Name: התרמת התחדשות פוליפ שלמה מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: למדו שיטה להתרמת התחדשות פוליפ שלם מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני התחדשות רקמות בדגם ימי מודל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי תאי גזע ניו יורק למדע (NYSTEM C028107) מענק GHT.

מיזוג 1. של בעלי חיים עבור טמפרטורה, תזונה מחזור אור / חושך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג מבוגרי vectensis Nematostella מאחד מעבדות Nematostella הרבות ברחבי העולם, או ספק ללא כוונת רווח (לוח 1) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור Nematostella בטמפרטורה קבועה (בדרך כלל בין 18 ו -21 מעלות צלזיוס) בחושך, ב &quot;1 / 3x&quot; מים לים מלאכותיים (ASW) במליחות של 12 חלקים לאלף (ppt). לשמור על תרבויות במנות תרבות זכוכית פשוטה סודה-סיד, בדרך כלל 250 מ&quot;ל או 1.5 ליטר קיבולת 11. הערה: תנאי התרבות פשוטים אלה משמשים בדרך כלל בין מעבדות ללמוד Nematostella, אך טיפול תרבות יכול גם להיות אוטומטי 19. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Feed הארטמיה Nematostella טרי בקעו Nauplii 2 - 4x בשבוע. ציסטות הארטמיה האץ במלוא העוצמה (36 ppt) או 1 / 3x ASW על 30 מעלות צלזיוס, בצלחת זכוכית מלבני רדוד 20 או בכל מספר של בקנה מידה קטנה, מדגרות ארטמיה מסחריות או תוצרת בית. אם באינקובטור אינו זמין, שרימפס יבקעו ב RT אבל לעשות זאת לאט יותר. הערה: זה בדרך כלל דורש יותר מ -24 שעות להשלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חלף מי תרבות כלנית לפחות פעם בשבוע. לבריאות המבוגרת הטובה ביותר, נקי (ללא סבון) תרבות קערות פעם בשבוע של פרשות ריר מצטברות, אשר מעיילת הקערה יכולים מלכודת מזון שלא נאכל ופסולת, לסבך את החיות. </li></ol> בחירה 2. והרפיה של בעלי חי אוויר התזונתי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גודל בהתאמה בחר פוליפים של באותו אורך כ (3 - 5 ס&quot;מ, כאשר באופן טבעי רגוע) ומניחים אותם בקערה מופרד המושבה במשך שלושה ימים לפני קטיעה. הערה: מספר בעלי החיים שנבחרו לחיתוך ייקבע על ידי הניסוי מתנהל, כמובן, אבל באופן כללי אנו ממליצים לפחות חמישה בעלי חיים לכל נקודות לדוגמא עם שש משוכפלים. כָּך,בניסוי טיפוסי מינימום של 30 חיות יהיה שנבחר מראש. באופן כללי, זה חכם כדי לבחור יותר מהמספר המזערי (30) מאז קטיעות כי הם לא סדירים (ראו להלן) יכול מאוחר יותר להשפיע ניקוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוציאים את המאפה של חיות שנבחרו מהחממה אל האור בחדר לפחות שעה אחת לפני קטיעה. הערה: זמן חשיפה לחדר אור תנודות של טיפול צפוי לגרום החיות להתכווץ, ולכן הם צריכים להיות מותאמים או &quot;רגועים&quot; על ידי דגירה על ספסל המעבדה. בעלי חיים יהפכו עקשן לגעת וחשיפה לאור ובשלב כי ניתן להעביר על ידי pipetting עדין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: להרדים את החיות על ידי הוספת 7.5% MgCl 2 (ב 1 / 3x ASW). בעדינות להוסיף את הפתרון MgCl 2 לקערה עם טפטפת פלסטיק 5 מ&quot;ל סטנדרטי. הערה: למרות חיות תהפוך בסופו של דבר מורגל אל האור מניפולציה פיזית, זה יכול להיות יתרון להרדים בעלי חיים על מנת לקיים או &quot;לתקן&quot; tהוא נרגע מדינה אחרי שהם הפכו 16,21,22 מוארכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש משעמם רחב פיפטה פלסטיק (&gt; 0.5 ס&quot;מ) להעביר (ב 1 / 3x ASW) חמישה בעלי חיים מבריכת צורך לקטוע, לתוך החלק התחתון של צלחת חיתוך זכוכית סטרילית של בקוטר 100 מ&quot;מ המכיל 12 ASW ppt. מניחים את צלחת על הבמה של סטראו עם הגדלה משתנה בין 10 - 40X. הערה: אם בעלי החיים לא הורדמו ורגוע לחיתוך, הם עדיין יכולים להגיב למגע ואת התאורה סטריאוסקופ ובכך עשוי להזדקק כמה דקות להיות רגוע שוב. </li></ol> 3. קטיעה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל סטרילי, לקטוע את physa aboral מכל פוליפ, במטרה להשיג קטע physa כי הוא כ כל עוד זה הוא רחב המכיל לא לפדר. הערה: האתר לחתוך האידיאלי הוא פשוט aboral אל הסיום לפדר. על המטוס של חיתוך ישנו מעבר מ לפדר ראוי l הדקאינס מתאים לכל אחד החדרת mesenterial (ראה איור 1, חיצים). עדר לפדר הוא קריטי משום שהיא מייצרת ריר שעשוי להקל &#39;חיבור&#39; החור 17,30. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את להב סכין המנתחים במגע עם החיה באתר הרצוי של קטיעה. בצע פעולה זו על העצמאית (חופשי), או על ידי בעדינות לתפוס את הגוף של החיה עם # 5 מלקחיים (בסגנון דומון או דומה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים דרך הרקמה על ידי מינוף הלהב המעוקל של אזמל בתנועה &#39;נדנדה&#39; על פני הגוף. הערה: רקמת צריך לנתק בצורה נקייה כמו סכין המנתחים הוא התנדנד ולשחרר את החלק הרצוי physa מן התורם. עם זאת, אם חתיכה קטנה של רקמה עדיין מתחברת לגוף physa, לחתוך אותו עם סכין המנתחים. אל תנסה להפריד בין החלקים מחוברים על ידי משיכת, מכיוון שהדבר עלול לגרום נזק physa. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר כל פוליפ &#39;תורם&#39; נקטע מהצלחת ולהחזיר אותו SEPAקערה שיעור שכותרתו &quot;קטועי גפיים ונקווה &#39;; לתארך את הקערה ולהחזיר אותו לתרבות מניות. הערה: פוליפים קטומים ירפא את הפצע aboral תוך יום ואז יכול להיות מוזן באופן נורמלי. הם להתחדש physa נורמלי מחפש בתוך שבועות ובנקודה את physa ניתן נקטעו שוב אם ירצה בכך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שוטפים את physa נכרת שנותרו בצלחת חיתוך ב ASW 12 ppt, ולאחר מכן להעביר כל physa אל באר סטרילי נפרד בצלחת תרבית תאים רב גם כי יש כבר 10 מ&quot;ל של ASW 12 ppt בכל טוב. הערה: בדוגמא זו נעשתה שימוש צלחת שש היטב, עם כל מחזיק גם 10 מיליליטר של מי ים וחמש נכרת physa. במי ים בכלל צריך לכסות את physa מספיק כדי למנוע חשיפה לאוויר בשל תנועת טיפול אידוי פוטנציאלי. הצלחת או הבארות צריכה מכסה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 3.1 - 3.3 לאסוף לפחות 5 physa בכל טוב מאופק עבור כל טיפול ניסיוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה physa בטמפרטורה אשר provIDE קצב ההתחדשות הטוב ביותר לקראת חקירתם ניסיוני המתוכננת. מניח את הצלחת המכילה את physa לתוך חממה מוסדרת טמפרטורה, בטמפרטורה קבועה נקבעה על ידי השיעור של התחדשות הרצויה. ההערה: physa יהיה לחדש רקמות חסרות ויוצרי פוליפ מלא כאשר מודגרות בטמפרטורות שבין 15 ו -27 מעלות צלזיוס. שיעור ההתחדשות תלוי בטמפרטורה למעט שני השלבים הראשונים. היום הממוצע להגעת שלב 4 עבור כל בטמפרטורות הוא 7 ד לאחר גזירה זו גם עולה בקנה אחד עם התחדשות ב 21 מעלות צלזיוס. בשעה 27 ° C, שלב 4 הוא הגיע כ -3 ימים קודם לכן ב -15 ° C, שלב 4 מתעכב בכ -3 D לעומת התחדשות ב 21 ° C (ראה גם הפניה 10). </li></ol> 4. הערכת התחדשות עם מערכת האחסון הזמני התחדשות Nematostella (NRSS) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון את physa באמצעות מיקרוסקופ סטריאו-מתחם עם magnific משתנהation (10 - 80x). ציון את physa טרי חתוך Nematostella כמו שלב 0 ולהמשיך הבקיע באותו זמן כל קטיעה פוסט יום (DPA) באמצעות NRSS 10. הערה: קריטריוני staging מפתח ופרטים להפנות הפנית 10. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון physa כמו שלב 0 (פצע פתוח) אם physa טרי חתוך מופיע כגוש cup- בצורת דמוי בלון רפוי, עם אתר פצע פתוח צפוי גלוי. הערה: שולי הפצע עלולים גם להישאר ביחד מלכתחילה, אבל הרקמה עדיין תכווץ וחוסר נוקשות. שולי הפצע הפתוח אפשר לראות עוברים התכווצות רדיאלי כמו מרפא הפצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון physa כמו שלב 1 (פצע נסגר) אם פצע הקטיעה מופיע סגור. הערה: מיקום הפצע יתאים הקוטב אוראלי בעתיד. המשטח החיצוני סביב הקוטב האוראלי בעתיד עשוי להתחיל להציג קשתות מובהקות מתאימות הוספות mesenterial שבבסיס רדיאלית הסימטרי endodermal. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ph ציוןYSA כמו שלב 2 (קשתות רדיאלי) אם פני השטח של המוט האוראלי מופיע מנופחים, חושף שמונה קשתות עלה מסודרות בתוך תבנית סימטרית רדיאלית והופרדו חריצים. שימו לב קטן, blebs hemispherical בשיא של הקשתות. הם יהיו על גבוה כמו רחב, חולף סביר, ובתחילה מורכבים על ידי שכבת תאי ectodermal יחידה. הערה: במקרים מסוימים blebs דו שכבתי עשוי לייצב. הערה: בשלב זה או אחר טיולי שכבת ריר עשויה להופיע כדי לתמצת את physa (איור 2) ב &#39;נדן&#39; קרומי. חומר encapsulating זה צריך להסיר כדי להקל ניקוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון physa כמו השלב 3 (Tentacle) אם הניצנים של הזרועות המכילות שכבות רקמת endodermal ו ectodermal נוצרים ביציבות בסוף הפה של לפחות קשתות רדיאלי כמה. הערה: הזרועות ארוכות יותר מאשר הם רחבים הם מינימאלי ניע. Physa מציגה את הגדילה, אך אינפלציה משתנית כך יסודות לפדר עלולים להפוך מולible המשתרעת החדרת mesenterial לתוך חלל הגוף (coelenteron). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון physa כמו שלב 4 (לינארית Mesenteries) אם physa מכיל שמונה mesenteries ברורים, גלויים שמרחיבים לתוך coelenteron מ הוספות בקיר הגוף, עם אורכים אוראליים aboral כי הם יותר מפי שתיים הרוחב רדיאלי שלהם נמדד ממקום שבו הם מופיעים להתחבר אל הלוע בקצה aboral שלה (enterostome). הערה: ארבעה או פחות יש mesenteries &quot;קפלים&quot; קצוות חינם פנימיים. הלוע גלוי. למעלה משמונה זרועות גלויות, ניע ולפעמים הם מתכווצים לתוך הגוף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציון physa כמו שלב 5 (Mesenteries קפלים בעיקר) אם physa יש יותר מארבע mesenteries עם קפול, ואת קפול הוא יותר מלא ומתפתל מאשר בשלב 4. חיה יש כמעט &quot;רגיל&quot; המראה מבוגר, אבל אין גלוי תאי אשכים. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Lenhoff, S. G., Lenhoff, H. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLenhoff%2C+SG+%22Hydra+and+the+Birth+of+Experimental+Biology%3A+Abraham+Trembley%27s+Memoirs+Concerning+the+Natural+History+of+a+Type+of+Freshwater+Polyp+with+Arms+Shaped+like+Horns%22">Hydra and the Birth of Experimental Biology: Abraham Trembley's Memoirs Concerning the Natural History of a Type of Freshwater Polyp with Arms Shaped like Horns</a>. , The Boxwood Press. (1986).</li>
<li>Trembley, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTrembley%2C+A+%22M%C3%A9moires+pour+servir+%C3%A0+l%27histoire+d%27un+genre+de+polypes+d%27eau+douce%2C+%C3%A0+bras+en+forme+de+cornes%22">Mémoires pour servir à l'histoire d'un genre de polypes d'eau douce, à bras en forme de cornes</a>. , Jean & Herman Verbeek. (1744).</li>
<li>Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+tissue+regenerative+capacity+and+mechanisms+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals.</a> Nat Rev Genet. 11 (10), 710-722 (2010).</li>
<li>Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydra%2C+a+fruitful+model+system+for+270+years%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Hydra, a fruitful model system for 270 years.</a> Int J Dev Biol. 56 (6-8), 411-423 (2012).</li>
<li>Gold, D. A., Jacobs, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+dynamics+in+Cnidaria%3A+are+there+unifying+principles%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Stem cell dynamics in Cnidaria: are there unifying principles?</a> Dev Genes Evol. 233 (1-2), 53-66 (2013).</li>
<li>Holstein, T. W., Hobmayer, E., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cnidarians%3A+an+evolutionarily+conserved+model+system+for+regeneration%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Cnidarians: an evolutionarily conserved model system for regeneration?</a> Dev Dyn. 226 (2), 257-267 (2003).</li>
<li>Amiel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Morphological+and+Cellular+Events+Underlying+Oral+Regeneration+in+the+Sea+Anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of Morphological and Cellular Events Underlying Oral Regeneration in the Sea Anemone, Nematostella vectensis.</a> Int J Mol Sci. 16 (12), 28449-28471 (2015).</li>
<li>Warren, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+perlecan%2FHSPG2+gene+and+its+activation+in+regenerating+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evolution of the perlecan/HSPG2 gene and its activation in regenerating Nematostella vectensis.</a> PLoS One. 10 (4), e0124578(2015).</li>
<li>Gong, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrins+of+the+starlet+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Bull%22%5BJournal%5D)">Integrins of the starlet sea anemone Nematostella vectensis.</a> Biol Bull. 227 (3), 211-220 (2014).</li>
<li>Bossert, P. E., Dunn, M. P., Thomsen, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+staging+system+for+the+regeneration+of+a+polyp+from+the+aboral+physa+of+the+anthozoan+Cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">A staging system for the regeneration of a polyp from the aboral physa of the anthozoan Cnidarian Nematostella vectensis.</a> Dev Dyn. 242 (11), 1320-1331 (2013).</li>
<li>Stefanik, D. J., Friedman, L. E., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collecting%2C+rearing%2C+spawning+and+inducing+regeneration+of+the+starlet+sea+anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Collecting, rearing, spawning and inducing regeneration of the starlet sea anemone, Nematostella vectensis.</a> Nat Protoc. 8 (5), 916-923 (2013).</li>
<li>Tucker, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thrombospondin+in+the+anthozoan+Nematostella+vectensis+is+associated+with+the+nervous+system+and+upregulated+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">A thrombospondin in the anthozoan Nematostella vectensis is associated with the nervous system and upregulated during regeneration.</a> Biol Open. 2 (2), 217-226 (2013).</li>
<li>Passamaneck, Y. J., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+proliferation+is+necessary+for+the+regeneration+of+oral+structures+in+the+anthozoan+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell proliferation is necessary for the regeneration of oral structures in the anthozoan cnidarian Nematostella vectensis.</a> BMC Dev Biol. 12, (2012).</li>
<li>Trevino, M., Stefanik, D. J., Rodriguez, R., Harmon, S., Burton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+canonical+Wnt+signaling+by+alsterpaullone+is+sufficient+for+oral+tissue+fate+during+regeneration+and+embryogenesis+in+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Induction of canonical Wnt signaling by alsterpaullone is sufficient for oral tissue fate during regeneration and embryogenesis in Nematostella vectensis.</a> Dev Dyn. 240 (12), 2673-2679 (2011).</li>
<li>Renfer, E., Amon-Hassenzahl, A., Steinmetz, P. R., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+muscle-specific+transgenic+reporter+line+of+the+sea+anemone%2C+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A muscle-specific transgenic reporter line of the sea anemone, Nematostella vectensis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (1), 104-108 (2010).</li>
<li>Burton, P. M., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+novel+gene+expression+between+regeneration+and+asexual+fission+in+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Conserved and novel gene expression between regeneration and asexual fission in Nematostella vectensis.</a> Dev Genes Evol. 219 (2), 79-87 (2009).</li>
<li>DuBuc, T. Q., Traylor-Knowles, N., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiating+a+regenerative+response%3B+cellular+and+molecular+features+of+wound+healing+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Initiating a regenerative response; cellular and molecular features of wound healing in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> BMC Biol. 12, (2014).</li>
<li>Hand, C., Uhlinger, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asexual+reproduction+by+transverse+fission+and+some+anomalies+in+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Invert+Biol%22%5BJournal%5D)">Asexual reproduction by transverse fission and some anomalies in the sea anemone Nematostella vectensis.</a> Invert Biol. 114, 9-18 (1995).</li>
<li>Fritzenwanker, J. H., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+gametogenesis+in+the+basal+cnidarian+Nematostella+vectensis%28Anthozoa%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Induction of gametogenesis in the basal cnidarian Nematostella vectensis(Anthozoa).</a> Dev Genes Evol. 212 (2), 99-103 (2002).</li>
<li>Magie, C., Bossert, P., Aramli, L., Thomsen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Science%27s+super+star%3A+The+starlet+sea+anemone+is+an+ideal+tool+for+student+inquiry%5BTitle%5D)+AND+%22The+Science+Teacher%22%5BJournal%5D)">Science's super star: The starlet sea anemone is an ideal tool for student inquiry.</a> The Science Teacher. 83 (3), 33-40 (2016).</li>
<li>Genikhovich, G., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+hybridization+of+starlet+sea+anemone+%28Nematostella+vectensis%29+embryos%2C+larvae%2C+and+polyps%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">In situ hybridization of starlet sea anemone (Nematostella vectensis) embryos, larvae, and polyps.</a> Cold Spring Harb Protoc. (9), (2009).</li>
<li>Magie, C. R., Pang, K., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+inventory+and+expression+of+Sox+and+Fox+genes+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Genomic inventory and expression of Sox and Fox genes in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> Dev Genes Evol. 215 (12), 618-630 (2005).</li>
<li>Chera, S., Kaloulis, K., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cAMP+response+element+binding+protein+%28CREB%29+as+an+integrative+HUB+selector+in+metazoans%3A+clues+from+the+hydra+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biosystems%22%5BJournal%5D)">The cAMP response element binding protein (CREB) as an integrative HUB selector in metazoans: clues from the hydra model system.</a> Biosystems. 87 (2-3), 191-203 (2007).</li>
<li>Reitzel, A. M., Burton, P. M., Krone, C., Finnerty, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+developmental+trajectories+in+the+starlet+sea+anemone+Nematostella+vectensis%3A+embryogenesis%2C+regeneration%2C+and+two+forms+of+asexual+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Invertebr+Biol%22%5BJournal%5D)">Comparison of developmental trajectories in the starlet sea anemone Nematostella vectensis: embryogenesis, regeneration, and two forms of asexual fission.</a> Invertebr Biol. 126, 99-112 (2007).</li>
<li>Ikmi, A., McKinney, S. A., Delventhal, K. M., Gibson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TALEN+and+CRISPR%2FCas9-mediated+genome+editing+in+the+early-branching+metazoan+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">TALEN and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the early-branching metazoan Nematostella vectensis.</a> Nat Commun. 5, 5486(2014).</li>
<li>Jahnel, S. M., Walzl, M., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+epithelial+organisation+of+muscle+cells+in+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Zool%22%5BJournal%5D)">Development and epithelial organisation of muscle cells in the sea anemone Nematostella vectensis.</a> Front Zool. 11, 44(2014).</li>
<li>Kelava, I., Rentzsch, F., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+eumetazoan+nervous+systems%3A+insights+from+cnidarians%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolution of eumetazoan nervous systems: insights from cnidarians.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 370 (1684), (2015).</li>
<li>Nakanishi, N., Renfer, E., Technau, U., Rentzsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nervous+systems+of+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis+are+generated+by+ectoderm+and+endoderm+and+shaped+by+distinct+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Nervous systems of the sea anemone Nematostella vectensis are generated by ectoderm and endoderm and shaped by distinct mechanisms.</a> Development. 139 (2), 347-357 (2012).</li>
<li>Richards, G. S., Rentzsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+analysis+of+a+SoxB+gene+reveals+neural+progenitor+cells+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Transgenic analysis of a SoxB gene reveals neural progenitor cells in the cnidarian Nematostella vectensis.</a> Development. 141 (24), 4681-4689 (2014).</li>
<li>DuBuc, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+Nematostella+vectensis+embryogenesis+and+late+development+using+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of Nematostella vectensis embryogenesis and late development using fluorescent probes.</a> BMC Cell Biol. 15, (2014).</li>
<li>Kaur, J., Debnath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+at+the+crossroads+of+catabolism+and+anabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Autophagy at the crossroads of catabolism and anabolism.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 16 (8), 461-472 (2015).</li>
<li>Carroll, B., Korolchuk, V. I., Sarkar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acids+and+autophagy%3A+cross-talk+and+co-operation+to+control+cellular+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Amino acids and autophagy: cross-talk and co-operation to control cellular homeostasis.</a> Amino Acids. 47 (10), 2065-2088 (2015).</li>
<li>Glick, D., Barth, S., Macleod, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy%3A+cellular+and+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Autophagy: cellular and molecular mechanisms.</a> J Pathol. 221 (1), 3-12 (2010).</li>
<li>Rodolfo, C., Di Bartolomeo, S., Cecconi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem and progenitor cells.</a> Cell Mol Life Sci. 73 (3), 475-496 (2016).</li>
<li>Guan, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy in stem cells.</a> Autophagy. 9 (6), 830-849 (2013).</li>
<li>Phadwal, K., Watson, A. S., Simon, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tightrope+act%3A+autophagy+in+stem+cell+renewal%2C+differentiation%2C+proliferation%2C+and+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Tightrope act: autophagy in stem cell renewal, differentiation, proliferation, and aging.</a> Cell Mol Life Sci. 70 (1), 89-103 (2013).</li>
<li>Varga, M., Fodor, E., Vellai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Autophagy in zebrafish.</a> Methods. 75, 172-180 (2015).</li>
<li>Varga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+is+required+for+zebrafish+caudal+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Autophagy is required for zebrafish caudal fin regeneration.</a> Cell Death Differ. 21 (4), 547-556 (2014).</li>
<li>Gonzalez-Estevez, C., Salo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+and+apoptosis+in+planarians%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Autophagy and apoptosis in planarians.</a> Apoptosis. 15 (3), 279-292 (2010).</li>
<li>Buzgariu, W., Chera, S., Galliot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+investigate+autophagy+during+starvation+and+regeneration+in+hydra%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Methods to investigate autophagy during starvation and regeneration in hydra.</a> Methods Enzymol. 451, 409-437 (2008).</li>
<li>Tettamanti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+in+invertebrates%3A+insights+into+development%2C+regeneration+and+body+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Autophagy in invertebrates: insights into development, regeneration and body remodeling.</a> Curr Pharm Des. 14 (2), 116-125 (2008).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

