Name: אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל פגיעת חוט (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 s
Description: למד שיטת פגיעת חוט ליצירת טרשת עורקים מואצת בעכברים Apoe knockout. מודל זה חוקר מנגנונים מולקולריים של רסטנוזיס ונבדק באמצעות צביעת Movat.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי המרכז הבינתחומי למחקר קליני IZKF Aachen (קבוצת מחקר זוטרה E.A.L.) בתוך הפקולטה לרפואה באוניברסיטת RWTH אאכן. אנו גם מודים לגברת רויה סולטן על העזרה בהכתמת אימונוהיסטוכימיה.

ניסויים המוצגים בנייר זה מבוצעים על פי החוק הגרמני ועל פי ההנחיות האירופיות לטיפול בבעלי חיים. בעלי החיים גדלים במתקן בעלי החיים של המכון למדעי בעלי חיים במעבדה, בית החולים האוניברסיטאי אאכן, גרמניה, בהשגחתם של פרופ' ר' טובה וד"ר א. טאובר (קצין רווחת בעלי חיים).
1. טיפול בבעלי חיים
<ol><li>שמור את העכברים ביחידת טיפול מיוחדת, הבטחת גישה נאותה למזון ושליטה וטיפול וטרינרי מיוחדים. אם בעלי החיים מועברים או נרכשים גורמים שלישיים, אנא ודאו תקופת לינה של שבוע לפני שתעברו את ההליך.</li>
</ol>2. תריץ היפרליפידמיה
<ol><li>להאכיל 6 - 8 בשבוע בן, 18 - 20 גרם, נקבה (אופציונלי) ApoE-/- עכברים עם דיאטה אתרוגנית (21% שומן, 0.15% כולסטרול, 19.5% casein, wt / wt) שבוע לפני ההליך הכירורגי ולהמשיך את הדיאטה עד ניתוח פלאק עורקים הוא להתבצע.</li>
</ol>3. הכנה כירורגית
<ol><li>להניח את העכברים באמצעות הזרקה תוך-אפרטונלית של 100 מ"ג/ק"ג קטמין על ידי משקל גוף ו 10 מ"ג/ק"ג xylazine על ידי משקל גוף. לאשר ההרמה נכונה לפני הניתוח על ידי חוסר רפלקסים ותנועת שפם. מניחים בעין כמות קטנה של משחה סטרילית לעיניים כדי למזער את הייבש.</li>
	<li>הימנע תחזוקה של תנאים סטריליים כדי למנוע זיהומים במהלך הניתוח באמצעות חומרים סטריליים ומכשירים.</li>
	<li>לגלח את העכברים באזור הצוואר האוורטי. חיטו את העור עם בטאדין לפני החתך. הפוך חתך עור 1 ס"מ באזור החציוני של אזור הצוואר, על גבי קנה הנשימה.</li>
	<li>הפרד את שני הגופים השמנים כדי להבטיח נוף נכון על אזור ה-tracheal. השתמשו במפשקים כדי להחזיק את שכבת השריר ולחשוף את העורק הראשי. אם קיים, לבצע את הניתח הקהה של שכבת השריר הדק מכסה את העורק הראשי.</li>
	<li>השתמש מקצות מעוקלים חדים כדי להפריד את העורק הראשי מעצב התועה וריד הצוואר. לכן, אזור bifurcation עם העורק הראשי הפנימי והחיצוני צריך להיות גלוי. השתמש 0.9% NaCl על מנת למנוע יובש רקמות במהלך ההליך הכירורגי.</li>
</ol>4. פגיעה בחוט
<ol><li>מניחים תפר משי באורך 7 ס"מ מתחת לעורק הראשי, קרוב לקשת האב העורקים. הפוך לולאה פתוחה, מוכן להיסגר בכל עת.</li>
	<li>מניחים שני תפרי משי 0/7 (כל אחד באורך 1.5 ס"מ) סביב העורק הראשי החיצוני: לולאה אחת קרובה לנקודת הדו-פורר, ולולאה אחת דיסטלית ככל האפשר. הכן אותם כלולאה פתוחה, מוכן להיסגר בכל עת.</li>
	<li>מניחים תפר משי אחד 0/7 (1.5 ס"מ אורך) מתחת לעורק הראשי הפנימי. הכן אותו כלולאה פתוחה, מוכן להיסגר בכל עת.</li>
	<li>מקם את טבלת העכבר עם ראש העכבר לכיוון האופרטור כדי להבטיח מיקום נכון להכנסת חוט היישור במהלך ההתפרקות (איור 1A).</li>
	<li>תחת התצוגה המיקרוסקופית, לעצור את זרימת הדם דרך העורק הראשי המשותף על ידי החזקה ומשיכת הקצוות של 0/5 תפר משי עם מלקות hemostat.</li>
	<li>מיד לאחר קשירת העורק הראשי המשותף, לסגור את לולאות התפר להציב על העורק הראשי הפנימי ואת התפר הדיסטלי על העורק הראשי החיצוני בחוזקה(איור 1B).</li>
	<li>לבצע חתך קטן (arteriotomy, חצי קוטר הכלי) דיסטל לעורק הראשי החיצוני, בין שתי לולאות, באמצעות מספריים קטנים(איור 1C). אם החתך גדול מדי, נא בצע את ההוראות לפתרון בעיות (עיין בדיון).</li>
	<li>השתמשו בחוטי הנחיה מלוטשים באופן מסחרי או השתמשו בכוח אדם מיוחד כדי ללטש את חוטי היישור. חיטו את חוט היישור הגמיש המלוטש בגודל 14 אינץ' עם אלכוהול והניחו אותה בטיפה של 0.9% NaCl כדי להבטיח גלישה נכונה לתוך הכלי.</li>
	<li>הכנס את חוט היישור לתוך העורק הראשי המשותף באמצעות עורק העורק הרוחבי של העורק הראשי החיצוני(איור 1D). להשיג התבוללות אנדותל על ידי העברת חוט המדריך לאורך כלי השיט תוך כדי סיבוב. חזור על הליך זה שלוש פעמים. שמור על אותה משרעת של תנועה סיבובית בכל עכבר כדי להגדיל את הרבייה.</li>
	<li>סגור את הלולאה הפרוקסימלית בעורק הראשי החיצוני בחוזקה. לשחזר את זרימת הדם בעורק הראשי על ידי חיתוך התפר סביב עורק משותף ואת התפר סביב העורק הראשי הפנימי.</li>
</ol>5. תפר ושחזור
<ol><li>הסר את המפשקים והחזר את שכבת השריר ואת שני הגופים השמנים לתנוחה הפיזיולוגית.</li>
	<li>סגור את העור עם שלושה תפרים מופרדים 0/6, אם יש צורך במדידות אקו-קרדיוגרפיות. אם אין צורך בהדמיה, השתמשו בסרטונים מתכתיים כדי לסגור את העור.</li>
	<li>הנח את העכבר על צדו השמאלי תחת אור האינפרא-אדום עד שהוא מתעורר. אין להשאיר בעל חיים ללא השגחה או בחברת בעלי חיים אחרים עד להחלמה מלאה.</li>
	<li>לזיהוי עתידי, סמן את העכבר באמצעות המערכת המקומית. שאל את קצין רווחת בעלי החיים מהמוסד המקומי.</li>
</ol>6. ניתוח הלוחית טרשת עורקים
<ol><li>להניחות את העכברים בנקודת הסיום באמצעות הזרקה תוך-אפרטונית של 100 מ"ג/ק"ג קטמין על ידי משקל גוף ו 10 מ"ג/ק"ג xylazine על ידי משקל גוף. אשר ההתמהמהה הנכונה על ידי חוסר רפלקסים ותנועת שפם.</li>
	<li>לבצע דם על ידי רטרו מסלולית או ניקור לב ולאסוף את הדם לניתוח נוסף2.</li>
	<li>לחטא את העור עם בטאדין. פתח את חלל בית החזה והסר את התאוריקולום הימני של הלב. להסתפר פוספט אגירה פתרון דרך החדר השמאלי כדי להסיר את הדם הנותר מכלי ולאחר מכן להסתפר 4% PFA כדי לתקן את הרקמה.</li>
	<li>אם אין צורך קיבעון, לשתול את העורק הראשי מיד לאחר כביסה2,4,11. בצע פרוטוקולים סטנדרטיים עם ניתוחים של עניין: הטבעת פרפין, cryosection, mRNA או ניתוח חלבון, וכו '.</li>
	<li>למדידות מורפומטריות, לשתול בזהירות את העורק הראשי כולל bifurcation, עם מניפולציה מינימלית, כמו פרוקסימלי לקשת האב העורקים באמצעות מפלצות מעוקל ומספריים קטנים.</li>
	<li>הטבע את העורק הראשי בבלוק הפרפין באמצעות פרוטוקולי הטבעה סטנדרטיים. כדי לבצע מקטעים טרנסוורסאליים, מניחים את העורק הראשי זקוף על bifurcation. לחתוך 5 μm מקטעים טוריים עבים החל bifurcation ולאסוף את כולם על שקופיות היסטולוגיות מצופה (איור 2A).</li>
	<li>מכתים כלקטע 10 באמצעות כתמי Movat כדי להדגיש את למינאס2,4,11. לאחר איסוף תמונות מיקרוסקופיות של כל כלי השיט (באמצעות יעד 10X), למדוד את הלומן, כמו גם את ה למינה הפנימית והחיצוני עבור כל סעיף, באמצעות תוכנה מיוחדתמעוצבת 2,4,11, כפי ש המוצג באות 2B. חשב את הצמיחה האופטימית והמדיה של כלי הדם.</li>
	<li>לנתח תאי שריר חלקים ותוכן מקרופאג, או שחזור אנדותל במקטעים טוריים,באמצעות כתמים חיסוניים רגילים 2(איור 2C).</li>
</ol>

