Name: כימות של תסיסנית התנהגות Grooming (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-19T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: למד כיצד לכמת התנהגות grooming ב-Drosophila באמצעות צבע brilliant yellow. שיטה זו מספקת נתונים כמותיים מהירים וחזקים לחקר נוירוביולוגיה וגנטיקה התנהגותית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו רוצים להודות בריאן שפרד, טאט אודומריטרוג&#39;רוג, אהרון ויללי, רובי פרום, אליס פיטמון, ורד הדרין לעבודה מוקדמת בבדיקות והקמת מתודולוגיה זו עיצובים קאמריים. אנו מודים לקלי טלז ולגרהם בוקאן על קריאה ועריכה של כתב היד. אנו מודים אנדרו זרעים וג &#39;ולי סימפסון על העבודה החלוצית שלהם ואת העצה שלהם ואת התמיכה בהצעה להשתמש Brilliant צהוב Dye (Sigma). עבודה זו נתמכת בין השאר על ידי מרי א &#39;גרוף כירורגית מחקר רפואי קרן חינוך, מרכז המדע ברונפמן, ואת תוכנית עמיתי הלמן.

1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן aspirator להזיז תסיסנית לחיות מתוך בקבוקון תרבות לחדר grooming. Aspirators לאפשר העברת בעלי חיים מודעים לתאי התנהגות כדי להבטיח כי הרדמה אינה משפיעה על התצפית ההתנהגותית שלאחר מכן. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מספריים לחתוך 1.5 מטר של צינור tygon מזהה ⅛ &quot;, OD ¼&quot;. Cut לפחות 1 אינץ &#39;של קצה קצה 1 מ&quot;ל חד פעמי micropipette. החזק חתיכת 1 ס&quot;מ מרובע של רשת (פתיחה 0.196 אינץ &#39;) על קצה לחתוך. הערה: רוב עצות 1mL יש קו הדרגתית שבו קצה יושב בתיבת החבילה, בדרך כלל לחתוך לקו זה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במקום snugly טרי 1 מ&quot;ל micropipette עצה מעל קצה / רשת לחתוך. התבוננו בצורת רשת בין שני הטיפים. החלק הפנימי של קצה חדש יוצר חדר החזקת זבובים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את קצה קיצוני של קצה micropipette חדש להרחיב את פתיחת מספיק כדי לאפשר מעבר של זבוב אחד. הולדואר יהיה בערך להתאים את הפתיחה של החדר grooming (כ 1.5-2 מ&quot;מ קוטר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התקינו בקפידה את הקצות המקוננות על קצה צינורות הטיגון. דחוף את הקצות לתוך הצינור כדי להבטיח התאמה הדוקה כדי לאפשר לחץ ואקום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בקצה השני של הצינור, לחתוך את קצה קצה micropipette 200 μL ולהתאים את סוף לחתוך צר לתוך צינורות. זהו הצד &quot;הפה&quot; של השואף. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן צינורות aliquot אבק. שוקלים כ 5 מ&quot;ג של צבע צהוב מבריק על נייר במשקל שקוף. יוצקים את האבק לתוך צינור microcentrifuge 0.6 מ&quot;ל לסגור בחוזקה את הכובע. הערה: אנו מייעצים לשימוש כפפות ניטריל במהלך הכנה aliquot, כמו כמה כפפות לטקס חדיר לצבוע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.2) עבור כל דגימות בניסוי (אחד לכל זבוב בכל חדר). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן אתנול (EtOH) צינורות: פיפ 1 מ&quot;ל של EtOH 100% לתוך צינורות microcentrifuge 1.5 מ&quot;ל. תווית צינורות עבור גנוטיפים או תנאים/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.4) עבור כל דגימות בניסוי (אחד לכל זבוב בכל חדר). שווי ולשמור את צינורות EtOH להשלמת assay הטיפוח. גם לכלול לפחות אחד &quot;ריק&quot; מדגם אשר יהיה רק ​​1 מ&quot;ל EtOH ללא זבוב עבור שולטת שלילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרכיב כל חדר grooming ידי הברגה צלחת העליון מחליק (עם חורים קטנים), אבל משאיר את הצלחת התחתונה (עם חורים גדולים) הוסרו עבור תוספת של אבק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים כל חדר השינה grooming הכרחי על השולחן עם הפנים למעלה למטה. הצד הזבוב של הכניסה הוא כלפי מטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען 5 מ&quot;ג Brilliant צבע aliquot מבריק לתוך החדר על ידי הקשה על הצינור על פני השטח של החדר מעל הבאר הרצוי. הקש על החדר נגד השולחן כדי להבטיח כי כל האבק נופל דרך הרשת אל צלחת העליון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הברג את הצלחת התחתונה על כל חדר כזה הקצוות הרחבים של הפתחים חרוטי הפנים החוצה את החורים לא לנוח על הבארות. לאבטח את הבוטצלחת טום בחוזקה, כך שהוא לא להחליק ולשחרר צבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך את החדר מעל לדפוק אותו על השולחן כמה פעמים, כך האבק נופל דרך הרשת לנוח על הצלחת התחתונה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החלק את הצלחת העליונה של החדר לתוך &quot;מיקום פתוח&quot;, כך חורים קטנים ליישר עם חמש עשרה בארות, המאפשר את כניסתם של זבובים לתוך בארות בודדים. </li></ol> 2. לטוס-אבק ו grooming <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען זבוב אחד לתוך aspirator הפה על ידי מציצה בעדינות דרך קצה אחד של aspirator כאילו באמצעות קש. להפקיד את הזבובים על ידי נושבת קלות לכוון את הפתח לכיוון המטרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב זבוב אחד לתוך כל משמש היטב עבור הניסוי. לאחר טעינת באר, החלק את הצלחת העליונה כך לטוס הוא לכוד בחדר קלטת במקום מעל הפתיחה של זה היטב במהלך הטעינה של החדר כולו כדי למנוע את הבריחה של הזבוב תוך טעינת בארות אחרות. אם זבובים מרובים הם aspirated לתוך סינגלובכן, להשאיר את הפתח חשף עד רק זבוב אחד נשאר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל הבארות הדרושים מלאים זבובים, תהפכו את החדר כך את הצלחת התחתונה היא כלפי מעלה, כך אבק יש פוטנציאל מעיל את הזבובים על ידי נפילה דרך הרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מאובטח היטב את צלחות העליון והתחתון על ידי הידוק הברגים, ו מערבולת החדר לאבק את הזבובים במשך 4 שניות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדפוק את החדר (צלחת העליונה כלפי מטה) על השולחן פעמיים כך צבע נופל אל הצד השני. לאחר מכן, להפוך את החדר מעל (צלחת העליונה כלפי מעלה) ולהפיל את החדר פעמיים כדי להבטיח צבע מתיישב על הרצפה של החדר התחתון הרחק זבוב שנערך בחדר העליון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור זבובים שליטה אשר אינם מורשים החתן, מיד להמשיך לשלב 3 של הפרוטוקול. עבור זבובים כי ישלים את assay, המשך לשלב 2.7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הניחו את החדר קאמרית על שולחן או משטח עם צלחת העליון כלפי מעלה במשך שלושים דקות כדי לאפשר זבובים לחתן. מניחים את התאאה רעש ורעש ללא שטח לשמור על הסביבה שלך קבוע לכל הניסויים grooming (רמות תאורה, לחות, טמפרטורה). אינקובטור שולחן ב RT או 25 ° C עם לחות שולט הוא אידיאלי. </li></ol> 3. הכנת דוגמאות וניתוח ספיגה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמירה על רמה קאמרית עם צלחת למעלה כלפי מעלה, בעדינות לפתוח את הצלחת התחתונה ולהסיר אותו מן החדר, נזהר לא לאבד צבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החדר על משטח פליי CO 2 עם זרימת אוויר נמוכה עד זבובים הם מורדמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פתחו את צלחת העליון מהחדר. בזהירות להשתמש במלקחיים לתפוס רגל ולהזיז אחד לטוס אבק מכל חדר ולהפקיד אותו צינור microcentrifuge 1.5 מ&quot;ל המכיל EtOH. זמן ההעברה עבור 15 תאים כל אחד המכיל זבוב אחד הוא כ 3-5 דקות. הניסוי צריך גורם פעמים העברה אם / כאשר ניסויים מדהימים עם תאים מרובים כדי להבטיח היערכות יעילה של ניסויים. </Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כל צינור microcentrifuge מכיל 1 לטוס, לסגור את מכסה ולהפוך את הצינור שלוש פעמים כדי לעורר ולערבב את הפתרון של צבע ואתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה צינורות המכילים אתנול זבובים עבור 5 שעות ב RT כדי להבטיח הסרת מלאה של צבע מן לטוס לתוך פתרון. לאחר 5 שעות, במערבולת קצרה כל צינור (2) כדי להבטיח אישור של צבע מן הזבובים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Aliquot 50 μL של צינור 1.5 מ&quot;ל ניסיוני לתוך באר של צלחת 96 גם אם זמין, לשים לב למיקום של כל מדגם על הצלחת. הוסף 200 μL של EtOH לדלל את המדגם 5x. הדילול נמנע השפעות התקרה של זבובים מאובקים בכבדות או פגמים גדולים grooming. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש הקורא צלחת לנתח כל מדגם ב 397 ננומטר. לחלופין, למדוד ספיגה עבור דגימות בודדים וחסר על ספקטרופוטומטר סטנדרטי בספקטרום גלוי אם קורא צלחת אינו זמין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקרוא ולהקליט את המדגם דרך הקורא צלחת ולשמור את הגיליון האלקטרוני עם recordeד דוגמאות על הצלחת. </li></ol> 4. כימות התוצאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקמפל תוצאות עבור כל הדגימות ולמדוד את השונות עבור כל גנוטיפ או מצב. הערה: הצטברות צבע בזמן 0 דקות ובזמן 30 דקות נחשבים כתנאים נפרדים באמצעות ניתוח סטטיסטי על ידי ANOVA חד כיווני ותיקון Bonferroni או תיקונים אחרים עבור השוואות מקבילות מרובות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב הפרש אחוז ההבדל עבור כל גנוטיפ / תנאי באמצעות המשוואה הבאה: [(צבירת צבע אומר ערך בזמן 0 &#39;- צבירת צבע מתכוון ערך בזמן 30&#39;) / צבירת צבע אומר ערך בזמן 0] x 100. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להביע את אחוז עבור כל גנוטיפ ומצב של מגרשים בר להשוות בין גנוטיפים ותנאים. </li></ol>

<ol><li>Szebenyi, A. L. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0003347269800060">Cleaning Behaviour in Drosophila-Melanogaster.</a> Animal. Behaviour. 17, (1969).</li>
<li>Corfas, G., Dudai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Habituation+and+dishabituation+of+a+cleaning+reflex+in+normal+and+mutant+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila.</a> J Neurosci. 9 (1), 56-62 (1989).</li>
<li>Yanagawa, A., Guigue, A. M. A., Marion-Poll, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hygienic+grooming+is+induced+by+contact+chemicals+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Hygienic grooming is induced by contact chemicals in Drosophila melanogaster.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li>
<li>Dawkins, R., Dawkins, M. <a target="_blank" href="http://agris.fao.org/agris-search/search.do?recordID=GB19770205092">Hierarchical Organization and Postural Facilitation - Rules for Grooming in Flies.</a> Animal Behaviour. 24 (Nov), 739-755 (1976).</li>
<li>Seeds, A. M., et al. A suppression hierarchy among competing motor programs drives sequential grooming in Drosophila. Elife. 3, e02951(2014).</li>
<li>King, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromin+Loss+of+Function+Drives+Excessive+Grooming+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3-Genes+Genomes+Genetics%22%5BJournal%5D)">Neurofibromin Loss of Function Drives Excessive Grooming in Drosophila.</a> G3-Genes Genomes Genetics. 6 (4), 1083-1093 (2016).</li>
<li>Tauber, J. M., Vanlandingham, P. A., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+Levels+of+the+Vesicular+Monoamine+Transporter+and+a+Novel+Repetitive+Behavior+in+the+Drosophila+Model+of+Fragile+X+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Elevated Levels of the Vesicular Monoamine Transporter and a Novel Repetitive Behavior in the Drosophila Model of Fragile X Syndrome.</a> Plos One. 6 (11), e27100(2011).</li>
<li>Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+bisphenol+A+on+Drosophila+melanogaster+behavior--a+new+model+for+the+studies+on+neurodevelopmental+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of bisphenol A on Drosophila melanogaster behavior--a new model for the studies on neurodevelopmental disorders.</a> Behav Brain Res. 284, 77-84 (2015).</li>
<li>Chang, H. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+the+Drosophila+vesicular+monoamine+transporter+increases+motor+activity+and+courtship+but+decreases+the+behavioral+response+to+cocaine%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Overexpression of the Drosophila vesicular monoamine transporter increases motor activity and courtship but decreases the behavioral response to cocaine.</a> Molecular Psychiatry. 11 (1), 99-113 (2006).</li>
<li>Yellman, C., Tao, H., He, B., Hirsh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+and+sexually+dimorphic+behavioral+responses+to+biogenic+amines+in+decapitated+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Conserved and sexually dimorphic behavioral responses to biogenic amines in decapitated Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 94 (8), 4131-4136 (1997).</li>
<li>Feng, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+functional+characterization+of+a+novel+dopamine+receptor+from+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Cloning and functional characterization of a novel dopamine receptor from Drosophila melanogaster.</a> Journal of Neuroscience. 16 (12), 3925-3933 (1996).</li>
<li>Gotzes, F., Balfanz, S., Baumann, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7953290">Primary Structure and Functional-Characterization of a Drosophila Dopamine-Receptor with High Homology to Human D(1/5).</a> Receptors. Receptors & Channels. 2 (2), 131-141 (1994).</li>
<li>Han, K. A., Millar, N. S., Grotewiel, M. S., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DAMB%2C+a+novel+dopamine+receptor+expressed+specifically+in+Drosophila+mushroom+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">DAMB, a novel dopamine receptor expressed specifically in Drosophila mushroom bodies.</a> Neuron. 16 (6), 1127-1135 (1996).</li>
<li>Sugamori, K. S., Demchyshyn, L. L., Mcconkey, F., Forte, M. A., Niznik, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Primordial+Dopamine+D1-Like+Adenylyl+Cyclase-Linked+Receptor+from+Drosophila-Melanogaster+Displaying+Poor+Affinity+for+Benzazepines%5BTitle%5D)+AND+%22Febs+Letters%22%5BJournal%5D)">A Primordial Dopamine D1-Like Adenylyl Cyclase-Linked Receptor from Drosophila-Melanogaster Displaying Poor Affinity for Benzazepines.</a> Febs Letters. 362 (2), 131-138 (1995).</li>
<li>Pitmon, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+D1+family+dopamine+receptor%2C+DopR%2C+potentiates+hind+leg+grooming+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">The D1 family dopamine receptor, DopR, potentiates hind leg grooming behavior in Drosophila.</a> Genes Brain and Behavior. 15 (3), 327-334 (2016).</li>
<li>Phillis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mutations+affecting+neural+circuitry+required+for+grooming+behavior+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Isolation of mutations affecting neural circuitry required for grooming behavior in Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 133 (3), 581-592 (1993).</li>
<li>Hampel, S., Franconville, R., Simpson, J. H., Seeds, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neural+command+circuit+for+grooming+movement+control%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">A neural command circuit for grooming movement control.</a> Elife. 4, e08758(2015).</li>
<li>Kays, I., Cvetkovska, V., Chen, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+analysis+of+single+neurons+to+correlate+synaptic+connectivity+with+grooming+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Structural and functional analysis of single neurons to correlate synaptic connectivity with grooming behavior.</a> Nature Protocols. 9 (1), 1-10 (2014).</li>
</ol>

המחברים אינם מכריזים על ניגודי אינטרסים.

Assay הטיפוח הוא פשוט יחסית, אבל היינו הזהיר הניסויים להקדיש תשומת לב מיוחדת בנושאים הבאים. שמירה על חותם הדוק על ידי הידוק הברגים על צלחות העליון והתחתון לאחר החדרת זבובים וצבע הוא חיוני עבור תוצאות לשחזור. צבע צהוב מבריק הוא מאוד בסדר המפרקים רופפת יאפשר הפסדים של צבע מקצוות החדר. אי סדירות התוכן לצבוע עבור כל טוב יכול בקלות לזרוק את כימות הטיפוח כמו אבק לא אחיד יגדיל את השונות ואת שיעורי חיוביות שווא עבור אירועי הטיפוח. בנוסף אנו מעודדים את הניסויים להיות מודעים לסביבה שבה הם ב...

Grooming ב תסיסנית melanogaster ( ד melanogaster ) היא התנהגות מולדת חזקה הכוללת את התיאום של מספר רב של תוכניות עצמאיות המנוע 1 . פירות זבובים לנקות את גופם של אבק, חיידקים, פתוגנים אחרים שיכולים לעכב תפקוד פיזיולוגי נורמלי כגון חזון הטיסה, או להוביל לאתגרים חיסונית משמעותית. בחישה ובמענה לפעולה מכנית 2 ופעילות חיסונית 3 , זבובים משפשפים שוב ושוב את רגליהם או על אזור גוף ממוקד עד שהוא נקי מספיק והטיפוח מתקדם לחלק אחר של הגוף. זבובים לבצע תנועות grooming ב מובהק bouts כי מתרחשות בעיקר בדפוסים סטריאוטיפיים 1 , 4 . היררכיה התנהגותית מתבהרת כאשר אותות הטיפוח מסודרים לפי סדר עדיפויות. מעגלים ודפוסי פעילות זוהו בתמיכהFa, כי תוכניות הטיפוח בחלק העליון של ההיררכיה להתרחש הראשון לדכא אותות מקבילים מאזורים של הגוף כי הם groomed לאחר מכן 5 . העדיפות הגבוהה ביותר ניתנת לראש, אחר כך את הבטן, כנפיים, ולבסוף את בית החזה 5 . תוכנית הטיפוח ב- D. melanogaster היא מערכת אידיאלית לחקר מעגלים עצביים, אותות מולקולריים מודולאריים ומעבירים נוירוטרנסמיטריים. לדוגמה, פשרה של תפקוד neurofibromin 6 , אובדן של תסיסנית X חלבונים פיגור שכלי נפשי ( dfmr1 ) 7 , וחשיפה bisphenol A (BPA) 8 כל לגרום להתנהגויות מוגזמות והתנהגויות אחרות אשר מקביל לסימפטומים אנושיים נפרדים של neurofibromatosis, שביר X תסמונת, ואת ההיבטים של הפרעות ספקטרום האוטיזם הפרעת קשב וריכוז Hyperactivity הפרעת (ADHD), בהתאמה. התנהגות Grooming יכול להיות גם הרגלטד דיפרנציאלי על פני זנים מוטציה 2 , ההלוואות זו תוכנית המנוע ללימודי גמישות התנהגותית. רוחב התופעות הנוירולוגיות שניתן לדגם על ידי תסיסנית דורש גישה השוואתית חדשה למדוד את היכולת של זבובים לחתן את עצמם. הפעולה המשולבת של מובילי monoamine שלפוחית ​​ואת השפע היחסי של דופמין ואמינים ביוגניים אחרים בגוף הוכחו לתווך זבוב פרי התנהגות grooming 9 , 10 . Octopamine ודופאמין לעורר פעילות טיפוח hindleg דומה זבובים ערופים, בעוד טירמין, החומר המוצא לייצור octopamine, תופעל גם טיפוח ובמידה פחותה 7. ארבעה קולטנים דופאמין זוהו ב ד melanogaster 11 , 12 , 13 , 14 </sup&gt; על ידי שימוש בשיטה assay הטיפוח המתואר בפרוטוקול זה, קבענו תפקיד עבור סוג אני משפחה Dopamine קולטן DopR ( DopR, dDA1, מטומטם ) ב hindleg התנהגות grooming 15 . הטיפוח ניתן לכימות בעקיפין על ידי הסתכלות על מידת הניקיון שבו חיה יכולה לחתוך באופן מלא לאחר אבק לכל הגוף עם צבע סמן או אבק פלואורסצנטי 5 , 16 . שאר שאריות האבק שנותרו על הגוף יכולות לשמש כסמן יחסי להתנהגות הכללית. זבובים מאובקים לאחר שקיבלו מספיק זמן כדי החתן עשוי להיות לידי ביטוי גירעון מסוים בהתנהגות grooming. כמו חקירות הטיפוח הפכו נרחב יותר, פרוטוקולים שולבו פרקטיקות כגון עריפת ראש כדי להוסיף טיפולים תרופתי על הצוואר עצבי החיבור 10 , גירוי מישוש של זיפים כדי לעורר את התגובה grooming 2 ,והקלטת וידאו של התנהגות 15 . תצפית ישירה של הטיפוח ניתן ללמוד בקלות באמצעות תצפית חזותית הקלטה ידנית של תדירות ומשך של אירועים grooming ספציפיים 4 . עיצבנו חמישה עשר חדרים grooming כי ניתן לבנות עם מדפסת 3D או חותך לייזר, ואת עיצובים תכנית מתאר זמינים עבור רבייה 15 . העיצוב משתמש בשני לוחות מרכזיים מחוברים עם פתחים מתאימים מופרדים על ידי רשת ושני לוחות הזזה העליון והתחתון, שממנו זבובים ו / או צבע נטען, בהתאמה. לאחר המאפשרים זבובים אבק זמן החתן, אנו להפקיד אותם אתנול כדי solubilize לצבוע ולמדוד את ספיגת של פתרון זה באורך גל של צבע. קורא צלחת ניתן להשתמש בדגמים מקבילים מרובים או ספקטרופוטומטר יחיד לקרוא ניתן להשתמש עבור דגימות בודדות. שיטה זו ממזער את השגיאה המושרה על ידי טיפול אלLows עבור grooming assays להיות לרוץ על קטן, חסכונית בקנה מידה. שיטה זו נגזרת ו שונה מן השיטות חלוץ על ידי ג &#39;ולי סימפסון אנדרו זרעים, אשר משתמשים בתאי grooming גדול עם אלמנטים חימום עבור מניפולציות מעגל טמפרטורה רגישה 5 . פרוטוקול הבא מציג את כימות של הטיפוח של הגוף כולו, כמו גם מראה שיטות חלופיות quantitation של הצטברות צבע על חלקי גוף בודדים. כמו כן, אנו מציגים נתוני השוואה מדגם בין מוטציות WT ו- DopR , כמו גם שיטות לחישוב מדד ביצועים פשוט להתנהגות הטיפוח.

