Name: ניתוח תזרים Cytometric של תא הטבעי Killer ממס פעילות דם מלא אנוש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-17T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: חקור ניתוח זרימה ציטומטרי של תאי NK מדם מלא אנושי לקביעת מספר תאים ורמת פעילות ציטוטוקסית. שיטה זו מספקת תוצאות מהירות, מדויקות וברות שחזור למחקר אימונולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרויקט זה נתמך על ידי מענק תחרותי מס' 2100-68003-30395 מהמכון הלאומי למזון וחקלאות של משרד החקלאות האמריקאי.

<ol><li>Cerwenka, A., Lanier, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+cells%2C+viruses+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Natural killer cells, viruses and cancer.</a> Nat Rev Immunol. 1 (1), 41-49 (2001).</li>
<li>Nieman, D. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7883395">Exercise, infection, and immunity.</a> Int J Sports Med. 15, Suppl 3 131-141 (1994).</li>
<li>Romeo, J., Warnberg, J., Pozo, T., Marcos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+activity%2C+immunity+and+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Nutr+Soc%22%5BJournal%5D)">Physical activity, immunity and infection.</a> Proc Nutr Soc. 69 (3), 390-399 (2010).</li>
<li>Nieman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marathon+training+and+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Marathon training and immune function.</a> Sports Med. 37 (4-5), 412-415 (2007).</li>
<li>Simpson, R. J., Kunz, H., Agha, N., Graff, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+and+the+Regulation+of+Immune+Functions%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Exercise and the Regulation of Immune Functions.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 135, 355-380 (2015).</li>
<li>Walsh, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Position+statement.+Part+one%3A+Immune+function+and+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc+Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Position statement. Part one: Immune function and exercise.</a> Exerc Immunol Rev. 17, 6-63 (2011).</li>
<li>Timmons, B. W., Cieslak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+natural+killer+cell+subsets+and+acute+exercise%3A+a+brief+review%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc+Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Human natural killer cell subsets and acute exercise: a brief review.</a> Exerc Immunol Rev. 14, 8-23 (2008).</li>
<li>Westermann, J., Pabst, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+lymphocyte+subsets+and+natural+killer+cells+in+the+human+body%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Investig%22%5BJournal%5D)">Distribution of lymphocyte subsets and natural killer cells in the human body.</a> Clin Investig. 70 (7), 539-544 (1992).</li>
<li>Boyum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+leucocytes+from+human+blood.+Further+observations.+Methylcellulose%2C+dextran%2C+and+ficoll+as+erythrocyteaggregating+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Scand+J+Clin+Lab+Invest+Suppl%22%5BJournal%5D)">Isolation of leucocytes from human blood. Further observations. Methylcellulose, dextran, and ficoll as erythrocyteaggregating agents.</a> Scand J Clin Lab Invest Suppl. 97, 31-50 (1968).</li>
<li>McMillan, R., Scott, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocyte+labeling+with+51-Chromium.+I.+Technic+and+results+in+normal+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Leukocyte labeling with 51-Chromium. I. Technic and results in normal subjects.</a> Blood. 32 (5), 738-754 (1968).</li>
<li>Berk, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+long+endurance+running+on+natural+killer+cells+in+marathoners%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">The effect of long endurance running on natural killer cells in marathoners.</a> Med Sci Sports Exerc. 22 (2), 207-212 (1990).</li>
<li>McAnulty, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+blueberry+ingestion+on+natural+killer+cell+counts%2C+oxidative+stress%2C+and+inflammation+prior+to+and+after+2.5+h+of+running%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Physiol+Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">Effect of blueberry ingestion on natural killer cell counts, oxidative stress, and inflammation prior to and after 2.5 h of running.</a> Appl Physiol Nutr Metab. 36 (6), 976-984 (2011).</li>
<li>Millard, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+Exercise+Increases+Peripheral+Blood+NK+Cell+Counts+without+Immediate+Functional+Changes%2C+but+Impairs+their+Responses+to+ex+vivo+Stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Brief Exercise Increases Peripheral Blood NK Cell Counts without Immediate Functional Changes, but Impairs their Responses to ex vivo Stimulation.</a> Front Immunol. 4, 125(2013).</li>
<li>Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJaneway%2C+CA+%22Immunobiology%3A+The+Immune+System+in+Health+and+Disease.+5th+edn%22">Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. 5th edn</a>. , Garland Science. (2001).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

השיטה המתוארת במחקר זה ישירות מודדת את הפעילות הספציפית של תאי NK של פרט בתגובה לגירויים (במקרה המסוים הזה, פעילות הגופנית ממושכת). בדרך כלל, תאי NK מבודדים מהדם של אחד על ידי מפלי צפיפות או מיון התא באמצעות שילוב של סמנים. בעוד שיטות אלה נמצאים בשימוש נרחב, יש להם חסרונות רבים: הם זמן רב, לערב מניפולציות מרובות, והם בכבדות משתמש תלוי. כתוצאה מכך, לחץ חזק מושמת על תאי NK המבודדים, אשר עלול לגרום השתנות מוגברת מניסוי לניסוי, או אפילו בתוך אותו הניסוי. במאמר זה תיארנו פרוטוקול אשר מ...

<html> תאי הרג טבעיים הם מרכיב חיוני של מערכת החיסון המולדת. למרות שהם מוסדרים מאוד, יש להם את היכולת לזהות ולסלק תאים חריגים באמצעות מגע תא אל תא וללא לפני ההפעלה 1. ככזה, הם יוצרים קו מהיר של הגנה מפני זיהומים. אינטנסיבי תרגיל, במיוחד, מוכיח לדכא את המערכת החיסונית 2 זמני, 3, 4, 5. תאי NK הם רגישים במיוחד את האפקט הזה 4, 6, 7, ובכך נפתח חלון של רגישות משופרת באופן יעיל למחלות. לפיכך, במחקר של התערבויות לפני, במהלך או אחרי פעילות גופנית אינטנסיבית במטרה להפחית את השפעתה על תפקוד תא NK הוא בעלת עניין מיוחד עבור רווחתם של ספורטאים-תחרויות פוסט. = &quot;jove_content&quot;&gt; עם זאת, המחקר של התערבויות כאלה מסתבך בשל גורמים רבים: 1) תאי NK הם דלילים 8, בסביבות 1% של תא תא דם לבן; 2) תאי NK רגישים מאוד ללחץ ולהסתמך על חשיפה מתמדת בתנאים פיסיולוגיים להישאר קיימא ויציב במהלך ניסויים; מבחני תקן 3) לקבוע cytotoxicity תא NK, כגון הדרגתי Ficoll 9 ולשחרר מבחנים 10, הם אמינים ובלתי עקביים. ההשתנות הטבועה של דגימות אנושיות רק תחריף את הנושאים הללו. דגימות אנושיות טריות שנאספו במהלך התערבויות למדי מוסדרות וקשים להשיג, לפחות בהשוואת דגימות מן החי או שורות תאים הונצחו. פעולה זו מפחיתה הזדמנויות לשחזר ניסויים או להוספת משתתפים עוקבת המחקר להגיע ספי סטטיסטיים מובהקים. ביחד, הנושאים הללו תומכים בצורך פרוטוקול יעיל המאפשר FOr היא תפוקה גבוהה ניתוח אמינות גבוהה של פעילות ממס תא NK בדגימות אדם. הקמנו עבודה המקצרת את הזמן הדרוש כדי לזהות, לבודד תאי NK מבחן מהדם האנושי כולו תוך מזעור החשיפה גורמים חיצוניים. השיטה מייעלת את השימוש בשני מכשירים, סדרן תא מגנטי מבוסס וזרימת הדמית cytometer, וחולצת assay הספציפי, אופטימיזציה: יחס E כדי לאפשר זיהוי של ירידות או עליות של cytotoxicity תא NK.

<table><tbody><tr><td>לימפובלסטים K-562</td><td>ATCC</td><td>CCL-243</td><td></td></tr><tr><td>Modified Dulbecco's Media ATCC</td><td></td><td>30-2005</td><td>גלוקוז גבוה, עם L-גלוטמין, עם HEPES,</td></tr><tr><td>מדיום אלפא מינימלי חיוני</td> מסונן סטרילי <td>ATCC</td><td>CRL-2407</td><td>ללא ריבונוקלאוזידים ודאוקסיריבונוקלאוזידים אך עם 2 מ"מ L-גלוטמין ו-1.5 גרם/ליטר נתרן ביקרבונט</td></tr><tr><td>תמיסה כחולה טריפן 0.4%</td><td>Amresco</td><td>K940-100ML</td><td>תרבית רקמות בדרגה</td></tr><tr><td>תמיסת צביעת פרופרידיום יודיד</td><td>BD Pharmingen</td><td>51-66211E</td><td></td></tr><tr><td>Vybranto DiO פתרון תיוג תאים</td><td>Vybranto</td><td>V-22886</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Pro מפריד</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-545</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS מאגר ריצה</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-221</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS מאגר כביסה</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-987</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS עמודות</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-021-101</td><td></td></tr><tr><td>דם מלא CD56 MicroBeads, אנושי</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-875</td><td></td></tr><tr><td>ImageStream X Mark II Imaging Flow Cytometer</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Speedbeads</td><td>Amnis Corporation</td><td>400030</td><td></td></tr><tr><td>0.4-0.7% היפוכלוריט (סטריליזטור)</td><td>VWR</td><td>JT9416-1</td><td></td></tr><tr><td>קולטר קלנץ</td><td>בקמן קולטר</td><td>8546929</td><td></td></tr><tr><td>70% איזופרופנול (מסיר בועות)</td><td>EMD Millipore</td><td>1.3704</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS (נוזל נדן)</td><td>EMD Millipore</td><td>BSS-1006-B (1X)</td><td>ללא סידן או מגנזיום</td></tr><tr><td>תוכנת INSPIRE EMD</td><td>Millipore</td><td></td><td>גרסה סימן II, ספטמבר 2013</td></tr><tr><td>תוכנת יישום רעיונות</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td>גרסה 6.1, יולי 2014</td></tr></tbody></table>

ניתוח תזרים cytometric של תא הטבעי killer ממס פעילות דם מלא אנוש

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

cytotoxicity תא NK הוא מדד בשימוש נרחב כדי לקבוע את ההשפעה של התערבות חיצונית על תפקוד תאי NK. עם זאת, את הדיוק ואת השחזור של assay זה יכולים להיחשב יציב, אם בשל טעויות של המשתמש או בגלל הרגישות של תאי NK כדי מניפולציה ניסויית. כדי למנוע בעיות אלה, עבודה המפחיתה אותם למינימום הוקמה ומוצגת כאן. לשם המחשה, השגנו דגימות דם, בנקודות זמן שונות, מן הרצים (n = 4) שהוגשו התקף אינטנסיבי של פעילות גופנית. ראשית, תאי NK מזוהים בו זמנית ומבודד באמצעות תיוג CD56 ומיון מגנטי מבוסס, ישירות דם שלם מ קטנה כמו למיליליטר אחד. תאי NK המסודרים יוסרו מכל נוגדנים מגיבים או מכסה. הם ניתן לספור על מנת להקים ספירת תאי NK מדויקת למיליליטר דם. שנית, תאי NK המסודרים (תאי effectors או E) ניתן לערבב עם 3,3&#39;-Diotadecyloxacarbocyanine פרכלורט (DIO) מתויג K562 תאים (תאים היעד או T) לעבר assay-אופטימלית 1: 5 T: יחס E, ונותחו באמצעות cytometer זרימה הדמיה המאפשרת הדמיה של כל אירוע חיסול כל חיובי כוזב או שלילי שגוי (כגון כפילויות או תאי מפעיל). עבודה זו יכולה להסתכם בערך 4 שעות, ומאפשרת תוצאות יציבות מאוד גם כאשר עובדים עם דגימות אנושיות. תאריך הכניסה, צוותות מחקר יכול לבדוק התערבויות ניסיון כמה בבני אדם, ולהשוות מדידות על פני מספר נקודות זמן מבלי להתפשר על השלמות של הנתונים.

קביעת ספירת תאי NK ההשפעה של ריצה כבד על ספירת תאי NK בדם כולו נמדדה, באמצעות פרוטוקול התרגיל כמתואר באיור 2. דגימות דם נלקחו לפני האימון, מיד לאחר האימון, 1.5 שעות לאחר פעילות גופנית, ולבסוף 24 ו -48 שעות לאחר לקיחת הדם הראשונית. ריכוז תאי NK למיליליטר של דם מלא נמדד עבור כל רץ (איור 3 א) ובממוצע (איור 3B) עבור כל נקודת זמן. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page="1" style="...

עבודה זו מתארת זרימת עבודה מתקדמת לקביעה מדויקת ומהירה של ספירת תאי NK (רוצח טבעי) וציטוטוקסיות של תאי NK בדגימות דם אנושיות.

ניתוח תזרים Cytometric של תא הטבעי Killer ממס פעילות דם מלא אנוש

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

המטרה הכוללת של ניסוי זה היא לקבוע את ספירת תאי NK ורמות ההפעלה הציטוטוקסית בדגימת דם מלאה אנושית בצורה מהירה, אמינה ויציבה. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות בתחומים אימונולוגיים, כגון, מהן ההשפעות של התערבויות חיצוניות על הפעילות הביולוגית של תאי NK? היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מהירה ומדויקת, תוך שהיא מספקת תוצאות הניתנות לשחזור על פני ניסויים.כדי לבודד תאי NK מדם מלא אנושי, הנח תחילה צינורות של 15 מיליליטר המסומנים דגימת דם מלאה, שבר שלילי ושבר חיובי במיקומים המתאימים במדף הצינור המפריד בין התאים. כאשר כל הצינורות נטענים, הכנס את מתלה המפריד למיני-דגימה לתיוג אוטומטי, ובחר Reagent בתפריט, כדי להדגיש את המיקום שבו הבקבוקון יונח על המתלה. בחר קרא מגיב כדי להפעיל את קורא הקוד הדו-ממדי והחזק את בקבוקון המגיב המתאים מול קורא הקוד הדו-ממדי בזווית של 0.5 עד 2.5 סנטימטרים ממכסה קורא הקוד.הנח את בקבוקון הקריאה למצב מתלה המפריד המתאים. לאחר מכן, תחת הכרטיסייה הפרדה, סמן את המיקומים הרצויים. לאחר מכן פתח את תפריט המשנה תיוג ובחר תוכנית תיוג אוטומטית.הקצה את מיקרו-חרוזי המגיב להפרדת התאים למיקומי מתלה 1, 2, 3 ו-4. ובחר בתוכנית ההפרדה של Posselwb. בחר את תוכנית Rinse Wash.הזן 1500 מיקרוליטר עבור נפח לדוגמה תחת תפריט המשנה נפח והקש Enter. לאחר מכן לחץ על הפעל כדי להתחיל בהפרדת התאים. לחיצה על אישור כדי לאשר שיש מספיק מאגר זמין לעיבוד כל הדגימות.כדי להכין דגימת בדיקת ציטוטוקסיות, ראשית, סמן צינורות של 1.5 מיליליטר עבור כל דגימה ו/או משתתף לפי הצורך, וצנר את היחס הרצוי של תאי NK ותאי K562 המסומנים ב-DIO לכל צינור. אסוף את התאים על ידי צנטריפוגה, והסר בזהירות את הסופרנטנט מבלי להפריע לכדור התא. לאחר מכן, השעו מחדש את תערובת התאים ב-500 מיקרוליטר של מדיום תאי NK לא שלם, ותייגו את התאים בכל צינור ב-5 מיקרוליטר של פרופידיום יודיד.אוספים את התאים באמצעות צנטריפוגה נוספת, ומדגרים את תרבית החיסול ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. בתום הדגירה, צנטריפוגה את התאים באותם תנאי צנטריפוגה, והשעיה מחדש של הגלולה ב-25 מיקרוליטר של מדיום תרבית תאי NK טרי ולא שלם. כדי לנתח את התאים על ידי Flow Cytometry, ראשית, לחץ על כפתור ההפעלה בתוכנת ציטומטר זרימת ההדמיה כדי לשטוף את המערכת.לאחר מכן, לחץ על כפתור Scatterplot כדי ליצור ארבע עלילות פיזור, וטען את צינור הבקרה החיובי הכפול. באמצעות דגימת הבקרה החיובית הכפולה, קבע את העוצמה הרצויה עבור לייזר 405 מילי-וואט, כך שהגלאי לא יהיה עמוס יתר על המידה, והגדר את המצלמת לרכוש את המספר המתאים של ספירת תאים. הגדרת לייזר 405 מיליוואט בעוצמה המתאימה לזיהוי של DIO ו-PI כאחד תדרוש ניסיון הן בצבעים והן בטווח הזיהוי של ציטומטר הזרימה.לאחר רכישת דגימת הבקרה החיובית הכפולה, טען את דגימת הבקרה של DIO בלבד, בחר את המטרה 40X וכבה את הלייזר של 642 מילי-וואט ואת ערוץ Brightfield. גדל את מספר התאים המתאים וחזור על הרכישה עבור דגימת הפרופידיום יודיד בלבד. לאחר הפעלת כל דגימות הבקרה, הפעל שוב את הלייזר של 405 מילי-וואט ואת ערוץ Brightfield, ולחץ על הגדר עוצמה.לאחר מכן, תחת הכרטיסייה File Acquisition, הזן שם קובץ מותאם אישית ובחר תיקייה לשמירת קובצי הנתונים. לאחר מכן, הזן את מספר התאים שיש לרכוש. טען את צינור הדגימה הניסיוני הראשון ולחץ על כפתור הרכישה.לאחר הפעלת כל הדגימות פתח את יישום התוכנה לניתוח ציטומטר זרימת הדמיה, ופתח קובץ RIF ניסיוני יחיד. תחת לשונית הפיצוי, בחר צור מטריצה חדשה. התוכנה תבקש לבחור את קבצי הצבע הבודד, ותמזג אותם ליצירת קובץ מטריצה שייבחר להחלת פיצוי הערוץ.השתמש בפונקציה אבני בניין כדי להגדיר את תרשימי הנקודות המתאימים. לאחר מכן לחץ על פונקציית הסטטיסטיקה כדי לגשת למספרי התאים בכל שער. בניסוי מייצג זה, נלקחו דגימות דם כפי שצוין ונמדד ריכוז תאי NK למיליליטר דם מלא עבור כל רץ, ובממוצע עבור כל נקודת זמן.שלושה מתוך ארבעה רצים הציגו עלייה קלה דומה בספירת תאי NK לאחר פעילות גופנית. מיד לאחר מכן ירידה חדה, לפני שחזרה לאט לאט לשגרה, 24 עד 48 שעות לאחר סיום האירוע. בממוצע, ספירת תאי ה-NK ירדה 1.5 שעות לאחר האימון, אך חזרה לרמות כמעט נורמליות לאחר 24 שעות.לאחר חישוב ספירת התאים, הפעילות הציטוטוקסית של תאי ה-NK נותחה מיד כפי שהודגם זה עתה, עם ירידה ממוצעת בציטוטוקסיות של תאי NK באופן מיידי, ו-1.5 שעות לאחר סיום אירוע האימון, שגדלה באופן משמעותי ב-24 שעות לאחר האימון. הציטוטוקסיות של NK נותרה גבוהה בהשוואה לרמות שלפני האימון, אם כי באופן לא משמעותי. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך כארבע שעות כאשר היא מבוצעת כראוי.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשיג ולאפיין את ספירת תאי NK ופעילות ציטוטוקסית מדגימות דם אנושיות בצורה הידרופית הניתנת לשחזור.

flow-cytometric-analysis-natural-killer-cell-lytic-activity-human

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מדגים את הפעילות הליטית של תאי הרג טבעיים כנגד תאי מטרה מוכתמים פלואורסצנטית. השיטה מאפשרת מדידת ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי תאי NK על ידי צביעת תאים מתים ושימוש בציטומטר זרימה לכימות תאי מטרה חיים ומתים.

בדיקת ציטוטוקסיות של תאי הרג טבעיים הכנת דגימה לניתוח ציטומטרי זרימה

סרטון זה מדגים ביצוע בדיקת שחרור לקטט דהידרוגנאז כדי לקבוע את ציטוטוקסיות תאי הרג טבעי (NK) כנגד תאי סרטן המטרה. הבדיקה מכמתת את שחרורו של האנזים ציטופלזמי לקטט דהידרוגנאז מתאי סרטן על ידי מדידת הספיגה של המוצר בצבע אדום שנוצר.

בדיקת מבחנה להערכת ציטוטוקסיות של תאי הרג טבעיים כנגד תאים סרטניים

פרוטוקול זה מתאר בדיקת ציטוטוקסיות רגישה מבוססת תאים. על ידי ספירת הירידה בתדירות של תאי CD4+ T מטרה חיים בנוכחות מספר הולך וגדל של תאי CD8+ T אפקטיביים, בדיקה זו מאפשרת הערכה ישירה של הפעילות הציטוליטית של תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן.

בדיקת ציטומטריית זרימה מבוססת תאים למדידת פעילות ציטוטוקסית

שיטה פשוטה ואמינה מתוארת כאן כדי לנתח קבוצה של פונקציות תא NK כגון degranulation, ציטוקינים וייצור chemokine בתוך תת תא NK שונה.

Flow Cytometry מבוסס Assay עבור הניטור של פונקציות תא NK

שיטה מבוססת cytometry זרימה כדי לקבוע באופן כמותי את הפעילות ציטוטוקסיות של תאים אנושיים של הרוצח הטבעי מוצגים כאן.

וזמינותו Cytotoxicity מבוססי Cytometry זרימה להערכה של פעילות תאי NK אנושי

התחמקות של הרוצח הטבעי (NK) תא מתווכת מיגור על ידי תאים סרטניים חשוב לחניכה והתקדמות סרטן. כאן, אנו מציגים שני פרוטוקולים שאינם מבוססי רדיואקטיביות כדי להעריך את הרעילות של התאים NK בתיווך לקראת תאי גידול בכבד. בנוסף, פרוטוקול שלישי מוצג לניתוח העברת תאים של NK.

מדידה של הרוצח הטבעי Cell-בתיווך ציטורעילות והגירה בהקשר של תאים סרטניים בכבד

פרוטוקול לחקר אירועים המונעים על ידי FcγRIIIa על ידי נוגדנים טיפוליים בתאי הרג טבעיים אנושיים מתואר כאן. פלטפורמת גירוי מלאכותית זו מאפשרת חקירה של פונקציות אפקט במורד הזרם כגון degranulation, ייצור chemokine / ציטוקינים, ומסלולי איתות בתיווך FcγRIIIa וחלקי Fc של נוגדנים המעורבים בכריכה.

הערכה של אירועי תאי רוצח טבעי אנושי המונעים על ידי מעורבות FcγRIIIa בנוכחות נוגדנים טיפוליים

במאמר זה, אנו מתארים שיטה למדוד גליקוליזה ונשימה מיטוכונדריאלי בתאים קטלניים אנושיים עיקריים (NK) מבודדים מדם היקפי, במנוחה או בעקבות הפעלה המושרה IL15. הפרוטוקול המתואר יכול להיות מורחב בקלות לתאי NK אנושיים ראשוניים המופעלים על ידי ציטוקינות אחרים או גירויים מסיסים.

ניתוח של חילוף החומרים של תאי הרוצח הטבעי האנושי

פרוטוקול זה מתאר שיטה נטולת תוויות לניתוח מהיר של תא בודד של ספירת תאי הרג טבעי (NK) ופעילותם באמצעות טכנולוגיית הדמיית צל ללא עדשה. שיטה זו מכמתת שינויים מורפולוגיים בתאי NK בודדים על ידי ניתוח ממוחשב של דפוסי העקיפה שלהם.

פלטפורמת הדמיה נטולת עדשות הניתנת לפריסה בשטח לניתוח מהיר ללא תוויות של הפעלת תאי הרג טבעיים

פרוטוקול זה מספק תהליך עבודה מאוזן במבחנה למדידה עקבית של ציטוטוקסיות טבעית, מתווכת קולטני אנטיגן כימריים ותלויה בנוגדנים של תאי רוצח טבעיים אנושיים, באמצעות הדמיית תאים חיים וציטומטריית זרימה.

כימות ציטוטוקסיות של תאי NK המועצמת על ידי קולטני אנטיגן כימריים ונוגדנים טיפוליים באמצעות הדמיית תאים חיים וציטומטריית זרימה

חקור ניתוח זרימה ציטומטרי של תאי NK מדם מלא אנושי לקביעת מספר תאים ורמת פעילות ציטוטוקסית. שיטה זו מספקת תוצאות מהירות, מדויקות וברות שחזור למחקר אימונולוגי.

ניתוח תזרים Cytometric של תא הטבעי Killer ממס פעילות דם מלא אנוש

גלה סרטונים נוספים