<ol><li>Simsekyilmaz, S., Liehn, E. A., Militaru, C., Vogt, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+interventional+cardiology%3A+challenges+for+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Progress in interventional cardiology: challenges for the future.</a> Thromb Haemost. 113 (3), 464-472 (2015).</li>
<li>Kubo, N., McCurdy, S., Boisvert, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Fas+Expression+on+Bone+Marrow+Derived+Cells+Alters+Atherosclerotic+Plaque+Morphology+in+Hyperlipidemic+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Discoveries%22%5BJournal%5D)">Defective Fas Expression on Bone Marrow Derived Cells Alters Atherosclerotic Plaque Morphology in Hyperlipidemic Mice.</a> Discoveries. 3 (1), e37(2015).</li>
<li>Saffarzadeh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+rapid+neutrophil+extracellular+trap+formation+and+its+cooperation+with+phagocytosis+in+human+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Discoveries%22%5BJournal%5D)">Characterization of rapid neutrophil extracellular trap formation and its cooperation with phagocytosis in human neutrophils.</a> Discoveries. 2 (2), e19(2014).</li>
<li>Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+arterial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse model of arterial injury.</a> Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).</li>
<li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+evaluation+of+drug-eluting+stents+for+peripheral+applications%3A+recommendations+from+an+expert+consensus+group%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Preclinical evaluation of drug-eluting stents for peripheral applications: recommendations from an expert consensus group.</a> Circulation. 110 (16), 2498-2505 (2004).</li>
<li>Schwartz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restenosis+and+the+proportional+neointimal+response+to+coronary+artery+injury%3A+results+in+a+porcine+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Restenosis and the proportional neointimal response to coronary artery injury: results in a porcine model.</a> J Am Coll Cardiol. 19 (2), 267-274 (1992).</li>
<li>Curaj, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+molecular+ultrasound+monitoring+of+vessel+healing+after+intravascular+surgical+procedures+in+a+preclinical+setup%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive molecular ultrasound monitoring of vessel healing after intravascular surgical procedures in a preclinical setup.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1366-1373 (2015).</li>
<li>Liehn, E. A., Schober, A., Weber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+keratinocyte-derived+chemokine+inhibits+endothelial+recovery+and+enhances+plaque+formation+after+arterial+injury+in+ApoE-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Blockade of keratinocyte-derived chemokine inhibits endothelial recovery and enhances plaque formation after arterial injury in ApoE-deficient mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24 (10), 1891-1896 (2004).</li>
<li>Liehn, E. A., Zernecke, A., Postea, O., Weber, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemokines%3A+inflammatory+mediators+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Physiol+Biochem%22%5BJournal%5D)">Chemokines: inflammatory mediators of atherosclerosis.</a> Arch Physiol Biochem. 112 (4-5), 229-238 (2006).</li>
<li>Simsekyilmaz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+extracellular+RNA+in+atherosclerotic+plaque+formation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Role of extracellular RNA in atherosclerotic plaque formation in mice.</a> Circulation. 129 (5), 598-606 (2014).</li>
<li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhodamine-loaded+intercellular+adhesion+molecule-1-targeted+microbubbles+for+dual-modality+imaging+under+controlled+shear+stresses%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Cardiovasc+Imaging%22%5BJournal%5D)">Rhodamine-loaded intercellular adhesion molecule-1-targeted microbubbles for dual-modality imaging under controlled shear stresses.</a> Circ Cardiovasc Imaging. 6 (6), 974-981 (2013).</li>
<li>Schober, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+the+CCL2%2FCCR2+axis+in+neointimal+hyperplasia+after+arterial+injury+in+hyperlipidemic+mice+involves+early+monocyte+recruitment+and+CCL2+presentation+on+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Crucial role of the CCL2/CCR2 axis in neointimal hyperplasia after arterial injury in hyperlipidemic mice involves early monocyte recruitment and CCL2 presentation on platelets.</a> Circ Res. 95 (11), 1125-1133 (2004).</li>
<li>Ali, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+in-stent+stenosis+in+ApoE+knockout+mice%3A+insights+from+a+novel+mouse+model+of+balloon+angioplasty+and+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Increased in-stent stenosis in ApoE knockout mice: insights from a novel mouse model of balloon angioplasty and stenting.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27 (4), 833-840 (2007).</li>
<li>Chamberlain, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+in+situ+stenting%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of in situ stenting.</a> Cardiovasc Res. 85, 38-44 (2010).</li>
<li>Rodriguez-Menocal, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+of+in-stent+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model of in-stent restenosis.</a> Atherosclerosis. 209 (2), 359-366 (2010).</li>
<li>Simsekyilmaz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+stent+implantation+in+the+carotid+artery+for+the+study+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A murine model of stent implantation in the carotid artery for the study of restenosis.</a> J Vis Exp. , e50233(2013).</li>
<li>Schroder, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NADPH+oxidase+Nox2+is+required+for+hypoxia-induced+mobilization+of+endothelial+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">NADPH oxidase Nox2 is required for hypoxia-induced mobilization of endothelial progenitor cells.</a> Circ Res. 105 (6), 537-544 (2009).</li>
</ol>

