שיטת הזרקה אלטרנטיבית והמאומתת עבור גישת שטח subretinal דרך בגישה אחורית Transcleral

המטרה הכוללת של מחקר זה היא לתאר טכניקת הזרקה תת-רשתית חדשה שניתן להשתמש בה כדי למקד וקטורים ויראליים, חומרים פרמקולוגיים, או לגרום לתאי גזע פלוריפוטנטיים לחלל התת-רשתית בעכברים. שיטה זו יכולה לענות על שאלות מפתח בתחומי מדעי הראייה ורפואת העיניים, כגון הערכת היעילות של התערבויות טיפוליות חדשניות לניוון רשתית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן להשתמש בה להעברת חומר לחלל התת-רשתית, עם יעילות גבוהה, נזק מינימלי והתאוששות מהירה של מבנה ותפקוד הרשתית.

מי שידגים את ההליך יהיה סאצ'ין פ', טכנאי מהמעבדה שלי. כדי להתחיל בהליך זה, קצצו את השפם של עכבר מורדם כדי להקל על ההדמיה, ושמרו על טמפרטורת הגוף של החיה על 37 מעלות צלזיוס עם כרית מים במחזור. לאחר מכן, הרחב את האישונים שלו עם טיפות עיניים של 2.5% פנילפרין.

לאחר מכן, מרחו טיפות עיניים מתיל צלולוז כדי למנוע יובש, ולמזער קטרקט חולף המושרה על ידי הרדמה. עקר את המכשירים לפני הניתוח. לאחר מכן, הכינו את הפלואורסצאין המדולל בארון בטיחות ביולוגית.

מלאו את המזרק בכמות המתאימה של פלואורסצאין. לאחר מכן, בצעו צביטה בבוהן כדי לוודא שהחיה מורדמת עמוק, ומקמו את העכבר כך שהעין המוזרקת פונה כלפי מעלה ונראית בבירור במיקרוסקופ הניתוח. צבט בעדינות את הלחמית הטמפורלית עם זוג מלקחיים דקים.

לאחר מכן, בצע חתך היקפי של כ-90 מעלות באמצעות המספריים המעוקלים של Vannas. חזור על ההליך על הקפסולה של טנון הבסיסית. לאחר מכן, כרתו את בעיית החיבור שמסביב בעזרת מלקחיים דקים, תוך סיבוב הגלובוס באף.

עבדו לכיוון מקום ההזרקה במרחק של כ-0.5 מילימטרים מהעצב האופטי והקפידו מאוד להימנע משיבוש הסינוס הרטרו-אורביטלי. שלב קריטי הוא חשיפת אתר ההזרקה הדורש סיבוב של העין, מבלי לפגוע בעין עצמה, או במבנים נלווים, ובמיוחד הימנעות מפגיעה בשק הדם המסלולי. בהליך זה, בצע חתך קטן בסקלרה של מקום ההזרקה, על ידי גירוד עדין של העין עם להב עיניים של 22.5 מעלות.

חתך זה צריך להיות גדול מספיק כדי לאפשר לקצה המחט לעבור דרך הסקלרה. לאחר מכן, הכנס את המחט המשופעת בגודל 33 לתוך הטרשת כשהשיפוע פונה וזווית מקבילה לרשתית. הזריק את הכמות הרצויה של 0.01% פלואורסצאין על ידי לחיצה איטית על הבוכנה בלחץ אחיד.

שימו לב שכאשר המחט נמצאת בחלל התת-רשתית, תורגש התנגדות קלה בזמן לחיצה על הבוכנה. לא תהיה התנגדות אם המחט מנקבת את הרשתית, אך עמידות גבוהה אם המחט לא חודרת לסקלרה או ל-RPE. שלב קריטי נוסף הוא ההזרקה המכוונת לחלל התת-רשתית.

יש לעשות זאת מבלי לחדור דרך הרשתית הנוירו-חושית, לחלל הזגוגית. המתן מספר שניות לפני משיכת המחט, כדי למזער זרימה חוזרת. לאחר מכן, שטפו את העין במי מלח סטריליים, וודאו שהעין הסתובבה בחזרה למקומה הרגיל.

לאחר מכן, מרחו שכבה עבה של קרם עיניים אנטיביוטי משולש על פני הקרנית של העין המוזרקת. לאחר מכן, הנח את העכבר בכלוב בודד נקי להתאוששות. עקוב אחר הנשימה והטמפרטורה שלו במהלך התאוששות ההרדמה, ובדוק שהוא יכול לשמור על שכיבה על החזה.

לבצע ניטור וטיפול מתאימים נוספים לאחר הניתוח, כולל הזרקה תת עורית של קרפרופן, לטיפול בכאב לאחר הניתוח. הנה שחזור תלת מימדי של הבלב בצורת כיפה באתר ההזרקה. לאחר מכן ממלאים את הכיפה בלבן צפוף כדי להראות את ההיקף והשוליים של ניתוק הרשתית.

ניתן לראות חתכי רשתית מה-OCT בלבן, בעוד שהחלל המלא בנוזל ברמת ה-RPE וקולטני האור נראה שחור. ובאיור זה, סריקות ה-OCTB המייצגות באתר היפרדות הרשתית המקסימלית מוצגות לפני ההזרקה, 10 דקות לאחר ההזרקה וארבעה שבועות לאחר ההזרקה. תמונה זו מציגה את היווצרות והרזולוציה של כתם שטוח מהזרקה של 0.3 מיקרוליטר.

ותמונה זו מציגה את היווצרות והרזולוציה של כיפה מהזרקה של 0.5 מיקרוליטר, בעוד שתמונה זו מציגה את היווצרות והרזולוציה של כיפה מהזרקה של מיקרוליטר אחד. לבסוף, הנה דוגמה להצטלקות כורואידית חמורה ודילול רשתית במקום ההזרקה. הרשתית שומרת על תפקוד תקין לאחר היעלמות הדף.

בתשע עוצמות תאורה, צורות הגל לתגובות בתיווך מוט סקוטופי מוצגות לפני ההזרקה וארבעה שבועות לאחר ההזרקה עבור זריקות של 0.3 מיקרוליטר, 0.5 מיקרוליטר ו-1 מיקרוליטר. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 10 עד 15 דקות לכל עין. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב להעריך את בריאות העיניים לפני שמתחילים.

אל תכלול עיניים עם אטימות קרנית או עדשה, או עיניים עמוקות שעבורן הליך זה יהיה קשה מאוד. לאחר הליך זה ניתן לבצע שיטות נוספות כגון OCT והדמיית פונדוס על מנת להעריך את איכות ההזרקה.