מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic אצל נקבות עכברים C57BL / 6J ועל ניטור של הגידול.

המטרה הכוללת של שיטה לא כירורגית זו היא לייצר באופן עקבי גידולי שלפוחית השתן אורתוטופיים שאינם פולשניים לשריר בעכברים שניתן לנטר בקלות להערכת טיפולים תוך-שלפוחיתיים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום סרטן שלפוחית השתן. כגון הערכה של טיפולים תוך-שלפוחיתיים חדשים.

היתרון העיקרי בטכניקה זו הוא שקל להשתיל גידולים בעכברים ולעקוב אחר צמיחתם, מה שעוזר לקבוע במדויק את התגובות לטיפולים. יום אחד לפני ההשתלה, כאשר התאים הם כ-80% מעבר קונפלואנט לתאי הגידול MB49 PSA במדיה DMEM מלאה עם פיצול אחד עד שניים. ביום ההליך, אספו וספרו את התאים, וודאו שהם בריאים מספיק.

מערבבים בנפח שווה של תרחיף תאים ו-4% טריפן כחול, וסופרים את התאים החיים המוכתמים בכחול באמצעות המוציטומטר. התאים צריכים להיות בעלי יכולת חיוניות של 80% לפחות. לאחר מכן, השעו מחדש את התאים בשני מיליון למיליליטר בצינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר, ושטפו אותם שלוש פעמים ב-DMEM.

לאחר מכן, שמור אותם מקוררים עד להזרקה. לאחר שעכברה מורדמת, ספקו לה לחות על ידי הזרקה תוך-צפקית של תמיסת הרטמנס ב-1 מיליליטר לכל 10 גרם משקל גוף. חזור על פעולה זו כל שעה או שעתיים במהלך ההרדמה.

לאחר מכן, יש למרוח משחת עיניים סטרילית על שתי העיניים, למרוח מחדש לפי הצורך. לאחר מכן, הניחו את העכבר על מגבות נייר מעל כרית חום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. לאחר מכן, אבטח את הרגליים האחוריות בעזרת סרט.

כעת הפעל לחץ עדין על אזור הבטן התחתונה, ואסוף שתן לתוך צינור של 1.5 מיליליטר כדי למדוד את הרמה הבסיסית של PSA בשתן. לאחר מכן, טען מזרק של מיליליטר אחד עם PLL סטרילי וחבר קטטר IV בגודל 24 כשהמחט הוסרה. מרחו חומר סיכה על קצה הקטטר.

לאחר מכן, הכנס את הקטטר לשופכה, ובעזרת מלקחיים הנח אותו לשלפוחית השתן. עצור כאשר מורגשת התנגדות. לאחר מכן, יש להוציא לאט 50 מיקרוליטר של PLL בקצב של 10 מיקרוליטר כל 20 שניות כדי למנוע רפלוקס שלפוחית.

כעת השאירו את הקטטר בשלפוחית השתן למשך 20 דקות, עם פקק למניעת יציאה. לאחר 20 דקות יש להסיר את הקטטר ולפנות את שלפוחית השתן מכל תכולה, על ידי לחיצה עדינה על הבטן התחתונה. לאחר מכן, בעזרת מזרק של מיליליטר, שטפו את כל התכולה שנותרה מהקטטר.

כעת מערבבים היטב את תאי ה-PSA MB49 על ידי פיפטינג, וטוענים אותם למזרק של 1 מ"ל. חבר את הקטטר ושמן אותו כמו קודם. הכנס את הקטטר לשלפוחית השתן כמו קודם.

ולהתחיל בהזרקת התאים, באמצעות פליטה הדרגתית של 10 מיקרוליטר ל-20 שניות. לאחר מכן המתן שעה. לאחר שעה, הסר את הקטטר ופנה את שלפוחית השתן מכל תכולה.

לאחר מכן, שחררו את העכבר, התמקמו על צד הגחון שלו והחיו אותו עם הזרקת אטיפמזול. כעת, עקוב אחר העכבר עד שיחזור לשכיבה על החזה, ולאחר מכן החזר אותו לכלוב הביתי שלו. הפרשת PSA של תאי MB49 נמצאה משתנה עם מצע הגידול.

נעשה שימוש במדיה DMEM מכיוון שהיא גרמה להפרשת ה-PSA הגדולה ביותר. על מנת לקבוע את הרגישות של PSA ELISA, מספרים שונים של תאים מפרישי PSA MB49 עורבבו עם תאי אב MB49. הבדיקה זיהתה לפחות 100,000 תאים מפרישי PSA לכל מיליון תאים.

שיטת PLL להשתלת גידול גורמת להתפתחות גידולים מרובים בשלפוחית השתן. הן איסוף שתן בן לילה באמצעות כלובים מטבוליים והן דגימות שתן נקודתיות יכולות לשמש למדידת PSA על ידי ELISA. בכל המחקרים בבעלי חיים, משקל העכבר נרשם כמדד לבריאות.

ו-PSA בשתן מנוטר על בסיס שבועי כמדד לצמיחת הגידול. טיפולים שונים שימשו על כל עכבר, וכתוצאה מכך גדלי גידול שונים. שבועיים לאחר ההשתלה, שלפוחית השתן נקצרה ועובדה.

גדלי הגידול השתנו, ומדידות ה-PSA ניבאו זאת. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לייצר גידולי שלפוחית השתן אורתוטרופיים בעכברים, ולעקוב אחר צמיחתם. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך שעתיים לכל עכבר.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לוודא שהתאים מעורבבים לפני ההשתלה, ולבצע את ההשתלה בקצב איטי. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כמו ניתוח זרימה ציטומטרי של Uvm או ELISA על מנת לחקור את ההפעלה החיסונית לאחר הטיפול.