אין גילויים על ידי המחברים.

בנייר זה, אנו מספקים טיפים שימושיים לביצוע הליך פגיעה בחוט גם על ידי אנשים עם ניסיון מינימלי בניתוחים בבעלי חיים. ישנם שני שלבים קריטיים בביצוע הליך זה: החתך של העורק הראשי החיצוני והחדרת החוט. החתך בעורק הראשי החיצוני צריך להתבצע ככל האפשר מן bifurcation, על מנת להבטיח מספיק חומר שנותר(איור 1C). החתך לא צריך להיות גדול מדי, בשל הסיכון של חיתוך הכלי כולו. השלב הקריטי השני הוא הסיכון הגבוה לדימום במהלך כריתת העורקים והחדרת חוט התיל אם זרימת הדם אינה הופסקה ביעילות. יתר על כן, ההתבוללות האאנדותל לא יכול להתרחש או קרע עורקי אפשרי אם חוט המדריך אינו הציג כראוי בכלי לומן. כדי להימנע מכך, יש ללטש בזהירות את פני השטח של חוט היישור לפני הפעולה.
כדי לייעל את הפרוטוקול, המיקום של טבלת ההפעלה עם ראש העכבר לכיוון המנתח מבטיח תצוגה טובה יותר, נגישות ובקרה עבור מניפולציה נכונה חוט מדריך. יתר על כן, כדי להגדיל את הרבייה, להשתמש באותו חוט מדריך בכל המחקרים. מאחר שגודל החוט אינו משתנה, חשוב לשקול ולחסל את כל ההבדלים האפשריים בין העכברים באמצעות אותו מין, גיל ומשקל עבור כל העכברים הכלולים במחקר. לאחר מכן, הכתמה אוונס-כחול יעזור למנתח לקבוע את היעילות של ההתעבה. קיומו של ציוד מתאים הוא תנאי מוקדם להצלחת ההליך. סטריאומיקרוסקופ 10X חיוני לביצוע הליך זה. ההכנה הנכונה של חוט היישור (למשל ליטושו) היא קריטית. לכן, אנו ממליצים בחום כי הכנת חוט מדריך להתבצע על ידי צוות טכני מיוחד איפה זמין.
קיימים שלבים רבים לפתרון בעיות בפרוטוקול זה. אם חותך את העורק הראשי החיצוני ליד bifurcation, בזהירות לקשור את externa, ליד bifurcation, כך לא מתרחש דימום. במהלך החיתוך, העורק הראשי החיצוני לא ניתן לראות. לכן, לשקול את bifurcation ברמה של תפר משי. לאסוף קטעים כאשר תפר משי נעלם. אם החתך בעורק הראשי החיצוני גדול מדי וכלי הדם נקרע, ודא שזרימת הדם לתוך הקומוניס בעורק הראשי והעורק הראשי הפנימי נקטעת ביעילות ומנסה למצוא את פתח כלי הדם באמצעות מפסים. לאחר הצגת חוט הנחייה וביצוע ההתבוללות, קשרו את כלי השיט ליד ההתפוררות. במהלך החיתוך, להתחיל לאסוף כאשר המשי מהתפר מתחיל להיעלם. אם הקרע העורקי מתרחש במהלך ההתעטשות עם חוט הנחיה, בדוק מתחת למיקרוסקופ אם חוט הנחיה מלוטש כראוי.
למרות הדמיון של מודל פגיעת תיל למצבים קליניים, קבוצות רבות מתמקדות טרשת עורקים מקומית בעכברים, או שהם בוחרים אינדוקציה טרשת עורקים פולשנית, כגון אנגיופלסטיקה בלון בחולדות או ארנבים, בשל חוסר כוח אדם מיומן שיכול לבצע ניתוחים בעלי חיים קטנים. למרות היתרונות של שימוש ארנבים / חולדות, למשל אין צורך בציוד ממזער, לא מודלים חולדה ולא מודלים ארנב להציע מגוון רחב של זנים נוק אאוט שונים, במונחים של לימוד מנגנונים מולקולריים מעורבים צמיחה neointima ופקקת ב סטנט.
המודלים הקיימים ללימוד רסנטים בעכברים הם קשים, דורשים כישורים כירורגיים גבוהים, ויש להם סיכונים גבוהים של סיבוכים כגון דימום או שיתוק. לדוגמה, הפציעה המכנית או השתלת סטנט לתוך בית החזה באמצעות עורק הירך מלווה בשיעור תמותה גבוה (35%) עקב שיתוק ברגל האחורית או דימום13-15. אנו גם מתארים השתלת סטנט בעורק הראשי של עכבר16. ההליך דומה; עם זאת, עיבוד רקמות לניתוח הוא מסובך והוא אינו זמין לכל המעבדות16. העורק הראשי נגיש ישירות, לא רק עבור הליכי פעולה, אלא גם עבור שיטות הדמיה קיימות כגון הדמיית אולטרסאונד. אינדוקציה פציעה אחרים בעורקים הראשיים בעכברים יכול להיעשות באמצעות מכשירים חשמליים17. שיטה זו קלה לביצוע ומבטיחה שכפול גבוה. עם זאת, היא גורם לפציעה בכל שכבות כלי הדם, שאינה זהה לפציעה מכנית. יישומי בלון יש יתרונות, למשל ההתאמה לקוטר כלי העבודה בקנה אחד עם הפרקטיקה הקלינית ויש לו השפעה חזקה על התוצאה הפתולוגית. למרות בלוני עכבר זמינים, הם יקרים מאוד ולכן, לא בשימוש נרחב. במקום זאת, פגיעת התיל היא השיטה המבוססת, המחקה היצרות בסטינט.
ההסתה מתבצעת על הקיר העורקי הרגיל, אם כי עם רקע טרשת עורקים. לכן, היווצרות neointima יהיה מתון בהשוואה למצב הקליני. המספר הגבוה של מודלים פרה-לקלינליים מדגים כי אף אחד מהמודלים לא ממלא את כל הקריטריונים הדרושים כדי לחשוף את שלמות המנגנונים הסלולריים והמולקולריים המובילים לפתופיזיולוגיה בבני אדם (ראה טבלה 2).
לאחר ביצוע הליך פגיעה בחוט, ניתן לבצע ניתוח ביולוגי ומולקולרי אחר כדי לזהות תאים, חלבונים, mRNAs, microRNAs, גנים או סמנים ביולוגיים אחרים, אשר יכול לשמש כיעדים טיפוליים לפתח אסטרטגיות טיפול חדשות לטישת עורקים, ובמיוחד עבור היווצרות neointima לאחר פגיעה בכלי הדם. אם זמין, צמיחת הפלאק ניתן לפקח באמצעות אולטרסאונד בתדר גבוה או טכניקות הדמיה ברזולוציה גבוהה אחרות. יתר על כן, שליטה בטכניקה זו תעניק למפעיל את ההזדמנות להתאים את הפרוטוקול למודלים אחרים של טרשת עורקים פולשנית, כגון מיקום הבריחון, קשירה חלקית או אפילו השתלת סטנט.

