Name: Ex Vivo שיטת הדמיה זמן לשגות של רשתות כלי הדם Mesenteric עכברוש מתורבתות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 54 s
Description: למדו שיטת הדמיה זמן לשגות של רשתות כלי דם Mesenteric עכברוש מתורבתות לחקירת אנגיוגנזה ואינטראקציות תאי אנדותל. מודל זה מאפשר הערכת השפעת תרופות אנטי-אנגיוגניות בסביבה פיזיולוגית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענק 5-P20GM103629 ל-WLM ולמרכז טוליין להזדקנות. ברצוננו להודות למתיו נייס על עזרתו בעריכת טקסט הפרוטוקול.

כל הניסויים בבעלי חיים ואת ההליכים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים של אוניברסיטת טוליין ועדת שימוש (IACUC). 1. הגדרת הליך כירורגי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשירי חיטוי, ציוד כירורגי, ואספקת התרבות לפני הניתוח. חומרי מתכלים כירורגיים לכל חולדה כוללים: 1 וילון, 1 וילון עם חור חתוך מראש (0.5 x 1.5 ב) במרכז, פדי גזה, ו -1 underpad סופג. מכשירי ניתוח כוללים: 1 אזמל עם להב מספר 10, 2 זוגות של פינצטה, וזוג מספריים בסדר. אספקת תרבות כוללת: 1 וילון, 1 פינצטה, ומכין מוסיף 6-גם צלחת עם מסנני פוליקרבונט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר פלטפורמת פרספקס, במה כירורגי ומרחב המעבדתיים כירורגית עם אתנול 70%. שמור על הבמה כירורגי בקערה סטרילי עד השימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צור הבמה כירורגי באמצעות קידוח של כ 2 ב -1 ב חור במרכז של צלחת תרבות 100 מ&quot;מ. לאחר מכן, השתמש נייר זכוכית כדי להחליקכל קצוות חדים ולהוסיף שכבה של דבק סיליקון אל הקצוות של החור כדי ליצור משטח מוגבה עבור הרקמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחלופין, לעצב את הבמה כירורגי באמצעות תוכנת CAD ולהפוך ידי הדפסת 3-D (איור 1). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים underpad סופג סטרילית ושכב פלטפורמה פרספקס על גבי זה. מניח את הווילון, ללא חור חתוך מראש, על משטח לוהט ליד underpad סופג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוספט שנאגר תמיסת מלח סטרילית טרום חם (PBS), מדיה מלוחה עד 37 מעלות צלזיוס. מדיה פלייס PBS במנות תרבות נפרדת על גבי כרית חימום ו מלוחים ומכניסים צינור חרוטי 50 מ&quot;ל ליד ההתקנה כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא כל החבילות נפתחות לפני תחילת הניתוח כדי להבטיח טיפול סטרילי של כל החומרים. רשימה מלאה של הכלים הנפוצים המשמשים בהליך זה מפורט טבלת חומרים וכלים כירורגיים ספציפיים. </li></ol> 2. Mesenterקציר רקמות y <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש חולדות Wistar זכר בוגר (350 ± 25 גרם; 6 - 8 שבועות של גיל). זנים אחרים וגילים של חולדות ניתן להחליף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים חולדה באמצעות זריקה תוך שרירית של קטמין (80 מ&quot;ג / ק&quot;ג משקל גוף) ו xylazine (8 מ&quot;ג / ק&quot;ג משקל גוף). אשר את החולדה היא בהרדמה ידי צובט בין האצבעות כדי לבדוק לתגובה רפלקס; שם צריך להיות אף אחד. שיכוך כאבים מנעו עבור הליך מסוף זה לא הכרחי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את אזור הבטן ולהסיר שיער הנותרים באמצעות קרם להסרת שיער. נגב עור הבטן פעמיים עם אלכוהול איזופרופיל 70% ואחריו יוד povidone. עבור המגבונים שהמנתח צריך להתחיל במרכז של האתר כירורגית ולעבור מחוץ לאזור המוכן באופן מעגלי שלא חופף באזורים קרצפו בעבר עם אותה פיסת גזה סטרילי או מקלון צמר גפן סטרילי. ואז להעביר חית התקנת ניתוח סטרילי ולמקם גבי plat פרספקסטופס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות סכין אזמל, לבצע 0.75 ב - 1.25 ב חתך במעיים החל מיום 1 ב מתחת עצם החזה. היזהר שלא לנקב את המעי או לפדר (1 שכבת העור, 1 שכבה של רקמת חיבור, ו -1 שכבת השריר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח וילון עם חור חתוך מראש על החתך ומניח במה כירורגי סטרילי על גבי הווילון. ודא מיישרת הפתיחה עם החתך. השתמש applicators כותנה שקצו סטרילי לאתר ולשלוף את המעי דרך הפתח הבמה כירורגי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך 6 - 8 חלונות mesenteric באמצעות לבמה בעזרת אזניים, ולהיזהר לא לגעת חלונות (איור 1). רקמות בדרך כלל נקצרות מאזור המעי של המעי הדק מתחיל ליד cecum. שמור חשוף רקמות לחות עם מלח סטרילית חימם לפי הצורך באמצעות מזרק סטרילי לטפטף הפתרון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברוש באמצעות הזרקת intracardiac של נתרן pentobarbital (0.2 מ&quot;ל לכל חולדה). לפני ההסרה ליחלונות senteric, להבטיח העכברוש הוא מורדם על ידי מישוש הלב; לא אמור להיות שום דופק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר רקמות לפדר רצויות באמצעות פינצטה לתפוס את כרית השומן ומספריים בסדר לחתוך את החלון. השאר גבול של שומן (2 מ&quot;מ) סביב החלון. לשטוף רקמות פעם חימם PBS סטרילי ופעם התקשורת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור מעי exteriorized אל חלל הבטן ולהיפטר מן החי על פי הנחיות מוסדיות. </li></ol> 3. תרבות רקמות לפדר ללימודים זמן לשגות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אספקת העברת תרבות autoclaved (ראה סעיף 1.1) ורקמות כדי ברדס זרימה למינרית סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש בפינצטה כדי להעביר את כל רקמות על גבי קרום מסנן פוליקרבונט. רקמות תפוס על ידי כרית שומן כדי למנוע נזק בכלי הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהירות להפיץ את הרקמות באמצעות כרית השומן, נזהר שלא לגעת החלון. הפוך את הכנס עם רקמה לתוך החלק התחתון של צלחת 6-היטב ומכסים 3 מ&quot;ל של התקשורת (איור 1 </stרונג&gt;). תקשורת אופיינית בשימוש לצורך הליך זה כוללת מדיה Essential Minimum (ממ) עם 1% פניצילין סטרפטומיצין (PenStrep) ו -10% עובריים שור סרום (FBS). מדיה זו יכולה להיות מלווה סרומים אחרים ו / או גורמי גדילה כדי לעורר אנגיוגנזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבי 3.2 - 3.3 כל רקמות ותרבות בתנאי חממה סטנדרטיות (5% CO 2, 37 מעלות צלזיוס) במשך עד 5 ימים. </li></ol> 4. זמן לשגות הדמיה של רקמות לפדר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום ההדמיה, להשלים את התקשורת בכל טוב עם מצומדות BSI-לקטיני דגירה בתנאי תרבות סטנדרטיים למשך 30 דקות. לשטוף רקמות פעמים עם תקשורת לקטינים ללא. BSI-לקטינים הכתם יישאר גלוי על הרקמה לפדר עד 3 ימים בתרבות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעביר את הצלחת על במת מיקרוסקופ. זיהוי כלי הדם הלימפה מבוסס על מבנה המורפולוגיה שלהם ברשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אתר אזור רשת רצוי על כל רקמות לקחת תמונות. כדאי לשים לב במיוחד ההדמיהמיקום מנת להבטיח את אותה באזור יהיה בשבי עבור תמונות עוקבות. אם באמצעות במה ממונעת, לתעד את הקואורדינטות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור רקמות אל האינקובטור ולהמשיך תרבות עד לנקודת הסיום הרצויה. חזור על צעדי 4.1 - 4.3 דרוש תלוי בנקודות זמן ניסוי רצויות. </li></ol> 5. רקמות immunolabeling <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג BSI-לקטינים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הרקמות למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס 1:40 לקטינים FITC- מצומדות בתקשורת (פתרון נוגדנים 2.5 מ&quot;ל לכל היטב צלחת 6-באר) ואחריו שני שטיפות עם התקשורת. עבור שטיפות, להוסיף מדיה ומיד להחליף. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג Live / Dead <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה רקמות במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס עם 1: 500 homodimer-1 ethidium 2 מ&quot;מ ו 1: AM calcein 500 1 מ&quot;מ בתקשורת (פתרון נוגדנים 2.5 מ&quot;ל לכל היטב צלחת 6-באר) ואחריו שני שטיפות עם התקשורת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BSI-לקטינים / תיוג NG2 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות מורח על מיקרוסקופ החליקודואר (1 - 2 רקמות / שקופית) ולאפשר לו להתייבש. הסר עודף שומן עם אזמל ידי לחיצה איתנה מטה שיחתוך את השומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן רקמות מתנול קר במשך 30 דקות ב -20 מעלות צלזיוס. לשטוף רקמות עם PBS (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדן ראשוני דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: נוגדן 100 ארנב polyclonal NG2 ו -5% בסרום עז נורמלי (NGS). לשטוף רקמות עם PBS (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדנים משני דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: 100 נוגדן נגד ארנב עז Cy2 מצומדות (GAR-Cy2) ו -5% NGS. לשטוף רקמות עם PBS (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הרקמות למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר 1:40 לקטינים FITC- מצומדות ב PBS ואחריו שני שטיפות עם PBS. עבור שטיפות, להוסיף PBS ומיד להחליף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לעגן את השקופיות, לכסות רקמות עם 50:50 PBS פתרון גליצרול coverslip מקום על גבי. חותם את הקצוות שקופית באמצעות לק. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> LYVE-1 / תיוג PECAM<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים רקמות על שקופיות מיקרוסקופ (1 - 2 רקמות / שקופית) ולאפשר לו להתייבש. הסר עודף שומן עם אזמל ידי לחיצה איתנה מטה שיחתוך את השומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן רקמות מתנול קר במשך 30 דקות ב -20 מעלות צלזיוס. לשטוף רקמות עם saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדן ראשוני דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: 200 עכבר נוגדנים CD31 biotinylated חד שבטיים ו 1: 100 ארנב polyclonal נוגדן LYVE-1 ב PBS + 0.1% saponin + 2% אלבומין בסרום שור (BSA) + 5% NGS . לשטוף רקמות עם saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדנים משני, דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: 500 נוגדן streptavidin CY3 מצומדות ו 1: 100-Cy2 GAR ב PBS + 0.1% saponin + 2% BSA + 5% NGS. לשטוף רקמות עם saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להרכיב שקופיות, רקמות כיסוי עם 50:50 PBS פתרון גליצרול במקום coverslip על גבי. חותם את הקצוות שקופית באמצעות לק. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BrdU / BSI-לקטינים תיוג <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​BrdU למדיה ולהחליף התקשורת רקמות עם פתרון BrdU. דגירה של 2 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים רקמות על שקופיות מיקרוסקופ (1 - 2 רקמות / שקופית) ולאפשר לו להתייבש. הסר עודף שומן עם אזמל ידי לחיצה איתנה מטה שיחתוך את השומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן רקמות מתנול קר במשך 30 דקות ב -20 מעלות צלזיוס. לשטוף רקמות עם PBS (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לפגל DNA רקמה 2 M HCl עבור h 1 ב 37 מעלות צלזיוס. לשטוף רקמות saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדן ראשוני, דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: 100 העכבר חד שבטיים אנטי BrdU ב PBS + 0.1% saponin + 2% BSA + 5% NGS. לשטוף רקמות עם saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדנים משני, דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: 100 עיזים אנטי עכבר נוגדנים Cy3 מצומדות (GAM-Cy3) ב- PBS + 0.1% saponin + 2% BSA + 5% NGS. לשטוף רקמות עם saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li&gt; דגירה רקמות במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר 1:40 לקטינים FITC- מצומדות ב PBS ואחריו שני שטיפות עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להרכיב שקופיות, רקמות כיסוי עם 50:50 PBS פתרון גליצרול coverslip מקום על גבי. חותם את הקצוות שקופית באמצעות לק. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> BSI-לקטינים / תיוג CD11b <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מורחים רקמות על שקופיות מיקרוסקופ (1 - 2 רקמות / שקופית) ולאפשר לו להתייבש. הסר עודף שומן עם אזמל ידי לחיצה איתנה מטה שיחתוך את השומן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן רקמות מתנול קר במשך 30 דקות ב -20 מעלות צלזיוס. לשטוף רקמות עם saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדן ראשוני דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: 100 CD11b אנטי עכברוש העכבר ב PBS + 0.1% saponin + 2% BSA + 5% NGS. לשטוף רקמות עם saponin PBS + 0.1% (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תיוג נוגדנים משני דגירה רקמות 1 שעות בטמפרטורת החדר עם 1: 100 GAM-Cy3 ב PBS + 0.1% saponin + 2% BSA + 5% NGS. לשטוף רקמות עם PBSעלייה של 0.1% saponin (3 x 10 דקות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הרקמות למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר 1:40 לקטינים FITC- מצומדות ב PBS ואחריו שני שטיפות עם PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להרכיב שקופיות, רקמות כיסוי עם 50:50 PBS פתרון גליצרול coverslip מקום על גבי. חותם את הקצוות שקופית באמצעות לק. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+cancer+and+other+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in cancer and other diseases.</a> Nature. 407 (6801), 249-257 (2000).</li>
<li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+life%2C+disease+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in life, disease and medicine.</a> Nature. 438 (7070), 932-936 (2005).</li>
