אבחון הרומן ב מהדורה שכיחיםהחלפת: שתל Sonication ואת תגובת שרשרת פולימראזית מולטיפלקס

המטרה הכוללת של ההליכים המתוארים עם שאיבת מפרקים, תגובת שרשרת פולימראז מולטיפלקס וסוניקציה היא לספק תוצאות מיקרוביולוגיות מהירות ואמינות למנתחים האורטופדיים במקרים של חשד לזיהום מפרק פרי-תותב. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האבחוני והטיפולי של זיהום מפרקים פרי-תותב, כגון ממצאים מוקדמים של פתוגנים, ולכן טיפול ממוקד מוקדם. היתרון העיקרי של טכניקות אלו הוא אספקת תוצאות מהירות.

זה יכול להאיץ את האבחון הדיפרנציאלי במקרים של חשד לזיהום במפרק פרי-תותב. מקם את המטופל במצב שכיבה על מיטת בדיקה. אם יש לנקב את הברך, הנח גליל ברך מתחת לברך המטופל כך שהברך תנוח במצב מעט מכופף.

השתמש בקוצץ חשמלי כדי לקצר שיער גוף צפוף או ארוך. לאחר מכן הכינו את שולחן המכשירים והשמלה לניתוח בהתאם לפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן השתמש בחומר חיטוי עור כדי לשטוף היטב את עור המטופל במקום הניקוב.

עם וילון סטרילי מכוסה, יש לכסות את אתר הניקוב. לאחר מכן זהה את אתר הניקוב דרך הווילון. בעזרת להב אזמל מחודד, בצע חתך דקירה קטן דרך העור במקום החתך.

חבר את הצינורית להחלקה של המזרק. לאחר מכן הכנס את הצינורית דרך חתך הדקירה. בשקע העליון של מפרק הברך, כוונו בזווית של 45 מעלות גב ומדיאלי לכיוון השקע, מתחת לקוטב העליון של הפיקה, והכנסו את המחט לעומק של כ-5 ס"מ.

שאפו את נוזל המפרק על ידי משיכת הבוכנה של המזרק. כדי למנוע היווצרות המטומות, יש למרוח חבישה, ואחריה תחבושת על חתך הדקירה. השתמש בחומר חיטוי אלכוהולי כדי לחטא את הממברנה של בקבוק תרבית דם לילדים.

לאחר מכן הניחו צינורית טרייה על המזרק והזריקו ל-1 עד 3 מ"ל של נוזל מפרקים נשאף לתוך הבקבוק. מערבבים על ידי ערבוב עדין או סיבוב. להכנת דגימת שאיבת מפרקים מקורית, הסר את הצינורית מהמזרק.

לאחר מכן פתח צינור איסוף דם ללא תוספים והזריק 1 מ"ל שאיבה לצינור האיסוף. החזר והדק את המכסה לבדיקת PCR. העבר 1 עד 4 מ"ל של שאיבת המפרק לצינור איסוף דם המכיל EDTA לספירת תאים והתמיינות.

הפשירו את צינור התערובת הראשי על ידי הגדרתו לטמפרטורת החדר. העבירו 180 מק"ל מהדגימה שנאספה לתוך צינור הדגימה. סגור את צינור הדגימה עם מכסה צינור הדגימה המכיל חלבון קינאז K וגן בקרה פנימי לבקרת האיכות של זרימת העבודה כולה.

בתא הטייס, פתח את תוכנת ההפעלה על-ידי נגיעה בלחצן 'בדיקה חדשה' בפינה השמאלית התחתונה. השתמש במסך המגע כדי להזין את נתוני המטופל או דגימה ID.To בחר את הדגימה מהתפריט הנפתח, בחר תחילה מחסנית ITI, לאחר מכן אורתופדיה כמצב יישום, ולבסוף, בחר נוזל סינוביאלי או נוזל סוניקציה כסוג מדגם. לאחר מכן לחץ על כפתור התחל.

סרוק את הברקוד בתחתית צינור הדגימה. לאחר מכן הכנס את צינור הדגימה לתוך הליזטור. לאחר מכן, בחר את הדגימה במסך תא הטייס כדי לפתוח את צינור הדגימה מה-Lysator.

לאחר מכן הסר את צינור הדגימה מה-Lysator וסגור את המכסה העליון של הליזטור. העבר את צינור הדגימה לחריץ צינור הדגימה של מחסנית ה-PCR. לאחר מכן הכנס את צינור התערובת הראשי המופשר לחריץ התערובת הראשי של מחסנית ה-PCR.

עקוב אחר ההוראות שעל צג תא הטייס כדי לסרוק את מחסנית ה-PCR עם התערובת הראשית וצינור הדגימה. הכנס את מחסנית ה-PCR לחריץ המחסנית המצוין של המנתח. במסך המגע של תא הטייס בפינה השמאלית התחתונה, בחר בדיקות פעילות ולאחר מכן בחר את מזהה הדגימה הנכון כדי להציג את תוצאות הבדיקה.

שמור את התוצאות בזיכרון המכשיר והדפס או ייצא לעיון נוסף. שוחח עם המיקרוביולוג שלך ותדרך אותו על פרטי המקרה, כך שהוא יהיה מוכן לנתח את הדגימות במהירות. מתחת לספסל עבודה למינרי לזרימת אוויר, פתח את מיכל הפלסטיק, החזק את התותבת הנטועה לשעבר מחדר הניתוח והוסף תמיסת נתרן כלורי סטרילית של 0.9% עד שהגוף הזר הנטוע לשעבר מכוסה לפחות 80%סגור את מיכל הפלסטיק.

לאחר מכן יש לנער היטב או לערבב את מיכל הפלסטיק למשך 30 שניות. העבירו את מיכל הפלסטיק לאמבט הסוניקציה. לאחר מכן בדוק את מפלס הנוזל באמבטיה.

סוניקציה של הדגימה למשך חמש דקות, בתדר של 40 פלוס מינוס 2 קילו-הרץ וצפיפות הספק של 0.22 פלוס או מינוס 0.04 וואט לסנטימטר מרובע. לאחר מכן יש לנער או לערבב היטב את הדגימה למשך 30 שניות. בתוך ספסל הזרימה הלמינרית, אספו 50 מ"ל מנוזל הסוניקציה והעבירו אותו לצינור סטרילי לפני איטום הדוק של הצינור.

כדי ליצור נוזל סוניקציה מרוכז, צנטריפוגה את הצינור ב-4200 פעמים G למשך 10 דקות, והשאיר נפח שיורי של 10 מ"ל, השתמש בפיפטה כדי להשליך את הסופרנטנט שנותר. השעו מחדש את הגלולה על ידי פיפטינג ומערבולת. חסנו כל בקבוק של מצע תרבית מתאים ב-0.5 מ"ל של נוזל סוניקציה מרוכז.

חסנו את בקבוק תרבית הדם לילדים ב-2 מ"ל של נוזל סוניקציה מרוכז כפי שהודגם קודם לכן בסרטון זה. לאחר מכן העבירו 1 מ"ל של נוזל סוניקציה מרוכז לצינור סטרילי ללא תוספים לניתוח PCR. העבירו את אמצעי התרבית המחוסנים לחממה.

דגרו על התרבויות למשך 14 יום ובדקו אם יש צמיחה מדי יום. נוכחות של זיהום במפרק פרי-תותב נחשבה מוכחת כאשר קריטריון עיקרי אחד או לפחות שלושה מתוך חמישה קריטריונים מינוריים היו קיימים. הקריטריונים העיקריים כוללים נוכחות של פיסטולה או זיהוי פתוגן בשתי דגימות מיקרוביולוגיות נפרדות.

קריטריונים מינוריים כוללים ספירת תאים חיובית או התמיינות תאים חיובית בשאיבת מפרקים, CRP חיובי וקצב שקיעה בדגימות דם, היסטולוגיה חיובית בדגימות הרקמה, או זיהוי פתוגן בדגימה מיקרוביולוגית אחת בלבד. התוצאות כאן הראו רגישות בינונית לאבחון PCR של נוזל סוניקציה ושאיבת מפרקים, אך ספציפיות חזקה מאוד של 100%בכל פעם ש-PCR הראה ממצא חיובי בשאיבת המפרק או בנוזל הסוניקציה, אותו פתוגן התגלה מאוחר יותר באחת התרביות המיקרוביולוגיות הקונבנציונליות. ה-PCR של הדגימות השונות של מקרים שאינם נדבקים לא הראה תוצאות חיוביות כוזבות.

שישה מתוך 16 פתוגנים אמיתיים בדגימות נוזל הסוניקציה וחמישה מתוך 13 פתוגנים מתרבית נוזל המפרקים הוחמצו על ידי זיהוי PCR. אבחון ה-PCR המשולב של שני החומרים, שאיבת המפרקים ונוזל הסוניקציה זיהה נכון 12 מתוך 18 מקרי זיהום. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לשפר את נתיב האבחון שלך בזיהום מפרק פרי-תותב.

אתה יכול לראות כיצד מיקרוביולוגים ומנתחים אורטופדיים חייבים לעבוד יחד בשיתוף פעולה הדוק כדי לשפר את האבחון הדיפרנציאלי בצורה הטובה ביותר האפשרית. אם מבוצע כהלכה, תקבל תוצאות בעלות ערך קליני מהמולטיפלקס PCR מבוסס המחסנית תוך חמש שעות לאחר שאיבת המפרק. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לעבוד סטרילי לאורך כל התהליך.

אל תשכח שעבודה עם דגימות רקמה אנושית או דגימות מיקרוביולוגיות עלולה להיות מסוכנת ביותר. יש לנקוט תמיד בכל אמצעי הזהירות, כגון ציוד מגן אישי, בעת ביצוע הליך זה.