Name: במבחנה בידול של האדם CD4 + FOXP3 + מושרה תקינה בתאי T (iTregs) מ נאיבית CD4 + T תאים באמצעות פרוטוקול TGF-β-המכיל (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: למד לייצר ולטפטף תאי T רגולטוריים מושרים (iTregs) מנאיביים CD4+ T תאים אנושיים באמצעות TGF-β. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני הבדלת תאי Treg ויישומים בתחום האימונולוגיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

נינה נייגל זוכה להכרת תודה על הסיוע הטכני במהלך צילומי הווידיאו וההכנה הניסיונית. אנו מודים לאווה-מריה וייס על העזרה בפרוטוקול הצביעה התוך-תאי FOXP3 ולאליזבת סורי-פייר ונינה אוברל על קביעת פרוטוקול הבידוד של nTreg. מטילדה אריקסון ופרי נורי זוכות להכרה על ניהול המעבדה. 
מימון: A.S. נתמך על ידי מלגת מארי קירי התוך-אירופית במסגרת תוכנית מסגרת הקהילה האירופית השביעית, קרן ד"ר אקה אולסון וקרנות המחקר של KI; A.S. ו-J.T. נתמכו על ידי מענק CERIC (מרכז המצוינות לחקר דלקת ומחלות לב וכלי דם), J.T. נתמך על ידי Vetenskapsrådet Medicine and Health (Dnr 2011-3264), קרן טורסטן סודרברג, FP7 STATegra, AFA Insurance ומועצת מחוז שטוקהולם.

<ol><li>Sakaguchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells%3A+history+and+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.Biol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells: history and perspective.</a> Methods Mol.Biol. 707, 3-17 (2011).</li>
<li>DeLeeuw, R. J., Kost, S. E., Kakal, J. A., Nelson, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prognostic+value+of+FoxP3%2B+tumor-infiltrating+lymphocytes+in+cancer%3A+A+critical+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Can+Res%22%5BJournal%5D)">The prognostic value of FoxP3+ tumor-infiltrating lymphocytes in cancer: A critical review of the literature.</a> Clin Can Res. 18 (11), 3022-3029 (2012).</li>
<li>Liu, C., Workman, C. J., Vignali, D. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+Regulatory+T+Cells+in+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Targeting Regulatory T Cells in Tumors.</a> FEBS J. , (2016).</li>
<li>Trzonkowski, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First-in-man+clinical+results+of+the+treatment+of+patients+with+graft+versus+host+disease+with+human+ex+vivo+expanded+CD4%2BCD25%2BC%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">First-in-man clinical results of the treatment of patients with graft versus host disease with human ex vivo expanded CD4+CD25+C.</a> Clin. Immunol. 133, 22-26 (2009).</li>
<li>Brunstein, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infusion+of+ex+vivo+expanded+T+regulatory+cells+in+adults+transplanted+with+umbilical+cord+blood%3A+safety+profile+and+detection+kinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Infusion of ex vivo expanded T regulatory cells in adults transplanted with umbilical cord blood: safety profile and detection kinetics.</a> Blood. 117, 1061-1070 (2011).</li>
<li>Di Ianni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tregs+prevent+GVHD+and+promote+immune+reconstitution+in+HLA-haploidentical+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Tregs prevent GVHD and promote immune reconstitution in HLA-haploidentical transplantation.</a> Blood. 117, 3921-3928 (2011).</li>
<li>Edinger, M., Hoffmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+in+stem+cell+transplantation%3A+strategies+and+first+clinical+experiences%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells in stem cell transplantation: strategies and first clinical experiences.</a> Curr. Opin. Immunol. 23, 679-684 (2011).</li>
<li>Bluestone, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes+immunotherapy+using+polyclonal+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes immunotherapy using polyclonal regulatory T cells.</a> Science Transl Med. 7 (315), 189(2015).</li>
<li>Haribhai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+central+role+for+induced+regulatory+T+cells+in+tolerance+induction+in+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A central role for induced regulatory T cells in tolerance induction in experimental colitis.</a> J. Immunol. 182, 3461-3468 (2009).</li>
<li>Haribhai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+requisite+role+for+induced+regulatory+T+cells+in+tolerance+based+on+expanding+antigen+receptor+diversity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">A requisite role for induced regulatory T cells in tolerance based on expanding antigen receptor diversity.</a> Immunity. 35, 109-122 (2011).</li>
<li>Abbas, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells%3A+recommendations+to+simplify+the+nomenclature%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells: recommendations to simplify the nomenclature.</a> Nat.Immunol. 14, 307-308 (2013).</li>
<li>Curotto de Lafaille, M. A., Lafaille, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+and+adaptive+foxp3%2B+regulatory+T+cells%3A+more+of+the+same+or+a+division+of+labor%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Natural and adaptive foxp3+ regulatory T cells: more of the same or a division of labor.</a> Immunity. 30, 626-635 (2009).</li>
<li>Huehn, J., Polansky, J. K., Hamann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+control+of+FOXP3+expression%3A+the+key+to+a+stable+regulatory+T-cell+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Epigenetic control of FOXP3 expression: the key to a stable regulatory T-cell lineage.</a> Nat. Rev. Immunol. 9, 83-89 (2009).</li>
<li>Schmitt, E. G., Williams, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+function+of+induced+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Generation and function of induced regulatory T cells.</a> Front Immunol. 4, 152(2013).</li>
<li>Pillai, V., Ortega, S. B., Wang, C. K., Karandikar, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+regulatory+T-cells%3A+a+state+attained+by+all+activated+human+T-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.Immunol%22%5BJournal%5D)">Transient regulatory T-cells: a state attained by all activated human T-cells.</a> Clin.Immunol. 123, 18-29 (2007).</li>
<li>Wang, J., Ioan-Facsinay, A., vander Voort, E. I. H., Huizinga, T. W., Toes, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+expression+of+FOXP3+in+human+activated+nonregulatory+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Transient expression of FOXP3 in human activated nonregulatory CD4+ T cells.</a> Eur. J. Immunol. 37, 129-138 (2007).</li>
<li>Josefowicz, S. Z., Rudensky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+regulatory+T+cell+lineage+commitment+and+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Control of regulatory T cell lineage commitment and maintenance.</a> Immunity. 30, 616-625 (2009).</li>
<li>Sun, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+intestine+lamina+propria+dendritic+cells+promote+de+novo+generation+of+Foxp3+T+reg+cells+via+retinoic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22J.Exp.Med%22%5BJournal%5D)">Small intestine lamina propria dendritic cells promote de novo generation of Foxp3 T reg cells via retinoic acid.</a> J.Exp.Med. 204, 1775-1785 (2007).</li>
<li>Coombes, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functionally+specialized+population+of+mucosal+CD103%2B+DCs+induces+Foxp3%2B+regulatory+T+cells+via+a+TGF-beta+and+retinoic+acid-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A functionally specialized population of mucosal CD103+ DCs induces Foxp3+ regulatory T cells via a TGF-beta and retinoic acid-dependent mechanism.</a> J. Exp. Med. 204, 1757-1764 (2007).</li>
<li>Kang, S. G., Lim, H. W., Andrisani, O. M., Broxmeyer, H. E., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+A+metabolites+induce+gut-homing+FoxP3%2B+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Vitamin A metabolites induce gut-homing FoxP3+ regulatory T cells.</a> J. Immunol. 179, 3724-3733 (2007).</li>
<li>Mucida, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+can+directly+promote+TGF-beta-mediated+Foxp3%28%2B%29+Treg+cell+conversion+of+naive+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid can directly promote TGF-beta-mediated Foxp3(+) Treg cell conversion of naive T cells.</a> Immunity. 30, 471-472 (2009).</li>
<li>Schmidt, A., Eriksson, M., Shang, M. -M., Weyd, H., Tegnér, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Analysis+of+Protocols+to+Induce+Human+CD4%2BFoxp3%2B+Regulatory+T+Cells+by+Combinations+of+IL-2%2C+TGF-beta%2C+Retinoic+Acid%2C+Rapamycin+and+Butyrate%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Comparative Analysis of Protocols to Induce Human CD4+Foxp3+ Regulatory T Cells by Combinations of IL-2, TGF-beta, Retinoic Acid, Rapamycin and Butyrate.</a> PloS one. 11 (2), 0148474(2016).</li>
<li>Furusawa, Y., Obata, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">regulatory T cells.</a> Nature. 504, 446-450 (2013).</li>
<li>Arpaia, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+produced+by+commensal+bacteria+promote+peripheral+regulatory+T-cell+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Metabolites produced by commensal bacteria promote peripheral regulatory T-cell generation.</a> Nature. 504, 451-455 (2013).</li>
<li>Battaglia, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+promotes+expansion+of+functional+CD4%2BCD25%2BFOXP3%2B+regulatory+T+cells+of+both+healthy+subjects+and+type+1+diabetic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Rapamycin promotes expansion of functional CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells of both healthy subjects and type 1 diabetic patients.</a> J. Immunol. 177, 8338-8347 (2006).</li>
<li>Hippen, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massive+ex+vivo+expansion+of+human+natural+regulatory+T+cells+%28T%28regs%29%29+with+minimal+loss+of+in+vivo+functional+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Massive ex vivo expansion of human natural regulatory T cells (T(regs)) with minimal loss of in vivo functional activity.</a> Sci. Transl. Med. 3, 41(2011).</li>
<li>Schmidt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+macrophages+induce+CD4%28%2B%29Foxp3%28%2B%29+regulatory+T+cells+via+binding+and+re-release+of+TGF-%CE%B2%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+cell+biol%22%5BJournal%5D)">Human macrophages induce CD4(+)Foxp3(+) regulatory T cells via binding and re-release of TGF-β.</a> Immunol cell biol. , (2016).</li>
<li>Baron, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+demethylation+in+the+human+FOXP3+locus+discriminates+regulatory+T+cells+from+activated+FOXP3%28%2B%29+conventional+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">DNA demethylation in the human FOXP3 locus discriminates regulatory T cells from activated FOXP3(+) conventional T cells.</a> Eur. J. Immunol. 37, 2378-2389 (2007).</li>
<li>Schmidt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+regulatory+T+cells+rapidly+suppress+T+cell+receptor-induced+Ca%282%2B%29%2C+NF-kappaB%2C+and+NFAT+signaling+in+conventional+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Signal%22%5BJournal%5D)">Human regulatory T cells rapidly suppress T cell receptor-induced Ca(2+), NF-kappaB, and NFAT signaling in conventional T cells.</a> Sci. Signal. 4, 90(2011).</li>
<li>Ohkura, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+receptor+stimulation-induced+epigenetic+changes+and+Foxp3+expression+are+independent+and+complementary+events+required+for+Treg+cell+development%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">T cell receptor stimulation-induced epigenetic changes and Foxp3 expression are independent and complementary events required for Treg cell development.</a> Immunity. 37, 785-799 (2012).</li>
<li>Hill, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+enhances+Foxp3+induction+indirectly+by+relieving+inhibition+from+CD4%2BCD44hi+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid enhances Foxp3 induction indirectly by relieving inhibition from CD4+CD44hi Cells.</a> Immunity. 29, 758-770 (2008).</li>
<li>Yang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+Sulfide+Promotes+Tet1-+and+Tet2-Mediated+Foxp3+Demethylation+to+Drive+Regulatory+T+Cell+Differentiation+and+Maintain+Immune+Homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Hydrogen Sulfide Promotes Tet1- and Tet2-Mediated Foxp3 Demethylation to Drive Regulatory T Cell Differentiation and Maintain Immune Homeostasis.</a> Immunity. 43 (2), 251-263 (2015).</li>
<li>Yue, X., Trifari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+Foxp3+stability+through+modulation+of+TET+activity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">Control of Foxp3 stability through modulation of TET activity.</a> The Journal of experimental medicine. 213 (3), 377-397 (2016).</li>
<li>Sasidharan Nair, V., Song, M. H., Oh, K. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+Facilitates+Demethylation+of+the+Foxp3+Enhancer+in+a+Tet-Dependent+Manner%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Vitamin C Facilitates Demethylation of the Foxp3 Enhancer in a Tet-Dependent Manner.</a> J Immunol. 196 (5), 2119-2131 (2016).</li>
<li>Geiger, T. L., Tauro, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+and+nurture+in+Foxp3+%2B+regulatory+T+cell+development%2C+stability%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nature and nurture in Foxp3 + regulatory T cell development, stability, and function.</a> Hum Immunol. 73 (3), 232-239 (2012).</li>
<li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGF-%CE%B2-induced+CD4%2BFoxp3%2B+T+cells+attenuate+acute+graft-versus-host+disease+by+suppressing+expansion+and+killing+of+effector+CD8%2B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">TGF-β-induced CD4+Foxp3+ T cells attenuate acute graft-versus-host disease by suppressing expansion and killing of effector CD8+ cells.</a> J Immunol. 193 (7), 3388-3397 (2014).</li>
<li>Brusko, T. M., Hulme, M. A., Myhr, C. B., Haller, M. J., Atkinson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+In+Vitro+Suppressive+Capacity+of+Regulatory+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Invest%22%5BJournal%5D)">Assessing the In Vitro Suppressive Capacity of Regulatory T Cells.</a> Immunol Invest. 36 (5-6), 607-628 (2007).</li>
<li>McMurchy, A. N., Levings, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suppression+assays+with+human+T+regulatory+cells%3A+a+technical+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+immunol%22%5BJournal%5D)">Suppression assays with human T regulatory cells: a technical guide.</a> Eur J immunol. 42 (1), 27-34 (2012).</li>
<li>Mutis, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+regulatory+T+cells+control+xenogeneic+graft-versus-host+disease+induced+by+autologous+T+cells+in+RAG2-%2F-gammac-%2F-+immunodeficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+cancer+res%22%5BJournal%5D)">Human regulatory T cells control xenogeneic graft-versus-host disease induced by autologous T cells in RAG2-/-gammac-/- immunodeficient mice.</a> Clin cancer res. 12 (18), 5520-5525 (2006).</li>
<li>Tran, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+suppression+assay+for+functional+assessment+of+human+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+mol+biol%22%5BJournal%5D)">In vitro suppression assay for functional assessment of human regulatory T cells.</a> Meth mol biol. 979, 199-212 (2013).</li>
<li>Oberle, N., Eberhardt, N., Falk, C. S., Krammer, P. H., Suri-Payer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Suppression+of+Cytokine+Transcription+in+Human+CD4%2BCD25+T+Cells+by+CD4%2BFoxp3%2B+Regulatory+T+Cells%3A+Independence+of+IL-2+Consumption%2C+TGF-beta%2C+and+Various+Inhibitors+of+TCR+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Rapid Suppression of Cytokine Transcription in Human CD4+CD25 T Cells by CD4+Foxp3+ Regulatory T Cells: Independence of IL-2 Consumption, TGF-beta, and Various Inhibitors of TCR Signaling.</a> J. Immunol. 179, 3578-3587 (2007).</li>
<li>Shevach, E. M., Thornton, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((tTregs%2C+pTregs%2C+and+iTregs%3A+similarities+and+differences%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">tTregs, pTregs, and iTregs: similarities and differences.</a> Immunol. Rev. 259, 88-102 (2014).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

הפרוטוקול המתואר מאפשר האינדוקציה החזקה של CD4 + אדם FOXP3 + iTregs מתאי אדם נאיביים CD4 + T. היא כוללת פרוטוקול חדשות שתארנו לאחרונה, באמצעות שילוב של TGF-β, ATRA ו rapamycin, לזירוז של iTregs עם פונקציה מדכאת מעולה במבחנת 22. לעומת פרוטוקולים שפורסמו אחרים, יתרון נוסף הוא הגיוס של אוכלוסיות iTreg שונות במקביל על ידי פרוטוקולים שונים, המאפשר השוואה הישירה של השפעות של גורמים iTreg וישכנעו מסוימים, יחד עם תאי שליטה אשר מופעלים בנוכחות IL-2 בלבד . הפר...

CD4 + CD25 + FOXP3 + תאי T רגולטוריים (Tregs) לדכא תאי חיסון אחרים והם מתווכים קריטיים של סובלנות היקפית, אוטואימוניות במניעת 1 דלקת מופרזת. חשיבותה של Tregs מודגמת על ידי enteropathy האדם המחלה immunodysregulation polyendocrinopathy תסמונת ה- X-צמודות (אייפקס), שבו אובדן Tregs עקב מוטציות בשנות ה P3 תיבת forkhead גורם שעתוק Treg master&#39; (FOXP3) מוביל למחלות אוטואימוניות מערכתי חמור, קטלן בגיל צעיר. עם זאת, Tregs לפעול כחרב פיפיות במערכת החיסונית: הם גם יכולים להפריע חסינות אנטי סרטנית במסגרות מסוימות 2. מניפולציה טיפולית של מספר ותפקוד Treg לפיכך כפופה חקירות קליניות רבות. בשנת סרטן, דלדול של Tregs יכול להיות רצוי והצלחה חלק גישות קליניות מעודדת מחקר נוסף 3. במחלות אוטואימוניות ודלקתיות, בנוסף השפעות טיפוליות של Tregs ב seveמודלי עכבר מחל RAL, ניסויים-האדם ראשונים האחרונים של העברת מאמצת Treg למנוע graft- מול מחל -host (GvHD) 4 - 7 ועל מנת להעריך את בטיחות בטיפול בסוכרת סוג 1 8 הראו תוצאות מבטיחות מאוד. בטבע הופעת Tregs (nTregs) מהווה tTregs נגזרות הרתי ואת שולה מושרה pTregs, עם פונקציות חיוניות לא יתירים בשמירה על בריאות 9 - 11. עם זאת, מספרי nTreg מוגבלים, עידוד הגישה המשלימה של Tregs התרמה (iTregs) במבחנה מן מבשרי תא T נאיביים 12. עדיין יציבות iTregs, ככל הנראה בשל חוסר demethylation באזור demethylated שנקרא Treg הספציפי (TSDR) ב לוקוס גן FOXP3 13, נותרת חשש וכמה מחקרים מצביעים על כך in vivo מושרה Tregs יציבים יותר 14. נכון להיום, FOXP3 נשאר מ &#39;החלבון הטוב ביותרarker עבור Tregs אבל זה לא ספציפי לחלוטין כי תאי CD4 + T CD25- קונבנציונאלי אדם זמני מבטאים רמות ביניים של FOXP3 באקטיבציה 15,16. למרות התקדמות משמעותית נעשתה הבהרת בקרת הביטוי FOXP3, הרבה נשאר להתגלות לגבי אינדוקציה, יציבות ותפקוד של FOXP3 במיוחד בתאים אנושיים. למרות ההבדלים כדי nTregs, במבחנה המושרה FOXP3 + CD4 + T תאים יכול לשמש כמערכת מודל ללמוד המנגנונים המולקולריים של אינדוקציה FOXP3 ו כנקודת המוצא לפיתוח פרוטוקולים בעתיד המאפשרים דור iTregs כי הם דומים יותר ב vivo שנוצר Tregs, אשר יכול להיות רלוונטי עבור אסטרטגיות העברת מאמצת בעתיד. יש `אין פרוטוקול הזהב standard&#39; לגרום iTregs אדם, ופרוטוקולים נוכחיים פותחו בהתבסס על מחק תנאי Treg וישכנע in vivo: אינטרלוקין 2 (IL-2) והאיתות גורם הגדילה הפיכת β (TGF-β) הם קריטיים לזירוז FOXP3 in vivo 17, וכל-טרנס החומצה הרטינואית (ATRA) - אשר מופק in vivo על ידי תאים דנדריטים הקשורים במעיים - משמש לעתים קרובות כדי לשפר אינדוקציה FOXP3 במבחנה 18 - 21. פתחנו פרוטוקולי Treg וישכנעו אדם נוספים באמצעות בוטיראט 22, בטן חיידקים נגזרת חומצת שומן קצרה שרשרת אשר הוצגה לאחרונה להגדיל בעכברי Treg אינדוקציה 23,24. אנחנו גם קימה לאחרונה פרוטוקול חדש עבור דור של iTregs עם פונקציה מדכאת מעולה במבחנה באמצעות שילוב של TGF-β, ATRA ו Rapamycin 22, האחרון הוא יעד יונק אשר קליני של rapamycin (mTOR) מעכב כי ידוע כדי לקדם תחזוקת FOXP3 במהלך התרחבות אדם Treg 25,26. שיטה זו מתארת את לשחזורדור במבחנה של CD4 אדם + FOXP3 + iTregs באמצעות סדרה של תנאים שונים, phenotyping הבא שלהם על ידי cytometry זרימת תגובת שרשרת פולימראז השעתוק כמוני הפוך (qRT-PCR) לחשוף את דפוסי פרוטוקול ספציפי ביטוי של FOXP3 ומולקולות חתימת Treg אחרים כגון כמו CD25, CTLA-4, EOS, כמו גם הדיכוי של-γ IFN ו- SATB1 הביטוי 22. אוכלוסיות התאים שנוצרו יכולות לשמש מבחנים תפקודיים לגבי פעילות מדכאת או עבור מחקרים מולקולריים, בין אם בנוגע רגולטורי FOXP3 כלליים או ללמוד השפעות ספציפיות תרכובות מסוימות כגון בוטיראט או rapamycin. הבנה נוספת של מנגנונים מולקולריים נהיגת בידול Treg רלוונטית ביותר עבור גישות טיפוליות עתידיות אוטואימוניות או סרטן למקד מולקולות מעורבות במיוחד בדור Treg ותפקוד.

