שתי טכניקות כדי ליצור עכברים Hypoparathyroid: Parathyroidectomy שימוש בלוטות GFP ודיפטריה-רעלן בתיווך יותרת התריס אבלציה

המטרה הכוללת של הליך זה היא ליצור שני מודלים עכבריים של תת פעילות בלוטת התריס נרכשת שהם קלים לשימוש, מייצרים פנוטיפ יציב ומשאירים את תפקוד בלוטת התריס על כנו. היתרון העיקרי של שני המודלים הללו הוא שהם מאפשרים הסרה מדויקת של בלוטות יותרת התריס בעכברים, בין אם על ידי ניתוח מונחה פלואורסצנטי, או על ידי ביטוי ספציפי ל-PTH של קולטן רעלן דיפתריה, מה שמאפשר למקד ולהרוס את התאים באופן סלקטיבי מבלי להפריע לבלוטת התריס השכנה. אנו מקווים שהמודלים העכבריים שלנו יוכלו לענות על שאלות מפתח בתחום תת-פעילות בלוטת התריס.

לדוגמה, האם טיפולים אנלוגיים של PTH יכולים לעזור לשמור על רמות סידן תקינות בסרום מבלי להגביר את הפרשת הסידן בשתן? מודלים אלה יכולים לשמש גם לחקר שאלות קליניות אחרות בתת-פעילות של בלוטת התריס. לדוגמה, האם חוזק העצם מושפע מתת פעילות של בלוטת התריס והאם הוא משתנה עם הטיפול?

קשה לענות על שאלות כאלה אצל מטופלים, אך ניתן להשתמש במודלים אלה של עכברים כדי לענות עליהן. התחל בהרדמת עכברים בני שמונה עד 10 שבועות, המבטאים GFP במיוחד בבלוטת התריס על פי פרוטוקול מאושר. הנח את החיה במצב שכיבה והקפד על עומק הרדמה מתאים על ידי היעדר צביטה בבוהן, רפלקס נסיגה או אמצעים אחרים.

הרחיבו את אזור הצוואר הגחוני והתכוננו לניתוח על ידי גילוח הפרווה. חטאו את העור המגולח עם פד חיטוי יוד פובידון, ולאחר מכן הכינו את מקום החתך באמצעות פילינג כירורגי ושטיפת אלכוהול לפי הפרוטוקול המאושר שלכם. לאחר מכן, כסו את החיה בווילונות כירורגיים סטריליים כדי להפחית את זיהום אתר הניתוח.

לאחר חיתוך חתך אורכי של 2 ס"מ עם אזמל כירורגי, השתמש במלקחיים מעוקלים ומשוננים כדי לנתח את הפאשיה, ולדחוף את בלוטות הרוק הצידה. לאחר מכן, תוך כדי צפייה באתר הניתוח דרך מיקרוסקופ דיסקציה, השתמש בקצות המלקחיים החדים כדי לחתוך ולהפריד את שרירי קנה הנשימה ולחשוף את קנה הנשימה. זהה את האונות הימנית והשמאלית של בלוטת התריס הממוקמות ליד קנה הנשימה.

לאחר מכן העבר את מקור האור לאור פלואורסצנטי ודמיין את שתי בלוטות יותרת התריס הפלואורסצנטיות הירוקות. למכרסמים יש בדרך כלל רק שתי בלוטות פאראתירואיד. אם אינך יכול לזהות את שתי בלוטות יותרת התריס ליד בלוטת התריס מכל צד, יש לחשוד בבלוטות יותרת התריס הממוקמות חוץ רחמית, ולבצע חיפוש מדוקדק אחריהן לאורך קנה הנשימה.

לאחר מכן, השתמש במלקחיים ובמספריים כירורגיים כדי להסיר בזהירות את בלוטות יותרת התריס הירוקות ובדוק היטב לאורך קנה הנשימה כדי לוודא שכל הרקמה הירוקה הוסרה. השתמש בגזה סטרילית להמוסטזיס. סגור את שרירי קנה הנשימה עם תפרים קטועים.

