Name: מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית השתן סרטן מערכת איתור (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: למד שיטה לא-ניתוחית להשתלת גידולי שלפוחית שתן אורתוטופיים לא פולשניים בעכברות C57BL/6J. שיטה זו מאפשרת מעקב קל אחרי צמיחת הגידולים והערכת טיפולים תוך-שלפוחיתיים ביעילות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומנה על ידי מענק מהמועצה הלאומית למחקר רפואי של סינגפור (NMRC/CIRG/1335/2012) שהוענק לפרופסור Kesavan Esuvaranathan.

<ol><li>Gunther, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2011).</li>
<li>Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Braz+J+Urol%22%5BJournal%5D)">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int Braz J Urol. 34, 220-226 (2008).</li>
<li>Chan, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+orthotopic+bladder+tumor+implantation+in+a+syngeneic+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Optimizing orthotopic bladder tumor implantation in a syngeneic mouse model.</a> J Urol. 182, 2926-2931 (2009).</li>
<li>Kasman, L., Voelkel-Johnson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+bladder+cancer+model+for+gene+delivery+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">An orthotopic bladder cancer model for gene delivery studies.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , e50181(2013).</li>
<li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li>
<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684(2011).</li>
<li>Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detecting+and+treatment+monitoring+of+orthotopic+murine+bladder+tumor+implants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants.</a> J Urol. 145, 1297-1301 (1991).</li>
<li>Kikuchi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+quantitative+analysis+of+early+stage+orthotopic+murine+bladder+tumor+using+in+vivo+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging.</a> J Urol. 170, 1375-1378 (2003).</li>
<li>Sweeney, S. K., Luo, Y., O'Donnell, M. A., Assouline, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnology+and+cancer%3A+improving+real-time+monitoring+and+staging+of+bladder+cancer+with+multimodal+mesoporous+silica+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Nanotechnology and cancer: improving real-time monitoring and staging of bladder cancer with multimodal mesoporous silica nanoparticles.</a> Cancer nanotechnology. 7, 3(2016).</li>
<li>Tanaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+detection+of+bladder+cancer+in+an+orthotopic+murine+model+with+green+fluorescence+protein+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive detection of bladder cancer in an orthotopic murine model with green fluorescence protein cytology.</a> J Urol. 170, 975-978 (2003).</li>
<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li>
<li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li>
<li>Patel, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transabdominal+micro-ultrasound+imaging+of+bladder+cancer+in+a+mouse+model%3A+a+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study.</a> Urology. 75, 799-804 (2010).</li>
<li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter.</a> Clin Cancer Res. 10, 6977-6984 (2004).</li>
<li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Urol%22%5BJournal%5D)">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li>
<li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li>
<li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172(2012).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075(2007).</li>
<li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718(2015).</li>
<li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470%2C+an+angiogenic+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+radiology%22%5BJournal%5D)">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li>
<li>Folin, O., Morris, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+determination+of+creatinine+and+creatine+in+urine%5BTitle%5D)+AND+%22JBC%22%5BJournal%5D)">On the determination of creatinine and creatine in urine.</a> JBC. 17, 469-473 (1914).</li>
<li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li>
<li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+%28II%29+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors & bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li>
<li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles%2FPAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors & bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li>
<li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+physiology+and+biochemistry+%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

השלבים הקריטיים ביותר בפרוטוקול הם 1) בהצלחה שמירה על tumorigenicity של הקו הסלולרי; 2) להבטיח הפרשת PSA למדידה לפני ההשתלה תאים סרטניים בעכברים; 3) יצירת השעית תא יחיד להשתלה כדי להפחית וריאציה בגודל גידולים; ו -4) הקניית תאים בקצב איטי כדי למנוע ריפלוקס vesico-השופכן, וכתוצאה מכך ההשתלה תאים סרטניים בכליות. לאחר מעבר ממושך במבחנה, MB49 / תאי MB49-PSA יכולים להפסיד tumorigenicity שלהם, כפי שהוכח על ידי ...

המטרה של שיטה זו היא ליצור גידולים בשלפוחית ​​שתן orthotopic murine וכן לפקח על הגידולים המושתלים באופן מדויק ככל האפשר, כך שהעכברים ללא השתלת גידול לא מיוחסים נרפאו ב ניתוח נקודת סיום. בסך הכל, השיטה לראות תפחית את צורך כמויות גדולות של עכברים לניתוח הניסיון ולהבטיח דיוק רב יותר בקביעת תוצאות טיפוליות. פיתוח מודל orthotopic לסרטן חשוב, כמו תאים סרטניים להשתיל מתחת לעור לא לשחזר את הסביבה של מחלה קלינית או לאפשר פיתוח של אסטרטגיות טיפוליות. הארכיטקטורה של שלפוחית ​​השתן מאפשרת ההחדרה של טיפולים בסרטן שלפוחית ​​השתן ישירות לתוך שלפוחית ​​השתן עם תופעות מערכתיות מינימאליות. לכן, במודלים של בעלי חיים כי לשחזר בסביבה זו, כגון מודל orthotopic, שחשובים להעריך טיפולים חדשים. מסקנות מכל ניסוי הגדרה הם dependent על מגבלות המודל. טכניקות פותחו מספר לייצור גידולים בשלפוחית ​​השתן orthotopic בעכברים. אלה מסתמכים על הפגיעה בשכבת glycosaminoglycan של שלפוחית ​​השתן, מה שמאפשר לתאים נגועים להיות מושתלים. הטכניקות בשימוש כוללות electrocautery, שתוצאתה נקודה אחת של נזק לדופן השלפוחית, מה שמוביל להתפתחות גידולים באתר אחד בשלפוחית 1,2. עם זאת, שיעור ההצלחה של השתלת גידול באמצעות electrocautery הוא מפעיל תלוי הנע בין 10 - 90%, והיא כוללת את הסכנה כי לדופן השלפוחית ​​יהיה נקב, שמובילה גידולים המתפתחים חלל הצפק. כווייה כימית מתבצעת באמצעות כסף חנק, אשר פוגע בקיר השלפוחית 3. באופן דומה, חומצה נעשה שימוש כדי לפגוע בקיר השלפוחית 4. טריפסין גם נעשה שימוש כדי לפגוע השלפוחית כמו גם 5. שיטות אלה עלולות לגרום להתפתחות של יותר מ גידול אחד בשלפוחית.יתר על כן, קיימת סכנה של נזק חמור השלפוחית ​​אם הכימיקלים נשארים במגע עם דופן השלפוחית ​​במשך זמן רב מדי. השיטה שפותחה על ידי Ninalga et al. משתמש פולי- L- ליזין בעלי המטען החשמלי החיובי (PLL) 6 מולקולות כדי לצפות את קיר שלפוחית השתן; זה מאפשר לתאי הגידול טעונים שלילית להיצמד שכבת glycosaminoglycan של שלפוחית ​​השתן. שיטה זו בדרך כלל תוצאות יותר גידול אחד לפתח בשלפוחית, אך השתלת גידול היא 80 - 100% 4,7. מבחינה טכנית, זה גם ההליך הקל ביותר לבצע. כדי להבטיח כי הגידולים המתפתחים הם די אפילו בגודל, חשוב כי התאים הסרטניים אינם מקובצי גושים גדולים לפני ההשתלה. על מנת להעריך יעילות טיפולית, עדיף לבצע מחקר זה על עכברים עם גידולים בגודל דומים למדי. לפיכך, מערכת זיהוי טובה שיכול לכמת גודל גידול קצר לאחר ההשתלה היא חשובה. יש מספר אסטרטגיות דבורהn המשמש להערכת גידולים. אלה כוללים הדמיה בתהודה מגנטית (MRI) 8-10, קרינת 11, פליטת אור 12,13, אולטרסאונד 14, ו assay immunosorbent enzyme-linked (ELISA) 15,16. בעוד MRI ואולטרסאונד אינו דורשים שינויים של התאים הסרטניים, יש צורך סוכני ציוד והניגודיות רגישים עבור MRI. Fluorescence-, luminescence-, המבחנים המבוססים ELISA דורשים שינוי של התאים הסרטניים לבטא חלבוני סמן שיכול להיות מזוהה על ידי שיטות אלה. לקבלת הארה, מצע נדרש לצורך זיהוי של פעילות בלוציפראז; ובכך, יש שלב מוסף התייקרות. שניהם הארת הקרינה דורשות ציוד מיוחד. כדי לייצר קרינה, חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) cyclization, אשר מזורז על ידי חמצן מולקולרי, נדרש. לפיכך, ביטוי של GFP עשוי להיות משתנה בתוך מסת גידול תלוי גישת החמצן, מה שהופך את סמן למדי אמין <sup&gt; 17. שינוי של שורת התאים בעכברי שלפוחית שתן סרטן MB49 להפריש אנטיגן ספציפי לערמונית אדם (PSA) 15,16 כסמן פונדקאי הוא אסטרטגיה אחרת. סמנים אלה גם לספק אמצעים חלופיים המאשר נוכחות גידול על סיום הניסוי, מה שהופך אותם כחלופה אימונוהיסטוכימיה. מחקר זה מדווח על שיטת PLL של השתלת גידול orthotopic ומציג השוואה של מערכות גילוי גידול, כלומר ELISA, קרינה, והדמית אולטרסאונד.