שימוש Nematostella כמודל של ריפוי פצעים והתחדשות אהיה יותר ויותר פופולרי. לכן, חשוב להיות מסוגל לדמיין את דפוסי מורפולוגיים של פרוטוקול מסוים לפני ניתוחים תאיים ומולקולריים יעילים ניתן להקצות והשווה. Nematostella יש רמה גבוהה של &quot;גמישות&quot; משובים, יכולת לבצע רפורמה כמעט כל מבנה חסר נקטע בכל מקום, בשלבים שלאחר planula חיים. לפיכך, חוקרים שונים בחנו התחדשות נובעי קטיעה או פציעה באזורים שונים של פוליפים, בגילים שונים וגדלים 7-18. <p class="jov...

התצפית של התחדשות ב הידרה יחיד הייתה האירוע המכונן כניסתו של ביולוגיה כמו 1,2 מדע ניסויי. ההתחדשות נשארת תופעה של משיכה רחבה באופן יוצא דופן כדי ביולוג ולהניח אדם כאחד. פוטנציאל ביולוגים התפתחותיים, קלינאים, מדענים ביו מהנדסים רקמות להבין ולהתגבר על המגבלות על התחדשות אדם עושה ביולוגית התחדשות יותר מעניין מהותי. עכשיו, עם השימוש של טכנולוגיות מתפתחות כגון הגנום רצף רווח והפסד של כלי פונקציה, השדה צפוי ניסה להפריד מנגנון שיקום וכדי בסופו של דבר להבין כיצד שונה מינים יכול להתחדש בעוד שאחרים לא יכולים. מידת האחידות בתגובות מולקולריות, תאית מורפולוגיים נותרה הובהרה, אך עד כה נראה כי התגובות הבסיסיות בקרב בעלי חיים שיכולים להתחדש דומות יותר מאשר יצטרך Imagi היהנד רק לפני עשור 3. צורב בפרט הם קלילים על התחדשות כמעט כל חלקי גופם בתוך קשת רחבה של גיוון מורפולוגיים. מתוך פוליפ מים הבודד הטרי, הדרתי יחד עם הפוליפים הימיים הזעירים לבנות שוניות אלמוגים עצומות, אל בסיפונופורים הקולוניאלי המורכב, כגון Man-O-המלחמה הפורטוגזית, התחדשות היא לעתים קרובות במצב של רבייה, בנוסף מנגנון תיקון או רפורמה חלקי גוף פגומים או אבד כתוצאה מפגיעה וטריפה. אם המינים השונים של צורבים להשתמש מנגנונים דומים או שונים להתחדשות היא שאלה מעניינת ביסודו 4-6. אנחנו, ואחרים כבר בפיתוח anthozoan, Nematostella vectensis כמודל התחדשות 7-17. אנחנו לאחרונה פתחנו מערכת אחסון זמנית לתיאור התחדשות של גוף כולו מחתיכה אחידה מורפולוגית של רקמות נחצתה מן aboraסוף l של הפוליפ 10. בעוד פוליף Nematostella יכולים להתחדש כאשר נחצו ברמה כזו או אחרת, בחרנו לחתוך מבוגרים לעבר עמדת aboral באזור הפשוט ביותר מורפולוגית, את physa, בין שאר כי זה קרוב המטוס הרגיל של ביקוע מיני טבעי 18, וגם בגלל זה תצפית היתרים בניתוחים מולקולריים לאופן שבו גוף כולו מחדש מן הרכיבים מורפולוגיים הפשוטים. מערכת staging התחדשות Nematostella (NRSS) מספקת מערכת פשוטה יחסי של מבחני ביצועים מורפולוגיים שיכול לשמש להבקיע את ההתקדמות של כל היבט של התחדשות ידי physa קטוע, בתנאי תרבות נורמלים או ניסיוני מוטרד מצבים כגון טיפולי מולקולה קטנים, מניפולציה גנטית , או שינוי סביבתי. כצפוי, NRSS הופכת אמצה כמו פיגום מורפולוגיים שעליו האירועים התאיים ומולקולריים של התחדשות יכולים להיות הופנה10. לבסוף השיטה של חיתוך שלנו מייצרת הזמנות כמה חור שנפערו גודל גדול יותר לנקב סיכת נקודה בשימוש במחקר שנערך לאחרונה 17, עדיין הוא לרפא את הפצעים סביב 6 שעות. תיעוד השלב חזותי מעצר והמובחן של סגירת פצע צריכה להציע גישות ניסיוניות להסביר את העצמאות לכאורה של הגודל של פצע ואת הזמן שנדרש כדי לסגור. לפיכך, הבנה ויזואלית עמוקה יותר של תהליך קטיעת aboral, המסופקת על ידי פרוטוקול זה, תסייע חקירות נוספות לתוך מערכת התחדשות המודל הזה ולהרחיב את היישום של מערכת קביעת שלב זו באמצעות Nematostella vectensis.

<table><tbody><tr><td>Nematostella vectensis, מבוגרים</td><td>מעבדה ביולוגית ימית (MBL)</td><td></td> <td>ספק ללא מטרות רווח</td></tr><tr><td>צלחת תרבית זכוכית, 250 מ"ל</td><td>אספקה ביולוגית של קרוליינה</td><td>741004</td><td>250 מ"ל</td></tr><tr><td>צלחת תרבית זכוכית, 1,500 מ"ל</td><td>אספקה ביולוגית של קרוליינה</td><td>741006</td><td>1,500 מ"ל</td></tr><tr><td>פיפטת העברת פוליאתילן, 5&nbsp; מ"ל</td><td>ארה"ב מדעי&nbsp;</td><td>1022-2500</td><td>קדח צר, בוגר</td></tr><tr><td>צינור העברת פוליאתילן, מחודד</td><td>Samco</td><td>202-205</td><td>חתך 1 אינץ' של קצה כדי ליצור קדח רחב</td></tr> חד <tr><td>פעמי אזמל</td><td>נוצות בטיחות סכין גילוח בע"מ</td><td>מס' 10</td><td>להב מס' 10 צריך להיות מעוקל</td></tr> <tr><td># 5 Dumont פינצטה עדינה</td><td>Roboz</td><td>RS5045</td><td>ספקים חלופיים זמינים</td></tr><tr><td>צלחת פטרי פיירקס, קורנינג בקוטר 100 מ"מ</td><td></td><td>3160</td><td>יכול להחליף לוחות פטרי זכוכית אחרים</td></tr><tr><td>צלחת סטרילית 6 בארות</td><td>קורנינג פלקון&nbsp;</td><td>353046</td><td>או דומה מיצרן אחר</td></tr><tr><td>צלחת סטרילית 12 בארות</td><td>Nunc&nbsp;</td><td>150628</td><td>או דומה מיצרן אחר</td></tr><tr><td>צלחת סטרילית 24 בארות</td><td>Celltar, Greiner bio-one</td><td>662-160</td><td>או דומה מיצרן אחר</td></tr><tr><td>ערכת שנאת שרימפס מלח</td><td>מפרץ סן פרנסיסקו; drsfostersmith.com</td><td>CD-154005</td><td>אפשרות לגידול תבנית אפייה פיירקס שרימפס מלח</td></tr><tr><td></td><td>הנפוצה בחנויות</td><td></td> מכולת <td>אפשרות לגידול שרימפס מלח</td></tr><tr><td>תערובת מי ים מלאכותיים 50 גל ומעלה&nbsp;</td><td>אוקיינוס מיידי; drsfoster-smith.com</td><td>CD-116528</td><td>מותגים אחרים עשויים להספיק</td></tr><tr><td>אמבט פלסטיק להכנת ASW</td><td></td><td>פח אשפה פלסטיק נפוץ</td>שונים <td></td> 25 ליטר בסדר</tr><tr><td>פוליפרופילן</td><td>קרבוי קרולינה אספקה ביולוגית</td><td>716391</td><td>למלאי עבודה של ASW @ 12 ppt</td></tr><tr><td>, בוגר, 4,000 מ"ל</td><td>מעבדות PhytoTechnology</td><td>B199</td><td>לדילול של 36 ppt ASW ל 12 ppt</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ ומקור אור</td><td>שונים&nbsp;</td><td></td><td>עם הגדלה רציפה של 1 - 40X</td></tr></tbody></table>

התרמת התחדשות פוליפ שלמה מן aboral physa של שושנת ים הכוכבת nematostella vectensis

Inducing Complete Polyp Regeneration from the Aboral Physa of the Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis

צורבים, ובאופן ספציפי הידרה, היו הבעלים החיים הראשונים הראו להתחדש מבנים שניזוקו או נקטעים, ואכן מחקרים כאלה לטעון השיקו חקירה ביולוגית מודרנית דרך העבודה של Trembley לפני יותר 250 שנה. נכון להיום המחקר של התחדשות חלה התעוררות מחודשת הן באמצעות &quot;קלאסיים&quot; אורגניזמים רגנרטיבית, כגון הידרה, planaria ו Urodeles, כמו גם קשת הרחבת מינים פורש טווח של metazoa, מן ספוגים באמצעות יונקים. מלבד העניין המהותי שלה כתופעה ביולוגית, הבנה כיצד התחדשות עובדת במגוון מינים תרצינה להודיע ​​לנו על האם תהליכי התחדשות לשתף תכונות משותפות ו / או מינים או בהקשר ספציפי מנגנונים תאיים ומולקולריים. כלנית הים כוכבנית, vectensis Nematostella, הוא אורגניזם מודל המתעוררים להתחדשות. כמו ההידרה, Nematostella הוא חבר של המערכה העתיקה, הצורבים, אבל בתוך tהוא בכיתה anthozoa, clade אחותו אל הידרתים כי הוא אבולוציונית יותר הבסיס. לכן היבטים של התחדשות Nematostella יהיו מעניינים להשוות לעומת עם אלה של ההידרה צורב אחרים. במאמר זה, אנו מציגים שיטה לחצות, להתבונן ולסווג התחדשות של סוף aboral של המבוגר Nematostella, אשר נקרא physa. Physa עובר ביקוע טבעי כאמצעי רבייה מינית, ואו ביקוע טבעי או קטיעה ידנית של physa מפעילה מחדש צמיחה הרפורמציה של מורפולוגיות מורכבות. כאן יש לנו קודיפיקציה שינויים מורפולוגיים פשוטים אלה בתוך מערכת Staging התחדשות Nematostella (להלן NRSS). אנו משתמשים NRSS כדי לבחון את ההשפעה של chloroquine, מעכב פונקציה ליזוזומלית שחוסמת autophagy. התוצאות מראות כי התחדשות של מבנים פוליפ, ובמיוחד mesenteries, הוא לא נורמלי כאשר autophagy מעוכבת.

ההתקדמות של אירועים מורפולוגיים במהלך רגנרציה ב physa הכרות מוצג באיור 1 א ', הכולל נופים נציג physa בכל שלב NRSS. האתר לחתוך physa הטיפוסי מותווה על המבוגר (ראשי החץ). הצילומים איור 1A להראות התחדשות מתקדמת של מבנים אוראלי הגוף מפני physa טרי ביקע פוליפ נוצר באופן מלא. איור 1B, C להראות את הסדר של המחיצה הפנימית, mesenteries, בשלב 4 ושלב 5, בהתאמה. שימו לב כמה mesenteries בשלב 4 יחסר "קפול", אבל כ...

כאן אנו מדגימים כיצד לגרום ולנטר התחדשות בשושנת ים הכוכב Nematostella vectensis, מודל אנתוזואן קנידרי. אנו מדגימים כיצד לקטוע ולסווג התחדשות באמצעות מערכת בימוי מורפולוגית, ואנו משתמשים במערכת זו כדי לחשוף דרישה לאוטופגיה בהתחדשות מבני פוליפ.

התרמת התחדשות פוליפ שלמה מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis

Cnidarians, and specifically Hydra, were the first animals shown to regenerate damaged or severed structures, and indeed such studies arguably launched ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא להמחיש את הסדרה הצפויה של שינויים מורפולוגיים שהתרחשו במהלך התחדשות של פוליפ שלם מקטע זעיר של רקמה שהוסר מהקצה האוראלי של nematostella vectensis שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בביולוגיה של התחדשות, כגון כיצד תאים באתר הפצע מתארגנים מחדש ונפרסים כדי ליצור מחדש את המבנים החסרים. הרעיון לשיטה זו עלה לי לראשונה מכיוון שרציתי לראות כיצד פוליפ מורכב יחסית יכול להרכיב את עצמו מחדש החל מכמות המידע המורפולוגית הנמוכה ביותר. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שהתקדמות השלב לאחר הפציעה הראשונית מוסתרת לפעמים על ידי קרום רירי.בדרך כלל אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו להשיג הפרדה מלאה של הרקמה במקום הפצע, בגלל האופי הרך, הדביק והג'לטיני של הפוליפ. התחל הליך זה עם התניה של nematostella vectensis כמתואר בפרוטוקול הטקסט. חשוב במיוחד כאשר משתמשים בטכניקה זו שבעלי החיים שנבחרו יהיו באותו גודל, ויש להם את אותה היסטוריה תרבותית, כגון האכלה זהה ופרמטרים אחרים של מצב.הוציאו את המנה של בעלי חיים נבחרים מהחממה לאור החדר לפחות שעה לפני הקטיעה. השתמש בפיפטה מפלסטיק רחב קדח כדי להעביר את חמשת בעלי החיים מהבריכה לכריתת צלחת חיתוך זכוכית סטרילית בקוטר 100 מילימטר המכילה מי ים מלאכותיים במליחות של 12 חלקים לאלף. הנח את המנה על הבמה של מיקרוסקופ סטריאו עם הגדלה משתנה בין פי 10 ל-40x.בחר פוליפים תואמים בגודל בערך באותו אורך והניח אותם בקערה המופרדת מהמושבה למשך שלושה ימים לפני הקטיעה. בעזרת אזמל סטרילי, כרתו את הפיזיה האבורלית מכל פוליפ כדי לקבל קטע של הפיזה שאורכו בערך כמו שהוא רחב ואינו מכיל מזנטריה. כדי להשיג זאת, הנח את להב האזמל במגע עם החיה באתר הקטיעה הרצוי.עשו זאת ללא סיוע או על ידי אחיזה עדינה בגוף החיה עם מלקחיים מספר חמש. חותכים את הרקמה על ידי מינוף הלהב המעוקל של האזמל בתנועת נדנוד על פני הגוף. הסר כל פוליפ תורם קטוע מהצלחת והחזיר אותו לקערה נפרדת עם הכיתוב קטועי גפיים.לאחר תיארוך הקערה, החזירו אותה לתרבות המלאי. שטפו את הפיזה שנכרתה שנותרה בכלי החיתוך במי ים מלאכותיים במליחות של 12 חלקים ל-1,000. לאחר מכן, העבירו כל פיזה לבאר סטרילית נפרדת בצלחת תרבית תאים מרובת בארות שיש בה 10 מיליליטר מי ים מלאכותיים במליחות של 12 חלקים ל-1,000 בכל באר.חזור על שלבים אלה כדי לאסוף לפחות חמש פיסות בכל באר שישמרו לכל טיפול ניסיוני. הנח את הצלחת המכילה את הפיזה לתוך חממה מווסתת טמפרטורה בטמפרטורה קבועה הנקבעת על ידי קצב ההתחדשות הרצוי. ציין את הפיזיה באמצעות מיקרוסקופ מורכב סטריאו עם הגדלה משתנה.ציין את ה-nematostella physa הטרי שנחתך כשלב אפס, והמשיך לצבור ניקוד באותה שעה בכל יום לאחר הקטיעה, או DPA, באמצעות ה-NRSS. ציין את הפיסה כשלב אפס אם פיזה שזה עתה נחתכה מופיעה כמסה בצורת הדומה לבלון רפוי עם אתר פצע פתוח שסביר להניח שנראה לעין. ציין פיזיה כשלב ראשון אם פצע הקטיעה נראה סגור.ציון פיזיה כשלב שני אם פני השטח של עמוד השמיעה נראים מנופחים, וחושפים שמונה קשתות מוגבהות המסודרות בתבנית סימטרית רדיאלית ומופרדות על ידי חריצים. בשלב השני, התבונן בכתמים חצי כדוריים קטנים בקודקוד הקשתות שגובהם כרוחב של כנראה חולפים, ומורכבים ראשונית משכבת תאים אקטודרמלית אחת. ככל שהפיזיה מזדקנת, היא עלולה להיות עטופה ברירית, אותה יש להסיר בזהירות בעזרת מלקחיים.ציון פיזה כשלב שלישי אם ניצני הזרועות המכילים שכבות רקמה אנדודרמיס ואקטודרמיס נוצרים ביציבות בקצה השמיעה של לפחות כמה קשתות רדיאליות. ציין פיזה כשלב רביעי אם הפיזיה מכילה שמונה מזנטריות נפרדות הנראות לעין המשתרעות בקולנטרון מהחדרות בדופן הגוף עם אורכי אבורה שמיעתיים שהם יותר מפי שניים מרוחבם הרדיאלי הנמדד מהמקום שבו הם נראים כמתחברים ללוע בקצה האבורלי שלו, או לאנטרוסטום. לבסוף, ציין פיזיה כשלב חמישי אם לפיזיה יש יותר מארבעה מזנטריות עם קפלים, והקפלים מלאים ומתפתלים יותר מאשר בשלב ארבע.בשלב החמישי, לחיה יש מראה בוגר כמעט רגיל, אך אין תאי בלוטת המין הנראים לעין. קבוצה זו של ביקורת nematostella physa שטופלה ב-0.1 אחוז DMSO התחדשה לחלוטין לשלב החמישי. פיזיה שטופלה בכלורוקווין, לעומת זאת, לא הצליחה ליצור לחלוטין מזנטריות שלמות.תקריב מראה הן את הנוכחות והן את היעדר הקפלים במזנטריות בפיזה שהודגרה בכלורוקווין. גרף זה ממחיש את התוצאות המצטברות של הטיפול בכלורוקווין. כל טיפול בין 10 ל-50 מיקרו-טוחנת גרם לפגמים דומים, בעיקר היעדר רפורמה מלאה של המזנטריות בכך שהמזנטריות חסרות קפלים.לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך פחות משעה עבור כל צלחת בת שש בארות המכילה 30 פיזה חתוכה. הניקוד מהיר, ואולי דורש חצי שעה עבור כל צלחת משוכפלת. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לקטוע את הפיזיה כדי לדמיין את השינויים המורפולוגיים המתרחשים במהלך התחדשות של פוליפ שלם מקטע זעיר של רקמה אבורית.היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מספקת שלבים מורפולוגיים בהם ניתן להצמיד את האירועים המולקולריים העומדים בבסיס התחדשות של פוליפ שלם מכוס רקמה אחידה מבחינה ויזואלית. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להתנות מראש את בעלי החיים ביחס להיסטוריה התזונתית, לחתוך לשניים כדי לא לכלול מזנטריה בוגרים, ולתקנן את גודל הפיזיה המתחדשת כדי להפחית את השונות בתוך הטיפולים. בעקבות הליך זה, ניתן להעריך את ההשפעות של מוטציות גנטיות או הפרעות במסלול האיתות עם מולקולות קטנות, למשל.או ששינויים מורפוגנטיים יכולים להיות בקורלציה עם ניתוח מיקרוסקופי של התפשטות עצמית, מעקב אחר שושלת או ביטוי גנים באתר שני. טכניקה זו תסלול את הדרך לחוקרים בתחום הביולוגיה של ההתחדשות לחקור את הביולוגיה של התא, מסלולי האיתות והתהליכים המורפוגנטיים העומדים בבסיס יכולת ההתחדשות המדהימה של אורגניזם מודל זה.

