Name: מודל הפלישה Perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: חקור מודל פלישה פרינאורלית בקרצינומה תאי ראש וצוואר קשקש באמצעות נויריטים מגנגליון שורש גבי עכבר. שיטה זו מאפשרת הערכה מהירה של תנאי טיפול עם שיעורי הצלחה גבוהים ושחזוריות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה במלואה על ידי מימון מה-NIH באמצעות מענק R21, "מנגנונים של פלישה פרי-עצבית בסרטן ראש וצוואר" ומענק ההכשרה של NCI T32, "הכשרה במחקר פוסט-דוקטורט באונקולוגיה של ראש וצוואר (2T32CA060397-21)". תודה לריצ'רד סטיימן, MD, PhD וצוות המעבדה.

<ol><li>Jemal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2006%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2006.</a> CA Cancer J Clin. 56 (2), 106-130 (2006).</li>
<li>Hinerman, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+irradiation+for+squamous+cell+carcinoma+of+the+oral+cavity%3A+35-year+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Postoperative irradiation for squamous cell carcinoma of the oral cavity: 35-year experience.</a> Head Neck. 26 (11), 984-994 (2004).</li>
<li>Rahima, B., Shingaki, S., Nagata, M., Saito, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+significance+of+perineural+invasion+in+oral+and+oropharyngeal+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Surg+Oral+Med+Oral+Pathol+Oral+Radiol+Endod%22%5BJournal%5D)">Prognostic significance of perineural invasion in oral and oropharyngeal carcinoma.</a> Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 97 (4), 423-431 (2004).</li>
<li>Woolgar, J. A., Scott, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+cervical+lymph+node+metastasis+in+squamous+cell+carcinoma+of+the+tongue%2Ffloor+of+mouth%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Prediction of cervical lymph node metastasis in squamous cell carcinoma of the tongue/floor of mouth.</a> Head Neck. 17 (6), 463-472 (1995).</li>
<li>Tai, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+for+T1-2+oral+squamous+cell+carcinoma+with+or+without+perineural+invasion%3A+neck+dissection+and+postoperative+adjuvant+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Treatment for T1-2 oral squamous cell carcinoma with or without perineural invasion: neck dissection and postoperative adjuvant therapy.</a> Ann Surg Oncol. 19 (6), 1995-2002 (2012).</li>
<li>George, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nosocomial+sinusitis+in+patients+in+the+medical+intensive+care+unit%3A+a+prospective+epidemiological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Nosocomial sinusitis in patients in the medical intensive care unit: a prospective epidemiological study.</a> Clin Infect Dis. 27 (3), 463-470 (1998).</li>
<li>Fagan, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+invasion+in+squamous+cell+carcinoma+of+the+head+and+neck%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Otolaryngol+Head+Neck+Surg%22%5BJournal%5D)">Perineural invasion in squamous cell carcinoma of the head and neck.</a> Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 124 (6), 637-640 (1998).</li>
<li>Soo, K. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+implications+of+perineural+spread+in+squamous+carcinomas+of+the+head+and+neck%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Prognostic implications of perineural spread in squamous carcinomas of the head and neck.</a> Laryngoscope. 96 (10), 1145-1148 (1986).</li>
<li>Parsons, J. T., Mendenhall, W. M., Stringer, S. P., Cassisi, N. J., Million, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+factors+influencing+the+outcome+of+postoperative+irradiation+for+squamous+cell+carcinoma+of+the+oral+cavity%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">An analysis of factors influencing the outcome of postoperative irradiation for squamous cell carcinoma of the oral cavity.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 39 (1), 137-148 (1997).</li>
<li>Liao, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+adjuvant+radiation+therapy+improve+outcomes+in+pT1-3N0+oral+cavity+cancer+with+tumor-free+margins+and+perineural+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">Does adjuvant radiation therapy improve outcomes in pT1-3N0 oral cavity cancer with tumor-free margins and perineural invasion.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 71 (2), 371-376 (2008).</li>
<li>Fan, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+results+of+postoperative+radiotherapy+on+squamous+cell+carcinoma+of+the+oral+cavity%3A+coexistence+of+multiple+minor+risk+factors+results+in+higher+recurrence+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">Treatment results of postoperative radiotherapy on squamous cell carcinoma of the oral cavity: coexistence of multiple minor risk factors results in higher recurrence rates.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 77 (4), 1024-1029 (2010).</li>
<li>Dai, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+survival+in+perineural+invasion+of+pancreatic+cancer%3A+an+in+vitro+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Enhanced survival in perineural invasion of pancreatic cancer: an in vitro approach.</a> Hum Pathol. 38 (2), 299-307 (2007).</li>
<li>Ceyhan, G. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+invasion+in+pancreatic+cancer%3A+a+mutual+tropism+between+neurons+and+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Neural invasion in pancreatic cancer: a mutual tropism between neurons and cancer cells.</a> Biochem Biophys Res Commun. 374 (3), 442-447 (2008).</li>
<li>Gil, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+regulation+of+pancreatic+cancer+cell+invasion+by+peripheral+nerves%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Paracrine regulation of pancreatic cancer cell invasion by peripheral nerves.</a> J Natl Cancer Inst. 102 (2), 107-118 (2010).</li>
<li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFRalpha1+released+by+nerves+enhances+cancer+cell+perineural+invasion+through+GDNF-RET+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">GFRalpha1 released by nerves enhances cancer cell perineural invasion through GDNF-RET signaling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (19), 2008-2017 (2014).</li>
<li>He, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemokine+%28CCL2-CCR2%29+signaling+axis+mediates+perineural+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The chemokine (CCL2-CCR2) signaling axis mediates perineural invasion.</a> Mol Cancer Res. 13 (2), 380-390 (2015).</li>
<li>Bakst, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation+impairs+perineural+invasion+by+modulating+the+nerve+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Radiation impairs perineural invasion by modulating the nerve microenvironment.</a> PLoS One. 7 (6), 39925(2012).</li>
<li>Ayala, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+dorsal+root+ganglia+and+human+prostate+cell+line+interaction%3A+redefining+perineural+invasion+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">In vitro dorsal root ganglia and human prostate cell line interaction: redefining perineural invasion in prostate cancer.</a> Prostate. 49 (3), 213-223 (2001).</li>
<li>Na'ara, S., Gil, Z., Amit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Modeling+of+Cancerous+Neural+Invasion%3A+The+Dorsal+Root+Ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In Vitro Modeling of Cancerous Neural Invasion: The Dorsal Root Ganglion.</a> J Vis Exp. (110), (2016).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול הצעדים החשובים ביותר בתוך פרוטוקול זה הם לנתיחת מיצוי המדויקת של גרעיני שורש הגבה. חיתוך רוחב תקין של עמוד השדרה ועל חלוקת קו אמצע-אורך לשני חמי קוצים הם קריטיים קבלה מספר גדול של DRG. במהלך דיסקציה של DRGs הפרט, הגנגליון לא צריך להיות מטופלים באופן ישיר, אלא fascia שמסביב צריך להיתפס עם מלקחיים מיקרוסקופיים. אי ביצוע הוראה זו תיגרם פגיעה למעוך של DRG, המהווה את הגורם...