<table><tbody><tr><td>MB49-PSA תאים</td><td>N/A</td><td>N/A REF</td><td>(Wu QH, 2004)</td></tr><tr><td>RPMI 1640 media</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) Media</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS) דרום אמריקאי</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS) דרום אמריקאי, פרימיום</td><td>Biowest</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30088.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>Hygromycin B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>חינם PSA (אנושי) ערכת ELISA</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reagent למיצוי RNA&nbsp;</td><td></td><td></td> ערכת שעתוק הפוך cDNA בקיבולת גבוהה של Ambion 15596026 <td></td></tr><tr><td>עם מעכב RNase</td><td>Applied Biosystems</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master</td><td>Mix Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay &ndash; Mouse Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Mm00607939_s1</td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay &ndash; עכברים נקבות KLK3</td><td>יישומי</td><td>4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>C57BL/6J עכברים נקבות</td><td>ב-Vivos</td><td></td><td>4 - 6 שבועות</td></tr><tr><td>הרדמה (75 מ"ג/ק"ג קטמין ו-1 מ"ג/ק"ג מדטומידין)</td><td>בית מרקחת</td><td></td><td></td>מקומי</tr><tr><td>תרופת היפוך (1 מ"ג/ק"ג אטיפמזול)</td><td>בית מרקחת</td><td></td><td></td>מקומי</tr><tr><td>אגרוף אוזניים</td><td>מדעי מיקרוסקופיה אלקטרונית</td><td>72893-01</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת הרטמן או תרכובת נתרן לקטט</td><td>B משחת עיניים בראון</td><td></td><td></td></tr><tr><td>- Duratears משחת סיכה סטרילית לעיניים</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat Pack - מחממי ידיים</td><td>HotHands Heatmax Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Introcan Certo IV קטטר</td><td>B בראון</td><td>4251300</td><td>24 גרם x 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>ג'ל סיכה אקווג'ל</td><td>בית מרקחת</td><td></td><td></td>מקומי</tr><tr><td>תמיסת פולי-L-ליזין, 0.01%,</td> <td>סיגמא</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, מיני, מעכב פרוטאז ללא EDTA קוקטייל</td><td>רוש</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>ערכת בדיקת קריאטינין קוונטיכרום</td><td>מערכות בדיקה ביולוגיות</td><td>DICT-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>צבע פלואורסצנטי - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater-ICE פתרון מעבר רקמות קפואות</td><td>אמביון</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>שם</td><td>חברה</td><td>מספר קטלוגי</td><td>הערות</td></tr><tr><td>ציוד ותוכנה</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 מערכת PCR בזמן אמת</td><td>מיושמת Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Software v2.3</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metabolic Cage</td><td>Tecniplast&nbsp;</td><td>מתלה מסוג אנכי ל-12 כלובים</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto I מערכת&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva תוכנה v7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT in vivo מערכת הדמיה&nbsp;</td><td>קליפר מדעי החיים&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>תוכנת תמונה חיה v3.1</td><td>קליפר מדעי החיים&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מערכת הדמיה Vevo 2100&nbsp;</td><td>ויזואליסוניקס&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מודל גידול murine orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן אצל נקבות עכברים C57BL / 6J באמצעות שורת תאים סרטניים בשלפוחית ​​השתן בעכברים MB49, אשר שונתה כדי להפריש אנטיגן ספציפי לערמונית האדם (PSA), ואת ההליך לאישור של ההשתלה הגידול. בקיצור, עכברים מורדמים באמצעות תרופות להזרקה והם עשויים להניח במצב הגבה. שתן מתפנה מן השלפוחית ​​50 μL של פולי- L- ליזין (PLL) הוא החדיר לאט בקצב של 10 μL / 20 שניות באמצעות קטטר 24 G IV. הוא עזב בשלפוחית ​​במשך 20 דקות על ידי וסותם את הקטטר. צנתר מוסר PLL הוא שפונה על ידי לחץ עדין על שלפוחית ​​השתן. זה ואחריו החדרה של הקו הסלולרי בעכברים שלפוחית השתן סרטן (1 x 10 5 תאים / 50 μL) בשיעור של 10 μL / 20 שניות. קטטר פקוק למנוע פינוי מוקדם. לאחר h 1, העכברים הם החיו עם תרופת היפוך, ואת שלפוחית ​​השתן שהתפנה. שיעור ההחדרה האיטי חשוב,כפי שהיא מקטינה ריפלוקס vesico-השופכן, אשר יכול לגרום לגידולים להתרחש בדרכי השתן העליונות בכליות. שורת התא צריך להיות גם מחדש תלוי להפחית clumping של תאים, כמו זה יכול להוביל בגדלי גידול אחידים לאחר השתלה. טכניקה זו גורמת גידולים עם יעילות גבוהה. צמיחת גידול מנוטרת על ידי הפרשת PSA שתן. ניטור סמן PSA הוא יותר אמין יותר מאשר אולטרסאונד או דימות פלואורסצנטי לאיתור נוכחות של גידולים בשלפוחית. גידולים בעכברים בדרך כלל להגיע לגודל מקסימאלי משפיע לרעה בריאות בכ 3 - 4 שבועות אם אינו מטופל. באמצעות מעקב אחר צמיחת הגידול, אפשר להבחין עכברים נרפאו מאלו שלא הושתלו בהצלחה עם גידולים. עם ניתוח נקודת סיום רק, זה האחרון עשוי להניח בטעות נרפא על ידי טיפול.

