Examining Proteasome Assembly with Recombinant Archaeal Proteasomes and Nondenaturing PAGE:  The Case for a Combined Approach

Dilrajkaur Panfair; Andrew R. Kusmierczyk

doi:10.3791/54860

בחינת העצרת הפרוטאזום עם רקומביננטי Archaeal הפרוטאזומים ועמוד Nondenaturing: The Case for גישה מ...

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

Examining Proteasome Assembly with Recombinant Archaeal Proteasomes and Nondenaturing PAGE: The Case for a Combined Approach

בחינת העצרת הפרוטאזום עם רקומביננטי Archaeal הפרוטאזומים ועמוד Nondenaturing: The Case for גישה משולבת

Full Text

6,906 Views

09:57 min

December 17, 2016

DOI: 10.3791/54860-v

Dilrajkaur Panfair¹, Andrew R. Kusmierczyk¹

¹Department of Biology,Indiana University-Purdue University, Indianapolis (IUPUI)

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

פרוטוקול זה משתמש בשני Coexpression למקטע ו למקטע postlysis ערבוב לבדיקה יסודית יותר של הרכבת הפרוטאזום רקומביננטי.

המטרה הכוללת של ניסוי זה היא לנתח הרכבה של קומפלקס רב-חלבוני כגון הפרוטאזום, באמצעות תת-יחידות רקומביננטיות, ואלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד, או PAGE. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הפרוטאזום כגון, באילו מיני ביניים נתקלים לאורך מסלול ההרכבה של קומפלקס חלבון זה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת סינון מהיר של הרכבה בשתי גישות מקבילות, המאפשרת זיהוי של חומרי ביניים במסלול הפעלה וכיבוי. הליך זה מתחיל בביטוי חיידקים כמתואר בפרוטוקול הטקסט. כדי לבצע ליזה חיידקית, יש להפשיר את משטח התאים המושרה המבטא במשותף את השילוב הרצוי של תת-יחידות פרוטאזום, על קרח למשך חמש דקות. לאחר ההפשרה, השעו מחדש את המזרן ב-600 מיקרוליטר של מאגר ליזה.דגרו את המתלה ב-30

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos