מודל הפלישה Perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש

המטרה הכוללת של פרוטוקול ניסיוני זה היא להעריך במהירות מצבי טיפול מרובים המשפיעים על פלישה פרינוירולית בסרטן קשקש ראש וצוואר עם שיעורי הצלחה ושחזור גבוהים מאוד. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום אונקולוגיה של ראש וצוואר, כגון מהם הגורמים המשפיעים על פלישת תאי סרטן ראש וצוואר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לבצע מספר רב של בדיקות במהירות ובשחזור מעכבר אחד בפרק זמן קצר יחסית.

לפני שמתחילים בהליך הדיסקציה של גנגליון השורש הגבי או DRG, הוסף מדיום טרי בטמפרטורת החדר לפחות ל-40 בארות של צלחת V-bottom של 96 בארות. לאחר מכן, השתמש במספריים עדינים כדי לבצע חתך אורכי לאורך עמוד השדרה משורש הזנב לראש העכבר. ולחלק לרוחב את הרקמה מתחת לעמוד השדרה הקדוש, לנתח את שני צידי עמוד השדרה, עד לבסיס הגולגולת.

העבירו את הדגימה מתחת למיקרוסקופ, והתבוננו בקצה צוואר הרחם של עמוד השדרה בעוצמה נמוכה. חוט השדרה הלבן נראה באמצע טבעת גרמית, המוקפת בכמויות משתנות של שרירים סביב עמוד השדרה ורקמות רכות. בעזרת מספריים קפיציים מיקרוסקופיים, פצלו את ההיבט הגבי או העליון של שניים עד שלושה גופי החוליות הראשונים.

לאחר מכן, השתמש בפעולת הקפיץ של המספריים כדי לפתוח את החתך הגרמי הראשוני הזה, כדי להבטיח שדיסקציה של גוף החוליה תתרחש בקו האמצע. המשיכו במרווחים קטנים לכיוון עמוד השדרה הקדוש, חתכו את עמוד השדרה עם חתכים זהים בהיבט הגחוני, או התחתון, של גופי החוליות. הנח חצי כדור אחד בצד, העביר את החצי השני של עמוד השדרה עם הפנים כלפי מטה על צלחת סטרילית כשחוט השדרה במקומו.

והשתמש בשתי מחטים בגודל 18 כדי להדק את שני קצוות ההמיספין על משטח חיתוך הפוליסטירן. לאחר מכן, החל מהקצה הצר יותר, צוואר הרחם, קלף בעדינות את חוט השדרה מכארבע רמות חוליות. באזור שבו העצבים התחושתיים נכנסים לתוך ה-DRG, תפסו בעדינות את הפאשיה שמסביב בעזרת מלקחיים מיקרוסקופיים, והשתמשו במספריים קפיציים מיקרוסקופיים כדי לקצץ את הפאשיה הזו ורקמת עצב אחרת כדי לשחרר את ה-DRG.

בהגדלה מוגברת, השתמש במספריים הקפיציים כדי לחתוך את העצב ההיקפי קרוב ככל האפשר ל-DRG כדי לשחרר את הרקמה, ולקצץ את הענפים הפרוקסימליים. לאחר מכן, חתוך את ה-DRG של כל סיבי עצב תועים או חיבורים פאסיאליים והנח את הרקמה המבודדת לבאר אחת של צלחת ה-V התחתונה של 96 בארות. כדי להכין את טיפות המטריצה המוצקות למחצה, העבירו צלחת זכוכית תחתונה אחת מקרח על גוש קרח מתחת למיקרוסקופ ההפעלה.

הניחו את קצה הפיפטה של לא יותר מ-10 מיקרוליטר ישירות על הזכוכית בזווית של 45 מעלות, והוציאו בזהירות טיפת מטריצה של 1.5 מיקרוליטר על הזכוכית. הרחיקו לאט את קצה הפיפטה מהזכוכית כאשר המטריצה מתחברת לצלחת. הפקידו טיפה אחת של מטריצה על כל אחת מארבע פינות הצלחת, והעבירו את הצלחת למשטח בטמפרטורת החדר למשך כדקה.

כאשר המטריצה התקשחה מעט, החזירו את הצלחת לגוש הקרח, והשתמשו במלקחיים מיקרוסקופיים סגורים כדי לגרוף את ה-DRG בעדינות ביד שמאל. בעזרת יד ימין, העבירו בזהירות את רקמת העצב לקצה מחט בגודל 21 והשתמשו במחט כדי להכניס בעדינות את ה-DRG לאמצע טיפת המטריצה. ה-DRG אמור להשתחרר בקלות לתוך המטריצה למיקום מרכזי עם המחט.

לאחר הכנסת חתיכת DRG לכל אחת מארבע הטיפות, הנח את הצלחת באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך שלוש דקות. כאשר כל ה-DRG הוטמע, החזק את הלוחות בזה אחר זה, בזווית קלה והוסף לאט לאט ארבעה מיליליטר של DMEM בתוספת 10% FBS לצלחות, כך שהמדיום רק בא במגע בהדרגה עם יחידות ה-DRG המטריקס. החזירו את הצלחות לחממה למשך 48 עד 72 שעות נוספות.

כאשר הנויריטים מגיעים לפחות ל-75% מהדרך לקצה המטריצה, שאפו את המדיום מהבארות מבלי להסיר את יחידות ה-DRG של המטריצה. לאחר מכן, בעזרת פיפטה של 200 מיקרוליטר, עם הדק חלק, הניחו שתי טיפות של שלוש פעמים 10 עד התאים החמישיים למיליליטר מדיום מעל כל בדיקת DRG מטריצה. והחזירו את הצלחות לחממה.

לאחר שעה, הוסף בעדינות ארבעה מיליליטר DMEM עם 10% FBS לאורך הדופן הצדדית של צלחת הזכוכית התחתונה, והחזיר את הצלחות לחממה עד להערכה המיקרוסקופית הבאה שלהן. לאחר חיתוכם ומיקומם בתוך טיפות המטריצה, מראה הבדיקה אמור להידמות ל-DRG המוטבע במטריצה המוצג כאן. שימו לב שה-DRG אינו עגול לחלוטין, אלא מרוכז בתוך טיפת המטריצה, מה שמאפשר צמיחה של נויריטים ב-360 מעלות.

מיד לאחר הציפוי, תאי סרטן הקשקש בראש ובצוואר יוצרים טבעת היקפית סביב המטריצה, ומתרחבת לאורך הנויריטים במהלך היומיים-שלושה הבאים. תאים מצופים על טיפות בקרה ריקות המכילות מטריצה בלבד מתחלקים באופן פעיל סביב המטריצות אך אינם נכנסים או נמשכים מעל החלק העליון. לצורך כימות הפלישה הפרי-עצבית של תאי הסרטן, תמונות הבדיקות מחולקות לארבעה רבעים באמצעות קו אנכי אחד וקו אופקי אחד.

לאחר מכן נקבעות סדרה של נקודות עבור כל הרחבת פלישה פרינוירולית שנצפתה בכל רבע, מה שמאפשר השוואה של גידולי תאי הסרטן לאורך הנויריטים בין קווי תאי סרטן שונים. לאחר השליטה, טכניקת בידוד גרעיני השורש הגבי יכולה להסתיים תוך פחות משעתיים אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב למזער טיפול מוגזם בגרעיני השורש הגבי שכן פציעת ריסוק היא הסיבה השכיחה ביותר לכישלון הבדיקה.

בעקבות הליך זה, ניתן לחקור את המנגנונים של פלישה פרינוירולית, מה שעשוי להוביל לפיתוח טיפולים ממוקדים נגד סוג זה של פלישה לרקמות רכות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לנתח גרעיני שורש גב מעכבר ולהגדיר מבחן לבחינת פלישה פרינוירולית.