הפרשת PSA מתאי MB49 נמצאה להשתנות עם תקשורת הצמיחה. MB49-PSA הוא גדל DMEM התקשורת כי זה תוצאות הפרשת PSA מוגבר (איור 1 א). כדי לקבוע את הרגישות של ELISA PSA בזמן אמת PCR, מספרים שונים של תאים מפרישי MB49-PSA היו מעורבים עם תאים הורית MB49. PSA ELISA מזהה מינימום של 1 x 10 5 מפריש PSA תאים / 1 x 10 6 תאים (איור 1B), תוך ניתוח PCR בזמן אמת מזהה 100 תאים PSA מפריש / 1 x 10 6 תאים <stro...

פרוטוקול זה מתאר את הדור של גידולים בשלפוחית ​​השתן בעכברים orthotopic אצל נקבות עכברים C57BL / 6J ועל ניטור של הגידול.

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

המטרה הכללית של שיטה לא-כירורגית זו היא להפיק באופן עקבי גידולי שלפוחית השתן אורטוטופיים שאינם פולשים לשריר בעכברים, אשר ניתן לנטרם בקלות לצורך הערכה של טיפולים תוך-שלפוחיתיים. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום סרטן שלפוחית השתן, כגון הערכה של טיפולים תוך-שלפוחיתיים חדשניים.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא הקלות שבה ניתן להשתיל גידולים בעכברים ולנטר את צמיחתם, דבר המסייע לקביעה מדויקת של התגובות לטיפולים. יום אחד לפני ההשתלה, כאשר התאים מגיעים לכ-80% confluence, בצעו passage לתאי גידול MB49 PSA במצע DMEM מלא ביחס של 1:2. ביום הפרוצדורה, אספו וספרו את התאים, וודאו שהם בריאים מספיק.ערבבו נפחים שווים של תרחיף תאים ו-4% Trypan Blue, וספרו את התאים החיים שאינם נצבעים בכחול באמצעות המוציטומטר. לתאים צריכה להיות חיוניות של לפחות 80%. לאחר מכן, השהו שוב את התאים בריכוז של שני מיליון תאים למילליליטר בתוך מבחנת צנטריפוגה של 15 מיליליטר, ושטפו אותם שלוש פעמים ב-DMEM.לאחר מכן, שמרו אותם בקירור עד למועד ההזרקה. לאחר הרדמת עכברה, ספקו לה הידרציה באמצעות הזרקה תוך-בטנית של Hartmanns Solution במינון של 1 milliliters ל-10 גרם ממשקל הגוף. חזרו על פעולה זו מדי שעה או שעתיים במהלך ההרדמה.בשלב הבא, מרחו משחה עינית סטרילית לשתי העיניים, ומריו שוב לפי הצורך. לאחר מכן, הניחו את העכבר במנח גב (supine) על מגבות נייר מעל פד חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. לבסוף, קבעו את הרגליים האחוריות בעזרת סרט דביק.כעת הפעל לחץ עדין על אזור הבטן התחתונה, ואסוף שתן למבחנה של 1.5 milliliter כדי למדוד את הרמה הבסיסית של PSA בשתן. לאחר מכן, מלא מזרק של one-milliliter ב-PLL סטרילי וחבר קטטר IV בכילוב 24 לאחר הסרת מחט המוליך. מרח חומר סיכוך על קצה הקטטר.לאחר מכן, הכניסו את הקטטר לשופכה, והנחיתו אותו לשלפוחית השתן באמצעות פינצטה. עצרו כאשר מורגשת התנגדות. לאחר מכן, הזריקו לאט 50 µL של PLL בקצב של 10 µL כל 20 שניות כדי למנוע רפלקס של השתן מהשלפוחית לשופכנים.