<li>Kaunas, R., Kang, H., Bayless, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+Regulation+of+Angiogenic+Sprouting+by+Biochemical+Factors+and+Wall+Shear+Stress%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Synergistic Regulation of Angiogenic Sprouting by Biochemical Factors and Wall Shear Stress.</a> Cell Mol Bioeng. 4 (4), 547-559 (2011).</li>
<li>Pitulescu, M. E., Schmidt, I., Benedito, R., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+gene+targeting+in+the+neonatal+vasculature+and+analysis+of+retinal+angiogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Inducible gene targeting in the neonatal vasculature and analysis of retinal angiogenesis in mice.</a> Nat Protoc. 5 (9), 1518-1534 (2010).</li>
<li>Song, J. W., Munn, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+forces+control+endothelial+sprouting%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Fluid forces control endothelial sprouting.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108 (37), 15342-15347 (2011).</li>
<li>Chan, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+in+vitro+3D+capillary+beds+by+self-directed+angiogenic+sprouting%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Engineering of in vitro 3D capillary beds by self-directed angiogenic sprouting.</a> PLoS One. 7 (12), e50582(2012).</li>
<li>Peirce, S. M., Mac Gabhann, F., Bautch, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+experimental+and+computational+approaches+to+sprouting+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Hematol%22%5BJournal%5D)">Integration of experimental and computational approaches to sprouting angiogenesis.</a> Curr Opin Hematol. 19 (3), 184-191 (2012).</li>
<li>Stapor, P. C., Azimi, M. S., Ahsan, T., Murfee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+angiogenesis+model+for+investigating+multicellular+interactions+across+intact+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">An angiogenesis model for investigating multicellular interactions across intact microvascular networks.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 304 (2), H235-H245 (2013).</li>
<li>Azimi, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ex+vivo+model+for+anti-angiogenic+drug+testing+on+intact+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">An ex vivo model for anti-angiogenic drug testing on intact microvascular networks.</a> PLoS One. 10 (3), e0119227(2015).</li>
<li>Nicosia, R. F., Ottinetti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+of+microvessels+in+serum-free+matrix+culture+of+rat+aorta.+A+quantitative+assay+of+angiogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Growth of microvessels in serum-free matrix culture of rat aorta. A quantitative assay of angiogenesis in vitro.</a> Lab Invest. 63 (1), 115-122 (1990).</li>
<li>Hutter-Schmid, B., Kniewallner, K. M., Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+cultures+as+a+model+to+study+angiogenesis+of+brain+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice cultures as a model to study angiogenesis of brain vessels.</a> Front Cell Dev Biol. 3, 52(2015).</li>
<li>Sawamiphak, S., Ritter, M., Acker-Palmer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+retinal+explant+cultures+to+study+ex+vivo+tip+endothelial+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of retinal explant cultures to study ex vivo tip endothelial cell responses.</a> Nat Protoc. 5 (10), 1659-1665 (2010).</li>
<li>Unoki, N., Murakami, T., Ogino, K., Nukada, M., Yoshimura, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+imaging+of+retinal+angiogenesis+reveals+decreased+development+and+progression+of+neovascular+sprouting+by+anecortave+desacetate%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Time-lapse imaging of retinal angiogenesis reveals decreased development and progression of neovascular sprouting by anecortave desacetate.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51 (5), 2347-2355 (2010).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16989723">In vivo models of angiogenesis.</a> J Cell Mol Med. 10 (3), 588-612 (2006).</li>
<li>Kelly-Goss, M. R., Sweat, R. S., Azimi, M. S., Murfee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+islands+during+microvascular+regression+and+regrowth+in+adult+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Vascular islands during microvascular regression and regrowth in adult networks.</a> Front Physiol. 4, 108(2013).</li>
<li>Kelly-Goss, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+proliferation+along+vascular+islands+during+microvascular+network+growth%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cell proliferation along vascular islands during microvascular network growth.</a> BMC Physiol. 12, 7(2012).</li>
<li>Skalak, T. C., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mechanical+stresses+in+microvascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">The role of mechanical stresses in microvascular remodeling.</a> Microcirculation. 3 (2), 143-165 (1996).</li>
<li>Kadohama, T., Nishimura, K., Hoshino, Y., Sasajima, T., Sumpio, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+types+of+fluid+shear+stress+on+endothelial+cell+proliferation+and+survival%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of different types of fluid shear stress on endothelial cell proliferation and survival.</a> J Cell Physiol. 212 (1), 244-251 (2007).</li>
<li>Milkiewicz, M., Brown, M. D., Egginton, S., Hudlicka, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+shear+stress%2C+angiogenesis%2C+and+VEGF+in+skeletal+muscles+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Association between shear stress, angiogenesis, and VEGF in skeletal muscles in vivo.</a> Microcirculation. 8 (4), 229-241 (2001).</li>
<li>Corliss, B. A., Azimi, M. S., Munson, J. M., Peirce, S. M., Murfee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%3A+An+Inflammatory+Link+Between+Angiogenesis+and+Lymphangiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Macrophages: An Inflammatory Link Between Angiogenesis and Lymphangiogenesis.</a> Microcirculation. 23 (2), 95-121 (2016).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

<html> פרוטוקול זה מתעד שיטה לשימוש במודל תרבות עכברוש לפדר ככלי vivo לשעבר הדמיה זמן לשגות של צמיחה רשת כלי הדם. עבודה קודמת שנערכו במעבדה שלנו הקימה את השימוש במודל שלנו עבור 1) אנגיוגנזה 8, 2) lymphangiogenesis 8, 3) אינטראקציות תא pericyte-אנדותל 8, ו -4) תרופה אנטי-אנגיוגנזה בדיקות 9. יכולת הדמית רקמות לפדר עכברוש תרבותיים בנקודות זמן מרובות מציעה assay כמוני להערכת תגובות ...

צמיחת שיפוץ רשת כלי דם הם מכנים משותפים לתפקוד רקמות, ריפוי פצעים, ו פתולוגיות מרובות תהליך מפתח הוא אנגיוגנזה, כהגדרתו הצמיחה של כלי דם חדשים קיימים 1, 2. עבור הנדסת רקמות כלי דם חדש או בעיצוב טיפולים מבוססים angiogenic, הבנת חשיבות הדינמיקה הסלולר המעורבת אנגיוגנזה הוא קריטי. עם זאת, תהליך זה הוא מורכב. זה יכול להשתנות במקומות ספציפיים בתוך רשת כלי דם וכרוך סוגי תאים מרובים (כלומר תאי אנדותל, תאי שריר חלק, pericytes, מקרופאגים, תאי גזע) ומערכות מרובות (רשתות לימפטי רשתות עצביות). למרות מודלים במבחנה תרמו מאוד כדי לבדוק את הקשר בין תאים שונים המעורבים אנגיוגנזה 3, הרלוונטי הפיזיולוגית שלהם יכול להתערער בשל thei<html> r מורכבות מוגבלות ואת העובדה שהם מקרוב אינם משקפים תרחיש vivo. כדי להתגבר על המגבלות האלה, מערכות תרבות תלת מימדי 3, לשעבר vivo מודלים רקמות 4, מערכות microfluidic 5, 6, ו מודלים חישוביים 7 פותחו שהונהגה בשנים האחרונות. עם זאת, יש עדיין צורך מודל עם יכולת הזמן לשגות לחקור אנגיוגנזה ברשתות פגעו כלי דם vivo לשעבר. הקמת מודלים חדשים זמן לשגות ללימודי אנגיוגנזה עם כי רמת המורכבות תספק כלי רב ערך כדי להבין את המנגנונים המסדירים אנגיוגנזה לשפר טיפולים. מודל פוטנציאלי המאפשר חקירת vivo לשעבר של אנגיוגנזה ברחבי רשת כלי דם ללא פגע הוא מודל התרבות לפדר עכברוש&gt; 8. בשנים אחרונה עבודה, אנחנו הוכחנו כי דם ורשתות כלי דם הלימפה להישאר קיימא אחרי התרבות. יתרה מכך, מודל תרבות העכברוש לפדר יכול לשמש כדי לחקור אינטראקציות תא פונקציונליות-אנדותל pericyte, דם וקשרי תא האנדותל הלימפה, הזמן לשגות הדמיה. מטרת מאמר זה היא לספק פרוטוקול שלנו שיטת הדמיה זמן לשגות. תוצאות הנציג שלנו לתעד את סוגי התאים המרובים שנותרו קיימא לאחר הגירוי של אנגיוגנזה עם סרום ולהציע דוגמאות לשימוש בשיטה זו לכימות תגובות angiogenic רקמות ספציפיות, כמו גם מחקרי מעקב תא האנדותל.