קרצינומה של תאי קשקש בראש ובצוואר (HNSCC) הוא הסרטן השישי בשכיחותו בארה"ב, עם 10,000 מקרי מוות בשנה ברמה הלאומית ו-300,000 מקרי מוות בשנה ברחבי העולם1. הפרוגנוזה הכוללת של HNSCC נותרה ללא שינוי על 50% בעשורים האחרונים. פלישה פרינוירולית (PNI) היא אחד המאפיינים הפתולוגיים הבולטים ביותר המבשרים על פרוגנוזה גרועה בחולים עם HNSCC. למרבה הצער, PNI הוא תופעה שכיחה ב-HNSCC וניתן למצוא אותו בעד 40% מחולי HNSCC2,3. 
PNI הוא התהליך שבו תאים ממאירים עוקבים אחר עצבים לרקמות סמוכות, מה שמאפשר שיעורים גבוהים יותר של התפשטות מקומית ומרוחקת. בהתאם לכך, לגידולי HNSCC חיוביים ל-PNI יש שיעורים גבוהים יותר של הישנות מקומית וגרורות מרוחקות, וכתוצאה מכך הישרדות כוללת נמוכה יותר בהשוואה לחולי HNSCC ללא PNI4-8.
למרות שהטיפול בחולים עם PNI ממקסם בדרך כלל על ידי שימוש בניתוחים, הקרנות וכימותרפיה, שיעורי ההישרדות הכוללים של חולים אלה עדיין יורדים בעד 40% בהשוואה לחולים ללא PNI9-11. לפיכך, ברור כי שיטות הטיפול הנוכחיות ב-HNSCC אינן יעילות בשיפור הפרוגנוזה השלילית הקשורה ל-PNI. הגישה של פיתוח טיפול ממוקד נגד PNI ב-HNSCC נפגעה על ידי ההבנה הלקויה של הגורמים המווסתים תהליך זה. זו, בין השאר, תוצאה של היעדר מודל עקבי במבחנה לחקר PNI ב-HNSCC. 
בשנים האחרונות, מספר קבוצות משתמשות במודל מבחנה לחקר PNI בעיקר בסרטן הלבלב והערמונית12-19. מודל זה משתמש בנוריטים הנוצרים מגרעיני שורש גב שבודדו מעכברים או חולדות כתחליף לפלישה לעצבים גדולים. גרעיני השורש הגבי מקובעים במטריצה מוצקה למחצה מדולדלת גורם, שהיא תערובת חלבון ממברנת בסיס מסיסה המופרשת על ידי תאי סרקומה של עכבר אנגלברת-הולם-נחיל. מטריצה זו מאפשרת צמיחה של הנויריטים ומעקב אחר תאי סרטן בודדים לאורך תאי עצב אלה. מתואר כאן ההתאמה של מודל זה לבחינת PNI ב-HNSCC.

<table><tbody><tr><td>DMEM/F-12 50/50 תערובת עם L-גלוטמין ו-15 מ"מ HEPES</td><td>Corning Cellgro</td><td>10-090-CV</td><td>Manassas, VA</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>אטלנטה ביולוגי</td><td>S11150</td><td>Flowery Branch, GA</td></tr><tr><td>0.25% טריפסין-EDTA (1x)</td><td>Life Technologies Corporation</td><td>25200056</td><td>גרנד איילנד, ניו יורק</td></tr><tr><td>פוספט חוצץ מלח 1x</td><td>קורנינג</td><td>21-040-CM</td><td>מנסס, וירג'יניה</td></tr><tr><td>Matrigel hESC-Qualif</td><td>Mouse Corning Incorporated</td><td>354277</td><td>Bedford, MA</td></tr><tr><td>Gamma מוקרנים 35 מ"מ צלחות תרבית תחתית זכוכית</td><td>MatTek Corporation</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td>Ashland, MA</td></tr><tr><td>SteREO Discovery.V8 מיקרוסקופ הפעלה</td><td>Carl Zeiss Microimaging</td><td>495015-0021-000&nbsp;</td><td>ת'ורנווד, ניו יורק</td></tr><tr><td>מקור אור Schott ACE I</td><td>Schott</td><td>A20500</td><td>גרמניה</td></tr><tr><td>CellTracker&nbsp;</td><td>Life Technologies Corporation</td><td>C2925</td><td>Carlsbad, CA</td></tr><tr><td>BD PrecisionGlide Needle 18 G ו- 21 G</td><td>BD</td><td>305195</td><td>Franklin Lakes, NJ</td></tr><tr><td>Premium Microdissecting Tweezer</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>60-3851</td><td>Holliston, MA</td></tr><tr><td>פרימיום מספריים סטנדרטיים להפעלה עדינה</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>52-2789</td><td>Holliston, MA</td></tr><tr><td>מספריים קפיצים פרימיום</td><td>הרווארד מכשיר</td><td>60-3923</td><td>הוליסטון, MA</td></tr><tr><td>חבישת מלקחיים</td><td>הרווארד מכשיר</td><td>72-8949</td><td>הוליסטון, MA</td></tr><tr><td>עכברים עירומים אתימיים (002019)</td><td>מעבדת ג'קסון</td><td>002019</td><td>בר הרבור, מיין</td></tr></tbody></table>

