Name: דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש תסיסנית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: למד שיטה פשוטה למדידת צריכת אתנול התנדבותית בזבובי פירות Drosophila melanogaster כמדד לשינויים במצבי תגמול. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני מוטיבציה והתנהגות במדעי המוח.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים U. Heberlein וא Devineni לדיונים לטווח ארוך וייעוץ טכני. כמו כן, אנו מודים לחברי המעבדה שוחט-אופיר, א Benzur, ל קזז, וע &#39;שלום, על העזרה עם הוכחת השיטה. הערכה מיוחדת הולכת אליעזר Costi להקמת מערכות הזבוב במעבדה. עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע (384/14) ואת מענקי שילוב קריירה מארי קירי (CIG 631,127).

<ol><li>Robinson, G. E., Fernald, R. D., Clayton, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+and+social+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Genes and social behavior.</a> Science. 322, 896-900 (2008).</li>
<li>Koob, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobiological+substrates+for+the+dark+side+of+compulsivity+in+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacol%22%5BJournal%5D)">Neurobiological substrates for the dark side of compulsivity in addiction.</a> Neuropharmacol. 56, Suppl 1 18-31 (2009).</li>
<li>Kaun, K. R., Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+to+study+drug+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model to study drug addiction.</a> Hum Genet. 131, 959-975 (2012).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Addiction-like+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Addiction-like behavior in Drosophila.</a> Commun Integr Biol. 3, 357-359 (2010).</li>
<li>Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+deprivation+increases+ethanol+intake+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila.</a> Science. 335, 1351-1355 (2012).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+ethanol+consumption+in+Drosophila+models+features+of+addiction%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol+%3A+CB%22%5BJournal%5D)">Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction.</a> Curr Biol : CB. 19, 2126-2132 (2009).</li>
<li>McBride, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+ablation+impairs+short-term+memory+and+long-term+memory+of+courtship+conditioning+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Mushroom body ablation impairs short-term memory and long-term memory of courtship conditioning in Drosophila melanogaster.</a> Neuron. 24, 967-977 (1999).</li>
<li>Ejima, A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D., Griffith, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+learning+of+pheromonal+cues+modulates+memory+consolidation+in+trainer-specific+associative+courtship+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Sequential learning of pheromonal cues modulates memory consolidation in trainer-specific associative courtship conditioning.</a> Curr Biol. 15, 194-206 (2005).</li>
<li>Ejima, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generalization+of+courtship+learning+in+Drosophila+is+mediated+by+cis-vaccenyl+acetate%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Generalization of courtship learning in Drosophila is mediated by cis-vaccenyl acetate.</a> Curr Biol. 17, 599-605 (2007).</li>
<li>Keleman, K., Kruttner, S., Alenius, M., Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+Drosophila+CPEB+protein+Orb2+in+long-term+courtship+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Function of the Drosophila CPEB protein Orb2 in long-term courtship memory.</a> Nat Neurosci. 10, 1587-1593 (2007).</li>
<li>Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+model+for+alcohol+reward%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Drosophila model for alcohol reward.</a> Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).</li>
<li>Xu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+propensity+for+consuming+ethanol+in+Drosophila+requires+rutabaga+adenylyl+cyclase+expression+within+mushroom+body+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">The propensity for consuming ethanol in Drosophila requires rutabaga adenylyl cyclase expression within mushroom body neurons.</a> Genes Brain Behav. 11, 727-739 (2012).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolution+of+Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+alcohol+research%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The evolution of Drosophila melanogaster as a model for alcohol research.</a> Annu Rev Neurosci. 36, 121-138 (2013).</li>
<li>Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLIC%3A+high-throughput%2C+continuous+analysis+of+feeding+behaviors+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila.</a> PloS one. 9, 101107(2014).</li>
<li>Itskov, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+monitoring+and+quantitative+analysis+of+feeding+behaviour+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behaviour in Drosophila.</a> Nat Commun. 5, 4560(2014).</li>
<li>Yapici, N., Cohn, R., Schusterreiter, C., Ruta, V., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Taste+Circuit+that+Regulates+Ingestion+by+Integrating+Food+and+Hunger+Signals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Taste Circuit that Regulates Ingestion by Integrating Food and Hunger Signals.</a> Cell. 165, 715-729 (2016).</li>
<li>Peru, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting%2C+experience-dependent+alcohol+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Addict+Biol%22%5BJournal%5D)">Long-lasting, experience-dependent alcohol preference in Drosophila.</a> Addict Biol. 19, 392-401 (2014).</li>
<li>Dus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrient+Sensor+in+the+Brain+Directs+the+Action+of+the+Brain-Gut+Axis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Nutrient Sensor in the Brain Directs the Action of the Brain-Gut Axis in Drosophila.</a> Neuron. 87, 139-151 (2015).</li>
<li>Anderson, D. J., Adolphs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+studying+emotions+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A framework for studying emotions across species.</a> Cell. 157, 187-200 (2014).</li>
<li>Gibson, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+responses+to+a+repetitive+visual+threat+stimulus+express+a+persistent+state+of+defensive+arousal+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral responses to a repetitive visual threat stimulus express a persistent state of defensive arousal in Drosophila.</a> Curr Biol. 25, 1401-1415 (2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

כאן, אנו מדגימים את הפרטים של גישה משולבת למדידת שינויים בהתנהגות חיפוש תגמול, בהתבסס על עבודות קודמות שתוארו על ידי Devineni et al.6 ושוחט-אופיר ואח'5. החלק הראשון של הפרוטוקול משתמש בסוגים שונים של אינטראקציות מיניות כקלט החוויה, והחלק השני משתמש במבחן הזנה דו-ברירה כדי להעריך את השפעת החוויה על ההעדפה לצרוך אתנול.
כפי שמוצג על ידי Devineni et al.6, ניהול עצמי של אתנול בזבובים הוא התנהגות חזקה, המאופיינת בהתחלה בהעדפה נמוכה ומשתנה ש...

שינוי התנהגות בתגובת הניסיון מאפשר חיות כדי להתאים את התנהגותם לשינויים בסביבתם 1. במהלך תהליך זה, חיות לשלב המצב הפיזיולוגי הפנימי שלהם עם התנאים המשתנים של הסביבה החיצונית ולאחר מכן לבחור פעולה אחת על פני אחר כדי להגדיל את סיכויי הישרדות ורבייה שלהם. מערכות זכו התפתחו להניע התנהגויות נדרשות להישרדותו של יחידים ושל מינים ידי חיזוק התנהגויות משפרי הישרדות מיידית, כגון אכילה או שתייה, או אלה המבטיחים להישרדות ארוך טווח, כגון התנהגות מינית או אכפתיות עבור צאצאים 2. תרכובות מלאכותיות כגון תרופות של התעללות גם להשפיע על מערכות תגמול על ידי מסלולים עצביים בוחר שיתוף שמתווכים 2 תגמולים טבעיים. במהלך שני העשורים האחרונים, זבוב הפרות תסיסנית כבר נקבע כמודל מבטיח ללימוד Molecתואר בלבד ומנגנונים עצביים שמעצבים את ההשפעות של אתנול על התנהגות 3,4. בעבר, זיהינו תת-קבוצה של נוירונים peptidergic בזבובים (קולטן NPF / NPF (R נוירונים)) כי תגמולים טבעים זוג, כגון חוויה מינית, למוטיבציה של קבלת תגמולי תרופה 5. ביטוי NPF רגיש הוא חוויות מיניות וכדי תגמולי תרופה, כגון הרעלת אתנול. שינויים ברמות ביטוי NPF מומרים שינויי מנהל עצמי אתנול 5, שם הגבוהה NPF מפחיתה ונמוך NPF מגדיל את ההעדפה לצרוך אתנול. הפעלת נוירונים NPF היא מתגמלת לזבובים, כפי שהם להציג העדפה ברורה ריח לזווג עם ההפעלה, אשר באו לידי ביטוי גם על ידי צריכת אתנול מופחתת. יתרה מכך, הפעלה של נוירונים NPF מפריעה ליכולת של זבובים כדי ליצור קשר חיובי בין שיכרון אתנול רמז לא ריח. הקשר הסיבתי בין NPF / Rמערכת, מזיכרון הגמול, וצריך אתנול עולים כי אחד יכול להשתמש מנהל עצמי אתנול כאמצעי לשינויים במדינות גמול 5. בפרסום זה אנו מדגימים גישה משולבת עבור התחבר למערכת תגמול ושינויי assaying הטבעיים לטוס במדינות גמול. הגישה מורכבת משני חלקים נפרדים, פרוטוקול אימון מניפולצית חוויות תגמול קשור טבעיות, ואחריו assay מזין נימי שתי הברירה (CAFE) להעריך מנהל עצמי אתנול כאומדן לשינויים במדינות גמול. את assay CAFE משול מבחני בחירת שני בקבוקי שימוש במחקרים מכרסמים עבור מנהל עצמי בסמים הוכח משקף מאפיינים מסוימים של התנהגות התמכרות דמוית זבובים 6.

<table><tbody><tr><td>בקבוקוני פוליסטירן 25 x 95 מ"מ</td><td>FlyStuff</td><td>32-109</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני פלסטיק צרים FlyStuff</td><td></td><td>42-102</td><td></td></tr><tr><td>מחט סטרילית חד פעמית 18 גרם ו-27 גרם&nbsp;</td><td>ניתן לרכוש על ידי כל חברה</td><td></td><td>1.20 X 38 מ"מ (18 G x 1 1/2 אינץ'), 0.40 X 13 מ"מ (27 G x 1/2 אינץ')</td></tr> <tr><td>10 x 75 מ"מ צינורות תרבות חד פעמיים מזכוכית בורוסיליקט</td><td>kimble chase</td><td>73500-1075</td><td></td></tr><tr><td>פיפטות מכוילות 5 & #956; L</td><td>VWR</td><td>53432-706</td><td>מקודד בצבע לבן להכיל 5 &#956; L</td></tr><tr><td>שמן מינרלי&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp;</td><td>M5904</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז, ביולוגיה מולקולרית כיתה</td><td>CALBIOCHEM</td><td>573113</td><td></td></tr><tr><td>אבקת תמצית שמרים למיקרוביולוגיה</td><td>ניתן לרכוש על ידי כל חברה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp;</td><td>32221</td><td></td></tr><tr><td>קצות פיפטה סטנדרטיות (מיקרו-פיפטים)</td><td>ThermScientific</td><td>T114R-Q</td><td>נפח: 0.1 - 20 & #956; L (אולטרה-מיקרו)</td></tr><tr><td>IDENTI-PLUGS (תקעי צינור קצף)</td><td>Jaece</td><td>L800-A</td><td>מתאים לפתח 6 - 13 מ"מ</td></tr><tr><td>IDENTI-PLUGS (תקעי צינור קצף)</td><td>Jaece</td><td>L800-D</td><td>מתאים לפתח 35 - 45 מ"מ</td></tr><tr><td>Virginator Fly Stock&nbsp;</td><td>מרכז מניות בלומינגטון דרוזופילה</td> <td>#24638</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקונים צרים, חבילת מגשים (PS)</td><td>Genesee Scientific Corporation</td><td>&nbsp;# 32-109BR</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Media מתכונים ושיטות</td><td>מרכז המניות בלומינגטון דרוזופילה</td><td>http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פרופיונית</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp;</td><td>P5561</td><td></td></tr><tr><td>חומצה זרחתית</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp;</td><td></td><td></td>W290017</tr><tr><td>מת'ל 4-הידרוקסיבנזואט</td><td>סיגמא-אולדריץ'&nbsp;</td><td>H3647</td><td></td></tr><tr><td>אגר</td> אגר <td>ניתן לרכישה על ידי כל חברה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קמח תירס</td><td>ניתן לרכוש על ידי כל חברה</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מולסה של סבתא</td><td>B& G Foods, Inc</td><td>לא צוין</td><td></td></tr><tr><td>שמרים יבשים מיידיים</td><td>ניתנים לרכישה על ידי כל חברה</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש<em&gt; תסיסנית</em

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

אנו מתארים פרוטוקול למדידת מינהל עצמי אתנול בזבובי פירות (תסיסנית) כמדד לשינויים במדינות גמול. אנו מדגימים דרך פשוטה כדי לנצל את מערכת גמול הזבוב, לשנות חוויות הקשורות גמול טבעי, ולהשתמש צריכת אתנול מרצון כאמצעי לשינויים במדינות גמול. הגישה משמשת ככלי רלוונטי ללמוד הנוירונים והגנים לשחק תפקיד שינויים בתיווך ניסיון של מצב פנימי. הפרוטוקול מורכב משני חלקים נפרדים: חשיפת הזבובים לחוויות מתגמלות nonrewarding, ואת מנסה לאמוד את צריכת אתנול מרצון כמדד את המוטיבציה להשיג גמול תרופה. שני החלקים ניתן להשתמש באופן עצמאי כדי לגרום אפנון ניסיון בתור צעד ראשון עבור מבחנים במורד זרם או כקובץ assay האכלה שני-בחירה עצמאית, בהתאמה. הפרוטוקול אינו מחייב התקנה מסובכת ולכן יכול להיות מיושם בכל laboratory עם כלי תרבות זבוב בסיסיים.

FPreviously, Devineni et al. הראה שכאשר זבובי פירות ניתנים הבחירה לצרוך מזון המכיל אתנול, הם מציגים העדפה חזקה למזון המכיל אתנול מעל nonethanol המכיל מזון 6. המוצגים כאן הן כמה תוצאות נציגים השגנו כאשר מנסים לאמוד העדפת אתנול המולד של זבובי זכרים תמימים שלא עברה פרוטוקול האימון. זבובי זכר S הנאיבי קנטון נאספו על eclosion, בגילים...

אנו מתארים פרוטוקול גרימת מתגמל nonrewarding חוויות בזבובי פירות (תסיסנית) באמצעות צריכת אתנול מרצון כאמצעי לשינויים במדינות גמול.