<table><tbody><tr><td>חומצה רטינואית All-trans</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>R2625-50MG&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>שיבוט Foxp3-APC אנושי 236A/E7</td><td>eBioscience</td><td>17-4777-42</td><td></td></tr><tr><td>מיקרו-חרוזים CD25 אנטי-אנושיים</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-983</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-אנושי CD25-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-024</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן CD28 אנטי-אנושי, LEAF Purified&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>302914</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן CD3 אנטי אנושי, LEAF Purified&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>317315</td><td></td></tr><tr><td>אנטי אנושי CD45RA, FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-247</td><td></td></tr><tr><td>אנטי אנושי CD45RO שיבוט PE UCHL1</td><td>BD Biosciences</td><td>555493</td><td></td></tr><tr><td>שיבוט CD4-PerCP אנטי אנושי SK3; mIgG1</td><td>BD Biosciences</td><td>345770</td><td></td></tr><tr><td>אנטי אנושי CD8-eFluor 450 (שיבוט OKT8), mIgG2a</td><td>eBioscience</td><td>48-0086-42&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CTLA-4 אנטי אנושי (CD152), שיבוט BNI3, mIgG2ak, סגול מבריק 421</td><td>BD Biosciences</td><td>562743</td><td></td></tr><tr><td>שיבוט IFN-g FITC אנטי אנושי 4S. ב3; mIgG1k</td><td>eBioscience</td><td>11-7319-81&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>תמיסה המכילה ברפלדין A: ערכת סינתזת cDNA של GolgiPlug</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td></td></tr><tr><td>: ערכת סינתזת cDNA SuperScript VILO (Reverse transcriptase)</td><td>Invitrogen</td><td>11754-250</td><td></td></tr><tr><td>מדיום צנטריפוגה צפיפות: Ficoll-Paque</td><td>GE healthcare</td><td>17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>DMSO 99.7%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>D2650-5X5ML</td><td></td></tr><tr><td>FBS, </td><td>Invitrogen</td><td>10082-147 צבע כדאיות לתיקון Invitrogen 10082-147</td><td></td></tr><tr><td>, eFluor 780&nbsp; &nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-14 או 65-0865-18&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ערכת חיץ מכתים Foxp3</td><td>eBioscience</td><td>00-5523-00</td><td>אזהרה: מכיל פרפורמלדהיד. ניתן לקנות גם בערכה משולבת עם נוגדן; 77-5774-40 סט צביעה אנטי אנושי Foxp3 שיבוט APC: סט 236A/E7</td></tr><tr><td>GlutaMAX (200 מ"מ L-alanyl-L-גלוטמין)</td> <td>Invitrogen</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בידוד תאי CD4 T נאיבית אנושית II</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-131</td><td></td></tr><tr><td>אלבומין בסרום אנושי 50 גרם/ליטר</td><td>בקסטר</td><td>1501057</td><td></td></tr><tr><td>יונומיצין מ-Streptomyces conglobatus >98%</td> <td>סיגמא אולדריץ'</td><td>I9657-1MG</td><td></td></tr><tr><td>עמודות MACS LS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>עכבר IgG1 K בקרת איזוטיפ APC שיבוט: P3.6.2.8.1</td><td>eBioscience</td><td>17-4714-42</td><td></td></tr><tr><td>עכבר IgG1 K בקרת איזוטיפ FITC 50 & #956; g</td><td>eBioscience</td><td>11-4714-81&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>עכבר בקרת איזוטיפ IgG2a, סגול מבריק 421, שיבוט MOPC-173</td><td>BD Biosciences</td><td>563464</td><td></td></tr><tr><td>פלסטיק פיפט פסטר, ארוז בנפרד</td><td>Sarstedt</td><td>86.1172.001&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>PMA פורבול 12-מיריסטט 13-אצטט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P1585-1MG&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>רפמיצין</td><td>EMD (Merck)</td><td>553210-100UG</td><td></td></tr><tr><td>רקומביננטי אנושי IL-2, CF</td><td>מו"פ D</td><td>202-IL-050/CF</td><td></td></tr><tr><td>רקומביננטי אנושי TGF-beta 1, CF</td><td>RnD</td><td>240-B-010/CF</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בידוד RNA: ערכת RNAqueous-Micro</td><td>אמביון</td><td>AM1931&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 בינוני&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>72400-054&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>נתרן בוטיראט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>B5887-250MG&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מדיום תרבית תאי T: מדיום X-Vivo 15, עם גנטמיצין+פנולרד</td><td>Lonza</td><td>04-418Q</td><td></td></tr><tr><td>בדיקת ביטוי גנים TaqMan, FOXP3 (הכיסוי הטוב ביותר)&nbsp;</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182; מזהה בדיקה: Hs01085834_m1</td><td>זהירות: מכיל paraformaldehyde</td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay, RPL13A (הכיסוי הטוב ביותר)</td><td>Applied Biosystems</td><td>4351370; מזהה בדיקה: Hs04194366_g1&nbsp; &nbsp;</td><td>אזהרה: מכיל פרפורמלדהיד</td></tr><tr><td>TaqMan ביטוי גנים מאסטר מיקס</td><td>יישומי ביוסיסטמס</td><td>4369514</td><td></td></tr></tbody></table>

במבחנה בידול של האדם cd4 + foxp3 + מושרה תקינה בתאי t (itregs) מ נאיבית cd4 + t תאים באמצעות פרוטוקול tgf-β-המכיל