סגור את חתך העור עם תפרי הלסטד. הנח את החיה לאחר הניתוח בכלוב נפרד על כרית חימום להתאוששות טמפרטורת הגוף. לאחר שהעכבר ער, הניחו צ'או גלולה ומים עם מעט מזון ג'לטין על רצפת הכלוב.

לאחר תקופת תצפית לאחר הניתוח של שעתיים, החזירו את העכבר למתקן החיות. שלושה ימים לאחר כריתת בלוטת התריס, נתח 10 מיקרוליטר של דם זנב לסידן מיונן באמצעות מנתח כגון מערכת גזי הדם, מנתח סידן ו- pH. אם כריתת בלוטת התריס תצליח, סידן מיונן בדם יהיה שווה או פחות משתי סטיות תקן מזה של עכברי ביקורת שעברו ניתוח דמה.

התחל בהכנת תמיסת רעלן דיפתריה על ידי דילול אבקת רעלן דיפתריה במי מלח סטריליים לריכוז של 0.5 מיקרוגרם למיליליטר. מסנן סטרילי את התמיסה ו-alloquot. הזרקו חמישה מיקרוגרם לק"ג רעלן דיפתריה במשקל גוף לעכברים בני שמונה עד 10 שבועות, המבטאים את קולטני רעלן הדיפתריה במיוחד בבלוטת התריס.

שלושה ימים לאחר הזרקה שנייה של רעלן דיפתריה, נתח 10 מיקרוליטר של דם זנב לסידן מיונן, כמו קודם. להלן תמונות מייצגות של המיקומים השונים של בלוטות יותרת התריס בעכברים המבטאים GFP במיוחד בפאראתירואיד. לעכברים היו שתיים או שלוש בלוטות ירוקות של בלוטת יותרת התריס.

רוב בלוטות יותרת התריס היו ממוקמות ליד הגבול העליון או ליד הגבול התחתון של בלוטת התריס. במקרים נדירים, חלק מבלוטות יותרת התריס היו ממוקמות באופן אקטופי. אחד היתרונות של מודל העכברים שלנו הוא שבלוטת התריס נשארת שלמה.

איור זה מראה רמות TSH של עכברי GFP-PTX שלושה חודשים לאחר כריתת בלוטת התריס. האיור הזה מראה מדידות T4. עכברי GFP-PTX מראים ריכוזי TSH וריכוזי T4 שלא היו שונים מעכברי הביקורת.

תמונה זו מציגה את רמות הסידן בדם ורמות PTH בעכברי GFP-PTX. תמונה זו מציגה את רמות הסידן בדם ורמות ה-PTH בעכברי PTHcre-iDTR שהוזרקו לרעלן דיפתריה. גם עכברי GFP-PTX וגם עכברי PTHcre-iDTR שהוזרקו DT הראו היפוקלצמיה יציבה ורמות PTH מופחתות במהלך תקופת תצפית של שלושה חודשים.

לאחר השליטה, ניתן לבצע כריתת בלוטת התריס בהנחיית GFP תוך כ-20 דקות לכל ההליך. זריקה אחת של רעלן דיפתריה אורכת לא יותר מדקה אם היא מבוצעת כראוי. בעקבות הליך זה, עכברים אלה מפתחים תת-פעילות של בלוטת התריס ויכולים לשמש כמודל מחלה פרה-קלינית.

ניתן להתייחס לשאלות כגון היעילות של אנלוגים שונים של הורמוני PTH בטיפול בתת-פעילות של בלוטת התריס. אל תשכח שרעלן דיפתריה הוא מסוכן, ושהעובדים צריכים לקבל את החיסונים הרגילים נגד רעלן דיפתריה. יש ללבוש תמיד ציוד מגן אישי כגון מסכות וכפפות בעת ביצוע הליכים אלה.