Name: פיגום נתמך השתלת איים בשומן השומן האפידידימלי של עכברים סוכרתית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 57 s
Description: למד שיטה לבידוד איי לנקראת ושתילתם בפיגום נתמך בשומן האפידידימלי של עכברים סוכרתיים. שיטה זו מאפשרת הפיכת היפרגליקמיה ושיפור הישרדות האיי לנקראת.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות ויי ג &#39;אנג מ Guanhao ביוטק למתן את הפיגומים decellularized. אנו מודים ל- Xiao-hong Peng על השיחות המועילות. מחקר זה נתמך מבחינה כספית על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (פרויקט מס &#39;3212021).

<ol><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li>
<li>Shapiro, A. M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+Trial+of+the+Edmonton+Protocol+for+Islet+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">International Trial of the Edmonton Protocol for Islet Transplantation.</a> N Engl J Med. 355, 1318-1330 (2006).</li>
<li>Ryan, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Five-year+follow-up+after+clinical+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Five-year follow-up after clinical islet transplantation.</a> Diabetes. 54, 2060-2069 (2005).</li>
<li>Merani, S., Toso, C., Emamaullee, J., Shapiro, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+implantation+site+for+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Optimal implantation site for pancreatic islet transplantation.</a> Br J Surg. 95, 1449-1461 (2008).</li>
<li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nat Biotechnol. 35 (1), (2017).</li>
<li>Dufour, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+ectopic+site+for+islet+transplantation%2C+using+biodegradable+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Development of an ectopic site for islet transplantation, using biodegradable scaffolds.</a> Tissue Eng. 11, 1323-1331 (2005).</li>
<li>Weaver, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+Release+of+Dexamethasone+from+Organosilicone+Constructs+for+Local+Modulation+of+Inflammation+in+Islet+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Controlled Release of Dexamethasone from Organosilicone Constructs for Local Modulation of Inflammation in Islet Transplantation.</a> Tissue Eng Part A. 21, 2250-2261 (2015).</li>
<li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+Micro+to+Macro%3A+The+Hierarchical+Design+in+a+Micropatterned+Scaffold+for+Cell+Assembling+and+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">From Micro to Macro: The Hierarchical Design in a Micropatterned Scaffold for Cell Assembling and Transplantation.</a> Adv Mater. 29, (2017).</li>
<li>Blomeier, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymer+Scaffolds+as+Synthetic+Microenvironments+for+Extrahepatic+Islet+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Polymer Scaffolds as Synthetic Microenvironments for Extrahepatic Islet Transplantation.</a> Transplantation. 82, 452-459 (2006).</li>
<li>Gibly, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrahepatic+islet+transplantation+with+microporous+polymer+scaffolds+in+syngeneic+mouse+and+allogeneic+porcine+models%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Extrahepatic islet transplantation with microporous polymer scaffolds in syngeneic mouse and allogeneic porcine models.</a> Biomaterials. 32, 9677-9684 (2011).</li>
<li>Moskalewski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Culture+of+the+Islets+of+Langerhans+of+the+Guinea+Pig%5BTitle%5D)+AND+%22Gen+Comp+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Isolation and Culture of the Islets of Langerhans of the Guinea Pig.</a> Gen Comp Endocrinol. 5, 342-353 (1965).</li>
<li>Lacy, P. E., Kostianovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Method+for+the+isolation+of+intact+islets+of+Langerhans+from+the+rat+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Method for the isolation of intact islets of Langerhans from the rat pancreas.</a> Diabetes. 16, 35-39 (1967).</li>
<li>Zmuda, E. J., Powell, C. A., Hai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Method+for+Murine+Islet+Isolation+and+Subcapsular+Kidney+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation.</a> J Vis Exp. (50), (2011).</li>
<li>Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+islet+isolation+from+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol for islet isolation from mouse pancreas.</a> Nat Protoc. 4, 1649-1652 (2009).</li>
<li>Stull, N. D., Breite, A., McCarthy, R., Tersey, S. A., Mirmira, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Islet+of+Langerhans+Isolation+using+a+Combination+of+Purified+Collagenase+and+Neutral+Protease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse Islet of Langerhans Isolation using a Combination of Purified Collagenase and Neutral Protease.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li>
<li>Sakata, N., Yoshimatsu, G., Tsuchiya, H., Egawa, S., Unno, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+diabetes+mellitus+for+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of diabetes mellitus for islet transplantation.</a> Exp Diabetes Res. , 256707(2012).</li>
<li>Schmidt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+islets+find+a+new+transplant+home+in+the+omentum%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotech%22%5BJournal%5D)">Pancreatic islets find a new transplant home in the omentum.</a> Nat Biotech. 35, 8-8 (2017).</li>
<li>Londono, R., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologic+scaffolds+for+regenerative+medicine%3A+mechanisms+of+in+vivo+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Biologic scaffolds for regenerative medicine: mechanisms of in vivo remodeling.</a> Ann Biomed Eng. 43, 577-592 (2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

לבלב הלבלב זמן העיכול הם שני פרמטרים מרכזיים המשפיעים על התשואה איון ואיכות. Moskalewski הראשון דיווח על שימוש בתערובת collagenase גולמי לעכל טחון הלבלב גינס 11 . Lacy et al. דיווחו על הזרקה של אנזימים למערכת צינורית כדי לבלבל את הלבלב, אשר הגדילו מאוד את התשואה איון 12 . זלוף צינורית של אנזים מאפשר חשיפה מקסימלית של שטח פני הלבלב לאנזים, וכתוצאה מכך עיכול הומוגני יותר שחרור גדול יותר של איים שלם לעומת לעיכול לבלב טחון <sup ...

סוג 1 סוכרת (T1D) היא הפרעה אנדוקרינית אוטואימונית שבה תאי איון הם ablated על ידי המערכת החיסונית, וטיפול בחולים תלוי הזרקת אינסולין אקסוגני לכל חייהם. פרוטוקול אדמונטון מהווה ציון דרך במחקרים קליניים על השתלת איון; איים היו infused דרך הווריד הפורטל והושתלו באתר intrahepatic 1 . עם זאת, שני מכשולים עיקריים - מקורות לא מספיקים של איים התורם ואת engletment איון המסכן, למנוע את ההצלחה הגדולה של השתלת איון 2 . בדרך כלל, איים צריכים להיות שנאספו משלושה תורמים cadaveric כדי להפוך את מצב hyperglycemic של חולה אחד; זאת בשל התשואה הנמוכה של הליכי בידוד איון ואת איון הפסד לאחר ההשתלה. בפרט, למרות שאיים שלאחר ההשתלה היו שטופים דם עשיר בחמצן, המגע הישיר עם הדם עורר לעיתים קרובות את הדלקת המייצרת דם מיידיתתגובה של טורי (IBMIR), אשר עלולה לגרום לאובדן חריף של האיים. בטווח הארוך, נראה כי ההפסד ההדרגתי של איים בחולים היווה ירידה של שיעורי היפוך הסוכרת בקבוצות הקליניות, אשר יכול להגיע ל 90% בשנה הראשונה ו ירד ל 30% ו 10% על ידי 2 ו 5 שנים לאחר ההשתלה, בהתאמה 3 . השתלת Islet באתרים extrahepatic כבר אסטרטגיה אטרקטיבית כדי להפחית את הקשר הישיר של איים עם דם תוך הגבלת השתלות למיקומים מוגדרים יותר לעומת עירוי intrahepatic. מחקרים בוצעו בקפסולת הכליה, העין, השרירים, רפידות השומן וחללים תת-עוריים במהלך השנים האחרונות, מה שמראה כי איים באתרים אלה מסוגלים לשרוד ולתפקד כדי לשחזר את הנורמוגליזציה 4 . בנוסף, איים באתרים אלה הם לשחזור, מה שמאפשר ביופסיה או אפילו להליכי החלפת נוספים. אקסטרהפטיתזה ולכן להפגין פוטנציאל גדול להשתלה קלינית 5 . Biomaterials מבוססי פיגומים נבדקו באופן אינטנסיבי עבור השתלת תאים והנדסת רקמות. תלת מימדי (3D) פיגומים בדרך כלל מכילים מבנים נקבובי יכול לשמש תבניות הסלולר כדי ליצור מבנה מרחבי / ארגון של תאים או מאגרים לספק שחרור מבוקר של רמזים ביו. פיגומים יש גם מפוברק מחומרים פולימריים, כגון פולי (glycolide-L- לקטט) 6 , פולי (dimethylsiloxane) 7 , ו תרמופלסטיים פולי (urethane) 8 , כדי להשתלות איים EFP. בהשוואה להשתלה ישירה של איים, השימוש פיגומים נמצא להפחית את איים הפסד על ידי מניעת דליפה של איים לתוך חלל intraperitoneal 9 , 10 , מתן הגנה מכנית moduמניעת תגובה דלקתית מקומית. פיגומים ובכך ניתן יהיה לפתח לקדם engraftment איון באתרים להשתלה 7. במחקר זה, אנו מתכוונים להפגין פרדיגמה של השתלת איון ב EFP, מתבצעת מודלים עכברים באמצעות DCS. פיגומים נגזר מטריצות תאיים משכו עניין רב בשנים האחרונות בשל biocompatibility מעולה מבנים נקבוביים טבעיים יותר לעומת מוצרים סינתטיים. כאן, אנו מתארים פרוטוקול בידוד חזק כדי להשיג איים הלבלב בתשואות גבוהות של עכברים C57BL / 6J. DCSs מעובד מן קרום הלב קרום זרעו אז עם איים, ואת השתלות הושתלו EFP במודלים סוכרתית סינרגנית. נורמוגליקמיה בעכברים הושגה בתוך 10 ימים ונשמרה עד 100 ימים, עד להסרת השתלות.