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

המטרה הכללית של הליך זה היא למדוד ניהול עצמי של אתנול בזבובים כסמן לשינויים במצבי תגמול. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מרכזיות במדעי המוח, כגון כיצד נרשם ניסיון במוח וכיצד הוא מוביל לשינוי בהתנהגות. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא פשוטה יחסית ואינה דורשת מערך מורכב.הפרוטוקול מורכב משני חלקים נפרדים. הראשון הוא חשיפת הזבובים לחוויות מתגמלות ולא-מתגמלות, והשני הוא בדיקת צריכה רצונית של אתנול כמדד למוטיבציה להשגת תגמול של סם. ניתן להשתמש בשני חלקי הפרוטוקול באופן עצמאי.לגוף מודולציית הניסיון כשלב ראשוני עבור בדיקות המשך, או כבדיקת הזנה עצמאית בעלת שתי אפשרויות בחירה. את הפרוצדורה יעמידו ג'וליה ריבקין, סטודנטית לדוקטורט, ושיר זיר, סטודנטית לתואר שני, שתיהן מהמעבדה שלי. כדי להתחיל בהכנת המזין הנימי, קחו תחילה מבחנה סטנדרטית לזבובים עם חורים קטנים לאורך דופן המבחנה.השתמשו בלהב תער כדי לחתוך את פקק הבקבוק לשניים, לרוחב. סמנו ארבע נקודות על פני הפקק, כך שייווצר צורה של ריבוע למיקום מחזיקי הנימיים. באמצעות מחט במידה 18-gauge, צרו ארבעה חורים דרך הפקק במיקומי הסימונים.הרחיבו את החורים באמצעות מיקרופיפטה. בעזרת להב תער, גזרו ארבע מיקרופיפטות כך שיחזיקו בחוזקה קפילריות זכוכית של 5 µL. הכניסו אותן לתוך החורים בפקק שהוכן.סמנו על הפקק את המיקום של שתי הקפילריות שיכילו את האתנול. לאחר מכן, סדרו מבחנות זכוכית במערכי מיקרו-צנטריפוגה. המיסו מזון לזבובים, ואז שפכו 2 mL לכל אחת מהמבחנות.המתינו עד שהמזון יתקשה, ולאחר מכן כסו את המבחנות בניילון נצמד. התחילו בבחירת זבובים זכרים שהוחזקו בנפרד במבחנות קטנות יותר בבידוד. חלקו אותם באופן אקראי לשתי קבוצות.אלו שיעברו חוויות זיווג מתגמלות, לעומת חוויות זיווג שאינן מתגמלות. החל מקבוצה שאינה מתגמלת, הוסיפו נקבה שזיווגה כבר התבצע לכל מבחנה. עבור קבוצת התגמול, הוסיפו נקבה בתולה לכל מבחנה.עקבו אחר מפגשי ההמating כדי להבטיח שזכרים המקיימים אינטראקציה עם נקבות בתולות מזווגים בהצלחה בתוך השעה הראשונה, ושהזכרים המקיימים אינטראקציה עם נקבות שזווגו בעבר אינם מזווגים. חיוני לצפות בדייקנות, כדי לוודא שקוהורט הזיווג אכן עוברים זיווג, ושקוהורט הדחייה אינם מצליחים להזדווג.לאחר שעה, הוציאו מהניסוי את הזכרים מקבוצת הנשואים שסירבו אשר הצליחו להזדווג, ואת הזכרים מקבוצת הזכרים שהזדווגו אשר לא הזדווגו עד לסיום מפגש האימון הראשון. סיימו את מפגש ההתנייה על ידי שאיבת הנקבות שהזדווגו בעבר מהתנאי שאינו מעניק תגמול, ושמרו פרטים אלו לניסויים מאוחרים יותר. לבסוף, הוציאו והשליכו את הנקבות מקבוצת הזכרים שהזדווגו.הניחו לזבובים לנוח למשך שעה, ולאחר מכן חזרו על בדיקת ההתנייה שנמשכת שעה פעמיים נוספות, עם הפסקה של שעה בין פעם אחת לשנייה. יש לחזור על מפגשי אימון אלו בכל יום למשך שלושה ימים נוספים. לאחר מפגש ההתנייה האחרון ביום הרביעי, שאבו את הזכרים הבודדים והעבירו אותם בקבוצות של שישה עד שמונה לבקבוקוני ההאכלה עם הנימים, תוך שמירה על זבובים מאותה קבוצת תגמול יחד.השתמשו בפקק רך כדי להחזיק את הזכרים במקומם בזמן ההעברה. לאחר השחלת כל הזבובים, החליפו את הפקק הרך בפקק של מאכיל הנימי. הרטיבו את הפקקים על ידי הוספה עדינה של 5 mL מים לחלק העליון של כל פקק, תוך הימנעות משפיכה של מים לתוך הבקבוקון.הכינו את תמיסות המזון של אתנול ומים, ולאחר מכן הניחו טיפות של 5 µL מהן על רצועת סרט מעבדה. המתינו עד שהתמיסה תמלא את הנימיות עד שתגיע לסימון של 5 µL. לאחר מכן, הקישו עליהן בעדינות על הרצועה כדי למקם את התמיסה בדיוק בקו המסומן מראש.אטמו את קצות הנימיות על ידי טבילה שלן בטיפות קטנות של שמן מינרלי. לבסוף, הכניסו את שתי הנימיות, זו המכילה את האתנול וזו שאינה מכילה אתנול, אל המתאמים שבפקק. הצדדים החשופים צריכים לבלוט מילימטר אחד או פחות מפני שטח הפקק.שמירה על פתח הקפילריות קרוב לפקק הרטוב מפחיתה את האידוי ומאפשרת גישה קלה למזון, מכיוון שהזבובים יושבים בדרך כלל על הפקקים ומטפסים למטה אל הקפילריה החשופה כדי להזין. בנוסף, הכינו מבחנה אחת דמה ללא זבובים, שתשמש כביקורת להערכת אידוי טבעי. לבסוף, רשמו את המיקום היחסי של הנוזל בכל אחת מהקפילריות במבחנות ביחס לקו השחור במילימטרים.הניחו את המבחנות באינקובטור הניסויי למשך 24 שעות. מדדו ורשמו את מפלס הנוזל בכל קפילרית שהוצאה ביחס לקו השחור. לאחר תחילת הניסוי, החליפו את הקפילרית בכל יום בזמן קבוע.הרטיבו שוב את הפקקים עם 2 mL של מים, ולאחר מכן החזירו את המבחנות לאינקובטור. זבובים זכרים מסוג wild type מזן Canton S, שנאספו בעת הבקיעה והובאו לגיל של ארבעה ימים, נבדקו לאורך ארבעה ימים כדי לקבוע את העדיפות המולדת שלהם לצריכת אלכוהול. ניתוח הנפחים שנצרכו מתמיסות המכילות אתנול וממיסות שאינן מכילות אתנול, מראה כי הזבובים הפגינו העדפה משמעותית למקור מזון עם 15% ethanol.ניסוי ה-CAFE חזר על עצמו עם זכרים שהזכיגו לעומת זכרים שנדחו. שתי הקבוצות הוחזקו קודם לכן באופן בודד, ונחשפו לנקבות שהסכימו או דחו את ההזכגה. עם הכנסתן לקבוצות בתוך מבחנות ה-CAFE, הקבוצה שנדחתה צרכה יותר מנימי האתנול.ממצא זה העלה כי חוסר נתפס בגימול הוביל לעלייה בהתנהגות של חיפוש גמול. לעומת זאת, זיווג מוצלח מעלה את רמות הגמול הפנימיות, מה שבתורו מפחית את צריכת האתנול. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לשמור על סביבה לחה היטב לאורך כל הניסוי, תוך דגש מיוחד על שלב הצריכה, על ידי השקיה יומית של הפקקים ושמירה על קצות הנימיות בקרבה רבה לפקקים הרטובים.

a-simple-way-to-measure-alterations-reward-seeking-behavior-using

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

זחלי תסיסנית מסוגלים לשייך גירויי ריח בתגמול בטעם. כאן אנו מתארים הפרדיגמה התנהגות פשוטה המאפשרת הניתוח של למידה אסוציאטיבית אפטטיבית הרחה.

למידה אסוציאטיבית הרחה באפטטיבית<em&gt; דרוזופילה</em&gt; זחלים

סרטון זה מתאר בדיקת האכלה לזבובי פירות שבה משתמשים במזון צבעוני כדי לפקח על האכלה ועל ההשפעה שעשויה להיות לתרכובות נוספות על פעילות ההאכלה. הפרוטוקול לדוגמה בודק את ההשפעות של מספר כימיקלים משבשים אנדוקריניים (EDC).

מבחן האכלה: הערכת העדפות האכלה בדרוזופילה מלנוגסטר

סרטון זה מתאר את מבחן העדפות הטעם, שיטה התנהגותית המשמשת למדידת משיכה או הימנעות כלפי תמיסות צבעוניות שטעמן שונה על ידי הערכת צבע הבטן של הזבוב לאחר בליעת החומר המועדף. הפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך המשמש למדידת העדפת זבובים לתמיסות בריכוזי סוכרוז משתנים.

בדיקת העדפות טעם: שיטה למדידת התנהגות האכלה בדרוזופילה

במאמר זה וידאו, אנו מתארים assay אוטומטי כדי למדוד את ההשפעה של רעב או שובע על התנהגות חיפוש מזון תלויה בריח הפירות המבוגרים לעוף melanogaster דרוזופילה.

יחיד לטוס Assay עבור התנהגות שיחור מזון ב דרוזופילה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לכימות ההימנעות של אנשים לחוצים. פרדיגמה זו היא עוצמתית אך ידידותית למשתמש וניתן להשתמש בה כדי להעריך את ההשפעה של גנים וסביבה על סוג אחד של אינטראקציה חברתית ב-Drosophila melanogaster.

Assay הפשוט לכימות חברתיות הימנעות ב Melanogaster דרוזופילה

פרוטוקול זה מתאר בדיקת תפוקה גבוהה לבדיקת העדפות הטלת ביצים של Drosophila melanogaster ברזולוציה של בעל חיים יחיד.  בדיקה זו מספקת פלטפורמה פשוטה, יעילה וניתנת להרחבה לזיהוי גנים ורכיבי מעגלים השולטים בתהליך קבלת החלטות פשוט.

Assay תפוקה גבוהה לבחינת העדפות הטלה של פרט<em&gt; תסיסנית</em

אנו מתארים כאן הגדרה התנהגותית ושיטת ניתוח נתונים לבדיקת תגובות הריח של עד 100 זבובי חומץ (Drosophila melanogaster). ניתן להשתמש במערכת זו עם גירוי ריח יחיד או מרובה, וניתנת להתאמה להפעלה אופטוגנטית או להשתקה של תת-קבוצות עצביות.

התנהגויות חוש הריח assayed ידי מעקב ממוחשב של<em&gt; תסיסנית</em&gt; בתוך אולפקטומטר ארבעה-רביע

מאמר זה מתאר assay התנהגותיים המשתמש כונן הזדווגות זכר תסיסנית melanogaste r ללמוד מוטיבציה. באמצעות שיטה זו, חוקרים יכולים לנצל טכניקות neurogenetic זבוב מתקדם לחשוף את המנגנונים הגנטיים, מולקולריים והמכשירים סלולריים העומדים בבסיס המוטיבציה הזו.

מדידת כונן מזווג סירוס ועיקור במאלה<em&gt; תסיסנית</em

אנו מדגימים assay לנתח את רמזים סביבתיים וגנטיים המשפיעים על התנהגות ההזדווגות של זבוב הפירות תסיסנית melanogaster .

שיטה לבחינת ההשפעה של רמזים סביבתיים על התנהגות ההזדווגות ב<em&gt; תסיסנית מלנוגאסטר</em

פרוטוקול זה מתאר בדיקה התנהגותית לרישום התנהגות חיפוש המעוררת סוכר באמצעות Drosophila melanogaster. הבדיקה יכולה לשמש לחקר התנהגויות הקשורות להאכלה וליקוט מזון, כמו גם את המנגנונים העצביים הבסיסיים.

מעקב אחר התנהגות חיפוש מקומי בדרוזופילה

למד שיטה פשוטה למדידת צריכת אתנול התנדבותית בזבובי פירות Drosophila melanogaster כמדד לשינויים במצבי תגמול. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני מוטיבציה והתנהגות במדעי המוח.

דרך פשוטה למדוד שינויים בהתנהגות שוחרת זכה שימוש

גלה סרטונים נוספים