כעת השאירו את הקטטר בתוך שלפוחית השתן למשך 20 דקות, כאשר פקק מונע זליגה החוצה. לאחר 20 דקות, הוציאו את הקטטר ורוקנו את שלפוחית השתן מכל תוכנה על ידי לחיצה עדינה על הבטן התחתונה. לאחר מכן, בעזרת מזרק של 1 mL, שטפו את שאריות התוכן מתוך הקטטר.כעת ערבבו היטב את תאי ה-MB49 PSA באמצעות פיפטינג, והעבירו אותם למזרק של 1-mL. חברו את הקטטר ושמנו אותו כפי שנעשה קודם לכן. הכניסו את הקטטר לשלפוחית השתן כפי שנעשה קודם לכן.התחילו בהזרקת התאים, תוך כדי דחיפה הדרגתית של 10 µL כל 20 שניות. לאחר מכן המתינו שעה אחת. לאחר שעה, הוציאו את הקטטר ורוקנו את השלפוחית מכל תוכנה.לאחר מכן, שחררו את העכבר, הניחו אותו על הצדו הגחוני והעילו אותו באמצעות הזרקה של atipamezole. כעת, עקבו אחר העכבר עד שיחזור למצב של שכיבה על החזה (sternal recumbency), ולאחר מכן החזירו אותו לכלוב מגורי הבית שלו. נמצא כי הפרשת PSA של תאי MB49 משתנה בהתאם למצע הגידול.נעשה שימוש במצע DMEM מכיוון שהוא הניב את הפרשת ה-PSA הגבוהה ביותר. כדי לקבוע את הרגישות של בדיקת ה-PSA ELISA, ערבבו מספרים שונים של תאי MB49 מפרישי PSA עם תאי MB49 הוריים. הבדיקה זיהתה לפחות 100,000 תאים מפרישי PSA לכל מיליון תאים.שיטת השתלת הגידול באמצעות PLL גורמת להתפתחות של גידולים מרובים בשלפוחית השתן. ניתן להשתמש הן באיסוף שתן למשך לילה באמצעות כלובים מטבוליים והן בדגימות שתן רגעיות כדי למדוד PSA באמצעות ELISA. בכל מחקרי בעלי החיים, נרשם משקל העכבר כמדד לבריאות.ורמות ה-PSA בשתן מנוטרות על בסיס שבועי כמדד לצמיחת הגידול. טיפולים שונים הוחלו על כל עכבר, מה שהוביל לגדלי גידול שונים. שבועיים לאחר ההשתלה, השלפוחיות נאספו ועובדו.גדלי הגידולים היו שונים, ומדידות ה-PSA חזו זאת. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להיווצר גידולים אורתוטרופיים בשלפוחית השתן של עכברים, ולנטר את צמיחתם. לאחר רכישת מיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בשלוש שעות לכל עכבר.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להבטיח שהתאים מעורבבים לפני ההשתלה, ולבצע את ההשתלה בקצב איטי. לאחר פרוצדורה זו, ניתן לבצע שיטות אחרות, כגון ניתוח flow cytometric של Uvm או ELISA, כדי לחקור את ההפעלה החיסונית לאחר הטיפול.

a-murine-orthotopic-bladder-tumor-model-and-tumor-detection-system

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

גידולים בשלפוחית ​​השתן הן הוקמה בשנת נקבות העכברים בצורה פולשנית דרך צנתור, צריבה המקומי, בעקבות הידבקות של תאים קרצינומה לאתרים לשרוף.

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

הקמת מודל orthotopic גידול בשלפוחית ​​השתן להעריך את ההשפעות נוגדות הגידולים של סרנה נמסר intravesically וצמיחה ניטור הגידול והדמיה על ידי אולטרסאונד bioluminescent.