<table><tbody><tr><td>צינורות PVC שקופים Tygon High-Flex</td><td>McMaster-Carr</td><td>5229K54</td><td>ID 1/8 ", OD 1/4 ", המשמש עם קצות מיקרופיפטור ורשת לבניית שואבי פה</td></tr><tr><td>קצות מיקרופיפטה (1 מ"ל ו-200 & #956; L)</td> <td>Genesee Scientific</td><td>24-165, 24-150R</td><td></td></tr><tr><td>מסך רשת ניילון, 2 x 2.6 אינץ'</td> <td>McMaster-Carr</td><td>9318T44</td><td>משמש לבניית תא טיפוח ושואבי פה</td></tr><tr><td>Dumont #5 מלקחיים</td><td>Roboz מכשיר כירורגי</td><td>RS-5050</td><td></td></tr><tr><td>צבע צהוב מבריק</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>201375-25G</td><td>אנו ממליצים להשתמש בכפפות ניטריל בזמן הטיפול במוצר זה</td></tr><tr><td>וורטקסר</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-812</td><td>מוגדר "לגעת"</td></tr> <tr><td>אתנול</td><td>קרולינה אספקה ביולוגית</td><td>86-1282</td><td></td></tr><tr><td>צינורות מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"ל</td><td>VWR International</td><td>10025-726</td><td></td></tr><tr><td>0.65 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה</td><td>VWR International</td><td>20170-293</td><td>ניתן לעשות שימוש חוזר בבדיקות עוקבות</td></tr><tr><td>UV 96 בארות צלחת</td><td>קורנינג</td><td></td><td></td>26014017</tr><tr><td>BioTek Synergy HTX Platereader</td><td>BioTek</td><td>צריך להוריד קטלוג כדי לגשת למספר המוצר</td><td>http://www.biotek.com/products/microplate_detection/synergy_htx_multimode_microplate_reader.html?tab=overview</td></tr><tr><td>Gen5 Microplate Reader ותוכנת Imager</td><td>BioTek</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoftstore.com/store/msusa/en_US/pdp/Excel-2016/productID.323021400?tduid=(65d098c0e83b86c952bdff5b0719c83f)(256380)(2459594)(SRi0yYDlqd0-LI.. ql4M2LoZBEhcBljvIA)()</td></tr><tr><td>חממת דרוזופילה</td><td>Tritech</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td></td></tr><tr><td>1/4 אינץ' פלסטיק אקרילי</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>8473K341</td><td></td></tr><tr><td>8 - 32 אגוזים</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>90257A009</td><td></td></tr><tr><td>8 - 32 x 1 אינץ' ברגי כובע משושה</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>92185A199</td><td>יש להקיש על הצלחת התחתונה עבור בורג בגודל זה</td></tr><tr><td>8 - 32 x 1/2 אינץ' ברגי כובע משושה</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>92185A194</td><td>יש להקיש על הצלחת השנייה מלמעלה</td></tr><tr><td>2 - 56 3/8 אינץ' ברגי מכונת פיליפס עם ראש שטוח</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>91500A088</td><td>אלה מחזיקים את שתי הלוחות האמצעיים יחד</td></tr><tr><td>0.175 אינץ' ID, 1/4 אינץ' OD, 0.34 אינץ' צינור אלומיניום</td><td>מקמאסטר-קאר</td><td>92510A044</td><td>מיוצר בבית; המוצר הרשום הוא בערך באותם מידות ואמור לעבוד עבור ברגים בגודל 8. אלה פועלים כמעטפות לברגים בגודל 1 אינץ' ומציבים את מכסה המשושה מעט מעל פני הצלחת העליונה</td></tr></tbody></table>

כימות של תסיסנית התנהגות grooming

Quantification of Drosophila Grooming Behavior

תסמונת הטיפוח ההתנהגות היא מורכבת מורכבים צעד רב תוכנית הדורשת תנועה מתואמת של שתי קדמיות ו hindlegs. כאן אנו מציגים פרוטוקול assay grooming עיצוב קאמרית הרומן כי הוא חסכוני וניתן להרחבה עבור מחקרים קטנים או בקנה מידה גדול של תסיסנית תסיסנית . זבובים מאובקים בכל הגוף שלהם עם צבע צהוב מבריק ניתנה זמן כדי להסיר את הצבע מגופם בתוך החדר. זבובים מופקדים אז בנפח קבוע של אתנול כדי solubilize את הצבע. ספיגה ספקטרלית יחסית של דגימות אתנול לצבוע עבור חיות מטופחות לעומת מטומטמים נמדדים ומתועדים. פרוטוקול התשואות נתונים כמותיים של הצטברות צבע עבור זבובים בודדים, אשר ניתן בקלות ממוצעים לעומת דגימות. זה מאפשר עיצובים ניסיוניים בקלות להעריך יכולת הטיפוח עבור מחקרים בבעלי חיים מוטציה או מניפולציות מעגל. הליך זה יעיל הוא גם צדדי וניתן להרחבה. אנו מראים wזרימת אורק של הפרוטוקול ונתונים השוואתיים בין בעלי חיים WT לבין בעלי חיים מוטנטים עבור סוג תסיסנית אני דופמין קולטן ( DopR ).

Assay הטיפוח תשואות נתונים כמותיים כדי להעריך את הביצועים ההתנהגותיים על בסיס שארית יחסית של צבע שנצבר נותר על גופים של זבובים לאחר זמן מוגדר של המדידה לטיפוח (30 דקות). תמונות לדוגמה של עיצוב חדר השינה grooming השלבים העיקריים של assay מודגשים בתרשים 1 . זבובים לצבור כמות משמעותית של צבע מאבק מיידי על ידי vortexing בנוכחות צבע ( איור 2 ד, 2e ). זבובים אבק יכול לשמור על מגוון של הצטברות צבע שלאחר assay ( אי...

פרוטוקול זה מתאר טכניקה assay להרחבה אישית assay בתסיסנית כי התשואות נתונים חזקים, כמותיים כדי למדוד התנהגות הטיפוח. השיטה מבוססת על השוואת ההבדל הצטברות צבע על גופים של חיות מטופחות לעומת מטופח על פני תקופה של זמן.

כימות של תסיסנית התנהגות Grooming

Drosophila grooming behavior is a complex multi-step locomotor program that requires coordinated movement of both forelegs and hindlegs. Here we present a ...

המטרה הכללית של שיטה זו היא למדוד את התנהגות הטיפוח (grooming) של זבוב הפירות Drosophila על ידי כימות והשוואה של שאריות צבע צהוב Brilliant Yellow על גופם של בעלי החיים בתנאי טיפוח ובלי טיפוח. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחומי הנוירוביולוגיה והגנטיקה ההתנהגותית, כגון תיאום מיומנויות מוטוריות עדינות והווסתים המולקולריים והמעגלים העצביים הקשורים אליהן. היתרונות המרכזיים של טכניקה זו הם היותה מהירה, חסונה וקלה לביצוע על ידי חוקרים וסטודנטים רבים בעלי רמות מיומנות שונות.את הפרוצדורה יעמיד באופן מעשי פרנקי באראדייל, סטודנט במעבדתי. כדי להתחיל את הניסוי, הכינו שואב (aspirator) להעברת זבובים חיים מסוג Drosophila מבקבוק תרבית לתא הטיפוח.גזרו לפחות שורה אחת מקצה של טיפ מיקרו-פיפט חד-פעמי של 1 ml והחזיקו פיסת רשת ריבועית של 1 ס"מ מעל הפתח של הטיפ הגזור. הצמידו היטב טיפ מיקרו-פיפט חדש של 1 ml מעל הרשת והטיפ הגזור כדי ליצור תא החזקה לזבובים. גזרו את הקצה הקיצוני של טיפ המיקרו-פיפט החדש כדי להרחיב את הפתח מספיק כדי לאפשר מעבר של זבוב בודד.החור יתאים בקירוב לפתח של תא הטיפוח. התקינו את הקלפים המקוננים באופן הדוק מקצה צינור ה-Tygon. דחפו את הקלפים לתוך הצינור כדי להבטיח התאמה הדוקה שתאפשר לחץ ואקום.בקצה השני של הפיתול, גזרו את קצהו של טיפ למקרו-פיפט של 200 מיליליטר והכניסו את הקצה ה

quantification-of-drosophila-grooming-behavior

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

תסיסנית melanogaster היא מערכת גנטית התנהגותית מודל צייתן, שבו נעשה שימוש כדי להבין את הבסיס המולקולרי התאי של תהליכים ביולוגיים רבים חשובים יותר ממאה שנים 1. תסיסנית נוצלה היטב כדי לקבל תובנות לתוך הבסיס הגנטי של ההתנהגות במהירות הבזק.