טרשת עורקים היא הפתולוגיה העיקרית הבסיסית אירועים לב וכלי דם כגון אוטם שריר הלב או שבץ מוחי. המנגנונים העיקריים המפעילים תסמונות לב וכלי דם חריפים הם קרע פלאק, שחיקה שטחית, היווצרות טרומבוס. ישנם מצבים קליניים מרובים הקשורים להתפתחות הפלאק: פלאק טרשת עורקים מקורית, restenosis לאחר כריתת קצה, ו restenosis לאחר אנגיופלסטיקה בלון עם / בלי השתלת סטנט1. לאחר פגיעה עורקית,דיכוי של תהליכים דלקתיים 2,3 ואת ההתאוששות של תא אנדותל חיוניים כדי למנוע סיבוכים נוספים1. מחקר קליני מוגבל לדגימות רקמות ודם בשל שיקולים אתיים, עלויות, וחוסר ידע במנגנונים בסיסיים. מסיבות אלה, יש צורך ללמוד מנגנונים מולקולריים במודלים של בעליחיים 4-6, אשר יכול לשחזר את התנאים הקליניים. המודל שלנו של היווצרות neointima מואצת בהקשר של טרשת עורקים הוא תוצאה של שנים רבות של ניסיון ביישום מודלים אלה בבעלי חיים קטנים7-11. מודל העכבר הוא המודל האטרקטיבי ביותר למחקר, בשל קלות הטיפול בו, היכולת לקבוצות בעלי חיים גדולות בשל עלויות נמוכות הקשורות לרכישה וטיפול בבעלי חיים, והזמינות של זנים טרנסגניים ונוקאאוט שונים.
החיסרון העיקרי של מודל העכבר הוא הגודל הקטן של העורקים הראשיים הנתונים למחלות עורקים (העורק הראשי, אב העורקים, ועורק הירך), אשר דורש מומחיות כירורגית מוסמכת ומיומנויות כדי לתמרן את כלי הדם ולגרום באופן פולשני פלאק טרשת עורקים. לכן, המודל של היווצרות neointima מואצת, בהקשר של restenosis לאחר endarterectomy או השתלת סטנט, המוצעים בנייר זה מוצג עם קו מנחה צעד אחר צעד והצעות כדי להקל על המבוא עבור אנשי עניין. חיסרון נוסף הוא כי ההתעטשות נעשתה על הקיר העורקי הרגיל, ולכן, היווצרות ניאו-אינטימה יהיה מתון בהשוואה למצב הקליני. הרמה הגבוהה של כולסטרול פלזמה הגיע נוקאאוט apolipoprotein E(Apoe-/-) עכברים המוזנים עם דיאטת שומן גבוהה יוצרת סביבה פרו דלקתית נכונה הדרושה להיווצרות ניאו-אינטימה.
הניתוח מתבצע תחת סטריאומיקרוסקופ. העורק הראשי נחשף על ידי חתך חציון באזור צוואר הרחם הפתחי. מבנים אנטומיים על גבי וסביב העורק הראשי הם מניפולציה מינימלית כדי להפחית דלקת לאחר הניתוח. הדו-ריתום בעורק הראשי נחשף. כדי לגרום להיווצרות neointima מואצת, עורקים ראשיים פנימיים וחיצוניים מוכנים להפסקת זרימת הדם וההפשה נפוצה בעורק הראשי לאחר מכן. לסיכום, ניתן ללמוד את השיטה על ידי אנשים בעלי ניסיון מינימלי בניתוחים בבעלי חיים.