<table><tbody><tr><td>וילונות</td><td>קרדינל בריאות</td><td>4012</td><td>12 אינץ' x 12 אינץ' Bio-Shield עיקור רגיל עוטף</td></tr><tr><td>ידית אזמל</td><td>מכשיר כירורגי Roboz</td><td>RS-9843</td><td>ידית אזמל, #3; מוצק; </td></tr><tr><td>להב כירורגי סטרילי</td> באורך 4 אינץ' <td>סינסינטי כירורגי</td><td>0110</td><td>נירוסטה; גודל 10</td></tr><tr><td>צלחת תרבות (60 מ"מ)</td><td>Thermo Scientific</td><td>130181</td><td>10/שרוול</td></tr><tr><td>מלקחיים Graefe (פינצטה מעוקלת)</td><td>מכשיר כירורגי Roboz</td><td>RS-5135</td><td>מיקרו מלקחיים; משונן; עקומה קלה; רוחב קצה 0.8 מ"מ; מלקחיים באורך 4 אינץ'</td></tr><tr><td>(פינצטה ישרה)</td><td>מכשיר כירורגי Roboz</td><td>RS-5130</td><td>מיקרו מלקחיים; משונן, ישר; רוחב קצה 0.8 מ"מ; 4 אינץ'</td></tr><tr><td>אורך Noyes מיקרו מספריים</td><td>Roboz מכשיר כירורגי</td><td>RS-5677</td><td>Noyes מספריים קפיציים לניתוח; נקודות ישרות, חדות-קהות; קצה חיתוך 13 מ"מ; רוחב קצה 0.25 מ"מ, 4 1/2 אינץ'</td></tr><tr><td>רפידות גזה</td> באורך כולל <td>FisherBrand</td><td>13-761-52</td><td>ספוגי גזה כותנה לא סטריליים; 4 אינץ' x 4 אינץ' 12 שכבות</td></tr><tr><td>כותנה אפליקטורים</td><td>FisherBrand</td><td>23-400-124</td><td>אורך 6 אינץ'; פיר עץ; שימוש חד פעמי רק</td></tr><tr><td>6 בארות צלחת</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>08-772-49</td><td>תחתית שטוחה עם מכסה אידוי נמוך; פוליסטירן; מזרק סטרילי לא פירוגני</td></tr><tr><td>5 מ"ל</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>14-829-45</td><td>Luer-Lok Tip</td></tr><tr><td>קערה סטרילית</td><td>תעשיות פעולה רפואית בע"מ</td><td>01232</td><td>32 אונקיות נרתיק קליפה; כחול; תוספות צלחת סטריליות לשימוש חד פעמי</td></tr><tr><td>6 בארות (מוסיף CellCrown)</td><td>SIGMA</td><td>Z681792-3EA</td><td>מוסיף צלחת 6 בארות; </td></tr><tr><td>קרום מסנן פוליקרבונט</td> לא סטרילי <td>SIGMA</td><td>TMTP04700</td><td>מסנן קרום איזופור; פוליקרבונט; הידרופילי; 5.0&nbsp; ומיקרו; מ', 47&nbsp; mm, לבן פשוט<</td></tr><tr><td>חזק>שם</חזק></td><td><חזק>חברה</חזק></td><td><חזק>מספר קטלוגי</חזק></td><td><חזק>הערות/תיאור</חזק></td></tr><tr><td>Beuthanasia</td><td>Schering-Plough Animal Health Corp. Union (הוזמן מ-MWI Veterinary Supply)</td><td>MWI #: 011168</td><td>מרכיב פעיל: לכל 100 מ"ל, 390 מ"ג נתרן פנטוברביטל, 50 מ"ג פניטואין נתרן&nbsp;</td></tr><tr><td>קטמין</td><td>פורט דודג' בריאות בעלי חיים (הוזמן מ-MWI Veterinary Supply)</td><td>MWI #: 000680</td><td>Kateset 100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>LLOYD. Inc. (הוזמן מ-MWI Veterinary Supply)</td><td>MWI #: 000680</td><td>Anased 100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>מי מלח</td><td>בקסטר</td><td>2F7122</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Invitrogen</td><td>14040-133</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Invitrogen</td><td>11095080</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>001-000-162</td><td></td></tr><tr><td>Saponin&nbsp;</td><td>SIGMA</td><td>S7900-100G</td><td></td></tr><tr><td>איזופרופיל אלכוהול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>S25372</td><td></td></tr><tr><td>פובידון-יוד</td><td>אופרנד</td><td>82-226</td><td></td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>SIGMA</td><td>320331</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>67-56-1</td><td></td></tr><tr><td>גליצרול</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>56-81-5</td><td></td></tr><tr><td>מצומד FITC לקטין</td><td>SIGMA</td><td>L9381-2MG</td><td></td></tr><tr><td>אנטי-NG2 כונדרויטין סולפט נוגדן פרוטאוגליקן</td><td>SIGMA</td><td>AB5320</td><td></td></tr><tr><td>PECAM (CD31) נוגדן</td><td>BD Biosciences</td><td>555026</td><td></td></tr><tr><td>LYVE-1 נוגדן</td><td>AngioBio Co.</td><td>11-034</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן מצומד נגד ארנב Cy2 עיזים</td> Jackson <td>ImmunoResearch</td><td>111-585-144</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן מצומד נגד עכבר Cy3 עיזון</td><td>ImmunoResearch</td><td>115-227-003</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן מצומד סטרפטווידין Cy3</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>016-160-084</td><td></td></tr><tr><td>ערכת חיות/ציטוטוקסיות חיה/מתה</td><td>Invitrogen</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>סרום עיזים רגיל&nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>005-000-121</td><td></td></tr><tr><td>5-Bromo-2'-Deoxyuridine</td><td>SIGMA</td><td>B5002</td><td></td></tr><tr><td>עכבר חד-שבטי אנטי-ברומודוקסיורידין&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; שיבוט Bu20a</td><td>Dako</td><td>M074401-8</td><td></td></tr><tr><td>עכבר נגד חולדות CD11b&nbsp;</td><td>AbD Serotec</td><td>MCA275R</td><td></td></tr></tbody></table>

<em&gt; ex vivo</em&gt; שיטת הדמיה זמן לשגות של רשתות כלי הדם mesenteric עכברוש מתורבתות

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

אנגיוגנזה, כהגדרתו צמיחה של כלי דם חדשים מכלי קיימים, כרוך לתאי אנדותל, pericytes, ותאי שריר חלק, תאי מערכת החיסון, ואת התיאום עם כלי הלימפה והעצבים. המולטי-התא, אינטראקציות רבות מערכתיות מחייבות חקירת אנגיוגנזה בסביבה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית. וכך, בעוד השימוש במודלים תרבית תאים במבחנה סיפקו תובנות מכניסטית, ביקורת נפוצה היא כי הם לא לשחזר את המורכבות הקשורה רשת כלי הדם. מטרת פרוטוקול זה היא להדגים את היכולת לערוך השוואות זמן לשגות של רשתות כלי הדם ללא פגע לפני ואחרי גירוי אנגיוגנזה ברקמות לפדר עכברוש תרבותי. רקמות בתרבית מכילות רשתות כלי דם מקיים ההיררכיה שלהם. תיוג immunohistochemical מאשרת את נוכחותו של תאי אנדותל, תאי שריר חלק, pericytes, כלי הדם וכלי הלימפה. בddition, תיוג רקמות עם BSI-לקטינים מאפשר השוואת הזמן לשגות של אזורי רשת המקומיים לפני ואחרי הגירוי גורם בסרום או צמיחה מאופיינת הנבטה וצפיפות כלי נימים מוגברות. לשם השוואה למודלי תרבית תאים נפוצים, שיטה זו מספקת כלי ללימודי שושלת תא האנדותל וערכת תרופת angiogenic רקמות ספציפית ברשתות כלי דם רלוונטיות מבחינה פיזיולוגית.

לאחר 3 ימים בתרבות, רקמות תויגו עם ערכת cytotoxicity חי / מת הכדאיות / כדי להוכיח את הכדאיות של microvasculature במודל תרבות עכברוש לפדר (איור 2 א). רוב התאים הנמצאים לפדר נשארים קיימא בתרבות שבה תאי אנדותל זוהה על סמך המיקום שלהם במגזרי כלי דם. התפשטות תאים האנדותל גם אושרה על ידי תיוג לקטינים / BrdU (איור 2 ד). תא שריר חלק ונוכחות pericyte לאורך כלי אושרה עם תיוג NG2 (איור 2 ב). תיוג עבור LYVE1 ו...

אנגיוגנזה כוללת אינטראקציות רב-תאיות ורב-מערכתיות שיש לחקור בסביבה רלוונטית מבחינה פיזיולוגית. מטרת מחקר זה היא להדגים את יכולתו של מודל תרבית המזנטריה של חולדות לבצע השוואות זמן-lapse של רשתות מיקרו-וסקולריות שלמות במהלך אנגיוגנזה.

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; שיטת הדמיה זמן לשגות של רשתות כלי הדם Mesenteric עכברוש מתורבתות

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

המטרה הכללית של ניסוי זה היא להדגים את השימוש במודל תרבית של קרום בטן של חולדה (rat mesenteric culture) לחקירת צילומי time-lapse של עיצוב מחדש של רשת מיקרו-וסקולרית ex vivo, במטרה להעריך אינטראקציות בין תאי אנדותל של טפילים, קשרים בין תאי אנדותל של דם ולימפה, או השפעות של תרופות אנטי-אנגיוגניות. שיטה זו יכולה לסייע במתן תשובות לשאלות מפתח בתחום העיצוב המחדש של מיקרו-וסקולריות, כולל כיצד יודעים כלי דם זעירים היכן לצמוח, ומהו גורלם של מקטעי תאי אנדותל. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לדמות רשתות מיקרו-וסקולריות אמיתיות ושלמות לפני ואחרי צמיחה ex vivo.את הפרוצדורה ידגים Sadegh Azimi, סטודנט לתואר שני במעבדה שלנו שפיתח את השיטה. התחילו בהנחת פלטפורמת פרספקס שעברה סטריליזציה באתנול על גבי משטח ספיגה סטרילי, והניחו חולדה זכר בוגרת תחת הרדמה על גבי הפלטפורמה. חטאו את אזור הבטן הגלגול של החולדה באמצעות שני ניגוני אלכוהול איזופרופיל 70%, ולאחר מכן באמצעות povidone-iodine.החל ממרחק של אינץ' אחד מתחת לעצם הгруד (sternum), השתמש בסכין מנתחים כדי לבצע חתך באורך של שלושה רבעים עד אינץ' ורבע במערכת העיכול, דרך העור, הרקמה החיברית והשרירים. לאחר מכן, הנח כיסוי עם חור חתוור מראש מעל בעל החיים והנח במה ניתוח מעל הכיסוי, תוך הקפדה ליישור הפתחים בשני החומרים עם החתך. באמצעות מקלוני צמר sterile, משוך את ה-ileum דרך פתח במת הניתוח יחד עם שישה עד שמונה חלונות מזנטריים (mesenteric windows).השתמשו במזרק סטרילי כדי לטפטף תמיסות מלח סטריליות בטמפרטורה של 37 degrees Celsius על הרקמות החשופות לפי הצורך. לאחר שכל החלונות הובאו החוצה, השתמשו בפינצטה כדי לתפוס רפידת שומן והשתמשו במספריים כדי לקצור את החלונות, תוך השארת שולי שומן של שני מילימטרים מסביב לכל רקמת מסרק (mesenteric tissue). הקפידו שהפינצטה לא תיגע בחלונות המסרק על ידי נגיעה אך ורק בשולי השומן המקיפים אותם.שטפו כל חלון פעם אחת ב-PBS בטמפרטורה של 37 degree Celsius ופעם אחת במצע בטמפרטורה של 37 degree Celsius כפי שהוא נאסף. החזירו את ה-ileum לחלל הבטן לאחר שכל החלונות בודדו. תחת מ 빠르게-זרימה סטרילית (laminar flow hood), השתמשו בפינצטה כדי להעביר כל רקמה מסרנית באמצעות שולי השומן אל מעל ממבנה הסינון של ממבנה פוליקרבונט בתוך תבנית לתרבית תאים.השתמשו בפד השומן כדי לפרוס במהירות את דגימות הרקמה, תוך הקפדה לא לגעת בחלונות. לאחר מכן, הפכו את התבנית והניחו אותה בתוך באר אחת של פלטת 6 בארות, כך שהרקמה תונח בצורה שטוחה על קרקעית הבאר. כסו את הרקמה בשלושה מילימטרים של מצע, והעבירו את שאר החלונות לפלטה באופן דומה.לאחר מכן, גדלו את חלונות הקרום (mesentery windows) בתנאי דגרה סטנדרטיים לתרביות רקמה למשך עד חמישה ימים. ביום הדמיון, הוסיפו לתרביות לקטין BSI מסומן והחזירו את הפלטה לדגירה. לאחר 30 דקות, שטפו את הדגימות פעמיים עם מצע ללא לקטין והעבירו את הפלטה לשולחן של מיקרוסקופ פלואורסצנטי.זהו את כלי הדם וכלי הלימפה על סמך המורפולוגיה ומבני הרשת שלהם. לאחר מכן, הגדירו אזור רשת בעל עניין בכל רקמה כדי להוציא תמונות, תוך סימון המיקום כדי להבטיח שאותו אזור יצולם בתמונות הבאות. כאשר כל התמונות הושגו, החזירו את הדגימות לאינקובטור עד לסשן הצילום הבא או עד לסיום הניסוי בהתאם לנקודת הסיום הניסויית.לאחר שלושה ימים בתרבית, מרבית התאים הנמצאים בקרומי הבטן (mesentery) הם חיים, כאשר נוכחותן של תאי האנדותל אוששה על ידי מיקומם במקטעי המיקרו-כלי דם. ניתן לאשש שגשוג של תאי אנדותל גם באמצעות סימון בלקטין/BrdU, בעוד שנכחותם של תאי שריר חלק וטפילים לאורך כלי הדם ניתנת לאישור באמצעות סימון ב-NG2. סימון של רשת מיקרו-כלי דם לימפטיים ודם מסועפת מאשר עוד יותר את השמירה על הפנוטיפ של התאים הלימפטיים ברקמה בתרבית.הוספת 10% סרום למצע תרבית רקמה של חלון קרומי המעי (mesentery window) למשך שלושה ימים משרה תגובה אנגיוגנית חזקה, כאשר מקטעי כלי דם חדשים ונביטי קפילרות מזוהים לאחר חמישה ימי גירוי. דימויי Time lapse מאפשרים כימות של מספר כלי הדם לכל שטח וסקולרי ומספר נביטי הקפילרות לכל שטח וסקולרי, על בסיס תמונה אחת בהגדלה של 4x לכל רקמה. השוואות Time lapse של אזורי הרשת מאפשרות גם מעקב אחר מקטעי תאי אנדותל וזיהוי של שיבושים בדפוסי כלי הדם והלימפה.בנוסף, סימון באמצעות לקטין ו-Cd11b מאשר באופן נוסף את נוכחותם של מקרופאגים תושבים ביניינתיים (interstitial resident macrophages) ברשתות השחזור. לאחר רכישת המיומנות, ניתן יהיה להשלים טכניקה זו תוך פחות מארבע שעות. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה של אופן הקצירה, התרבית והדמיה במרווחי זמן (time-lapse) של רקמות מזנטריום של חולדה.

an-ex-vivo-method-for-time-lapse-imaging-cultured-rat-mesenteric

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

שיטה צדדי חדש להסתכלות של microcirculation מוצג. זה נחשב מתאים תצפית ארוכת טווח, ועל בשילוב עם התערבויות ביולוגיות pharmacophysiological או המולקולרית.

במדידה Micro-vivo מחזור בשרירי השלד על ידי מיקרוסקופית תוך חיוני

הרקמות מבוגר vascularized יונקים כי חסרה אנגיוגנזה פיזיולוגי שלא נחשף התערבות כירורגית משמש המחקר: (i) ייזום ופיתוח של אנגיוגנזה הבאים הממשל intraperitoneal של סוכני הבדיקה; (ii) שינוי של אנגיוגנזה הבאים מערכתית של הממשל נבחרת סוכני הבדיקה.

עכברוש mesentery Assay אנגיוגנזה

מאמר זה מתאר מודל פשוט של גירוי אנגיוגנזה ב לפדר את העכברוש. המודל מייצר עליות דרמטיות באזור נימי, מצמיח כלי דם וצפיפות כלי הדם במשך זמן קצר יחסית ברקמות המאפשר en להדמיה פני רשתות שלמות כלי הדם עד לרמה תא בודד.

לפדר החצנה חולדה: דגם לחקירת דינמיקה סלולר המעורבים אנגיוגנזה

תפקוד תאי כלי הדם תלוי בפעילות של שליחים תוך-תאיים.  מתוארת כאן שיטת הדמיית שני פוטונים ex vivo המאפשרת מדידה של רמות סידן ותחמוצת החנקן התוך תאיות בתגובה לגירויים פיזיולוגיים ופרמקולוגיים בתאי אנדותל ושריר חלק בודדים של אבי העורקים המבודד.

הדמיה שני פוטונים של תאיים Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; תאי טיפול ותחמוצת חנקן ייצור בהאנדותל ושריר חלק של עכברוש אב העורקים מבודדים

טכניקת לנדיס המותאמת מאפשרת מדידה זוגית של המוליכות ההידראולית של מיקרו-כלים בודדים במזנטריה של חולדות רגילות וחולדות מהונדסות גנטית בתנאי בקרה ובדיקה באמצעות טכניקות מיקרו-פרפוזיה. הוא מספק שיטה נוחה להערכת מנגנונים המווסתים את חדירות המיקרו-כלי דם וחילופי כלי דם בתנאים פיזיולוגיים.

Microperfusion טכניקה לחקירת הסדרת כלי דם קטן חדירות בחולדה לפדר

אנו מפרטים פרוטוקול לניטור התנהגותם של נויטרופילים ומונוציטים בוורידים מזנטריים במצב יציב ובתנאים דלקתיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית תוך-חיונית בעכברים מורדמים.

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

פרוטוקול זה מתאר את הדמיה intravital של העכברים הטרנסגניים לבטא סמני פלואורסצנט תאים ספציפיים. הדמיה intravital מספק שיטה לא פולשנית ברזולוציה גבוהה תצפיות בבעלי חיים באמצעות windows מושתלת שדרכו החזיית תהליכים מיקרוסקופיים אפשרית. שיטה זו שימושית במיוחד ללמוד תהליכים האורך.

מיקרוסקופ intravital להערכת סרטניים הקשורים לשימוש מתקדם הגבי צ'יימברס Skinfold חלון על העכברים הטרנסגניים פלורסנט

כתב יד זה מתאר במבחנה מיקרוסקופ וידאו פרוטוקולים להערכת הפונקציה כלי הדם בעכברוש מוחי התנגדות העורקים. כתב היד מתאר גם טכניקות להערכת צפיפות microvessel עם fluorescently שכותרתו זלוף לקטין ורקמות באמצעות לייזר Flowmetry דופלר.

הערכה של מנגנוני הבקרה וסקולרית ניצול מיקרוסקופ וידאו מבודד התנגדות העורקים של חולדות

מוצג כאן הוא פרוטוקול לחקור את microcirculation כלילית ברקמת לב מורין חי על ידי ניטור ex vivo של לחץ זלוף העורקים וזרימה השומרת על הלחץ, כמו גם רכיבי עץ כלי דם כולל מיטות נימי pericytes, כמו עורק הספל הוא משומר ולחץ.

מדידה והדמיה דינמיות של נימים, עורקים ופריציטים בלב העכבר

בפרוטוקול הנוכחי, פונקציית מחסום האנדותל של הבלוטה התת-מנדיבולרית (SMG) הוערכה על ידי הזרקת עוקבים פלואורסצנטיים משוקללים מולקולריים שונים לוורידים הזוויתיים של מודלים של חיות ניסוי in vivo תחת מיקרוסקופ סריקת לייזר של שני פוטונים.

אין ויוו זיהוי חדירות כלי דם בבלוטה תת-מנדיבולרית של עכבר

פרוטוקול זה מציג שיטה לגרימת פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה מזנטרית ולהדמיית מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות (NETs) בוורידים מזנטריים באמצעות מיקרוסקופ תוך-חיוני. זרימת הדם בעורק המזנטרי העליון הוגבלה למשך שעה אחת, ואחריה רפרפוזיה, המאפשרת כימות ישיר של הידבקות לויקוציטים ו- NETosis.

הדמיה של מלכודות חוץ-תאיות נויטרופילים בוורידים מזנטריים לאחר פגיעה באיסכמיה-רפרפוזיה מזנטרית באמצעות מיקרוסקופ תוך חיוני

למדו שיטת הדמיה זמן לשגות של רשתות כלי דם Mesenteric עכברוש מתורבתות לחקירת אנגיוגנזה ואינטראקציות תאי אנדותל. מודל זה מאפשר הערכת השפעת תרופות אנטי-אנגיוגניות בסביבה פיזיולוגית.

גלה סרטונים נוספים