<table><tbody><tr><td>חיתוך מספריים</td><td>Ningbo מלקחיים רפואיים</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ningbo רפואי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קוטר 0.5 מ"מ רשת תיל</td><td>Ningbo Medical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; מסננת תאים</td><td>m Falcon</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>מהדק המוסטטי עורק</td><td>Ningbo רפואי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופי מהדק המוסטטי</td><td>Ningbo רפואי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים המוסטטיים</td><td>Ningbo רפואי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>נספג 6-0 תפרי PGLA&nbsp;</td><td>JINHUAN</td><td></td><td>עם</td></tr><tr><td>קליפ פצע</td> מחט <td>Ningbo צמר</td> גפן רפואי <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ningbo</td> גזה רפואית <td></td><td></td></tr> Ningbo <tr><td>וילונות סטריליים רפואיים</td><td></td> Ningbo רפואי <td></td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק</td><td>JINGHUAN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל</td><td>JINGHUAN</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחט תוך ורידית 27G</td><td>JINGHUAN</td><td>0.45x15 RWSB</td><td></td></tr><tr><td>1.5 מ"ל צינור אפנדורף</td><td>Axygen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינור חרוטי</td><td>קורנינג</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>50 מ"ל צינור חרוטי</td><td>קורנינג</td><td>430829</td><td></td></tr><tr><td>35 מ"מ לא מטופל&nbsp; צלחות פרי-צלחות</td><td>קורנינג</td><td>430588</td><td></td></tr><tr><td>טרנסוול</td><td>קורנינג</td><td>3422</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &mu; m filter</td><td>Pall</td><td>PN4612</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל פיפט סרולוגי</td><td>קורנינג</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>מילוי פיפט S1</td><td>Thermo Scientific</td><td>9501</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה (2-20&mu; L)</td><td>Axygen</td><td>AP-20</td><td>AXYPETTM</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ חיתוך</td><td>אולימפוס</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Hank' תמיסת מלח מאוזנת&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>C14175500CP</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז P</td><td>Roche</td><td>COLLP-RO</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque 1077</td><td>Sigma</td><td>10771</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>11879-20</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>D-glucose</td><td>Gibco</td><td>A24940-01</td><td></td></tr><tr><td>מד סוכר</td><td>Roche</td><td></td><td>ACCU-CHEK</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>סטרפטוזוטוצין</td><td>סיגמא</td><td>V900890</td><td>VetecTM</td></tr><tr><td>Chloral hydrate</td><td>J& K</td><td>C0073</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ציטראט</td><td>סיגמא</td><td>71497</td><td></td></tr><tr><td>חומצת לימון</td><td>סיגמא</td><td>C2404</td><td></td></tr><tr><td>יודופורס</td><td>נינגבו רפואי</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6J, בן 10-12 שבועות</td><td>VitalRiver</td><td></td><td>בייג'ינג, סין</td></tr><tr><td>פיגום נטול תאים</td><td>Guanhao Biotec</td><td>131102</td><td>גואנגג'ואו, סין</td></tr></tbody></table>

פיגום נתמך השתלת איים בשומן השומן האפידידימלי של עכברים סוכרתית

Scaffold-supported Transplantation of Islets in the Epididymal Fat Pad of Diabetic Mice

השתלת Islet הוכח קלינית להיות יעיל בטיפול סוכרת סוג 1. עם זאת, האסטרטגיה הנוכחית השתלת intrahepatic עלול לגרום לתגובות דם שלמים חריפים ולגרום engraftment איון עני. כאן, אנו מדווחים על פרוטוקול איתן להשתלת איים באתר ההשתלות האקסטרפטית - משטח השומן האפידידימלי (EFP) - במודל עכבר סוכרתי. פרוטוקול לבודד ולטהר איים בתפוקה גבוהה של עכברים C57BL / 6J מתואר, כמו גם שיטת השתלת מבוצע על ידי זריעת איים על גבי פיגום decellularized (DCS) ו השתלת אותם באתר EFP בעכברים C57BL / 6J סינתטי שניתנו סוכרת על ידי streptozotocin. השתל DCS המכיל 500 איים הפך את מצב היפרגליקמיה בתוך 10 ימים, בעוד איים חופשי ללא DCS נדרש לפחות 30 ימים. הנורמוגליקמיה נשמרה עד 3 חודשים עד שהשתלפה. לסיכום, DCS שיפרה את engraftment של איים לתוך tהוא אתר extrahepatic של EFP, אשר יכול בקלות להיות מאוחזר עשוי לספק פלטפורמה לשחזור ושימושי לחקר חומרים פיגומים, כמו גם פרמטרים השתלה אחרים הנדרשים engraftment איון מוצלח.

השיטה שלנו clamping, המבוצעת באמצעות מהדק הרדמה מיקרוסקופיים, הוא פשוט וחוסך זמן לעומת טכניקה קשירת תפר. זה לקח בערך 4 שעות כדי לבודד ולטהר כ 1,200 איים מ 6 עכברים. איים מבודדים טרי בדרך כלל היה פריפריה מחוספס תחת מיקרוסקופ אופטי ( איור 3 א ). לאחר שהאיילים התאוששו מתהליך הבידוד, הם נראו בהירים ודוקים ורכשו משטח חלק. עם זאת, הבידוד מלחיץ עדיין יכול לגרום למוות התא, וכתוצאה מכך השתילה של תאים ממשטחי איון, איים בריא לעתי...

פרוטוקול זה מדגים בידוד איים Murine וזרע על פיגום decellularized. איים נתמך פיגומים הושתלו לתוך כרית שומן האפידידימלי של streptozotocin (STZ), המושרה עכברים סוכרתית. איים שרדו באתר ההשתלות והפכו את מצב ההיפרגליקמיה.

Islet transplantation has been clinically proven to be effective at treating type 1 diabetes. However, the current intrahepatic transplantation strategy ...

שלום לכולם, אני קאי וואנג מהמחלקה להנדסה ביו-רפואית באוניברסיטת פקין במעבדתו של ד"ר לואו. נכון לעכשיו, אנשים עם סוכרת מסוג 1 מטופלים בעיקר בזריקות אינסולין שאינן מדמות באופן מושלם את הפרשת האינסולין מהאיים. החלפת האיים האבודים על ידי הובלת איים יכולה להראות לך שליטה יציבה בגלוקוז בדם ללא תנודות חמורות.עם זאת, הדרישה לייצר מספר רב של איים באיכות גבוהה ויעילות ההשתלה הירודה פגעו בשימוש הקליני הנפוץ. היום, אני הולך להראות לכם את תהליך בידוד האיים ואת השתלת האיים הנתמכים על ידי פיגומים לתוך כרית השומן האפידידימלית של עכברים סוכרתיים. שלבים אלה דורשים ידע טוב של מבני הרקמות והידיים המיומנות לביצוע הניתוח.מרססים את כל הגוף באתנול. בצע חתך V החל מאזור איברי המין. הסר את המעי דרך הצד הימני של העכבר.מהדקים את וריד הפורטל ואת צינור המרה בעזרת מהדק המוסטטי. אחזו בתריסריון בזהירות בעזרת מלקחיים ומשכו את התריסריון עד להוראת צינור המרה. הכנס את המחט התוך ורידית לצינור המרה המשותף דרך האמפולה.מהדק את קטע הצינור המכיל את המחט באמצעות מהדק המוסטטי במיוחד. יש להוציא את התמיסה הקולגנית בקצב איטי וקבוע. לאחר ניפוח מלא של הלבלב, דחוף את המעי דרך הצד השמאלי של העכבר.ניתן לראות שצינור הלבלב מנופח במלואו. הסר את הלבלב על ידי התחלת סוף המעי הגס היורד. השתמש במלקחיים כדי להרים את המעי ולהפריד אותו מהלבלב בעזרת מלקחיים אחרים.המשיכו להסיר את הלבלב עד שהוא מתנתק מהחלק העליון של הקיבה. לבסוף, הרם את הלבלב מהבטן וחתך אותו מהטחול שנותר. מניחים לבלב בצינור החרוטי ומעבירים קרח.דגירה על הלבלב המפוזר. סיים את העיכול על ידי הוספת פתרונות נטרול. נתק את שני המרק על ידי ניעור נמרץ של הצינורות.מסננים את דגימות רקמת העיכול דרך רשת התיל. אסוף את מתלי האי לצינור חרוטי חדש. צנטריפוגה את הצינורות.יוצקים את הסופרנטנט בזהירות מבלי להפריע לפלטות הרקמות. השעו מחדש את הפלטות עם Histopaque על ידי הזזת המתלים למעלה ולמטה לכמה פעמים. העבירו לאט לאט את HBSS במורד צד הצינור לחלק העליון של תמיסות Histopaque.שני הפתרונות צריכים להיות שכבות מופרדות היטב עם ממשק חד. צנטריפוגה את המתלה למשך 20 דקות. רוב האיים נודדים לממשק של שכבות Histopaque ו-HBSS.הסירו את כל תמיסות העל-טבעיות, והעבירו את התמיסות דרך מסננת הפוכה. האיים יישמרו על ידי המסננת. טובלים את המשטח המחזיק את האיים בתמיסה ומנערים בעדינות כדי לשחרר את האיים.בחר ביד את האיים המבודדים תחת המיקרוסקופ. אוספים איים למנת תרבות חדשה. אם הרקמה המקיפה את הצינור מתחילה להתנפח, המשמעות היא שהמחט עוברת דרך דופן צינור המרה.יש צורך למקם מחדש את המחט ולנסות שוב לקנולציה של צינור המרה. כאשר התמיסות ממלאות את הלבלב, הרקמה ליד התריסריון מתנפחת תחילה, ואחריה האזור ליד זנב הלבלב. אם התריסריון מתחיל להתנפח כפי שמוצג כאן עם כתם כחול, כוונן את מהדק העורק והדק מחדש את צינור המרה.הנח את העכבר במצב שכיבה. לגלח את הבטן. לאחר מכן ספוג עם יודופורים כדי לעקר את העור.מכסים את העכבר בווילון סטרילי. בצע חתך קטן דרך דופן הצפק באמצע קרוב לאזור איברי המין. תפוס בעדינות ומשוך החוצה את כרית השומן האפידידימלי מחלל הבטן.מורחים את כרית השומן על גזה רטובה. הניחו פיגום המכיל איים על כרית השומן וקפלו את כרית השומן כדי לעטוף את ההשתלה. תפרו את כרית השומן כדי לאבטח את האיים העטופים בכרית השומן.הנח בעדינות את כרית השומן בחזרה לחלל הבטן. סגור את העכבר על ידי תפירת דופן הצפק. מהדקים את שכבת העור בעזרת קליפסים לפצע.יש להזריק מינונים מתאימים של משככי כאבים ואנטיביוטיקה תת עורית. לאיים המבודדים הטריים היה בדרך כלל פריפריה מחוספסת תחת מיקרוסקופ אופטי. לאחר שהאיים התאוששו מתהליך הבידוד, הם נראו בהירים, הדוקים ורכשו משטח חלק.קוטר האי הממוצע המחושב היה כ-130 מיקרומטר. הפיגומים המואטים חזקים מספיק מבחינה מכנית כדי לטפל בהם באמצעות פינצטה. האיים הנקבוביים הנתמכים בפיגומים הועברו לאחר מכן על פני כרית השומן הממורשת, ולאחר מכן נעטפו על ידי כרית השומן.במודל השתלה סינגני, בדרך כלל 500 איים הופכים היפוגליקמיה תוך 10 ימים. גליקמיה תקינה נשמרה לפני כ-100 ימים עד לשליפת השתלים. המחקרים ההיסטולוגיים מראים שהאיים עברו רה-וסקולריזציה והוקפו ברקמת כרית השומן והפיגום.לאחר צפייה בסרטון זה, עם תרגול, עליך ללמוד את השלבים העיקריים הכרוכים בבידוד ובהובלה של האי. ראשית, קנולציה של צינור המרה המשותף והרחבת הלבלב הוא החלק הקשה ביותר בפרוטוקול זה. שנית, עטפו את הפיגום העמוס באי עם כרית שומן לחלוטין, מכיוון שהאנקפסולציה הלא שלמה עלולה להוביל לכישלון ההשתלה.

scaffold-supported-transplantation-islets-epididymal-fat-pad-diabetic

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

פרוטוקול שלנו פותחה כדי נקייה בקלות לספק איים או תאים תחת הקפסולה הכליה של עכברים. תאים מרוכזים לתוך כדורי בצינור הסופי משמש השתלת התאים תחת הקפסולה כליות. הקלות של טכניקה זו מפחיתה את הלחץ על התאים ואת העכבר.

השתלת איי הלבלב לקופסית הכליה בעכברים סוכרתיים של

השתלה של איים מבודדים הוצע להיות טיפול פוטנציאלי עבור סוכרת מסוג 1. כאן אנו מתארים שיטה לבודד איים מהעכבר pancreata ואת השתלת אותם למרחב subcapsular של הכליה.

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

שיטה השתלת עם פגיעה של איים ב עכבר הוא הציג. איים מבודדים מעורבבים עם הידרוג, התערובת ימוקם לתיק עם פגיעה של עכבר סוכרתית. לאחר מכן, הסוכר מנוטר, מבוצע ניתוח חיסונית-פתולוגיה.

שיטת השתלת איון כדי Omentum העכבר

השתלת הלבלב איון היא דרך להשיג normoglycemia על סוכרת מסוג 1. מאמר זה מתמקד בטכניקה השתלת מהנתיב intraportal כדי לשמור על רמות גלוקוז נורמלי בעכברים סוכרתיים.

השתלת intraportal של לנגרהנס במודל עכבר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאימות ויוו של טיפול מבוסס הידרוג תא, שממחישים את הדוגמה של השתלת איון. h-עם פגיעה איון מטריקס ממלאת השרשה (ביות) מאפשר השתלה של תערובת תא-הידרוג בין השכבות עם פגיעה, ליד כלי הדם, כדי למקסם את engraftment בסביבה מטבולי תקין.

השתלת איון עם פגיעה אינטרה באמצעות h-עם פגיעה מטריקס איון מילוי (יונת)

בפרוטוקול זה, שיטה של מורטין איון בידוד והשתלת לתוך רקמת השומן הלבן התת עורית מתוארת. האיים המבודדים של מורנה ממורג מושתלים לתוך המטופל מורין באמצעות קרום מרתף הידרוג'ל. רמת הגלוקוז בדם של המטופלים מנוטרים, ו ניתוח היסטולוגיה של שתלי איון מבוצע.

השתלת מודל שומן לבן תת-עורית (ISWAT) מדגם ההשתלה של איויין מורנה

שיטת השתלת איונים מכוסה שומן זו מתאימה לאיתור איים מושתלים בחלל התוך-צפק. יש לציין כי היא אינה דורשת שימוש בחומרים מחייבים ביולוגיים או בתפירה.

השתלת איון מכוסה שומן באמצעות רקמת שומן לבן אפידידימלית

כאן אנו מציגים הליכים כירורגיים מעודנים על ביצוע מוצלח של השתלת איים תוך-ספורטיביים, הליך כירורגי רלוונטי מבחינה קלינית אך מאתגר מבחינה טכנית, בעכברים.

מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים

אנו מספקים פרוטוקול זעיר-פולשני להשתלה תוך-שרירית של איי תאי גזע לבלב שמקורם בתאי גזע אנושיים לעכברים חסרי חיסון, לצורך השתלה ב-in vivo וניתוח בהמשך הזרם.

השתלה תוך-שרירית של תאי גזע פלוריפוטנטיים במקור תאי גזע בלבלב בעכברים

כימות של פונקציה הדיאסטולי הגלובלית מדויקת, המבוסס על סיבתיות הושגה על ידי ניתוח המבוסס על המודלים kinematic של זרימת transmitral באמצעות הדיאסטולי Parametrized מילוי פורמליזם (PDF). PDF יוצר נוקשות, הרפיה, ופרמטרי עומס ייחודיים ומבהיר פיזיולוגיה 'חדשה', תוך מתן מדדים רגישים וספציפיים להפרעה בתפקוד.

כימות של פונקציה הגלובלית הדיאסטולי על ידי ניתוח המבוסס על דוגמנות Kinematic של Transmitral זרימה באמצעות הפורמליזם מילוי Parametrized הדיאסטולי

למד שיטה לבידוד איי לנקראת ושתילתם בפיגום נתמך בשומן האפידידימלי של עכברים סוכרתיים. שיטה זו מאפשרת הפיכת היפרגליקמיה ושיפור הישרדות האיי לנקראת.

פיגום נתמך השתלת איים בשומן השומן האפידידימלי של עכברים סוכרתית

גלה סרטונים נוספים