהירות מכשיר ההדייה לארבעה מטרים לשנייה, ואת זמן השהייה ל-240 מילישניות. הניחו פד חימום רך תחת גופו של בעל החיים, כדי לשמור על טמפרטורת הגוף קרוב ל-39 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, השתמשו בסרגלי אוזניים בעלי קצה קהה כדי לקבע את העכבר במסגרת הסטריאוטקטית במצב שכיבה על הבטן.השתמשו במנוע Z כדי להוריד את קצה הפגיעה קרוב לראש העכבר. העבירו את מנועי X ו-Y למחצית הדרך לקואורדינטות היעד, מעל התפר הסגיטלי, כדי להתאים את קצה הפגיעה השטוח בעל קוטר תשעה מילימטרים, תוך הקפדה שקצה אחד של ראש הפגיעה יהיה מקביל אנכית לקו אופקי דמיוני הנמתח בין שתי האוזניים. כדי לקבוע את עומק הפגיעה בצורה נכונה, הגדירו תחילה את ערוצי X ו-Y בלוח הבקרה הסטריאוטקסי הדיגיטלי על אפס, כדי לוודא שאין סטייה של מרכז הפגיעה לאחר החלפת הקצוות.לאחר מכן, העבירו את קצה הגשש הנוסף לאתר הפגיעה במוחו של העכבר. כוון באופן ידני את מניעי ה-X וה-Y כדי להזיז את קצה הגשש למרכז אזור הפגיעה, וחבקו חיישן מגע לזנב. השתמשו במניע ה-Z כדי להוריד את המכה עד שקצה הגשש יגע במשטח של אתר הפגיעה, ואפסו את ערוץ ה-Z בלוח הבקרה הסטריאוטקסי.לאחר מכן, השתמש במניעי X ו-Y כדי להזיז ידנית את קצה הפגיעה חזרה לאזור הפגיעה, עד שמניעי X ו-Y יגיעו לאפס. לאחר מכן, הנח את מניע Z למטה עד שבלוח הבקרה יופיע שהמניע Z נמצא ב-4.00. והעבר את מתג ההסגה בתיבת הבקרה כדי להסוג את המפעיל.כעת לחצו על מתג ההדפעה בתיבת הבקרה כדי להפעיל פגיעה עם עומק דפורמציה של ארבעה מילימטרים, והשתמשו בטיימר למדידת הזמן מרגע הפגיעה ועד לנשימה הראשונה של העכבר. לאחר מכן, העבירו את החיה למצע חימום תחת ניטור עד להחלמה מלאה. כדי להגדיר פגיעה חוזרת, גרמו לעכברים פגיעות נוספות בימים הרביעי, השביעי והעשירי לאחר הפגיעה הראשונית.פגיעה במרכז הראש גורמת לאובדן הכרה קצר מועד, המוגדר כהפסקה זמנית של הנשימה. המוחות מראים מורפולוגיה תקינה, ללא נגעים מבניים גלויים או נזק רקמתי מהפגיעה שנצפו היסטולוגית. בתגובה ל-TBI, ידוע כי אסטרוציטים עוברים שינויים מסוימים, כולל אקטיבציה, פרוליפרציה או גליוזיס ריאקטיבי.למעשה, בקרפוס קלוסום (corpus callosum) של מוחות עכברים שסבלו מפגיעות ראש חזרתיות מסוג זעזוע מוח, ניתן עדיין להבחין בסימנים ברורים להפעלה של אסטרוציטים שבעה ימים לאחר המכה האחרונה. יתרה מכך, ניתן לזהות תאים חיוביים לאימונו-פריטין בקורטקס של העכבר יום אחד לאחר המכה האחרונה, ועד שבעה ימים לפחות, מה שמרמז כי פגיעות מרובות עשויות להוביל לדימומים מיקרוסקופיים בקורטקס. לאחר רכישת מיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו בתוך 15 דקות, במידה והיא מבוצעת כהלכה.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור למקם נכון את צד הפגיעה של מוח העכבר. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך למחקר בתחום ה-TBI, כדי לבחון את השפעות TBI קלה, את האבחנה ואת הטיפול הפוטנציאלי במודלים של ספורטאים. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להקים מודל עכבר לזעזועי מוח חוזרים, באמצעות מערכת פגיעה מסורתית.

a-repetitive-concussive-head-injury-model-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מקור: Yang, Z., et.al. מודל פגיעת ראש חוזרת בעכברים. J. Vis. Exp. (2016). סרטון זה מדגים את השראת פגיעות ראש חוזרות ונשנות בעכבר באמצעות מכשיר פגיעה אלקטרומגנטי. ההליך כולל מיקום קצה הפגיעה בין התפרים הבין-פרונטליים והלמבדואידים על גולגולתו של עכבר מורדם ושימוש בקצה בדיקה כדי להגדיר במדויק את עומק הפגיעה. הפגיעה מועברת במהירות ובעומק מבוקרים כדי לדמות פגיעות מוח טראומטיות קלות, ולאחר מכן תקופת החלמה, כאשר הפציעות חוזרות על עצמן במרווחי זמן מוגדרים.

מידול פציעות ראש חוזרות ונשנות של זעזוע מוח במודל עכבר

הספורטאים סופגים כמה מאות פציעות מוחיות טראומטיות קלות (mTBI) / זעזוע מוח מדי שנה; עם זאת, את התוצאות של אלה על המוח הוא הבין היטב. לכן, מודל החיות של mTBI יחיד וחוזר על עצמו באופן עקבי משכפל סימפטומים קליניים רלוונטיים מספק את האמצעים לקדם את המחקר של mTBI ו זעזוע מוח.

דגם עכבר של פגיעה בודדת וחזרה קלה של פגיעה מוחית טראומטית

שינוי מוליך עצבי הוא מנגנון של תפקוד עצבי המתרחשת לאחר זעזוע מוח תורם להשלכות לפעמים קטסטרופלי לטווח ארוך. מודל עכברוש זה משלב מיקרודיאליזה, המאפשר לכמת את הvivo הנוירוטרנסמיטור, עם טכניקת טיפה משקל הפעלת האצה מהירה והאטה של הראש והגוף, גורם חשוב של טראומה הגולגולת האנושית.

מודל עכברוש הרומן והטרנסלבית של זעזוע מוח שילוב כוח וסיבוב עם Vivo מוחין מיקרודיאליזה

הפרוטוקול מתאר פגיעה מוחית טראומטית קלה במודל עכבר. בפרט, פרוטוקול שלב אחר שלב לגרימת פגיעת ראש סגורה קלה בקו האמצע ואפיון מודל בעלי החיים מוסבר במלואו.

מודל ראש סגור מבוקר אלקטרומגנטי של פגיעה מוחית טראומטית קלה בעכברים

פרוטוקול זה מציג מודל עכברי שונה של פגיעה מוחית טראומטית קלה חוזרת ונשנית (rmTBI) הנגרמת באמצעות שיטת פגיעת ראש סגור (CHI). הגישה כוללת חלון גולגולת דליל וכלי הקשה נוזליים כדי להפחית את הדלקת הנגרמת בדרך כלל על ידי חשיפה לקרומי המוח, יחד עם שיפור יכולת השחזור והדיוק במידול rmTBI במכרסמים.

מודל עכבר שונה של פגיעה מוחית טראומטית קלה חוזרת ונשנית המשלבת חלון גולגולת דליל וכלי הקשה נוזליים

זעזוע מוח בילדים עלול לגרום להפרעות פיזיולוגיות ופסיכולוגיות ארוכות טווח. מודל זה של עכבר זעזוע מוח בילדים גורם לדלקת עצבית ארוכת טווח, שינויים בחומר הלבן ושינויים עצביים עם תפקוד התנהגותי לקוי. ניתן להתאים את המודל למיקומי פגיעה דיפרנציאליים או לזעזועי מוח חוזרים ונשנים כדי להעריך שינויים במהלך החיים.

מודל זעזוע מוח בילדים בעכברים: פגיעת ראש סגורה עם הפרעות ארוכות טווח (CHILD) 

פגיעה נחסך עצב מודל החיה מתואר כאן כמו במודל של עכברים של כאב נוירופטי היקפי הבאים denervation חלקית של עצב השת ידי lesioning הענפים השוקה משותף עצב peroneal, עוזבים את העצב sural שנותרו ללא פגע. שינוי ההתנהגות הנובעים allodynia מכני לכמת ידי חוטים פון פריי.

פגיעה ניצלו עצב (SNI) דגם Allodynia מכונות המושרה עכברים

טכניקה חדשנית ליצירת...

פגיעה קריעת צוואר הרחם מבוקרת בעכברים

אנו מתארים מודלים של פגיעה בכליות הנגרמות איסכמיה reperfusion בינוניות וקשות שבו העכברים עוברים הידוק חד צדדי ואחרי כריתת כליה הנגדית בו זמנית או עיכוב, בהתאמה pedicle כליות. מודלים אלה נותנים באופן עקבי עלייה לפגיעה בתפקוד הכלייתי וסיסטיק לאחר פציעה, אך חומרת פציעה והישרדות תלויות ברקע, גיל וכירורגי ציוד עכבר.

דגם איסכמיה reperfusion של פגיעה חריפה בכליות ופגיעים ההודעה פיברוזיס בעכברים

שיטה זו פותחה במטרה לספק פתרון תרופתי קבוע באמצעות העורק הראשי, כדי להעריך את הפרמקוקינטיקה של תרופות חדשניות במודלים של עכברים.

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

למדו כיצד ליצור מודל עכברים עם פגיעות ראש חוזרות ומזעזעות באמצעות מערכת אימפקט אלקטרומגנטית. שיטה זו מאפשרת חקר השפעות פגיעות מוח טראומטיות קלות על תפקוד המוח.

מודל פגיע ראש החוזרים מזעזע של עכברים

גלה סרטונים נוספים