<table><tbody><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>אולימפוס SZ</td><td>/ X9-מלקחיים</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>FST, גרמניה</td><td>91197-00</td><td>קצה סטנדרטי מעוקל 0,17 מ"מ</td></tr><tr><td>מלקחיים Hemostat</td><td>FST, גרמניה</td><td>13007-12</td><td>מספריים מעוקלים</td></tr><tr><td></td><td>FST, גרמניה</td><td>91460-11</td> מספריים <td>ישרים</td></tr><tr><td>Vannas</td><td>Aesculap, גרמניה</td><td>OC 498</td> <td>R-Retractors</td></tr><tr><td></td><td>FST, גרמניה</td><td>18200-10</td><td>2.5 מ"מ רוחב</td></tr><tr><td>מחזירים</td><td>FST, גרמניה</td><td>18200-11</td><td>5 מ"מ רוחב</td></tr><tr><td>קטמין 10%</td> <td>CEVA, גרמניה</td><td></td><td></td> -</tr> <tr><td>קסילזין 2%</td> <td>מדיסטר, גרמניה</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>קרם עיניים ואף Bepanthene</td><td>באייר, גרמניה</td> <td>-</td><td></td></tr> <tr><td>שפופרת סיליקון</td><td>IFK Isofluor, גרמניה</td><td>בהתאמה אישית&nbsp; </td><td>קוטר המוצר 500 ומיקרו; מ ',</td></tr> <tr><td>עובי חתך 100 ומיקרו; m,</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>קטטר</td><td></td><td></td><td></td>פוליטטרפלואוראתילן</tr><tr><td>תפר פרולן 6/0&nbsp;</td><td>אתיקון</td><td>8707H&nbsp;</td><td>תפר מונופילמנט פוליפרופילן, בלתי נספג, מחט CC-1, 13 מ"מ, 3/8 מעגל&nbsp;</td></tr><tr><td>7/0 משי</td><td>Seraflex</td><td>IC 1005171Z-מישל</td><td></td></tr> <tr><td>תפרים קליפס</td><td>FST, גרמניה</td><td>12040-01&nbsp;</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td></tr><tr><td>קליפ מריחת מלקחיים</td><td>FST, גרמניה</td><td>12018-12&nbsp;</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td></tr><tr><td>14 אינץ' חוט לצנתר</td><td>Abbot</td><td>1000462H</td><td>השתמש ב-10 ס"מ מהחלק הנוקשה והשווה את הקצוות</td></tr><tr><td>עכברים</td><td>צ'ארלס ריבר</td><td>אפוליפופרוטאין E -/- עכברים עם רקע C57/Bl6</td><td>&nbsp;-&nbsp;</td></tr></tbody></table>

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

טרשת עורקים היא מחלה פיברו דלקתית מתפשטת המתפתחת בקיר העורקי, גורם זרימת דם לקויה או חוסר זרימת דם. יתר על כן, על ידי קרע של קיר כלי הדם פגום, טרשת עורקים גורמת היווצרות טרומבוס occlusive, אשר מייצג את הגורם העיקרי של אוטם שריר הלב או שבץ ואת סיבת המוות השכיחה ביותר. למרות ההתקדמות בתחום הלב וכלי הדם, שאלות רבות נותרו ללא מענה, ומחקר בסיסי נוסף חיוני כדי לשפר את הבנתנו את המנגנונים המולקולריים במהלך טרשת עורקים והשפעותיה. בשל מחקרים קליניים מוגבלים, יש צורך במודלים מייצגים של בעלי חיים המשפרים תנאי טרשת עורקים כגון היווצרות neointima לאחר השתלת סטנט, אנגיופלסטיקה בלון, או כריתת קצה. מאז העכבר מציג יתרונות רבים והוא המודל הנפוץ ביותר לחקר תהליכים מולקולריים, המחקר הנוכחי מציע הליך פולשני של השחתה אנדותל, המכונה גם מודל פגיעת חוט, אשר מייצג את המצב האנושי של היווצרות neointima בעורקים לאחר הליכי revascularization.

