Name: הזרקת Intranenal של Escherichia coli במודל עכברוש של Pyelonephritis (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: למדו את מודל הזרקת Escherichia coli ישירות לכליה בעכברוש לחקר פציאלונפריטיס. שיטה זו מאפשרת חקירה ישירה של דלקת כליות ופיברוזיס ללא צורך בריפלוקס כלייתי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות לתמיכתם של NIH/NIDDK K12 DK100014 (Lan Lu), מרכז הסרטן המקיף למקרה (NIH/NCI P30 CA43703), ושיתוף הפעולה למדע קליני ותרגום של קליבלנד (NIH/NCATS UL1 TR000439).

כל המחקרים בבעלי חיים בוצעו על פי פרוטוקולים מאושרים לטיפול בבעלי חיים מוסדיים ושימוש ועדת (IACUC) באוניברסיטת קייס ווסטרן ריזרב. משך הליך כירורגי המתואר להלן הוא כ 45-60 דקות. הליך MRI עצמו הוא כ 15 דקות עבור כל נקודת זמן. 1. הרדמה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדים עכברוש בחדר isoflurane להגדיר ב 2% isoflurane מעורבב עם חמצן כדי להקל על טיפול בבעלי חיים וריסון לפני מתן הרדמה הזרקת תוך - peritoneally. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 3-5 דקות של חשיפה isoflurane, לבדוק כי החיה הוא הרדים ולא מציג שום תגובה על קמצוץ הבוהן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עוד חולדה מסודר עם זריקה תוך-צפית של תערובת של xylazine ו ketamine: 75 מ&quot;ג / ק&quot;ג קטמין / 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג xylazine. בעת ביצוע זריקות intra-פריטונאלי, למשוך בחזרה את המחט כדי להבטיח חלקים של המעי או איברים חיוניים אחרים לא נקברו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנידלקת 2 מ&quot;ג / ק&quot;ג של bupivacaine תת עורית באתר החתך לספק הקלה על כאב מקומי. </li></ol> 2. הכנת אזור כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר מכשירים כירורגי ואספקה ​​לפני שהם משמשים לניתוח לפרוס על כרית כירורגי סטריליות. רוב המכשירים והאספקה ​​יכול להיות autoclaved ושימוש חוזר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש כפפות סטריליות עבור כל הליכים כירורגיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש תער חשמלי לגלח את הפרווה מן הצד הימני של החיה. לגלח את החיה מהחלק התחתון של הצלעות כלוב לחלק העליון של הרגל האחורית מתן אזור גדול ללא שיער עבור החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה על כרית כירורגי סטרילי לבודד את האזור מחטא מן האזורים הסמוכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשפשף את העור עם חיטוי כגון povidone יוד או betadine. התחל את קרצוף במרכז האתר כירורגית ולעבור החוצה באופן מעגלי. חזור לפחות שלוש פעמים עם מחיקת חדש של יוד פובידון או betadine. </Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשפשף את האתר כירורגי עם 70% אלכוהול ספוגי עד העור הוא ברור, כמו יוד עשוי להיות רעיל אם נספג. </li></ol> 3. הליך כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על הליך זה בתנאים aseptic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למקם את החיה הרדים על המיטה חימום חם בעמדה decubitus שמאל לרוחב עם האגף הימני פונה כלפי מעלה. הערה: יש להקפיד לשמור על טמפרטורת הגוף הליבה של החולה ב 35-37 מעלות צלזיוס כדי למנוע היפותרמיה. מיטה זו התחממות צריך גם להיות מעוקרים לפי הצורך כדי לשמור על תנאים aseptic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרגיש על כלוב צלעות, ולעשות חתך קטן 2-3 ס&quot;מ ימין retroperitoneal הגב באמצעות גודל סטרילי 10 להב סכין מנתח החל בחלק התחתון של הצלעות כלוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום גזה סטרילית longitudinally לאורך כל צד של החתך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח משם את הרקמה התת עורית, שומן, ואת השרירים על מנת לדמיין ולגשת חלל הבטן. השתמש מספריים Mayo מעוקל להב לאפשר חדירה עמוקה יותרRation לתוך הפצע ו לחתוך רקמות עבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הכבד הוא גלוי בבירור ונגיש, להשתמש מלקחיים קהה כדי לסגת את הכבד כלפי מעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות זוג אחר של מלקחיים קהה ביד השנייה, לחשוף את הכליות הנכונה כך שהוא יושב ממש מחוץ חלל הבטן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באצבע המצביע ובאגודל היד השמאלית כדי להחזיק את הכליה במצב. עם היד הימנית, לאט לאט בהזרקה 0.1 מ&quot;ל UTI89 E. coli פתרון (ריכוז בין 1 x 10 8 -1 x 10 9 ) מזרק סטרילי לתוך האגן הכליות (המופיע כמו בועה לבנה) 15 . הערה: הכן את titer בקטריאלי כמתואר בסעיף 15 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים רצועת המוסטאט absorbable מעל המחט כדי למנוע יצוא של inoculum לתוך הצפק. לאט לאט למשוך את המחט מתוך האגן הכליות. הערה: יש להקפיד לא לחדור או להדביק הרקמות הסובבות וכתוצאה מכך infecti היעדו / או סיבוכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מזרק גדול לשטוף היטב את הכליה עם מלוחים רגילים לפני הצבת אותו בחזרה חלל הבטן. </li></ol> 4. התפרים הערה: תפר כי יהיה קבור ברקמות צריך להיות 4-0 לא absorbable קלוע sutures. ניתן להשתמש בחומרי תפירה נספגים או מונופילמנטיים למשטחי גוף. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את התפרים באופן שווה, קרוב ככל האפשר לקצה רקמות כדי למנוע חסימה של זרימת הדם; בדרך כלל לא יותר מ 0.3 ס&quot;מ מן הקצה יש צורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתפוס את העור להסיט אותו מעט באמצעות זוג מלקחיים שיניים בסדר, לסובב את המחט בעל למצב pronated לקראת פירסינג העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כונן את המחט דרך עובי מלא של העור על ידי supinating את פרק כף היד כדי לסובב את המחט ולהעביר אותו דרך העור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על תהליך זה על קצה העור הקרוב ביותר לאדם המבצע את ההליך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לְהַדֵקהתפרים מספיק כדי להתנגד קצוות רקמות. כל לחץ חזק יותר יפריע לאספקת הדם, ריפוי פצעים איטי ויכול לגרום להרס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקשור את תפר באמצעות קשרים מרובעים, כאילו זה היה תפר קטוע פשוט, אלא רק את גדיל קצר הוא חתך, משאיר על זנב 3-4 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תפר הראשון כבר כבוי, להכין למקום תפר השני על 3 מ&quot;מ מן הראשון, ולהמשיך את תפר פועל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר סיום החתך הוא הגיע, לא למשוך את תפר האחרון לחלוטין דרך. במקום זאת, להשתמש בלולאה אשר מוחזק עם מחזיק מחט כאן כמו גדיל קצר על מנת לקשור את קצה דיסטלי של תפר הסגירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות קשרים המכשיר, לקשור את תפר באמצעות קשרים מרובעים. התוצאה היא 3 גדילי דבק מן הקשר הושלמה בקצה הדיסטלי. </li></ol> 5. התאוששות בעלי חיים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 2.1 מ&quot;ג / ק&quot;ג Yohimbine intra-peritoneally לאחר הניתוח כדי להפוך את ההרדמה. אNimals צפויים להתאושש לחלוטין מהליך כירורגי לאחר 3-5 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את החיה על כרית חימום (כדי למנוע היפותרמיה) ו מצעים רכים סופג לאחר הניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לספק rehydration עם נוזלים אוראליים או פרקטראליים עד שהוא יכול לחזור להאכלה רגילה (בתוך 24 שעות). להזריק כ 0.6 מ&quot;ל של תמיסת מלח תמיסת peritoneally מיד לאחר הניתוח להגביל את ההשפעות התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספק כאבים כפי שתואר IACUC אישרה טיפול בבעלי חיים פרוטוקול שימוש. להזריק 5 מ&quot;ג / ק&quot;ג carprofen תת עורית לניהול כאב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעקב אחר חתכים באופן קבוע עבור נפיחות, exudate, כאב, או dehiscence. </li></ol> 6. אימות באמצעות הדמיה תהודה מגנטית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התנהגות i vivo MRI ניסויים על שדה גבוה בעלי חיים קטנים MRI סורקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות הרדמה עם isoflurane 3% חמצן ומיקום החיה עם הכליה הנכונה ב isocenter בסורק ה- MRI ו מתאיםאכלו רדיו. לספק לבעלי חיים 1-2% הרדמה isoflurane ברציפות לאורך כל הליך הדמיה באמצעות nosecone. הערה: בתמונות MRI של vivo שמוצג באיור 1 , נעשה שימוש בגליל נפח של חולדה (בקוטר פנימי = 72 מ&quot;מ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ניטור בבעלי חיים מערכת בקרה כדי לשמור על קצב הנשימה של כל חיה (40-60 נשימות / דקות) ואת טמפרטורת הגוף הליבה (35 ± 1 ° C). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש רב פרוסה, הד הד ספין MRI הרכישה כדי להשיג ברזולוציה גבוהה, T2 משוקלל תמונות משוקלל של כליות נגוע והבקרה. פרמטרים אופייניים לרכישת MRI הם זמן חזרה = 5,000 msec, זמן הד = 40 msec, עובי פרוסה = 2.0 מ&quot;מ, רזולוציה מרחבית במטוס = 200 מיקרומטר, 3 ממוצעי אותות וזמן רכישה של 8 דקות. </li></ol>

<ol><li>Saliba, W., Barnett-Griness, O., Rennert, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+obesity+and+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">The association between obesity and urinary tract infection.</a> Eur J Intern Med. 24 (2), 27-31 (2012).</li>
<li>Semins, M., Shore, A., Makary, M., Weiner, J., Matlaga, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+obesity+on+urinary+tract+infection+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">The impact of obesity on urinary tract infection risk.</a> Urology. 79 (2), 266-269 (2011).</li>
<li>Zilberberg, M., Shorr, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secular+trends+in+gram-negative+resistance+among+urinary+tract+infection+hospitalizations+in+the+United+States%2C+2000-2009%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Control+Hosp+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Secular trends in gram-negative resistance among urinary tract infection hospitalizations in the United States, 2000-2009.</a> Infect Control Hosp Epidemiol. 34 (9), 940-946 (2013).</li>
<li>Whiting, D., Guariguata, L., Weil, C., Shaw, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IDF+diabetes+atlas%3A+global+estimates+of+the+prevalence+of+diabetes+for+2011+and+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Res+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">IDF diabetes atlas: global estimates of the prevalence of diabetes for 2011 and 2030.</a> Diabetes Res Clin Pract. 94 (3), 311-321 (2011).</li>
<li>Wild, S., Roglic, G., Green, A., Sicree, R., King, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+prevalence+of+diabetes%3A+estimates+for+the+year+2000+and+projections+for+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Global prevalence of diabetes: estimates for the year 2000 and projections for 2030.</a> Diabetes Care. 27 (5), 1047-1053 (2004).</li>
<li>Ma, D., Gulani, V., Seiberlich, N., Liu, K., Sunshine, J., Duerk, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/nature/journal/v495/n7440/full/nature11971.html">Magnetic resonance fingerprinting.</a> Nature. 495 (7440), 187-192 (2013).</li>
<li>Lu, L., Sedor, J., Gulani, V., Schelling, J., O'Brien, A., Flask, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+diffusion+tensor+MRI+to+identify+early+changes+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Use of diffusion tensor MRI to identify early changes in diabetic nephropathy.</a> Am J Nephrol. 34 (5), 476-482 (2011).</li>
<li>Rosen, D., Hooton, T., Stamm, W., Humphrey, P., Hultgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+intracellular+bacterial+communities+in+human+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of intracellular bacterial communities in human urinary tract infection.</a> PLoS Med. 4 (12), e329(2007).</li>
<li>Torine, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urinary+tract+infection%3A+diabetic+women%27s+strategies+for+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Nurs%22%5BJournal%5D)">Urinary tract infection: diabetic women's strategies for prevention.</a> Br J Nurs. 20 (13), 791-792 (2011).</li>
<li>Rosen, D., Hung, C., Kline, K., Hultgren, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Streptozocin-induced+diabetic+mouse+model+of+urinary+tract+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Streptozocin-induced diabetic mouse model of urinary tract infection.</a> Infect Immun. 76 (9), 4290-4298 (2008).</li>
<li>Larsson, P., Kaijser, B., Mattsby-Baltzer, I., Olling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+ascending+acute+pyelonephritis+caused+by+Escherichia+coli+or+proteus+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">An experimental model for ascending acute pyelonephritis caused by Escherichia coli or proteus in rats.</a> J Clin Pathol. 33 (4), 408-412 (1980).</li>
<li>Gupta, R., Ganguly, N., Ahuja, V., Joshi, K., Sharma, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ascending+non-obstructive+model+for+chronic+pyelonephritis+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An ascending non-obstructive model for chronic pyelonephritis in BALB/c mice.</a> J. Med. Microbiol. 43 (1), 33-36 (1995).</li>
<li>Fernandes, P., Shipkowitz, N., Bower, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+for+studying+the+pathogenesis+and+treatment+of+pyelonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Exp.+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Murine models for studying the pathogenesis and treatment of pyelonephritis.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 224, 35-51 (1987).</li>
<li>Kaye, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+water+diuresis+on+spread+of+bacteria+through+the+urinary+tract%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">The effect of water diuresis on spread of bacteria through the urinary tract.</a> J. Infect. Dis. 124 (3), 297-305 (1971).</li>
<li>Fierer, J., Tainer, L., Braude, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteremia+in+the+pathogenesis+of+retrograde+E.+coli+pyelonephritis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Bacteremia in the pathogenesis of retrograde E. coli pyelonephritis in the rat.</a> Am. J. Pathol. 64 (2), 443-456 (1971).</li>
<li>Nickel, J., Olson, M., Costerton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+experimental+bacterial+prostatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection%22%5BJournal%5D)">Rat model of experimental bacterial prostatitis.</a> Infection. 19 (3), S126-S130 (1991).</li>
<li>Hagberg, L., Engberg, I., Freter, R., Olling, S., Eden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ascending%2C+unobstructed+urinary+tract+infection+in+mice+caused+by+pyelonephritogenic+Escherichia+coli+of+human+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Soc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin.</a> Am Soc Microbiol. 40 (1), 273-283 (1983).</li>
<li>Kurosaka, Y., Ishida, Y., Yamamura, E., Takase, H., Otani, T., Kumon, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-surgical+rat+model+of+foreign+body-associated+urinary+tract+infection+with+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A non-surgical rat model of foreign body-associated urinary tract infection with Pseudomonas aeruginosa.</a> Microbiol. Immunol. 45 (1), 9-15 (2001).</li>
<li>Anderson, B., Jackson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pyelitis%2C+an+important+factor+in+the+pathogenesis+of+retrograde+pyelonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Pyelitis, an important factor in the pathogenesis of retrograde pyelonephritis.</a> J Exp Med. 114 (3), 375-384 (1961).</li>
<li>Anderson, J. <a target="_blank" href="http://journals.sagepub.com/doi/pdf/10.1177/003591576205500601">Vesico-ureteric reflux.</a> J R Soc Med. 55 (6), 419-426 (1962).</li>
</ol>

למחברים אין גילויים נוספים.

עולה pyelonephritis חריפה מכרסמים (כלומר עכברים וחולדות) יכול להיות מיוצר על ידי צנתור transurethral. 16 , 17 , 18 שיטה זו זיהום transurethral הוא יתרון בכך שהוא לא פולשני ומחקה את הפתופיזיולוגיה האנושית של זיהום עולה. 17 , 18 , 19 , 20 עם זאת, שיטה זו ...

מודלים מכרסמים שימשו כדי לחקור תופעות רבות של המחלה האנושית, כולל pyelonephritis וזיהומים בדרכי השתן (UTI). UTI הם בעיה בריאותית גלובלית, והוא יכול להשפיע על ילדים, גברים ונשים בכל הגילאים. 1 , 2 , 3 הביטוי הראשוני של UTI כולל דלקת שלפוחית ​​השתן, ואם הזיהום עולה לאורך השופכן, זיהום כליות (pyelonephritis) עשוי לעקוב. במקביל, שכיחות הסוכרת מתקרבת ל -400 מיליון איש ברחבי העולם. 4 , 5 חשוב לציין כי שכיחות UTI עשויה להיות גבוהה פי 4 בחולים הסובלים מהשמנת יתר או סוכרת מסוג 2, מה שמוביל לסיכון מוגבר לדלקת UTI חוזרת (rUTI), אלח דם, פיברוזיס כליות מדלקת פילונפריטיס, וחוסר תפקוד של שלפוחית ​​השתן. 6 , 7 , 8 מכרסמיםמודלים חשובים לחקר UTI, משום שטיפולים אנטיביוטיים עכשוויים מייצרים תגובה מתמשכת ומניעה רק בקבוצת משנה של חולי UTI. כדי לשפר את הטיפול UTI הקליני, הצעדים העיקריים הם להבין את המנגנון של RUTI ואת התהליכים הפתופיזיולוגיים שלה מפני דלקת חריפה לדלקת פיברוזיס, כמו גם את ההשפעה של סוכרת מסוג 2. המטרה של שיפור מודלים של בעלי חיים היא לפתח טכניקות המאפשרות הערכה מדויקת יותר של התקדמות המחלה והתערבויות טיפוליות. כמה גישות שונות שימשו כדי לגרום pyelonephritis חולדות ו / או עכברים ללמוד את הפתופיזיולוגיה של נזק לכליות, את ההשפעה של טיפול אנטיביוטי, וכן היבטים אחרים של הקורס הטבעי של UTIs. גישה נפוצה להקים UTI מדרדר הוא צנתור transurethral. 10 , 11 , 12 , 13 &lt;/ Sup&gt; שיטה זו מציגה חיידקים דרך השופכה לתוך שלפוחית ​​השתן של בעלי חיים הרדים. בעוד טכניקה זו מקרוב מדמה pyelonephritis האדם, ההיארעות בפועל ואת גודל של זיהום pyelonephritis יכול להיות משתנה מאוד בגלל מספר גורמים, כולל חוסר ריפלוקס אוורטרי ספונטנית או הימנעות השתן במהלך או מיד לאחר חיסון. 11 כתוצאה מכך, השתנות הניסוי בגידול זיהום pyelonephritis עולה יכול להגביל את התועלת של מודל זה כדי לחקור זיהומים כליות, כמו גם אסטרטגיות טיפוליות. דוח זה מתאר מודל כירורגי pyelonephritis חולדה שבו E. coli מוזרק ישירות לתוך הכליה חולדה. למרות מודל חולדה זה פולשני, כמות E. coli נמסר כליה ניתן לשלוט באופן יעיל המאפשר דלקת כליות חזקה דלקת. 14 במסגרת הליך זה, אנו מתארים גםאיך אלה המושרה זיהומים כליות ניתן לפקח longitudinally עם in vivo מגנטית תהודה הדמיה (MRI).

<table><tbody><tr><td>כרית סופגת</td><td>פישר</td><td>14-127-47</td><td></td></tr><tr><td>כרית גזה כותנה סטרילית</td><td>פישר</td><td>22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>כפפות כירורגיות לטקס</td><td>הנרי שיין בריאות בעלי חיים</td><td>21540</td><td></td></tr><tr><td>מספריים מעוקלים מאיו</td><td>פישר</td><td>S17341</td><td></td></tr><tr><td>ישר קהה Foreceps</td><td>פישר</td><td>08-895</td><td></td></tr><tr><td>ידית אזמל&nbsp;</td><td>פישר</td><td>08-913-5</td><td></td></tr><tr><td>להבי אזמל סטריליים</td><td>פישר</td><td>53220</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק לואר-לוק</td><td>BD Biosciences</td><td>309628</td><td>להזרקות חיידקים</td></tr><tr><td>20 מ"ל מזרק לואר-לוק&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>301031</td><td>לשטיפת מי מלח</td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Seneca Medical</td><td>240267</td><td></td></tr><tr><td>23 גרם 3/4 אינץ'. מחט&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>305143</td><td></td></tr><tr><td>30 גרם 1 אינץ'. מחט&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין U-100</td><td>אקסל אינטרנשיונל&nbsp;</td><td>25846</td><td>לזריקות תרופות</td></tr><tr><td>איזופלורן</td><td>הנרי שיין בריאות בעלי חיים</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>הנרי שיין בריאות בעלי חיים</td><td>33197</td><td>הזרקת IP</td></tr><tr><td>קטמין</td><td>פטרסון וטרינרי&nbsp;</td><td>07-881-9413</td><td>הזרקת IP</td></tr><tr><td>יוהימבין (אטיפמזול)</td><td>פטרסון וטרינרי&nbsp;</td><td>07-867-7097</td><td>הזרקת IP לאחר ניתוח</td></tr><tr><td>בופיבקאין (מרקאין)</td><td>פטרסון וטרינרי&nbsp;</td><td>07-890-4584</td><td>הזרקת SQ במקום החתך&nbsp;</td></tr><tr><td>4-0 Chromic Gut Suture</td><td>Ethicon Inc.</td><td>U203H</td><td></td></tr><tr><td>4-0 תפר Vicryl קלוע</td><td>Ethicon Inc.</td><td>J304H</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל מזרק SubQ</td><td>BD Biosciences</td><td>309597</td><td></td></tr><tr><td>E. coli&nbsp; UTI89 או CFT073</td><td>ATCC</td><td>700928</td><td></td></tr><tr><td>Surgicel Absorbable Hemostat</td><td>Ethicon Inc.</td><td>ETH1951CS&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Biospec 9.4T MRI&nbsp;</td><td>ברוקר&nbsp;</td><td>94/20 ברית המועצות</td><td></td></tr></tbody></table>

הזרקת intranenal של escherichia coli במודל עכברוש של pyelonephritis

Intrarenal Injection of Escherichia coli in a Rat Model of Pyelonephritis

פיילונפריטיס הוא זיהום חיידקי של הכליה ונגרם לרוב על ידי Escherichia coli. זיהומים חוזרים עלולים לגרום לדלקת כליות משמעותית ולפיברוזיס ובסופו של דבר לגרום לירידה בתפקוד הכליות. לפני שניתן יהיה לשפר את הניהול הקליני ומניעה של פיילונפריטיס, יש לבסס מודל אמין בבעלי חיים על מנת לחקור את מנגנוני ההתקדמות, ההישנות והיעילות הטיפולית. מודל הזיהום הטרנס-שופכה מחקה מקרוב את הפיילונפריטיס האנושי אך מציג שונות ניכרת בשל הסתמכותו על ריפלוקס בשופכה כדי להעביר את החיידקים לכליה. כאן, פרוטוקול כירורגי מפורט לביצוע הזרקות חיידקים לאגן הכליה של החולדה מסופק ומאושר על ידי הדמיית תהודה מגנטית לא פולשנית (MRI). באמצעות פרוטוקול זה, בעלי חיים מקבלים חשיפה ישירה לריכוז רצוי של חיידקי E. coli ויכולים להתאושש לחלוטין מההליך הכירורגי עם טיפול הולם לאחר הניתוח. זה מקל על הערכות MRI אורכיות עוקבות של המודלים של חיות הניסוי להשוואה עם בקרות מלוחות. באמצעות גישת אספקה ישירה זו, חומרת הזיהום ניתנת לשליטה וישימה למחקרים מכניסטיים של התקדמות כמו גם לפיתוח אסטרטגיות טיפול חדשות.

טכניקות ההדמיה הרפואית מציעות את האפשרות להעריך באופן לא פולשני את היעילות של UTI ואת היעילות הטיפולית. לכן, MRI נוצל כדי לאמת אינדוקציה של זיהום חריף לאחר הזרקה של 1-2 x 10 7 UTI89 E. coli , וכן לדמיין את השינויים בכליה לפני ואחרי הניתוח. איור 1a-b מראה אזור הולך וגובר של זיהום בכליות (חיצים צהובים). תמונות MRI שהתקבלו עבור כל בעל חיים בימים 1 ו 4 לאחר זיהום לעזור לאפיין את הצמיחה של דלקת חריפה pyelonephritis. ...

כתב יד זה מתאר מודל כירורגי של חולדות של פיילונפריטיס באמצעות זיהום תוך-כלייתי ישיר על ידי Escherichia coli לאגן הכליה. ניתן להשתמש בהליך הניסוי כדי לחקור את הפתוגנזה של פיילונפריטיס כמו גם את הדלקת והפיברוזיס הנלווים.

הזרקת Intranenal של Escherichia coli במודל עכברוש של Pyelonephritis

Pyelonephritis is a bacterial infection of the kidney and is most commonly caused by Escherichia coli. Recurrent infections can cause significant renal ...

המטרה הכוללת של מודל חולדה כירורגי זה של פיילונפריטיס היא לספק שיטה שאינה דורשת ריפלוקס כלייתי, המשמש במודלים אחרים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הרפואי כגון כיצד לתת טיפול אנטיביוטי בצורה הטובה ביותר, כיצד אנו יכולים לנטר את ההשפעות של זיהומים חוזרים או זיהומים שיוריים לאחר טיפול שעלולים להוביל להישנות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שמודל זה מיישם חיידקים ישירות על הכליה בכמות אמינה למדי ללא דרישה של ריפלוקס כלייתי, מה שיכול להוסיף שונות מסוימת מבחינת זיהום.לפני תחילת הליך זה, הכינו את בולוס הזרקת החיידקים המכיל בין מיליון ל-10 מיליון תאים. לאחר הרדמת החולדה והכנת עורה לניתוח, יש למרוח משחה וטרינרית על העיניים כדי למנוע יובש. מקם את החולדה על משטח כירורגי מחומם בתנוחת דקוביטוס שמאלית כשהצד הימני שלה פונה כלפי מעלה.שפשפו את העור בחומר חיטוי. חזור על הפעולה שלוש פעמים ולאחר מכן שפשף את אזור הניתוח עם החלפת אלכוהול של 70% עד שהעור נקי. כדי להתחיל את הניתוח, באמצעות אזמל מספר 10, בצע חתך רטרופריטונאלי גבי ימני קטן, שניים עד שלושה סנטימטרים, המתחיל בתחתית כלוב הצלעות.המשך בניתוח הרקמה התת עורית, השומן והשרירים כדי בסופו של דבר לדמיין ולגשת לחלל הבטן. ברגע שהכבד נראה בבירור ונגיש, השתמש במלקחיים קהים כדי למשוך אותו כלפי מעלה. לאחר מכן, באמצעות זוג שני של מלקחיים קהים, חשפו את הכליה הימנית כך שהיא תשב ממש מחוץ לחלל הבטן.כעת, מקם את הכליה להזרקה ביד הלא דומיננטית. בעזרת היד הדומיננטית, כוון במדויק את מחט ההזרקה על אגן הכליה. לאחר מכן, יש להזריק לאט ובהתמדה 0.1 מיליליטר של תמיסת חיידקים או מי מלח.כאן מוזרקים מי מלח. הבולוס ייראה כמו בועה לבנה ברקמה. לפני החזרת המחט, הנח רצועה של המוסטט נספג מעל מקום ההזרקה כדי למנוע יציאה של החיסון לתוך הצפק.לאחר מכן, משוך לאט את המחט החוצה. כעת, בעזרת מזרק גדול, שטפו היטב את הכליה במי מלח רגילים. לאחר מכן, החזר את הכליה לחלל הבטן.לסגירת אתר הניתוח, השתמש בתפרים נספגים או מונופילמנטים ברקמת הגוף וב-4-0 תפרים קלועים שאינם נספגים על משטחי הגוף. כדי למקם תפרים, התחל במקום הרחוק ביותר מהמפעיל, השתמש במלקחיים בעלי שיניים עדינות כדי לתפוס את העור ולמנוע אותו מעט. לאחר מכן, סובב את מחזיק המחט למצב בולט והניח את פרק כף היד כדי לסובב את המחט ולהניע אותה דרך עובי העור המלא.הדק את התפר מספיק כדי לחשוף את קצוות הרקמות. כל הידוק יחסום את אספקת הדם ובכך יאט את ריפוי הפצע ואולי יגרום להתפרקות. לאחר מכן, קשרו את התפר בעזרת קשר מרובע, כאילו היה תפר קטוע פשוט, אלא שרק הגדיל הקצר נחתך, ומשאיר זנב של שלושה עד ארבעה מילימטרים.כעת, הנחת כל תפר שלאחר מכן כשלושה מילימטרים מהקודם, המשך בתפר הריצה. לאחר שמגיעים לסוף החתך, אל תמשוך את התפר האחרון לחלוטין. במקום זאת, השתמש בלולאה המוחזקת על ידי מחזיק המחט כגדיל הקצר וקשר את הקצה הדיסטלי של סגירת התפר.כעת, בעזרת קשרי מכשירים, קושרים את התפר באמצעות קשרים מרובעים. התוצאה תהיה שלושה גדילים הבולטים מקשר שהושלם. לאחר מתן משככי כאבים והזרקה צפקית של 0.6 מיליליטר של מי מלח רגילים, התבונן בבעל החיים בזמן שהוא מתאושש מההרדמה על כרית חימום עם מצעים רכים סופגים.במהלך 24 השעות הראשונות של ההחלמה, החזירו לבעל החיים נוזלים דרך הפה או נוזלים עד שיוכל לחזור להאכלה רגילה. לאחר מכן, יש לעקוב באופן קבוע אחר החתך לאיתור נפיחות, הפרשה או פירוק ולספק משככי כאבים לכאבים לפי הצורך. זיהום פיילונפריטיס חריף נגרם על ידי הזרקה של מיליון ו-10 מיליון תאי E.coli UT189 למודל המכרסמים.MRI של הכליה הראה עלייה הדרגתית באזור הזיהום מיום לארבעה ימים לאחר ההזרקה. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 30 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לבדוק את בעלי החיים לאחר הניתוח כדי לשים לב לסימנים של זיהום E.Coli מחוץ לכליה, במיוחד בנקודות החתך, כדי לוודא שבעלי החיים לא יהפכו לספיגתיים מדי.לאחר הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כמו סריקת MRI, על מנת לענות על שאלות נוספות כגון, האם הזיהום בר-קיימא, כמה מהר הזיהום גדל והאם טיפול זה יעיל?

intrarenal-injection-escherichia-coli-rat-model

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מקור: קונובר, מ. ס. ואח', הקמה ואפיון של דלקות בדרכי השתן ו-CAUTI במודל עכבר. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים את גילוי קהילות חיידקיות תוך-תאיות (IBCs) ברקמת שלפוחית השתן של העכבר הנגועה ב-Escherichia coli המבטא β-גלקטוזידאז. לאחר קיבוע רקמות, פרמיאביליזציה וצביעה ב-X-gal, תאי IBC מופיעים כפונקטה כחולה תחת מיקרוסקופ ניתוח, מה שמאשר פלישה חיידקית במהלך זיהום בדרכי השתן.

המחשת קהילות חיידקים תוך-תאיות בשלפוחית כיס עכבר נגועה

מקור: גופטה, ק. ואחרים. הזרקה תוך-כלייתית של אשריכיה קולי במודל חולדה של דלקת פיאלונפריטיס.  J. Vis. Exp. (2017).הסרטון הזה מדגים את ההזרקה התוך-כלייתית של E. coli לאגן הכלייתי של עכברוש מונשם, כדי לגרום לזיהום כליה מקומי, בדומה לפילונפריטיס חריפה. הוא מדגיש שלבים כירורגיים מרכזיים וטכניקות אספטיות הנדרשות להקמת מודל זיהום ב-vivo שניתן לשחזור לניתוח במסגרת הדרך.

הזרקה תוך-כלייתית של E. coli לתוך האגן הכלייתי של חולדה

בסרטון זה אנו מציגים את הפרוטוקול להזרקה הידרודינמית של פלסמידים לאגן הכליה של הכליה של הכליה של העכבר לצורך העברת חומצות גרעין. טכניקה זו מאפשרת העברה ספציפית של פלסמידים על ידי ניצול עקרון הלחץ ההידרוסטטי הגבוה, אשר דוחף בכוח את הפלסמידים לאתר הספציפי מבלי לגרום לפגיעה ברקמות.

הזרקת אגן כליות הידרודינמית: טכניקה להעברת DNA ישירות לתאי כליות של מודל מורין

בסרטון זה אנו מדגימים מתן תרופות תוך-כלייתיות בחולדות דרך עורק הכליה. שיטה זו מועילה בשיפור מיקוד התרופות, עוצמת התרופות ומזעור רעילות מערכתית.

אספקת תרופות תוך כלייתית בחולדות: שיטה להעברת תרופות טיפוליות בכליה של חולדות באמצעות הזרקה תוך עורקית

בסרטון זה, אנו מתארים את הטכניקה לניהול תוך שלפוחית של חיידקים אורופתוגניים כדי ליצור מודל זיהום בדרכי השתן בעכברים. מודל זה יכול לשמש להבנת התפשטות זיהום חיידקי אורופתוגני בתוך מערכת השתן ואת המנגנונים הקובעים רגישות לזיהומים בדרכי השתן.

מודל יצירת דלקת בדרכי השתן: טכניקה למתן חיידקים אורופתוגניים בעכבר לפיתוח מודל דלקת בדרכי השתן

סרטון זה מדגים את ביסוס זיהום Escherichia coli אורופתוגני בשלפוחית השתן של עכבר נקבה באמצעות החדרת קטטר טרנס-שופכתי. החיידקים המוזרקים מצליחים לבסס זיהום בדרכי השתן בתוך שלפוחית השתן, ומספקים פלטפורמה רבת ערך לחקר מחלות הקשורות לבריאות הקשורות לדרכי השתן.

צנתור דרך השופכה וחיסון חיידקי ליצירת מודל דלקת בדרכי השתן בעכברים זכרים

הקמת מודל של דלקת בדרכי השתן בעכברות

כאן, הליך מתואר להקמת זיהום מערכתי בחולדה היילודים עם תרבויות של Escherichia coli K1. הליך בלתי פולשני זה מאפשר קולוניזציה של מערכת העיכול, טרנסלוקציה של הפתוגן למחזור המערכתי, ופלישה של מערכת העצבים המרכזית במקלעת דמית העין.

דגם לא פולשנית של Neuropathogenic Coli Escherichia זיהום בעכברוש הילודים

הדגם הוקמה של צנתור-transurethral של עכברים מאפשרת לימוד פתולוגיות בשלפוחית השתן, כולל זיהום בדרכי השתן, אך ניתן לבצע רק אצל נקבות. מודל חדש של זכר החדרה-transurethral, המובאים כאן, יאפשר מחקר באזור המסומן חזקה קליניים ואפידמיולוגיים ההבדלים בין המינים.

זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים

מודל עכברי של חיסון אורופתוגני E. coli (UPEC) טרנס-urethral כדי ליצור מאגרי שלפוחית שתן תוך-תאיים סמויים וחשיפה שלפוחית השתן לאחר מכן ל - G. vaginalis כדי לגרום ל- UPEC UTI חוזר ונשנה מודגם. כמו כן הודגמו ספירה של חיידקים, ציטולוגיה של שתן, וקיבוע ועיבוד שלפוחית השתן באתרם לסריקת מיקרוסקופיית אלקטרונים.

זיהום חוזר בדרכי השתן של Escherichia coli שנגרם על ידי גרדנרלה וגינליס חשיפה לשלפוחית השתן בעכברים

למדו את מודל הזרקת Escherichia coli ישירות לכליה בעכברוש לחקר פציאלונפריטיס. שיטה זו מאפשרת חקירה ישירה של דלקת כליות ופיברוזיס ללא צורך בריפלוקס כלייתי.

הזרקת Intranenal של Escherichia coli במודל עכברוש של Pyelonephritis

גלה סרטונים נוספים