שיטות Assay תסיסנית התנהגות

סרטון זה מתאר שיטה אחת לבניית שואב זבובים, שניתן להשתמש בו כדי להעביר חרקים בין מתחמים ללא הרדמה. השואף בפרוטוקול לדוגמה הוכן לניסוי לכימות התנהגויות טיפוח...

צינור שואב זבוב: כלי פשוט להעברת דרוזופילה חיה

Flywalk מערכת מעקב האוטומטי משמש לכימות ברזולוציה גבוהה של מודרך ריח התנהגות בmelanogaster תסיסנית.

כימות ברזולוציה גבוהה של התנהגות מודרכת ריח<em&gt; תסיסנית melanogaster</em&gt; שימוש ב<em&gt; Flywalk</em&gt; פרדיגמה

על מנת לזהות מוטציות חדשות המשפיעות על תחושה מכנית, תכננו בדיקה המודדת את התגובה ההתנהגותית לגירוי מישוש של זיפי זבובים בשיבוטים מוטנטיים שנוצרו בשיטת MARCM. שילוב הטכניקות מאפשר לזהות מוטציות רגישות למכניקה שאחרת היו קטלניות.

התנהגות Assay עבור Mechanosensation של MARCM מבוסס משובט ב<em&gt; תסיסנית melanogaster</em

מאמר זה מתאר assay התנהגותיים המשתמש כונן הזדווגות זכר תסיסנית melanogaste r ללמוד מוטיבציה. באמצעות שיטה זו, חוקרים יכולים לנצל טכניקות neurogenetic זבוב מתקדם לחשוף את המנגנונים הגנטיים, מולקולריים והמכשירים סלולריים העומדים בבסיס המוטיבציה הזו.

מדידת כונן מזווג סירוס ועיקור במאלה<em&gt; תסיסנית</em

פרוטוקול זה מתאר לימוד תסיסנית זיכרון assay שנקרא מיזוג חיזור. זה assay קלאסי מבוסס על צמצום התנהגות החיזור הגברי לאחר דחייה מינית על ידי נקבה לא נקלט מראש. צורה טבעית זו של גמישות התנהגותית יכולה לשמש לבחינת למידה, זיכרון לטווח קצר וזיכרון לטווח ארוך.

תסיסנית חיזור התניה כמדד למידה וזיכרון

עבודה זו מתארת פרדיגמה התנהגותית פשוטה המאפשרת ניתוח של למידה אסוציאטיבית מרתיעה בזבובי פירות בוגרים. השיטה מבוססת על דיכוי ההתנהגות הגיאוטקסית השלילית המולדת בשל הקשר שנוצר בין הקשר סביבתי מסוים להלם חשמלי.

דרוסופילה התנהגות הימנעות פסיבית כפרדיגמה חדשה לחקר למידה אסוציאטיבית מרתיעה

הפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD) קשורה להתנהגות חברתית ותקשורתית לקויה ולהופעתה של התנהגות חזרתית. לצורך חקר הקשר בין גנים אוטסיים וליקויים התנהגותיים במודל דרוזופילה , מתוארות במאמר זה חמש פרדיגמות התנהגותיות להערכת ריווח חברתי, תוקפנות, חיזור, טיפוח והתנהגות הרגלה.

פרדיגמות להערכה התנהגותית במודל דרוזופילה של הפרעת הספקטרום האוטיסטי

מודלים של מכרסמים הם כלים רבי ערך לחקר התנהגויות ליבה הקשורות להפרעת הספקטרום האוטיסטי (ASD). במאמר זה, אנו מסבירים על שני מבחנים התנהגותיים למידול מאפייני הליבה של ASD בעכברים: טיפוח עצמי, המעריך התנהגות חוזרת, ומבחן אינטראקציה חברתית בן שלושה חדרים, המתעד ליקויים חברתיים.

אסטרטגיות להערכת התנהגויות דמויות אוטיסטיות בעכברים

השיטה המוצגת כאן כוללת הערות ידניות של צילומים שנרכשו של Drosophila melanogaster להתנהגויות טיפוח ספציפיות. זה מאפשר לכמת הן את מספר התקפי הטיפוח והן את הזמן הכולל המושקע בטיפוח כדי להעריך פנוטיפים לא טיפוסיים של טיפוח עצמי.

כימות התנהגות הטיפוח של Drosophila melanogaster להערכת פנוטיפים של טיפוח יתר

למד כיצד לכמת התנהגות grooming ב-Drosophila באמצעות צבע brilliant yellow. שיטה זו מספקת נתונים כמותיים מהירים וחזקים לחקר נוירוביולוגיה וגנטיקה התנהגותית.

כימות של תסיסנית התנהגות Grooming

גלה סרטונים נוספים