הליך אינדוקציה פלאק טרשת עורקים לוקח 15 - 20 דקות ומראה שיעור תמותה מינימלי, בעיקר בשל הדימום המתרחש במהלך ההליך. לאחר הניתוח, העכברים להתאושש מהרדמה בתוך 20 - 25 דקות. לא נצפתה פגיעה גופנית, כגון שיתוק או הפרעה בהאכלה לאחר הניתוח.
הפציעה בחוט גורם דה אנדותל, מחקה נגעים בכלי דם לאחר ההתעבה בלון או סטנט-השתלה. מיד לאחר הפציעה, קיר כלי הדם ההופקע יהיה מכוסה בשכבה של טרומבוציטים, אשר מתווכת ומעדיפה את הדבקה של מונוציטים12. תאי שריר חלקים מופעלים מהתקשורת יתפשטו ויעברו לתוך החללים האופטימיים, ויוצרים את הניאונטימה. אנשים אחרים לתאי שריר חלקים יעברו מהדם (מוערך ב-40%) ולתרום לצמיחת הניאונטימה. היווצרות הפלאק תסתיים לאחר ההתפלה מחדש המלאה, בדרך כלל 4 שבועות לאחר פציעת התיל.
ניתן להעריך את היווצרות neointima באמצעות כתמי מובאט. גודל הפלאק מחושב עבור כל שקופית באמצעות תוכנה כפיצג באיון 2B. גודל הפלאק הכולל (עורק ראשי שמאלי) יכול להשתנות בין 70,000 - 100,000 μm², בעוד גודל כלי הבקרה (עורק ראשי ימני) יכול להשתנות בין 7,000 - 8,000 μm². ערכים אלה תלויים במידה רבה על המנתח. לכן, אנו ממליצים בחום להשתמש באותו מנתח במהלך הניסויים עבור אותו מחקר.
הפלאק המפותח דומה לסטינט רזנוסיס, אשר בעיקר מורכב מתאי שריר חלקים מהתרבות והועברו מהתקשורת. ההרכב התאי שנקבע על ידי הליכי כתמים חיסוניים מראה כי תכולת תאי השריר החלקה היא כ 30 - 40%, בעוד מקרופאגים נמצאים 15 - 25% neointima של כלי השיט הפצוע. האנדותל מחדש ניתן למדוד לאחר הכתמה עבור סמן אנדותל, ומחושב כאחוז היקף מוכתם על היקף כולו של לומן. בדרך כלל ה אנדותל מחדש מגיע 80 - 90% לאחר 3 שבועות, וכמעט צריך להיות שלם לאחר 4 שבועות(איור 2C). כדי לעקוב אחר הצמיחה פלאק במהלך התפתחותו, ניתן לחזור על אותו ניתוח עבור כל נקודת זמן לאחר הפציעה בחוט, בהתאם לעניין והנושא למד (ראה טבלה 1).
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/54571/54571fig1.jpg"> איור 1. ייצוג סכמטי של נוהל אופרטיבי. (א) מיקום טבלת הפעולה כלפי המפעיל במהלך הליך פגיעת התיל(ב) תצוגה מוגדלת של העורק הראשי המשותף וענפיו, כפי שהוא מופיע מתחת למיקרוסקופ בהגדלה של פי 10(ג) גודל החתך בעורק הראשי החיצוני מתחת למיקרוסקופ ב-10X ייצוג סכמטיD) של הליך פגיעת חוט באמצעות חוט 14 אינץ'. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54571/54571fig1large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/54571/54571fig2.jpg"> איור 2. ניתוח של פלאק ר-רזנוזיס. (א) ייצוג סכמטי של ניתוח פלאק בעורק הראשי המשותף, 4 שבועות לאחר אינדוקציה של פגיעה בחוט(ב) Neointima היווצרות 4 שבועות לאחר פציעת תיל וייצוג סכמטי של פרמטרים עיקריים המשמשים לניתוח. אינטימה (אזור ירוק) הוא ההבדל בין לומן (אדום) לבין interna למינה (קו ירוק). מדיה (אזור צהוב) היא ההבדל בין externa למינה (קו צהוב) ו interna (קו ירוק). סרגל קנה מידה 100 μm(ג) תמונות מייצגות של הכתמים של סוגי התאים העיקריים המעורבים היווצרות neointima. תאי שריר חלקים (שריר חלק actin -אדום, סרגל קנה מידה 100 μm), מקרופאגים (Mac 2- ירוק, סרגל קנה מידה 100 μm) ותאי אנדותל (CD31- אדום, חצים, סרגל קנה מידה 50 μm). <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/54571/54571fig2large.jpg" target="_blank">לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של נתון זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>זמן</td>
			<td>טרומבוס (פירושונים)</td>
			<td>פלאק (μm²)</td>
			<td>
מקרופאגים (% מפלאק)
</td>
			<td>
תאי שריר חלקים (% מפלאק)
</td>
			<td>
אנדותל מחדש (היקף לומן)
</td>
		</tr>
<tr>
<td>יום אחד</td>
			<td>הווה (הווה</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>שבוע אחד</td>
			<td>-</td>
			<td>30,000</td>
			<td>100000000000000000</td>
			<td>50</td>
			<td>50</td>
		</tr>
<tr>
<td>2 שבועות</td>
			<td>-</td>
			<td>50,000</td>
			<td>100000000000000000</td>
			<td>50</td>
			<td>5000000</td>
		</tr>
<tr>
<td>3 שבועות</td>
			<td>-</td>
			<td>70,000</td>
			<td>15-25</td>
			<td>30-40</td>
			<td>80-90</td>
		</tr>
<tr>
<td>4 שבועות</td>
			<td>-</td>
			<td>70 000 – 100 000</td>
			<td>15-25</td>
			<td>30-40</td>
			<td>השלם</td>
		</tr>
</tbody></table>שולחן 1 . פיתוח פלאק תלוי בזמן.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>דגם ודוגמנית</td>
			<td>בעלי חיים</td>
			<td>יתרונות ויתרונות</td>
			<td>חוסר תועומים</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">טרשת עורקים מקומית הנגרמת על ידי דיאטה</td>
			<td>קטן מאוד</td>
			<td>
			<ul>
<li>מחקה את פתולוגיית טרשת עורקים</li>
				<li>קלות טיפול</li>
				<li>אין ניתוח</li>
				<li>אין לחץ על בעלי החיים</li>
				<li>עלויות נמוכות הקשורות לרכישת בעלי חיים וטיפול</li>
				<li>זמינות של זנים טרנסגניים ונוקאאוט שונים</li>
			</ul>
</td>
			<td>
			<ul>
<li>פרודוקטיביות מחדש נמוכה</li>
				<li>שונות גבוהה</li>
				<li>מספר בעלי חיים מוגבר נדרש</li>
				<li>זמן המתנה מוגבר</li>
			</ul>
</td>
		</tr>
<tr>
<td>גדול (10</td>
			<td>
			<ul>
<li>מחקה את פתולוגיית טרשת עורקים</li>
				<li>קלות טיפול</li>
				<li>אין ניתוח</li>
				<li>אין לחץ על בעלי החיים</li>
			</ul>
</td>
			<td>
			<ul>
<li>פרודוקטיביות מחדש נמוכה</li>
				<li>שונות גבוהה</li>
				<li>מספר בעלי חיים מוגבר נדרש</li>
			</ul>
</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">נפח בלון</td>
			<td>קטן מאוד</td>
			<td>
			<ul>
<li>מחקה restenosis לאחר אנגיופלסטיקה בלון</li>
				<li>עלויות נמוכות הקשורות לרכישת בעלי חיים וטיפול</li>
				<li>זמינות של זנים טרנסגניים ונוקאאוט שונים</li>
			</ul>
</td>
			<td>
			<ul>
<li>גודל קטן של העורקים הראשיים</li>
				<li>דורש מומחיות כירורגית מוסמכת</li>
				<li>בלונים יקרים מאוד</li>
				<li>ההתנפלות נעשתה על הקיר העורקי הרגיל</li>
				<li>קיומו של ציוד מתאים</li>
				<li>סיכונים של סיבוכים כמו דימום או שיתוק</li>
			</ul>
</td>
		</tr>
<tr>
<td>גדול (10</td>
			<td>
			<ul>
<li>מחקה restenosis לאחר אנגיופלסטיקה בלון</li>
				<li>קלות טיפול</li>
				<li>שימוש במכשירים לבני אדם</li>
			</ul>
</td>
			<td>
			<ul>
<li>ההתנפלות נעשתה על הקיר העורקי הרגיל</li>
			</ul>
</td>
		</tr>
<tr>
<td>פגיעה בחוט</td>
			<td>קטן מאוד</td>
			<td>
			<ul>
<li>מחקה restenosis לאחר אנגיופלסטיקה בלון</li>
				<li>קלות טיפול</li>
				<li>שיעור תמותה מינימלי</li>
				<li>עלויות נמוכות הקשורות לרכישת בעלי חיים וטיפול</li>
				<li>זמינות של זנים טרנסגניים ונוקאאוט שונים</li>
				<li>ללא ליקוי פיזי</li>
			</ul>
</td>
			<td>
			<ul>
<li>גודל קטן של העורקים הראשיים</li>
				<li>דורש מומחיות כירורגית פחות מוסמכת</li>
				<li>ההתנפלות נעשתה על הקיר העורקי הרגיל</li>
				<li>קיומו של ציוד מתאים</li>
			</ul>
</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">השתלת סטנט</td>
			<td>קטן מאוד</td>
			<td>
			<ul>
<li>מחקה restenosis ופקקת לאחר השתלת סטנט</li>
				<li>עלויות נמוכות הקשורות לרכישת בעלי חיים וטיפול</li>
				<li>זמינות של זנים טרנסגניים ונוקאאוט שונים</li>
			</ul>
</td>
			<td>
			<ul>
<li>גודל קטן של העורקים הראשיים</li>
				<li>דורש מומחיות כירורגית מוסמכת</li>
				<li>סטנטים קטנים אינם זמינים</li>
				<li>ההתנפלות נעשתה על הקיר העורקי הרגיל</li>
				<li>תמותה מוגברת</li>
				<li>קיומו של ציוד מתאים</li>
				<li>סיכונים של סיבוכים כמו דימום או שיתוק</li>
			</ul>
</td>
		</tr>
<tr>
<td>גדול (10</td>
			<td>
			<ul>
<li>מחקה מנוחה ופקקת לאחר השתלת סטנט</li>
				<li>קלות טיפול</li>
				<li>שימוש במכשירים לבני אדם</li>
			</ul>
</td>
			<td>
			<ul>
<li>ההתנפלות נעשתה על הקיר העורקי הרגיל</li>
			</ul>
</td>
		</tr>
</tbody></table>שולחן 2 . יתרונות וחסרונות של מודלים קיימים של פגיעה עורקית.

מחקר זה מתאר הליך פולשני עבור אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים. בהשוואה לשיטות אחרות באמצעות פגיעה חשמלית או הקפאה, פציעה כתוצאה מכני מחקה את המצב האנושי של restenosis לאחר טיפולים revascularization והוא אידיאלי לחקר המנגנונים המולקולריים המעורבים.

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לחקות את המצב האנושי של restenosis לאחר טיפול revascularization בעכברים כדי ללמוד את המנגנונים המולקולריים המעורבים בתגובת הפציעה. היתרונות העיקריים של טכניקות אלה הם כי הוא מאוד לשכפל בקלות לבצע, המאפשר לחוקר עם ניסיון מינימלי אפילו ליישם את השיטה במודלים בעלי חיים קטנים. הפגנת ההליך תהיה אדלינה קוראג', פוסט-דוק למעבדה שלי.כדי לגרום היפרליפידמיה, להאכיל שישה עד שמונה שבועות בן 18 עד 20 עכברי נוקאאוט אפו גרם דיאטה אתרוגנית שבוע לפני ההליך הכירורגי ועד ניתוח פלאק טרשת עורקים. ביום הניתוח, לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן, לגלח את העכבר הרדמה באזור הצוואר הגחוני ולחטא את העור החשוף עם Betadine. בצע חתך עור בסנטימטר אחד באזור החציוני של הצוואר מעל קנה הנשימה והפרד את שני גופי השומן כדי לקבל תצוגה מלאה של אזור קנה הנשימה.באמצעות מפשק אחד להחזיק את שכבת השריר פתוח, לחשוף את העורק הראשי ולהשתמש מדפים מעוגלים חדים להפריד את העורק מן העצב vagus ואת וריד הצוואר עד אזור bifurcation של העורק הראשי הפנימי וחיצוני גלוי. באופן רופף, מניחים תפר משי באורך 7 ס"מ 0-5 מתחת לעורק הראשי קרוב לקשת העורק הראשי, ואחריו אחד ממוקם באופן רופף 1.5 ס"מ ארוך 0-7 תפר משי סביב העורק הראשי החיצוני קרוב לנקודת bifurcation, ואחד ממוקם באופן רופף 1.5 ס"מ ארוך 0-7 לולאת תפר משי דיסטלי מן bifurcation ככל האפשר. מניחים עוד תפר משי פתוח באורך 1.5 ס"מ 0-7 מתחת לעורק הראשי הפנימי.לאחר מכן מקם את החיה עם הראש בתמקם השעה שש. מיד, לסגור בחוזקה את לולאות התפר על העורק הראשי הפנימי ואת התפר הדיסטלי על העורק הראשי החיצוני. השתמש מטחני המוסטט כדי למשוך את הקצוות של תפר 0-5 כדי לעצור את זרימת הדם דרך העורק הראשי המשותף.באמצעות מספריים קטנים, להפוך עורק קטן של מחצית קוטר הכלי דיסטלי לעורק הראשי החיצוני בין שתי לולאות ולהכניס אלכוהול 14 אינץ' מלוטש מדריך גמיש לח עם ירידה של 0.9% נתרן כלורי לתוך העורק הראשי המשותף דרך החתך. כדי למנוע התפרצות עורקים במהלך חתך Y, השתמש guidewire מלוטש בקפידה. להשיג denudation אנדותל על ידי העברת החוט לאורך כלי השיט תוך סיבוב שלוש פעמים, ואז לסגור בחוזקה את הלולאה proximal על העורק הראשי החיצוני לחתוך את התפרים סביב העורקים הראשיים הנפוצים ופנימיים כדי לשחזר את זרימת הדם.לאחר מכן, להסיר את המפשקים ולהחזיר את שכבת השריר ואת שני גופי השומן למצב פיזיולוגי. סגור את העור עם קליפים מתכתיים, ולאחר מכן לאפשר לעכבר להתאושש בצד שמאל שלה תחת אור אינפרא אדום עם ניטור עד שהוא recumbent מלא. ניתן להעריך את היווצרות הניאואיטימה באמצעות כתמי מוואט.גודל הפלאק הכולל, אשר יכול להשתנות בין 70, 000 ו 100, 000 מיקרון בריבוע, בהתאם למיומנות של המנתח, לאחר מכן ניתן לחשב עבור כל מדגם באמצעות התוכנה המתאימה. הפלאק המפותח דומה ל-restenosis מיידית, המורכבת בעיקר מתרבות והיגרו של תאי שריר חלקים מהמדיום. התוכן של תאי השריר החלקים מייצג כ-30 עד 40% מהפלטה, בעוד שהמאקרופאגים שנמצאו בתוך הניאו-ינטימה של הכלי הפצוע מהווים 15 עד 25% ממספר התא הכולל.אנדותליזציה מחדש בדרך כלל מגיע 80 כדי 90% לאחר שלושה שבועות צריך להיות כמעט שלם לאחר ארבעה שבועות. כדי לעקוב אחר צמיחת הפלאק במהלך התפתחותו, הניתוח יכול לחזור על עצמו בנקודות זמן מרובות לאחר הפגיעה בחוט בהתאם לשאלה הניסיונית. לאחר השליטה, טכניקה זו ניתן להשלים בתוך 15 דקות אם הוא מבוצע כראוי.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי האזור הכירורגי צריך להיות hydrated כל הזמן כדי למנוע ייבוש כדי להפוך את מניפולציה חוט קל יותר.

induction-of-accelerated-atherosclerosis-in-mice-the-wire-injury-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

השרוול הצרת המוצגים במאמר זה נועד לגרום לטרשת עורקים בעורק התרדמה Murine משותף. בשל בצורת חרוט של לומן הפנימי שלה את האזיק מושתל יוצרת אזורים מוגדרים היטב של מתח נמוך, גזירה גבוהה oscillatory מפעילה את התפתחות טרשת עורקים של פנוטיפים דלקתיות שונות.

השרשה של קאף הראש מפעילה שאר מתח טרשת עורקים המושרה עכברים

ניתוח Ex vivo של נגעים עורקיים ממודלים של בעלי חיים של מחלות לב וכלי דם מסתמך באופן קלאסי על טכניקות היסטולוגיות ואימונוהיסטוכימיות. אלה מספקים מדידות דו-ממדיות בנגעים תלת מימדיים. כתב יד זה מתאר יצירת נגעים עורקיים לניתוח כמותי בתלת מימד באמצעות טומוגרפיה של הקרנה אופטית.

דור וQuantitation 3 ממדים של עורקי פצעים בעכברים באמצעות טומוגרפיה הקרנה אופטית

וידאו זה מראה שני מודלים של פיתוח פלאק בעורקי intimal עכבריים ומדגיש את ההבדלים בהיפרפלזיה myointimal וטרשת עורקת.

גרימת Myointimal היפרפלזיה נגד טרשת עורקים בעכברים: מבוא של שני מודלים חוקיים

אנו מתארים טכניקה כירורגית המייצרת פגיעה בחוט בעורק הירך של עכברים כדי לגרום להיפרפלזיה ניאו-אינטימית לשמש כמערכת בדיקה מודל לאספקה פרי-וסקולרית של תרכובות טיפוליות לעיכוב רסטנוזיס.

דגם Murine של עורק הירך חוט פגיעה בהשרשה של perivascular החדרת תרופות תיקון

מודל פציעת חוט עורק הירך העכבר של היצרות הוא מאתגר מבחינה טכנית. בפרוטוקול זה אנו מציגים את הפרטים הטכניים מפתח חיוניים לביצוע בהצלחה פציעת חוט כדי לגרום neointima העקבי למחקרים של היצרות.

דגם Murine של עורקי היצרות: היבטים טכניים של עצם הירך חוט פגיעה

מאמר זה מדגים מודל מאתר ללמוד על התפתחות היפרפלזיה myointimal (MH) לאחר פציעה בלון אבי העורקים.

מבוסס על בלון פציעה לזירוז היפרפלזיה Myointimal באבי העורקים בטן העכבר

אנו מתארים פרוטוקול לזירוז טרשת עורקים אצל שורש אבי העורקים ספקיות- / - עכברים שקיבלו עם דיאטה atherogenic, באמצעות שחרור רצוף של אלדוסטרון. שיטות לאפיון הרכב הפלאק מתוארים גם.

אינדוקציה של הפלאק טרשת עורקים באמצעות הפעלה של מינרלוקורטיקואידים הקולטנים בעכברים אפוליפופרוטאין E לקויה

תחת הרדמה מספקת, לב העכבר הוחצן דרך החלל הבין-קוסטלי, ואוטם שריר הלב נגרם בהצלחה על ידי קשירת העורק היורד הקדמי השמאלי (LAD) באמצעות חומרים הזמינים ברוב המעבדות.

שיטה פשוטה שונה להשראת אוטם שריר הלב בעכברים

כאן אנו מתארים שיטה פשוטה וניתנת לשחזור שיכולה לגרום לאוטם שריר הלב או לפגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים על ידי קשירה מדויקת של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי באמצעות מיקרומניפולציה.

השראת אוטם שריר הלב ופגיעה באיסכמיה של שריר הלב בעכברים

אנו מתארים הליכים לכימות ואפיון נגעים טרשת עורקים במודלים של עכברים באמצעות חתך מדויק של סינוס אבי העורקים ואבי העורקים העולה בשילוב עם ניתוח היסטוכימי ואימונוהיסטוכימי.

ניתוח כמותי ואפיון של נגעים טרשת עורקים בסינוס אבי העורקים של העכברים

למד שיטת פגיעת חוט ליצירת טרשת עורקים מואצת בעכברים Apoe knockout. מודל זה חוקר מנגנונים מולקולריים של רסטנוזיס ונבדק באמצעות צביעת Movat.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

גלה סרטונים נוספים