מודל הפלישה perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש

A Model for Perineural Invasion in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma

פלישה פרינוירולית (PNI) נמצאת בכ-40% מקרצינומות תאי הקשקש בראש ובצוואר (HNSCC). למרות טיפול רב-מודאלי בניתוח, הקרנות וכימותרפיה, הישנות מקומיות וגרורות מרוחקות מתרחשות בשיעורים גבוהים יותר, וההישרדות הכוללת יורדת ב-40% בהשוואה ל-HNSCC ללא PNI. מחקרי מבחנה של המסלולים המעורבים ב-HNSCC PNI היו מאתגרים מבחינה היסטורית בהתחשב בהיעדר בדיקה עקבית וניתנת לשחזור. מתואר כאן ההתאמה של בדיקת גנגליון השורש הגבי (DRG) לבדיקת PNI ב-HNSCC. במודל זה, DRG נקצרים מעמוד השדרה של עכבר עירום שהוקרב ומונחים בתוך מטריצה חצי מוצקה. במהלך הימים שלאחר מכן, נויריטים נוצרים וגדלים בתבנית רדיאלית מגופי התאים של ה-DRG. קווי תאי HNSCC ממוקמים לאחר מכן באופן היקפי סביב המטריצה ופולשים באופן מועדף לאורך הנויריטים לכיוון ה-DRG. שיטה זו מאפשרת הערכה מהירה של מצבי טיפול מרובים, עם שיעורי הצלחה ושחזור גבוהים מאוד של הבדיקה.

לאחר דיסקציה של DRG וההקצאה בתוך אגל מטריקס, את המראה של assay צריך להידמות הערה באיור 1. כי DRG אינו עגול באופן מושלם, אבל הוא מרוכז בתוך אגל מטריקס. זה מאפשר את התולדה של neurites ב 360 מעלות, הראתה חלקית באיור 2. שים לב כי חלקים מסוימים של DRG שולחים neurites מהר במספרים גדולים יותר מאשר לאחרים, בדרך כלל מתאימים שבו efferent וענפי עצב מביאים נכנסו ויצאו DRG, בהתאמה. אנו להסביר את זה ובגין הפרשים גודל בין DRGs בא...

פלישה פרינוירולית (PNI) היא תכונה שכיחה של קרצינומה של תאי קשקש בראש ובצוואר (HNSCC), המעניקה שיעורי הישרדות נמוכים יותר. המנגנונים שלו אינם מובנים היטב. תוך שימוש בנויריטים הנוצרים מגרעיני שורש גב עכברים המוגבלים למטריצה מוצקה למחצה, ניתן לחקור את המסלולים המעורבים ב-PNI של קווי תאי HNSCC.

מודל הפלישה Perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש

Perineural invasion (PNI) is found in approximately 40% of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Despite multimodal treatment with surgery, ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול ניסיוני זה היא להעריך במהירות מצבי טיפול מרובים המשפיעים על פלישה פרינוירולית בסרטן קשקש ראש וצוואר עם שיעורי הצלחה ושחזור גבוהים מאוד. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום אונקולוגיה של ראש וצוואר, כגון מהם הגורמים המשפיעים על פלישת תאי סרטן ראש וצוואר. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לבצע מספר רב של בדיקות במהירות ובשחזור מעכבר אחד בפרק זמן קצר יחסית.לפני שמתחילים בהליך הדיסקציה של גנגליון השורש הגבי או DRG, הוסף מדיום טרי בטמפרטורת החדר לפחות ל-40 בארות של צלחת V-bottom של 96 בארות. לאחר מכן, השתמש במספריים עדינים כדי לבצע חתך אורכי לאורך עמוד השדרה משורש הזנב לראש העכבר. ולחלק לרוחב את הרקמה מתחת לעמוד השדרה הקדוש, לנתח את שני צידי עמוד השדרה, עד לבסיס הגולגולת.העבירו את הדגימה מתחת למיקרוסקופ, והתבוננו בקצה צוואר הרחם של עמוד השדרה בעוצמה נמוכה. חוט השדרה הלבן נראה באמצע טבעת גרמית, המוקפת בכמויות משתנות של שרירים סביב עמוד השדרה ורקמות רכות. בעזרת מספריים קפיציים מיקרוסקופיים, פצלו את ההיבט הגבי או העליון של שניים עד שלושה גופי החוליות הראשונים.לאחר מכן, השתמש בפעולת הקפיץ של המספריים כדי לפתוח את החתך הגרמי הראשוני הזה, כדי להבטיח שדיסקציה של גוף החוליה תתרחש בקו האמצע. המשיכו במרווחים קטנים לכיוון עמוד השדרה הקדוש, חתכו את עמוד השדרה עם חתכים זהים בהיבט הגחוני, או התחתון, של גופי החוליות. הנח חצי כדור אחד בצד, העביר את החצי השני של עמוד השדרה עם הפנים כלפי מטה על צלחת סטרילית כשחוט השדרה במקומו.והשתמש בשתי מחטים בגודל 18 כדי להדק את שני קצוות ההמיספין על משטח חיתוך הפוליסטירן. לאחר מכן, החל מהקצה הצר יותר, צוואר הרחם, קלף בעדינות את חוט השדרה מכארבע רמות חוליות. באזור שבו העצבים התחושתיים נכנסים לתוך ה-DRG, תפסו בעדינות את הפאשיה שמסביב בעזרת מלקחיים מיקרוסקופיים, והשתמשו במספריים קפיציים מיקרוסקופיים כדי לקצץ את הפאשיה הזו ורקמת עצב אחרת כדי לשחרר את ה-DRG.בהגדלה מוגברת, השתמש במספריים הקפיציים כדי לחתוך את העצב ההיקפי קרוב ככל האפשר ל-DRG כדי לשחרר את הרקמה, ולקצץ את הענפים הפרוקסימליים. לאחר מכן, חתוך את ה-DRG של כל סיבי עצב תועים או חיבורים פאסיאליים והנח את הרקמה המבודדת לבאר אחת של צלחת ה-V התחתונה של 96 בארות. כדי להכין את טיפות המטריצה המוצקות למחצה, העבירו צלחת זכוכית תחתונה אחת מקרח על גוש קרח מתחת למיקרוסקופ ההפעלה.