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

תאי T רגולטוריים (Tregs) הם חלק בלתי נפרד מסבילות היקפית, מדכאים תגובות חיסוניות כנגד מבנים עצמיים ובכך מונעים מחלות אוטואימוניות. גישות קליניות להעברת Tregs לאימוץ, או לדלדול Tregs בסרטן, נמצאות בעיצומן עם תוצאות ראשונות מבטיחות. 
מכיוון שמספר ה-Tregs המופיעים באופן טבעי (nTregs) מוגבל מאוד, חקר תכונות מסוימות של Treg באמצעות Tregs המושרים במבחנה (iTregs) יכול להיות יתרון. נכון להיום, סמן החלבון הטוב ביותר אם כי לא ספציפי לחלוטין לתיחום Tregs הוא גורם השעתוק FOXP3. למרות החשיבות של Tregs כולל תפקידים לא מיותרים של Tregs המושרים היקפית, הפרוטוקולים ליצירת iTregs שנויים במחלוקת כיום, במיוחד עבור תאים אנושיים. פרוטוקול זה מתאר אפוא את ההתמיינות במבחנה של CD4+FOXP3+ iTregs אנושיים מתאי T נאיביים אנושיים תוך שימוש במגוון גורמים מעוררי Treg (TGF-β בתוספת IL-2 בלבד, או השילוב שלהם עם חומצה רטינואית, רפמיצין או בוטיראט) במקביל. הוא גם מתאר את הפנוטיפ של תאים אלה על ידי זרימה ציטומטרית ו-qRT-PCR. 
פרוטוקולים אלה מביאים לביטוי ניתן לשחזור של FOXP3 וגנים אחרים של חתימת Treg ומאפשרים לחקור מנגנוני ויסות כלליים של FOXP3 כמו גם השפעות ספציפיות לפרוטוקול כדי לתאר את ההשפעה של גורמים מסוימים. ניתן להשתמש ב-iTregs כדי לחקור היבטים פנוטיפיים שונים כמו גם מנגנונים מולקולריים של אינדוקציה של Treg. מחקרים מולקולריים מפורטים מתאפשרים על ידי מספר תאים גדול יחסית שניתן להשיג. 
מגבלה ליישום iTregs היא חוסר היציבות היחסי של ביטוי FOXP3 בתאים אלה בהשוואה ל-nTregs. iTregs שנוצרו על ידי פרוטוקולים אלה יכולים לשמש גם למבחנים פונקציונליים כגון חקר תפקודם המדכא, שבו iTregs המושרים על ידי TGF-β בתוספת חומצה רטינואית ורפמיצין מציגים פעילות דיכוי מעולה. עם זאת, יכולת הדיכוי של iTregs יכולה להיות שונה מ-nTregs והשימוש בבקרות מתאימות הוא קריטי.

איור 1 מציג סכמה של הגדרת הניסוי. איור 2 מראה מכתים מלא טוהר נציג תאי nTregs CD4 + T מבודדים מגנטי נאיביים. F igure 3A מראה את זרימת cytometry האסטרטגיה gating ואיור 3 ב מציג FOXP3 ו CD25 נציג cytometry זרימה stainings ביום 6 של התרבות בתנאים iTreg או שליטה המצוין. עם <e...

פרוטוקול זה מתאר את דור phenotyping לשחזור של תאי T רגולטוריים מושרה אדם (iTregs) מתאי CD4 + T נאיביים במבחנה. פרוטוקולים שונים לזירוז FOXP3 לאפשר לחקר פנוטיפים iTreg הספציפיים שהושגו עם פרוטוקולי בהתאמה.

במבחנה בידול של האדם CD4 + FOXP3 + מושרה תקינה בתאי T (iTregs) מ נאיבית CD4 + T תאים באמצעות פרוטוקול TGF-β-המכיל

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

המטרות הכלליות של ניסוי זה הן לגרום לתאי T רגולטוריים חיוביים ל-FOXP3 מתאי CD4 T נאיביים במבחנה, ולנתח את הפנוטיפ שלהם. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האימונולוגיה של תאי T, כגון כיצד מתרחשת התמיינות רגולטורית של תאי T ברמה המולקולרית? היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת יצירה ופנוטיפ ניתנים לשחזור של תאי T רגולטוריים חיוביים ל-FOXP3 אנושיים.למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי התמיינות תאי T רגולטוריים, ניתן לשנות אותה גם כדי לחקור תת-קבוצות אחרות של תאי CD4 T ותאי חיסון אחרים מעניינים. ההדגמה החזותית של שיטה זו היא קריטית מכיוון שקל להבין את שלבי ה-PBMC ובידוד הסיביות המגנטיות כאשר הם מוצגים ולא מתוארים. כדי לבודד תאי T בדם היקפי, התחל בהוספת 15 מיליליטר של מדיום שיפוע צפיפות בטמפרטורת החדר לחמישה צינורות של 50 מיליליטר לכל מעיל באפי, והביא את נפח המעיל הסופי של באפי עד 180 מיליליטר עם PBS בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, הטה צינור של מדיום שיפוע צפיפות הצידה ושכב לאט כ-35 מיליליטר של דם מדולל על מדיום שיפוע הצפיפות מבלי לערבב את התמיסות. הפרד את התאים באמצעות צנטריפוגה. לאחר מכן, העבירו את שכבות ה-PBMC הלבנות בין שיפוע הצפיפות לשלבי הפלזמה מכל צינור לצינורות חרוטיים חדשים של 50 מיליליטר.שטפו את ה-PBMC עם 200 מיליליטר PBS טרי והשעו מחדש את הכדורים במדיום שלם לדלדול מונוציטים בדם ההיקפי על ידי הדבקה פלסטית. לאחר איסוף התאים הצפים, שטפו את ה-PBMC שלוש פעמים בעד 50 מיליליטר של PBS טרי, והשעו מחדש את הכדור הסופי ב-40 מיקרוליטר של מאגר בידוד של ארבע מעלות צלזיוס ו-10 מיקרוליטר של קוקטייל נוגדנים ביוטין של תאי T חיוביים ל-CD4 לכל אחד כפול 10 לתאים השביעיים עם ערבוב יסודי. דגרו את התאים למשך 10 דקות בארבע מעלות צלזיוס, ואז שטפו את התאים ב-40 מיליליטר של ארבע מעלות צלזיוס PBS והשעו מחדש את הגלולה ב-80 מיקרוליטר של מאגר בידוד ו-20 מיקרוליטר של מיקרו-חרוזים אנטי-ביוטיניים לכל אחד כפול 10 לתאים השביעיים למשך 15 דקות דגירה בארבע מעלות צלזיוס.בזמן שהתאים מדגרים, הנח עמוד LS על מגנט, והתאזן עם שלושה מיליליטר של מאגר בידוד, ואז שטוף את התאים ב-50 מיליליטר PBS, והשהה מחדש את הגלולה בשלושה מיליליטר של מאגר בידוד טרי. כעת הוסיפו את התאים לעמודה, ואספו את הזרימה הנאיבית המכילה תאי T חיוביים ל-CD4 בשפופרת של 15 מיליליטר. כאשר העמוד מפסיק לטפטף, יש לשטוף את הצינור בשני מיליליטר מאגר בידוד ולהעביר את הכביסה לעמוד.לאחר הכביסה האחרונה, גלולה את תאי ה-T הממוינים מגנטית על ידי צנטריפוגה, ולאחר מכן שתי שטיפות ב-15 מיליליטר של מדיום, וכתוצאה מכך אוכלוסיית תאי T חיוביים ל-CD4 נאיבית יותר מ-94%. כדי לגרום לתאי T רגולטוריים, הוסף 50 מיקרוליטר מהגירויים המתאימים לבארות המתאימות של צלחת 96 בארות מצופה נגד CD3. לאחר מכן מלאו את הבארות הריקות, כולל בארות השוליים, ב-200 מיקרוליטר PBS, וחממו מראש את הצלחות ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני.התאם את ריכוז תאי ה-T הנאיביים במנוחה ל-2.2 עד 2.6 כפול 10 עד שישית התאים לצפיפות מיליליטר במדיום של 37 מעלות צלזיוס, והוסף 50 מיקרוליטר תאים לכל באר. לאחר שכל התאים נזרעו, עטפו את הצלחת בנייר אלומיניום להגנה מפני אור, והחזירו את הצלחת לחממת תרבית התאים. לאחר יומיים-שלושה, אשכולות קטנים של תאים מתרבים שיוצאים לצבירים גדולים יותר בנקודות זמן מאוחרות יותר אמורים להיראות במיקרוסקופ אור.לאחר ארבעה עד שישה ימים, המדיום משתנה מכתום מעט לצהבהב, וכדורי התאים המקובצים נראים לעין בלתי. כדי להעריך את ביטוי סמן פני התא, השתמש בפיפטה כדי להשעות מחדש את התאים בכל באר, ולהעביר את התאים לצלחת U חדשה של 96 בארות, ולהשאיר באר אחת פנויה סביב כל באר כדי למנוע זיהום זליגה במהלך תהליך העמידה. כאשר כל התאים הועברו, צנטריפוגה את הצלחת והשליכו את הסופרנטנט.משאירים את הצלחת הפוכה על נייר סופג, מקישים על הצלחת פעם אחת והופכים אותה מיד בצד ימין כלפי מעלה. מערבולת כדי להשעות מחדש את התאים בנוזל שנותר. לאחר מכן מוסיפים 25 מיקרוליטר של תערובת מוקדמת העומדת על פני השטח לכל באר, ודוגרים על הצלחת למשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס בחושך.בסוף הדגירה, שטפו את הבארות פעמיים ב-200 מיקרוליטר PBS, הסירו את הסופרנטנט ותלו מחדש את התאים לאחר כל שטיפה, כפי שהודגם זה עתה. לאחר מכן בצע כדאיות וצביעה תוך תאית עבור FOXP3 וסמנים מעניינים אחרים. בגרפים אלה מוצגת אסטרטגיית שער הזרימה הציטומטרית עבור תאי T רגולטוריים חיוביים ל-CD25 חיוביים ל-CD4 חיוביים ל-FOXP3.בגירוי במבחנה, רוב התאים מווסתים את CD25, שביטויו מצטמצם בנוכחות רפמיצין. רק בתוספת גורמי Treg הניתנים להשראה, מתגלה אוכלוסייה ברורה של תאים חיוביים ל-FOXP3 עם רמות ביטוי חלבון תוך תאיות גבוהות כמו Tregs המופיעים באופן טבעי. ואכן, כל מצב Treg מושרה מדגים דפוס ספציפי וניתן לשחזור של התפשטות תאים.כאשר TGF beta גורם לעלייה קלה בשגשוג, וחומצה רטינואית טראנס מגבירה את התפשטות תאי T באופן דרמטי, בעוד שתוספת של רפמיצין לתרביות מפחיתה מאוד את גודל אשכול התאים. ניתוח QRT-PCR של Tregs מושרים מצביע על כך שביטוי ה-mRNA של FOXP3 גבוה יותר בכל תרביות ה-Treg המושרות בהשוואה לתאים מגורים בבקרה, כאשר Tregs מושרים שטופלו ברפמיצין מציגים את הרמות הנמוכות ביותר של FOXP3 mRNA של תרביות Treg המושרות. יתר על כן, ביטוי ה-mRNA של FOXP3 ב-Tregs המופיעים באופן טבעי נצפה גבוה יותר מזה המוצג על ידי כל אחת מאוכלוסיות תאי ה-T הרגולטוריות הניתנות להשראה.טכניקה זו סוללת את הדרך לחוקרים בתחום האימונולוגיה של תאי T לחקור את המנגנונים המולקולריים של יצירת ותפקוד Treg בתורמים בריאים או בחולים עם מחלות אוטואימוניות או סרטן. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבודד תאי T אנושיים נאיביים חיוביים ל-CD4 וכיצד להתמיין ולפנוטיפ את ה-NU המתקבלים לתאי T רגולטוריים. אנא אל תשכח שעבודה עם דם אנושי או פרפורמלדהיד יכולה להיות מסוכנת ביותר.לכן יש לקחת בחשבון אמצעי זהירות כגון עיבוד מקדים, ביצוע כל החיסונים, לבישת ביגוד מגן ושימוש נכון בסילוק פסולת, בעת ביצוע הליכים אלה.