inducing-complete-polyp-regeneration-from-aboral-physa-starlet-sea

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

שיטות המייצרות עוברי morphant חיוניות ללמוד מנגנוני התפתחות ורשתות רגולציה גן. כוכב הים Patiria miniata הוא מערכת מודל מתעורר ללימודים אלה. כאן אנו מציגים פרוטוקול לקבלת תאי רבייה, בהפקת תרבויות של עוברים, וmicroinjection המהיר של zygotes ממין זה.

שיטה לMicroinjection של Minata Patiria Zygotes

Planarian Schmidtea התיכון ונמצא היא דוגמנית מעולה ללימוד בתאי גזע והתחדשות רקמות. פרסום זה מתאר שיטה להסרת איבר אחד, הלוע, באופן סלקטיבי על ידי חשיפת לבעלי חיים אזיד הנתרן כימי. פרוטוקול זה גם מתאר שיטות לניטור הלוע התחדשות.

כימית קטיעה והתחדשות של הלוע ב Planarian התיכון ונמצא Schmidtea

Ciliate ענק, Stentor coeruleus, היא מערכת מצויינת ללמוד התחדשות ואף ריפוי פצעים. אנו מציגים את הליכי הקמת Stentor תרביות תאים תאים בודדים או שברי תאים, גרימת התחדשות על ידי חיתוך תאים, מבחינה כימית גרימת לרגנרציה של להקת membranellar, המנגנון אוראלי, הדמיה, וניתוח של תא התחדשות.

שיטות המחקר של התחדשות ב- Stentor

המטרה של פרוטוקול זה היא גנוטיפ של כלנית המים ne, שושנת הימים במהלך המאבק מבלי להקריב את העובר.

הגנוזות של כלנית ימית במהלך ההתפתחות המוקדמת

כאן נתאר פרוטוקול להשגת תמצית ארס גולמית משכת ים וזיהוי פעילותה ההמוליטית והפוספוליפאזית.

זיהוי פעילות המוליטית ופוספוליפאזה בתמציות גולמיות מתוך שושנות ים על ידי מאמרים ביו-אסים פשוטים

חילוץ פוליפ הוא תהליך המושרה על ידי עקה חריפה, שבה פוליפים של אלמוגים מעכלים את הרקמה המחברת אותם למושבה שלהם ומתנתקים ממנה כדי לחיות כפרטים. הפרוטוקול הנוכחי מתאר כיצד לגרום למיקרו-פרופגציה של אלמוגים על ידי חילוץ באמצעות טיפולים בהיפר-סלין או במי ים נטולי סידן.

גרימת חילוץ פוליפ במושבות אלמוגים כדי להשיג מיקרו-פרופגאטים מותאמים אישית לשימוש ניסיוני במעבדה

מאמר זה מתאר שיטה ליצירת פצעים באפיתל של מדוזה חיה של Clytia hemisphaerica וריפוי פצעים ברזולוציה גבוהה in vivo. בנוסף, מוצגת טכניקה להחדרת צבעים ותרופות להפרעות לתהליכי איתות בתאי האפיתל ובמטריצה החוץ תאית במהלך ריפוי פצעים.

אפיון ריפוי פצעי אפיתל in vivo באמצעות אורגניזם המודל הקנידרי Clytia hemisphaerica

אנו מתארים פרוטוקול פשוט להסרת הסטטוסיסט והרקמות הנלוות ב-ctenophore Mnemiopsis leidyi, הניתן להדמיה חיה.

הסרה כירורגית של איבר חישה מורכב בקטנופורים רגנרטיביים מאוד

תאי דם דרוזופילה, או המוציטים, עוברים בין אתרי מגורים למחזור הדם.  בזחל, המוציטים תושבים (יושבים) מתמקמים במיקרו-סביבות אינדוקטיביות, הכיסים ההמטופויאטיים, בעוד המוציטים במחזור נעים בחופשיות בהמולימפה. מטרת פרוטוקול זה היא בידוד וכימות סטנדרטיים של שתי אוכלוסיות ההמוציטים הללו, הנבדלות מבחינה התנהגותית אך משתנות זו בזו.

אוכלוסיות תאי דם Assaying של<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; זחל

כאן אנו מתארים את זרימת העבודה לשימוש במערכת TetON להשגת ביטוי גנים ספציפי לרקמה בסנפיר הזנב המתחדש של דג הזברה הבוגר.

שימוש במערכת טיטון לחקר מולקולרי מנגנוני התחדשות דג הזברה

למדו שיטה להתרמת התחדשות פוליפ שלם מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנוני התחדשות רקמות בדגם ימי מודל.

התרמת התחדשות פוליפ שלמה מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis

גלה סרטונים נוספים