שלפוחית ​​השתן Orthotopic גידול דגם ואת הערכת טיפול סרנה השלפוחית

בסרטון זה אנו מתארים השתלה אורתוטופית של אורגנואידים מגידול בשלפוחית השתן בתרבית לתוך שלפוחית השתן כדי לחקור את תפקידה של סביבת האיברים בהתפתחות גידולים.

מודל אורגנואיד של גידול בשלפוחית השתן: שיטה להשתלה אורתוטופית של אורגנואידים משלפוחית השתן למושתלת שלפוחית השתן

בסרטון זה, אנו מתארים את ההליך התוך-שלפוחית של העברת תאים סרטניים לשלפוחית השתן של מודל עכבר. הליך זה מסייע ליצור מודל גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן שניתן להשתמש בו לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

מידול גידול אורתוטופי בשלפוחית השתן במודל עכבר: הליך למתן תוך שלפוחית של תאים סרטניים לשלפוחית השתן

השתלה של תאים סרטניים לתוך האיבר ממוצא יכולה לשמש מודל פרה שימושי כדי להעריך את הטיפולים חדשניים. ניתן לגדל תאי קרצינומה של שלפוחית ​​השתן MB49 בתוך שלפוחית ​​השתן בעקבות החדרת שלפוחית. פרוטוקול זה מדגים צנתור של שלפוחית ​​השתן בעכבר לצורך השתלת גידול ואספקת adenoviral.

סרטן שלפוחית ​​השתן לדגם orthotopic ג&#39;ין משלוח לימודים

הטכניקה המבוססת לחסן xenografts orthotopic פולשנית העיקרית לסרטן שלפוחית ​​השתן דורשת laparotomy והתגייסות של שלפוחית ​​השתן. הליך זה גורם תחלואה משמעותית בעכברים, הוא מאתגר מבחינה טכנית ודורש זמן רב. לפיכך, אנו פיתחנו דיוק גבוה, בגישה מלעורית ניצול הנחיית אולטרסאונד.

פולשנית הקמת Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן xenografts

גידולים בשלפוחית השתן מאתר הם המושרה עם גורם מסרטן nitrosamine N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). שלפוחית השתן גידול דור הוא. הטרוגניות; לכן, הערכה מדויקת של נטל הגידול יש צורך לפני אקראיות לטיפול ניסיוני. כאן אנו מציגים פרוטוקול MRI מהיר, אמין כדי להעריך את גודל הגידול ועל הבמה.

דימות תהודה מגנטית הערכה של גידולים המושרה מסרטן שלפוחית השתן מאתר

פרוטוקול זה מספק צעדים ניסיוני מפורט כדי ליצור תלת מימדי תרבות מבחנה של אורגנואידים גידול שלפוחית השתן נגזר מסרטן שלפוחית השתן מורטין ממורדית. שיטות תרבות כולל פאסאייג ', הנדסה גנטית, והשתלת אורתוטופית של אורגנואידים הגידול מתוארים.

תרבות, מניפולציה, והשתלת אורתוגרטופית של שלפוחית השתן של העכבר הגידול אורגנואידים

כדי להבהיר את תהליך רב שלבי של הפצת הצפק של קרצינומה השחלות, המחקר הנוכחי מציג מודל ניסיוני בעכברים של התפתחות גידולים המקורי וגרורות הצפק באמצעות חיסון orthotopic עם תאים סרטניים אלה.

Murine ניסיוני דגם של התפתחות גידולים מקורית גרור הצפק<em&gt; דרך</em&gt; Orthotopic הרכבה עם קרצינומה של תאי השחלות

אנו מתארים שיטה באמצעות הקרנה היקפית ממוקדת כדי לגרום התנהגות כמו-עייפה בעכברים. מינון ההקרנה לא הקטלני שנבחר מוביל לירידה של שבוע בפעילות ריצת גלגל מרצון.

במודל עכבר של עייפות הנגרם על ידי הקרנה ההיקפית

למד שיטה לא-ניתוחית להשתלת גידולי שלפוחית שתן אורתוטופיים לא פולשניים בעכברות C57BL/6J. שיטה זו מאפשרת מעקב קל אחרי צמיחת הגידולים והערכת טיפולים תוך-שלפוחיתיים ביעילות.

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית ​​השתן סרטן מערכת איתור

גלה סרטונים נוספים

מודל גידול Murine Orthotopic שלפוחית השתן סרטן מערכת איתור