in-vitro-differentiation-human-cd4-foxp3-induced-regulatory-t-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

Tregs הם מדכאי עוצמה של מערכת החיסון. קיים מחסור של סמנים משטח ייחודי להגדיר אותם, ולכן, הגדרות של Tregs הם פונקציונליים בעיקר. כאן אנו מתארים...

אנושי במבחנה דיכוי ככלי מיון עבור הכרה של מדינת מוקדם של חוסר איזון החיסון

אנו מתארים שיטה להפקת תאים T זיכרון הרגולציה, ואת נאיבי מתורם דם אחת האדם. Tregs מקוטב ניתן להשוות ואז תת אחרים במגוון רחב של יישומים גנטיים פונקציונלי עם הומוגניות גנטית, כולל assay דיכוי מפורטים גם כאן.

דור של מושרה תאים T רגולטוריים של האדם תאים ראשוניים טי נאיביות וזיכרון

CD4+ תאי T רגולטוריים הם מווסתת חיסונית רבת עוצמה וממלאים תפקידים חשובים בהומאוסטזיס של מערכת החיסון. המחסור בתאים אלה בדם היקפי הופך את המחקרים הפונקציונליים למאתגרים, במיוחד בהקשר של זיהום HIV-1. אנו מתארים כאן שיטה לבידוד והרחבה של CD4+ Tregs פונקציונליים מדם היקפי מאנשים נגועים ב-HIV-1.

כלים חדשים כדי להרחיב תאי T רגולטוריים מאנשים HIV-1 נגוע-

העברת גני adenoviral לתוך CD4 נאיבי תאי T מהונדס עם ביטוי של הקולטן אדנווירוס Coxsackie מאפשרת ניתוח המולקולרי של התמיינות תאי T...

התמרה adenoviral של CD4 תמימים תאי T ללמוד בידול Treg

ניתן להתמיין בתאי גזע עובריים של עכבר לתאי T במבחנה באמצעות מערכת התרבות המשותפת OP9-DL1. הצלחה בהליך זה דורשת תשומת לב קפדנית לתחזוקת ריאגנט/תאים, ושלבים רגישים לטכניקה מרכזית. כאן אנו דנים בפרמטרים קריטיים אלה ומספקים פרוטוקול מפורט לעידוד אימוץ טכנולוגיה זו.

גזירה של תאי T במבחנה מתאי עכבר גזע העובריים

תאי T נאיביים CD4+ מקוטבים לתת-קבוצות שונות בהתאם לסביבה בזמן ההפעלה.  ניתן להשיג את ההתמיינות של תאי CD4+ T נאיביים לתת-קבוצות אפקטורים שונות במבחנה באמצעות הוספת גירויים של קולטני תאי T ואותות ציטוקינים ספציפיים.

העכבר נאיבי CD4<sup&gt; +</supו&gt; בידוד תא T<em&gt; במבחנה</em&gt; בידול לתוך תת תא T

מאמר זה מתאר את השיטה הרומן לייצר אנטיגן הגידול-ספציפי המושרה ביותר תאים גזע מהגרים הרתי (iTE) על ידי תלת מימדי (3D) מערכת התרבות הרתי. iTE הינם תת-קבוצה הומוגנית של תאי T הקשורים היטב לתאי T תמימים עם יכולת התפשטות, היווצרות הזיכרון ודיכוי הגידול.

תלת מימדי הרתי תרבות מערכת לייצר Murine המושרה תא גזע Pluripotent-הגידול הנגזר אנטיגן-מהגרים ספציפיים הרתי

פרוטוקול זה מספק זרימת עבודה יעילה ליצירה ובדיקה של תאי T רגולטוריים של קולטני אנטיגן כימריים אנושיים (CAR Tregs).

יצירת תאי T רגולטוריים של קולטן אנטיגן כימרי אנושי

פרוטוקול זה מספק אסטרטגיית קו-קולטורציה במבחנה לחקר השפעות תאי T רגולטוריים על התרבות והבדייל של תאי T אפקטוריים.

In-Vitro ניתוח פונקציונלי של תאי T רגולטוריים: התמקדות בהתרבות ובהתמיינות

אנו מציגים פרוטוקול לייצר אנטיגן ספציפי עכבר מתאי T באמצעות התמרה...

התמרה retroviral של T-cell קולטנים עכבר מתאי T

למד לייצר ולטפטף תאי T רגולטוריים מושרים (iTregs) מנאיביים CD4+ T תאים אנושיים באמצעות TGF-β. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני הבדלת תאי Treg ויישומים בתחום האימונולוגיה.

במבחנה בידול של האדם CD4 ⁺ FOXP3 ⁺ מושרה תקינה בתאי T (iTregs) מ נאיבית CD4 ⁺ T תאים באמצעות פרוטוקול TGF-β-המכיל

גלה סרטונים נוספים