קרצינומה תא syngeneic עכבר הדגם של גרורתי כליות עבור הערכה כמותית אורך ורוחב של טיפולים פרה-קליניים

יישום מודל orthotopic של קרצינומה של תאי כליה בעכברים עם מערכת חיסון תקינים מקנה החוקר מערכת קלינית רלוונטית המוגדרת על ידי הנוכחות של גרורות גידול ריאות כליות עיקריות באותה החיה. מערכת זו יכולה לשמש כדי preclinically לבדוק מגוון של טיפולים in vivo.

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבסס גידולי כליה אורתוטופיים של עכברים באמצעות השתלה תוך כלייתית של תאי גידול לחקר צמיחת הגידול והגרורות והיעילות של טיפולים אנטי-גידוליים. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לענות על שאלות מפתח בתחום האונקולוגיה האורולוגית כגון עד כמה יעיל טיפול חדשני במודל פרה-קליני של סרטן הכליה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהשתלת גידול תוך כליה מבססת גידול כליה ראשוני ששולח גרורות ריאה המחקה פתוגנזה קלינית של קרצינומה של תאי כליה.

כדי להכין את תאי הגידול Renca יש לנתק תחילה את תרבית התאים עם 0.25% טריפסין ו-HBSS לאחר שטיפה עם PBS. נטרלו את התגובה לאחר חמש דקות עם מדיום RPMI מלא. העבירו את התאים לצינור חרוטי לצנטריפוגה והשעו מחדש את הגלולה ב-HBSS טרי.

לאחר הספירה, התאימו את הנפח לפעמיים עשרה עד שישה תאים לריכוז מיליליטר ב-HBSS, ומשכו את התאים למזרק מיליליטר אחד המצויד במחט 18. לאחר מכן, הניחו וילון כירורגי סטרילי על כרית חימום ואשרו את רמת ההרגעה המתאימה על ידי צביטת הבוהן. הסר את השיער מהצד השמאלי של העכבר ומרח משחה וטרינרית על העיניים.

לאחר מכן ספוג את מקום ההשתלה עם חומר חיטוי יוד 5% פובידון והשתמש באזמל סטרילי כדי לבצע חתך בודד של סנטימטר עד סנטימטר וחצי בצד שמאל, תוך הקפדה לא לחדור לצפק. בעזרת מספריים, הפרד את הדרמיס מהצפק, טפח את אתר החתך בגזה כותנה סטרילית כדי להסיר דם. ואז תפסו את הראש ביד שמאל ותמכו באגף ביד ימין כדי לאתר את הטחול דרך הצפק.

בעזרת אצבע אחת מיד ימין, משש את העכבר מתחתיו. הכליה צריכה להיות גלויה. תוך שמירה על אחיזה איתנה בבעל החיים כדי לספק מתח על פני הצפק והכליה, בקש מעוזר להעביר לאט לאט 0.1 מיליליטר מתאי הרנקה דרך הצפק השלם למרכז הכליה.

החזק את המחט במקומה למשך חמש עד 10 שניות כדי להפחית את הזרימה החוזרת של התאים. לאחר מכן, סגור את החתך בשכבה דקה של דבק רקמות ציאנואקרילט. בנקודת הסיום של הניסוי, השתמש במספריים כדי לבצע חתך בקו האמצע, החל מאמצע הבטן דרך כלוב הצלעות, הצוואר ובלוטות הרוק.

בעזרת מספריים ומלקחיים, הסר בזהירות את הצלעות מבלי לפגוע ברקמת הריאה, והסר את רקמת החיבור כדי לחשוף את קנה הנשימה. מלאו מזרק של שלושה מיליליטר המצויד במחט בגודל 18 עם דיו הודו 10% ו-PBS. לאחר מכן השתמש במלקחיים כדי להשחיל בזהירות תפר משי מתחת לקנה הנשימה ולאחר מכן לקשור קשר רופף.

לאחר מכן, הכנס בזהירות את המחט לקנה הנשימה ונפח לאט את הריאות עם מיליליטר עד מיליליטר וחצי של תמיסת India Ink. משוך את הקשר בחוזקה סביב קנה הנשימה כדי לעכב את הזרימה החוזרת של הדיו, ואז הסר את המחט וחתוך בזהירות את רקמת החיבור כדי להסיר את הריאות המנופחות. מקבעים את הריאות בצינור חרוטי של 15 מיליליטר המכיל חמישה מיליליטר של תמיסה של פקטה במכסה אדים כימי בטמפרטורת החדר.

לאחר 24 עד 48 שעות, הסר את הריאות השלמות המוכתמות ופרק בזהירות את האונות בצלחת פטרי בגודל 35 על 10 מילימטר. לאחר מכן ספרו את מספר גושי הגידול הלבנים תחת מיקרוסקופ מנתח. השתלת תאי Renca תוך כלייתית מוצלחת בעכבר מביאה להתפתחות גידול בכליות ולגרורות לריאות עם בעלי חיים נושאי גידול המפגינים עומס גידול חזק כפי שנמדד על ידי המשקל המוגבר של הכליות המושתלות בגידול.

כפי שנצפה, ניתן לזהות גידולי רנקה על ידי צביעה אימונוהיסטוכימית עבור ציטוקרטין 8 ו-18. השתלת קו תאי רנקה המבטא לוציפראז מאפשרת מעקב אחר עומס הגידול בכליה וגרורות לריאה על ידי הדמיה ביולומינסנט כפי שאושר עוד על ידי אינפלציית הריאות בהודו. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך פחות מחמש דקות לכל עכבר אם היא מבוצעת כראוי.

בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור לזהות בבירור את הכליה דרך הצפק כדי להבטיח השתלת גידול תוך כליה מדויקת. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כמו בדיקת תרופות פרה-קליניות כדי לענות על שאלות נוספות, כגון באיזו מידה תרופה חדשה משפיעה על צמיחה או גרורות של גידולים תוך-כליים? לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להיות בעל הבנה טובה כיצד לבצע השתלת תאי גידול תוך כליה להקמת גידולי כליה אורתוטופיים בעכבר.

אל תשכח שעבודה עם בעלי חיים ומכשירים כירורגיים עלולה להיות מסוכנת וכי יש לנקוט תמיד באמצעי זהירות, כגון שמירה על הנחיות מוסדיות לטיפול בבעלי חיים ושמירה על אזור ומכשירים כירורגיים סטריליים בעת ביצוע הליך זה.