הניחו את קצה הפיפטה של לא יותר מ-10 מיקרוליטר ישירות על הזכוכית בזווית של 45 מעלות, והוציאו בזהירות טיפת מטריצה של 1.5 מיקרוליטר על הזכוכית. הרחיקו לאט את קצה הפיפטה מהזכוכית כאשר המטריצה מתחברת לצלחת. הפקידו טיפה אחת של מטריצה על כל אחת מארבע פינות הצלחת, והעבירו את הצלחת למשטח בטמפרטורת החדר למשך כדקה.כאשר המטריצה התקשחה מעט, החזירו את הצלחת לגוש הקרח, והשתמשו במלקחיים מיקרוסקופיים סגורים כדי לגרוף את ה-DRG בעדינות ביד שמאל. בעזרת יד ימין, העבירו בזהירות את רקמת העצב לקצה מחט בגודל 21 והשתמשו במחט כדי להכניס בעדינות את ה-DRG לאמצע טיפת המטריצה. ה-DRG אמור להשתחרר בקלות לתוך המטריצה למיקום מרכזי עם המחט.לאחר הכנסת חתיכת DRG לכל אחת מארבע הטיפות, הנח את הצלחת באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך שלוש דקות. כאשר כל ה-DRG הוטמע, החזק את הלוחות בזה אחר זה, בזווית קלה והוסף לאט לאט ארבעה מיליליטר של DMEM בתוספת 10% FBS לצלחות, כך שהמדיום רק בא במגע בהדרגה עם יחידות ה-DRG המטריקס. החזירו את הצלחות לחממה למשך 48 עד 72 שעות נוספות.כאשר הנויריטים מגיעים לפחות ל-75% מהדרך לקצה המטריצה, שאפו את המדיום מהבארות מבלי להסיר את יחידות ה-DRG של המטריצה. לאחר מכן, בעזרת פיפטה של 200 מיקרוליטר, עם הדק חלק, הניחו שתי טיפות של שלוש פעמים 10 עד התאים החמישיים למיליליטר מדיום מעל כל בדיקת DRG מטריצה. והחזירו את הצלחות לחממה.לאחר שעה, הוסף בעדינות ארבעה מיליליטר DMEM עם 10% FBS לאורך הדופן הצדדית של צלחת הזכוכית התחתונה, והחזיר את הצלחות לחממה עד להערכה המיקרוסקופית הבאה שלהן. לאחר חיתוכם ומיקומם בתוך טיפות המטריצה, מראה הבדיקה אמור להידמות ל-DRG המוטבע במטריצה המוצג כאן. שימו לב שה-DRG אינו עגול לחלוטין, אלא מרוכז בתוך טיפת המטריצה, מה שמאפשר צמיחה של נויריטים ב-360 מעלות.מיד לאחר הציפוי, תאי סרטן הקשקש בראש ובצוואר יוצרים טבעת היקפית סביב המטריצה, ומתרחבת לאורך הנויריטים במהלך היומיים-שלושה הבאים. תאים מצופים על טיפות בקרה ריקות המכילות מטריצה בלבד מתחלקים באופן פעיל סביב המטריצות אך אינם נכנסים או נמשכים מעל החלק העליון. לצורך כימות הפלישה הפרי-עצבית של תאי הסרטן, תמונות הבדיקות מחולקות לארבעה רבעים באמצעות קו אנכי אחד וקו אופקי אחד.לאחר מכן נקבעות סדרה של נקודות עבור כל הרחבת פלישה פרינוירולית שנצפתה בכל רבע, מה שמאפשר השוואה של גידולי תאי הסרטן לאורך הנויריטים בין קווי תאי סרטן שונים. לאחר השליטה, טכניקת בידוד גרעיני השורש הגבי יכולה להסתיים תוך פחות משעתיים אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב למזער טיפול מוגזם בגרעיני השורש הגבי שכן פציעת ריסוק היא הסיבה השכיחה ביותר לכישלון הבדיקה.בעקבות הליך זה, ניתן לחקור את המנגנונים של פלישה פרינוירולית, מה שעשוי להוביל לפיתוח טיפולים ממוקדים נגד סוג זה של פלישה לרקמות רכות. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לנתח גרעיני שורש גב מעכבר ולהגדיר מבחן לבחינת פלישה פרינוירולית.

a-model-for-perineural-invasion-head-neck-squamous-cell

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

סקירה מקיפה של טכניקות מעורב ביצירת מודל עכברי של סרטן הפה ניטור כמותי של הפלישה הגידול בתוך הלשון באמצעות מיקרוסקופ רב פוטון של תאים שכותרתו מוצג. מערכת זו יכולה לשמש פלטפורמה שימושי להערכת יעילות התרופה מולקולרית של תרכובות אנטי פולשנית.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

בסרטון זה, אנו מתארים את השיטה לתרבית משותפת של גרעיני שורש גביים ותאים סרטניים על קרום כוריאואלנטואי אפרוח או CAM כדי לחקור פלישה פריעצבית.

Chick Chorioallantoic Membrane או CAM Tumor Model: שיטת In Ovo להדמיית פלישה פריעצבית של תאי גידול

בסרטון זה, אנו מדגימים את ההליך לפיתוח מודל פלישה של תאי סרטן פרינוירונים במבחנה על ידי תרבית משותפת של גנגליון שורש גבי של עכבר ותאי סרטן נוירוטרופיים. ניתן להשתמש במודל לביצוע בדיקות סרטן, המניבות תוצאות מהירות וניתנות לשחזור.

הקמת מודל תלת-ממדי של תרבית משותפת של גרעיני שורש מורין דורסלי ותאים סרטניים: מודל במבחנה לחקר פלישת תאי סרטן פריעצביים

בסרטון זה, אנו מפתחים מודל עכבר in vivo לפלישה פריעצבית על ידי הזרקת תאי סרטן הלבלב לעצב הסיאטי. מודל זה מסייע לכמת את היקף הפלישה ולחקור את יחסי הגומלין בין תאים סרטניים ועצבים.

מודל הפלישה הפרי-עצבית של מורין: יצירת מודל In Vivo להדמיית פלישה פרי-עצבית בעצב הסיאטי של עכבר

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך להקמת מודל מורין של פלישה פריעצבית על ידי הזרקת תאים סרטניים לעצב הסיאטי. המודל יכול לעזור להשיג הבנה של גודל הפלישה העצבית להערכה עוקבת של תרופות נגד סרטן.

מודל עצב סיאטי מורין של פלישה פריעצבית או PNI: חילוץ ועיבוד של עצב סיאטי להבנת פלישה של תאים סרטניים

פלישה לרקמות נורמליות שמסביב היא מאפיין מגדיר של גידולים ממאירים. אנו מספקים כאן מבחן מיקרו-צלחת פשוט ואוטומטי למחצה של פלישה לביומטריצה תלת מימדית טבעית שהודגמה במספר מודלים של סרטן אנושי מתקדם.

Assay (3D) תלת ממדי גידול ספרואיד הפלישה

מאמר וידאו זה מציג את השימוש בגרעיני השורש הגבי (DRG)/מודל תאי סרטן באדנוקרצינומה של צינור הלבלב.

במבחנת דוגמנות של פלישה העצבית סרטנית: מודל גנגליון השורש הגבה

אנו מתארים ויוו מאתר מודל של הפלישה perineural באמצעות הזרקת תאי סרטן הלבלב syngeneic לתוך בעצב. המודל מאפשר כימות היקף הפלישה עצב ותומך החקירה של המנגנונים תאית ומולקולרית של פלישה perineural.

מודל מאתר בעצב In Vivo של הפלישה Perineural

אנו מתארים את התפתחות מודל מבוסס ספרואיד, תלת מימדי במבחנה זה מאפשר לנו לבדוק הסטנדרטי העכשווי של משטרי טיפול ניסיוני עבור הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים בשורות תאים, מכוון הערכת טיפול רגישות והתנגדות על ראשי תאים אנושיים דגימות בעתיד.

טיפול בדיקות במודל תרבות המבוסס ספרואיד Cell תלת-ממד עבור קרצינומה של תאים קשקשיים בצוואר ואחראי

כאן אנו מציגים שיטה ישימה לפיתוח מודל מאתר orthotopic של הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים. גידולים מדגימים הרלוונטית קלינית תכונות histopathological של המחלה, לרבות נמק, בידול המסכן, גרורות קטרי הסתננות המערכת החיסונית. עכברים נושאות לפתח תסמינים הרלוונטית קלינית כולל בבליעה, הלסת הזחה של ירידה במשקל.

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

הפלישה הנקבים הוא פנוטיפ אגרסיבי הראש והצוואר קרצינומה של תאים וגידולים אחרים. מודל הממברנה של האפרוח שימש ללימוד אנגיוגנזה, הפלישה לסרטן וגרורות. כאן אנו מדגימים כיצד מודל זה יכול להיות מנוצל כדי להעריך את הפלישה הנקבים בvivo.

ממברנה של צ'יק כוראלאנטוניק במודל Vivo להערכת הפלישה לתוך הראש ולסרטן הצוואר

חקור מודל פלישה פרינאורלית בקרצינומה תאי ראש וצוואר קשקש באמצעות נויריטים מגנגליון שורש גבי עכבר. שיטה זו מאפשרת הערכה מהירה של תנאי טיפול עם שיעורי הצלחה גבוהים ושחזוריות.

מודל הפלישה Perineural ב קרצינומה תא ראש וצוואר קשקש

גלה סרטונים נוספים