כל 3D-לב בדיקת רקמות שריר הלב

קריין}המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להקל על שיטה מובנית וניתנת לשחזור לעיבוד תלת מימדי של רקמת לב שלמה שניתן להשתמש בה כדי להעריך את דיוק המיקוד של זריקות אינטרמיוקרדיאליות לאזור גבול האוטם. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הרפואה הלב-רגנרטיבית, כגון פיתוח תרגול ואופטימיזציה של טכניקות הזרקה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מציעה שיטה סטנדרטית וניתנת לשחזור לעיבוד תלת מימדי של רקמות לב שלמות.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על פיתוח טיפולים רגנרטיביים לבביים ואימות דיוק ההזרקה של טכניקות אספקה רגילות. מטרת הטיפול בתאי גזע לבביים היא להזריק תאים לאזור גבול האוטם לגירוי של כלי דם מקומיים והגנה מפני קרדיומיוציטים. לכידת הלב בשלב הדיאסטולי הסופי דורשת תרגול וסבלנות.

הדגמה חזותית של שלבים אלה היא קריטית. התחל בהפרדת קרום הלב מהלב המוזרק למיקרו-חרוזים, תוך שמירה על הפרוזדורים והחדרים שלמים. לאחר הסרת כל הרקמה, השתמש במספריים של קלינקנברג כדי לנתח את אבי העורקים העולה כסנטימטר אחד מעל המסתם האאורטלי, ולחתוך את ורידי הקוואל והריאה התחתונים כסנטימטר אחד מהפרוזדור.

לאחר קיבוע קודקוד הלב לתחתית מיכל ההטמעה מפלסטיק כדי למנוע ציפה, הניחו 2-0 תפרים דרך החלק הנותר של אבי העורקים לשולי המיכל, וקבעו את הלב. הקפידו שהלב יהיה מרוכז ולא נוגע בדפנות המיכל. כאשר האיבר מאובטח בגיאומטריה דיאסטולית קצה, השתמש במלחציים נגד יתושים כדי לאחוז בווריד התחתון והשתמש במזרק של 50 מיליליטר כדי להזריק לאט לאט אגר טרי של 50 עד 60 מעלות צלזיוס לתוך האטריום הימני דרך וריד הקוואל העליון עד שגם האטריום הימני וגם החדר מתמלאים לחלוטין.

כדי להשיג לב מוטבע הדומה לגיאומטריה הדיאסטולית הסופית ככל האפשר, קבע את קודקוד החדר השמאלי לתחתית המיכל ומלא את החדר הימני באגר בזמן שרידי הריאה מהודקים. לאחר מכן, הניחו מהדק יתושים על ורידי הריאה והעבירו בעדינות מזרק חדש מלא אגר 50 מיליליטר בכיוון הנסיגה דרך שסתומי אבי העורקים. הזרקו לאט את התמיסה לחדר השמאלי עד שהחדר והפרוזדור השמאלי מלאים לחלוטין, מהדקים את אבי העורקים לאחר מילוי החדר השמאלי.

כעת, שפכו את האגר הנותר לתוך המיכל עד שהלב מכוסה במלואו והניחו שני צינורות פלסטיק קשיחים בתוך מיכל ההטבעה כדי לשמש כמבני ייחוס במהלך רישום התמונה. לאחר מכן הניחו את הלב על שתיים עד שבע מעלות צלזיוס למשך ארבע שעות לפחות כדי למצק את האגר. לאחר הדמיית תהודה מגנטית, הפוך את המיכל הפוך ואפשר לאוויר בין האגר לדפנות המיכל להסיר את תמיסת האגר המוצקה ואת הלב מהמיכל.

הסר את מוטות הפלסטיק. לאחר מכן השתמש בפורס בשר כדי לחתוך את גוש האגר ואת הלב בפרוסות של חמישה מילימטר מהקודקוד לבסיס הלב, תוך חיתוך מקביל לתחתית גוש האגר כדי לשמור על זווית הפרוסות זהה לתמונות התהודה המגנטית הנרכשות. לאחר שכל הפרוסות הושגו, צבעו את דגימות הרקמה ב-TTC.

לאחר 15 דקות, צלמו את הפרוסות משני הצדדים בזווית מאונכת, ואז שטפו בזהירות את החלקים במי מלח של 0.9%. כדי לצלם את הדגימות במיקרוסקופ פלואורסצנטי, בחר הדמיית מצב פלואורסצנטי בסורק המצב המשתנה והגדר את גודל הפיקסלים ל-100 על 100 מיקרון. עבור בלוק המסנן הראשון, בחר מסנן מעבר פס החופף לאורך גל הפליטה של הקרינה החרוזית בערוץ הראשון, ולאחר מכן למסנן מעבר פס עבור בלוק המסנן השני מחוץ לאורך גל הפליטה בערוץ שני.

לאחר מכן, בחר את בלוק המסנן המתאים, הגדר את צינור מכפיל הפוטו למתח המתאים, ואת לייזר העירור לאורך גל העירור הקרוב ביותר לזה של המיקרו-חרוזים המוזרקים. לאחר קבלת כל התמונות, בתוכנת העיבוד המתאימה, פלח את גבולות שריר הלב והחדר השמאלי האנדו-ואפיקרדיאלי בתמונות התהודה המגנטית ואחריו פילוח דומה של שריר הלב ואתרי ההזרקה בתמונות הקרינה. לאחר מכן בצע אינטרפולציה ליניארית של הקטעים הרשומים בתמונה משני צידי הפרוסות כדי לשחזר את עובי הדגימה המקורי וליצור מודל תלת מימדי של הנתונים.

כאשר הלב מאובטח בקצה דיאסטולי כמו גיאומטריה כפי שהודגם זה עתה, בניסוי מייצג זה, האגר נצמד בהצלחה לרקמת הלב ואפשר לחתוך את הרקמה בזווית הרצויה בעובי פרוסה שווה. הן בתמונות הקרינה הדו-ממדית והן בתמונות התהודה המגנטית, אתרי הצלקת וההזרקה נבדלים בבירור. רקמה מוכתמת TTC ותמונות תהודה מגנטית משופרות של גדוליניום מאוחר מספקות בקרה להערכת צלקות בהדמיה פלואורסצנטית.

הדמיה לאחר עיבוד מאפשרת שחזור של הגיאומטריה התלת מימדית של הלב ex vivo על סמך הסגמנטציות ותמונות הקרינה, מה שמאפשר להעריך את דיוק ההזרקה התלת מימדית. במחקר זה, משקעי ההזרקה ואזור גבול האוטם היו מוגנים על הדופן האנדוקרדיאלית, ונמדדו המרחקים בין ההקרנות על פני השטח האנדוקרדיאליים. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו הערכה כירורגית, כימות גודל אוטם או אימות של שיטות הדמיה תלת מימדיות אחרות.

השתמשנו בטכניקה זו כדי להעריך את דיוק ההזרקה לאזור גבול האוטם. מחקר זה נערך כדי לשפר את הטיפול הקרדיו-רגנרטיבי באי ספיקת לב. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להכין את הלב, כיצד להטמיע ולעבד רקמת לב וכיצד לבצע הדמיה פלואורסצנטית של דגימות רקמת לב.