Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

Gabrielle L&#234;-Bury; Chantal Deschamps; Audrey Dumas; Florence Niedergang

doi:10.3791/54568

הגירה ו מהירות Phagosome נמדד המקרופאגים אדם מן המעלה הראשונה חי עם HIV-1

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

Phagosome Migration and Velocity Measured in Live Primary Human Macrophages Infected with HIV-1

הגירה ו מהירות Phagosome נמדד המקרופאגים אדם מן המעלה הראשונה חי עם HIV-1

Full Text

8,631 Views

07:32 min

September 5, 2016

DOI: 10.3791/54568-v

Gabrielle Lê-Bury¹, Chantal Deschamps¹, Audrey Dumas¹, Florence Niedergang¹

¹Inserm U1016, Institut Cochin, CNRS UMR 8104, Université Paris Descartes, Sorbonne Paris Cité

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

אנו מתארים שיטה למדידת מהירות הפגוזומים הנעים לעבר מרכז התא בתאים חיים הנגועים בנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) מסוג 1 או בלעדיו, באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי קונפוקלי של דיסק מסתובב לזיהוי תאים נגועים פלואורסצנטיים ומיקרוסקופ שדה בהיר לזיהוי פגוזומים.

המטרה הכוללת של ניתוח זה היא לכמת את מהירות הפגוזומים במקרופאגים נגועים ב-HIV-1 באמצעות שיטת מעקב ידנית פשוטה. היתרון של פרוטוקול זה הוא לספק שיטה קלה לחישוב התנועות היחסיות של קבוצות עצמים בתוך תא שיכולות להיות נעות או מעוותות. שיטה זו מספקת תובנה לגבי תנועת הפאגוזומים במקרופאגים נגועים חיוביים ל-GFP, אך ניתן להשתמש בה עבור תאים בין-תאיים אחרים בתאים המתויגים פלואורסצנטית.

לאחר הדבקת מקרופאגים אנושיים שמקורם במונוציטים ואופסונים של תאי דם שגודלו בכבשים, על פי פרוטוקול הטקסט, הקימו בדיקת פגוציטוזיס באמצעות מערכת הדמיה קונפוקלית, כגון מיקרוסקופ דיסק מסתובב, המצויד בתא חימום ב-37 מעלות צלזיוס, בפחמן דו חמצני. לפני הניסוי, הפעל את תא החימום כדי לחמם את שלב המיקרוסקופ ל-37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן הפעל את המיקרוסקופ והמחשב וטען את תוכנת ההדמיה.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos