מדידת נכות נוירולוגית מתקדמת עכבר דגם של טרשת נפוצה

המטרה הכוללת של הליך זה היא להעריך את הליקוי הנוירולוגי המתקדם בעכברים עם מחלות דמיאלינטיות כרוניות. אנו משיגים זאת על ידי מתן המלצות לבדיקת פרמטרים המתאימים לחקר נכות נוירולוגית ארוכת טווח במודל וירוס Theilers של טרשת נפוצה מתקדמת, באמצעות מבחן Rotarod. הליך זה מספק בסיס שלפיו ניתן להעריך את הרלוונטיות של מודל העכבר לדמיאלינציה מתקדמת ואת התועלת שלו לבדיקת טיפולים שמטרתם לטפל במצב נוירולוגי מתקדם כגון טרשת נפוצה.

היתרון של מבחן אופטימלי זה על פני מערכת הניקוד החזותי המסורתית הוא שהוא מייצר משתנה אובייקטיבי לכימות ההשפעה ארוכת הטווח של טיפולים ופרוצדורות ניסיוניות על תפקודים מוטוריים. תדגים את ההליך הזה דרלין רויס, טכנאית מהמעבדה לנוירואימונולוגיה בדארטמות'. על מנת להעריך את תיאום שיווי המשקל הבסיסי והשליטה המוטורית, התחל את פרוטוקול ההסתגלות חמישה ימים לפני הדבקה ב-TMEV על ידי מתן אפשרות לעכברים להתאקלם בחדר הבדיקה למשך 30 דקות לפחות.

בזמן שהעכברים מתאקלמים, הגדר מראש את ה-Rotarod עם מינוס חמישה פרמטרי אימון DPI. לאחר מכן, הרם עכבר בזנב והנח אותו על המוט הפונה הרחק מהמפעיל. אם העכבר נופל או קופץ, הנח אותו בחזרה בנתיב שלו על הרוטרוד עד שכל העכברים יהיו במקומם.

לאחר טעינת כל ארבעת העכברים, לחץ על כפתור ה-Enter כדי להתחיל את הניסוי. ודא שהטיימרים מתחילים אוטומטית, ושים לב לסיבובים לדקה המוצגים עבור כל נתיב. לאחר מכן, כאשר כל חיה נופלת מהמוט, רשום את מהירות המוט בזמן הנפילה, כמו גם את משך הזמן שבו החיה נשארה על המוט.

לאחר שכל העכברים נפלו, השתמש ברקמה כדי להסיר כל צואה ושתן מהמוט מכיוון שנוכחות של שתן וחומר צואה עלולה להשפיע על יכולתם של עכברים לאחוז כראוי במוט. לאחר מנוחה של שלוש דקות תנו לעכברים ניסיון שני ואז שלישי שבו הזמן המקסימלי לניסוי בודד הוא 240 שניות. נהל בסך הכל שלושה ניסויים במהלך כל יום בדיקה.

לבסוף, החזירו את העכברים לכלוב הביתי שלהם. בימים שליליים ארבע, שלילי שלוש, שלילי שניים ושלילי אחד PI, הגדירו מראש את הרוטרוד עם הפרמטרים המתאימים של פרוטוקול האימון וחזרו על ניסוי רוטרוד. התחל בהעברת כלובים המכילים עכברי SJL נקבות בנות ארבעה עד שישה שבועות מהמתלה לחלל עבודה נוח.

השתמש באגרופים באוזניים כדי לסמן את העכברים כדי לאפשר הערכה פרטנית של מחלה קלינית והיסטולוגית. לאחר מכן, שאב 30 מיקרוליטר של מלאי מדביק TMEV ב-PBS לתוך מחט מזרק אינסולין בגודל 29. הכן את מכונת גז ההרדמה על ידי הקפדה על נוכחות כמויות נאותות של חמצן ואיזופלורן למשך ההליך.

הנח את החיה בתא האינדוקציה ואטום את החלק העליון. לאחר מספר דקות, הוציאו את החיה מהתא, ובדקו את העכבר על ידי צביטה של כרית כף הרגל כדי להבטיח הרדמה מספקת. לאחר מכן, נקו את מקום ההזרקה עם 70% אלכוהול איזופרופיל והזריקו את 30 המיקרוליטרים של המלאי המזהם TMEV לחצי המוח הימני על ידי הזרקה ביד חופשית.

לבסוף, החזר את העכבר לכלוב האחיזה שלו ברגע שהוא ערני ונייד לחלוטין. ביום השביעי לאחר ההדבקה, הגדר מראש את הרוטרוד עם הפרמטרים הניסיוניים המתאימים, וחזור על תרגיל האימון המלא של רוטארוד עם פרמטרי פרוטוקול הניסוי המתאימים. לאחר הניסוי השלישי בכל יום, שקלו כל עכבר ורשמו את משקל הגוף בגיליון הנתונים.

בדוק את העכברים פעמיים בשבוע במשך ששת השבועות הבאים באותו אופן. לאחר שישה שבועות, בדוק את העכברים פעם בשבוע עם אותו פרוטוקול ניסוי במשך 150 ימי ניסוי בממוצע. לאחר מכן, נתח את הנתונים הגולמיים, והביע כמדד תפקודי נוירולוגי, או NFI.

כדי לקבוע את ערך ה-NFI הבודד, חשב את סף הביצועים הבסיסי של כל עכבר כממוצע של כל זמני הריצה בין 15 ל-45 ימים לאחר ההדבקה. על מנת לאפשר הערכה של ביצועים מוטוריים כתוצאה מדמיאלינציה מתקדמת ולשלול כל ליקויים תורמים עקב דלקת מוח מוקדמת. לאחר מכן, חשב את ערך ה-NFI כממוצע של שלושת זמני הריצה הממוצעים האחרונים חלקי סף הביצועים הבסיסי של העכבר.

לבסוף, חשב NFI מותאם על ידי חלוקת ערך ה-NFI בערך ה-NFI הממוצע שהתקבל על ידי הקבוצה שטופלה במזויף באותו יום ספציפי. איור זה מראה שהעכברים הנגועים ב-TMEV מציגים ליקויים נוירולוגיים מוגברים משמעותית לאורך זמן בהשוואה לעכברי ביקורת. זיהום כרוני בשני זנים שונים של TMEV השפיע לרעה על זמני הריצה של העכברים.

לשתי הקבוצות של עכברים נגועים ב-TMEV היו ערכי NFI נמוכים משמעותית מאלו של עכברי דמה. יתר על כן, לא היה הבדל בהשוואה בין התקדמות הנכות בעכברים שנדבקו בזן BeAn, לבין אלה שנדבקו בזן DA בכל נקודות הזמן. בעקבות הליך זה ניתן לבצע את שיטות הניקוד החזותי, כמו מבחן הרפלקס הנכון, על מנת להעריך במהירות את הבריאות הכללית בעכברים.

לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום טרשת נפוצה ומחלות ניווניות לבחון את יעילותם של טיפולים והתערבויות אחרות בעיכוב נכות מתקדמת. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להעריך את הנכות המתקדמת לטווח ארוך בעכברים. הליך זה שימושי לא רק באיתור הנכות הנוירולוגית המתקדמת במודל נגיף Theiler, אלא הוא שימושי גם בחשיפת ליקויים במודלים עכבריים אחרים של מחלות ניווניות.