The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

Shiang-Jong Tzeng

doi:10.3791/54582

הבידוד, בידול, וכימות של האדם נוגדן מפריש תאים B מדם: ELISPOT בתור Readout פונקציונלי של חסינות ה...

JoVE Journal
Immunology and Infection

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Immunology and Infection

The Isolation, Differentiation, and Quantification of Human Antibody-secreting B Cells from Blood: ELISpot as a Functional Readout of Humoral Immunity

הבידוד, בידול, וכימות של האדם נוגדן מפריש תאים B מדם: ELISPOT בתור Readout פונקציונלי של חסינות הלחות

Full Text

15,974 Views

08:26 min

December 14, 2016

DOI: 10.3791/54582-v

Shiang-Jong Tzeng¹

¹Graduate Institute of Pharmacology, College of Medicine,National Taiwan University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

דם היקפי אנושי משמש בדרך כלל להערכת התגובה החיסונית ההומורלית. כאן, מתוארות השיטות לבידוד תאי B אנושיים מדם היקפי, התמיינות תאי B אנושיים לתאי B מפרישי נוגדנים (AB) (ASCs) בתרבית, וספירת סך ה-IgM וה-IgG-ASCs באמצעות בדיקת ELISpot.

המטרה הכוללת של מתודולוגיית ELISpot זו היא לאפשר כימות של תאי B המפרישים נוגדנים אנושיים מהדם. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הביו-רפואי על האימונולוגיה של תאי B ומחקר חיסונים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת זיהוי ומדידה של תאי B המפרישים נוגדנים ברמת התא הבודד.

מי שידגים את ההליך יהיה צונג-צ'י צנג, סטודנט לתואר שני מהמעבדה שלי. מיד לאחר קבלת דגימת דם של 10 מ"ל מהווריד הקוביטלי החציוני לתוך שפופרת של 15 מ"ל המכילה אשלגן בתוספת EDTA, הפוך את הצינור מספר פעמים כדי למנוע היווצרות קרישים. לאחר מכן הוסף 35 מ"ל של מאגר ליזה של תאי דם אדומים אוטוקלאב לתאים למשך חמש דקות דגירה בטמפרטורת החדר.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos