Name: Rearing Scapularis קרצית, את הטיק השחור רגליים: האכלת שלבי Immature על עכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min
Description: למד פרוטוקול חדשני להאכלת קרציות צעירות על עכברים ללא חשיפה למים מזוהמים. השיטה מגבירה שרידות הקרציות, מפחיתה מתח בעכברים ומאפשרת איסוף יעיל ביום אחד למחקר ביולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים לעזרת הצוות של רפואת חיות מעבדה, אוניברסיטת נבאדה, רינו. MM קיבלה מימון מ-Nevada INBRE.

פרוטוקול (מספר- 00,682) המפורטים להלן תאושר על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש (IACUC) באוניברסיטת נבדה רינו והוא פועל בהתאם להנחיות של אוניברסיטת נבאדה, ועדת האתיקה במחקר בבעלי חיים של רינו. בקצרה, עכברים היו מורדמים עם isoflurane ו חרטומו שמש שמירה על רמות isoflurane רציפות במשך 20 דקות. משחת וטרינר שמשה כדי למנוע התייבשות של עיניים בהרדמה. טו קמצוץ שמש כדי לברר את רמת הרדמת קצב נשימה נמדד לאורך כל ההליך. עכברים הוחזקו בכלובים בודדים במעקב עד הכרתו הייתה חזרה. עכברים שימשו רק פעם אחת עבור האכלה התקתוק היו מורדמים התאוששות לתקתק פוסט. המתת החסד בוצע על ידי המעבדה של אנשי צוות רפואת Animal. CO 2 ו נקע בצוואר הרחם שימשו והרדמת חסד בבעלי חיים. הערה: עבודה על קרציות דורש שימוש EQ מגן אישי שלםuipment. לספירת קרציות בשלה, לובשים חלוקי מעבדה לבן, כפפות ניטריל ארוכה כדי לכסות את הפתח בשרוול מעילו מעבדה כתרים עם גומיות, ונעליים-בוהן סגורה. עבור בזיהום עכברים עם קרציות, השתמשו ברשת שיער, סרבלים חד פעמיים, כפפות ארוך-שרוולים על השרוולים, וכיסויים רגל. השתמש לבן או בהיר סרבל בצבע לזהות קרציות סוררת. בדוק מעת לעת את כפפות ושרוולים קרציות. חדר 1. הכנות לקראת שיכון Animal <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ציין בחדר נפרד כדי עכברי-עיר שורץ קרציות. שים סרט שטיח מחצלת או דו צדדית דביק מחוץ ובתוך הדלת כדי למנוע בריחה לתקתק בשוגג. </li></ol> ספירת 2. קרציות עבור עכבר שריצה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים דבק דו-צדדי בכל רחבי הקצוות העליונים של 7&quot; X 5&quot; x 14&quot; מיכל פלסטיק וממלאים במים עד כ 2 ס&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עוד קופסה קטנה או צלחת פטרי במרכז המיכל וממלאים במים עד 1 ס&quot;מ יצירת &amp;# 34; תעלת &quot;מסביב למכולה זו </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חנות בקבוקון המכיל זחלים או נימפות בתוך צלחת פטרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במברשת צבע בסדר להסיר זחלים או נימפות מן הבקבוקון לספור תחת המיקרוסקופ. ספירת 50 זחלים או 25 נימפות לתוך בקבוקי נצנוץ נפרדים. מכסים את צלוחיות מיד עם רשת ניילון או מסך בד האורגנדי קרוב עם להקות גומי. </li></ol> 3. התנגשות עכברים עם טיקים בוגרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש ספסל עבודה לבן או בהיר צבע מקל סרט דו צדדי סביב היקף של אזור העבודה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכבר עם isoflurane. בדוק את רמת ההרדמה על ידי קמצוץ הבוהן. לאחר הרדים, להעביר את העכבר על כרית חימום מכוסה במגבות נייר לצרף חרוט האף עבור המשך אספקת isoflurane. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל משחת עיניים מבוססי ג&#39;לי על מנת למנוע יובש. הערה דפוס נשימה של העכבר כדי להתאים את רמות isoflurane (80 - 230 נשימות לדקה הוא נורמלי., להקטין את רמת isoflurane אם breathing שיעור הוא פחות מ 80 נשימות לדקה, כדי למנוע הרג החיה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח בקבוקון אחד של 50 זחלים או 25 נימפות ומקום קרציות מתחת לפרווה על הראש בין האוזניים עם מברשת צבע (איור 1). שמור עכבר בהרדמה עבור 20 דקות לאחר השמה לתת מספיק זמן עבור קרציות לצרף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזז את העכבר כדי בכלוב עכבר פנוי-סוג קופסא נעליים רגיל, פלסטיק עם מכסים סטטי ומצעים לבנים. ספק צעצועים, מים, ו כרצונך מזון לפי טיפול עכבר רגיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסן את כלוב העכבר בתוך כלוב חולדה או הגרביל גדול מרופד נייר דבק דו-צדדים סביב קצוות עליונים. מלאו את הכלוב החיצוני עם 3 ס&quot;מ של מים (איור 2). </li></ol> איסוף 4. קרציות מעכברים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קרציות לא בוגר לנתק בין ימים 3 ו 6 של האכלה. בדוק את הכלובים ואת חפיר מים עבור קרציות תפוחות כל יום אחרי יום 3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף קרציות מנותקת הכלוב בין הימים 4 ו 6. השתמש כאבלא מברשת או מלקחיים רכים להרים קרציות בלויים ולאחסן בקבוקי נצנוץ נקי כתרים עם רשת ניילון בד מאובטחת עם להקות גומי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים ולבדוק העכבר ביום 7 עבור כל שאר המצורפת המצורפת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את מצעים, שוקת מזון, בקבוק מים עבור קרציות בלויים ביום 7. להרדים עכברים בעקבות הליך כמתואר לעיל. החיטוי כלובים חד פעמי, מצעים, בקבוק מים, שוקת מזון, כדי למנוע כל בריחות בלתי מנוסחת. </li></ol> 5. אחסון תיקי הפד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על קרציות בלוחות בלחות של 90%, 20 ° C, ו 12:12 אור: מחזור כהה לחות טמפרטורה חממה מבוקרת עד ההמולה מתרחשת. התהליך עשוי להימשך בין 12 ל -18 שבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד לחות גבוהה מקדמת הישרדות קשקשים, זה גם עושה את קרציות נוטה פטרייתיות יתר. בדוק את טדסים מוזן מתחת למיקרוסקופ לפחות פעם בשבוע עבור עובש. אם זוהה, לשטוף ניצולים באתנול 70% עבור 5דקות, לשטוף במים, להעביר נייר מסנן להתייבש, ולהעביר בקבוקונים חדשים, נקיים. </li></ol>

<ol><li>Gleim, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+associated+with+tick+bites+and+pathogen+prevalence+in+ticks+parasitizing+humans+in+Georgia%2C+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Parasites+%26amp%3B+Vectors%22%5BJournal%5D)">Factors associated with tick bites and pathogen prevalence in ticks parasitizing humans in Georgia, USA.</a> Parasites &amp; Vectors. 9 (125), Available from:
 <a target="_blank" href="http://doi.org/10.1186/s13071-016-1408-6">http://doi.org/10.1186/s13071-016-1408-6</a> 1-13 (2016).</li>
<li>Krober, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends Parasitol. 23 (9), 445-449 (2007).</li>
<li>Kuhnert, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+of+Hard+Ticks+In+Vitro%3A+New+Perspectives+for+Rearing+and+for+the+Identification+of+Systemic+Acaricides%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Feeding of Hard Ticks In Vitro: New Perspectives for Rearing and for the Identification of Systemic Acaricides.</a> ALTEX. 13 (2), 76-87 (1996).</li>
<li>Voigt, W. P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8233589">In vitro feeding of instars of the ixodid tick Amblyomma variegaturn on skin membranes and its application to the transmission of Theileria mutans and Cowdria ruminantium.</a> Parasitol. 107, 257-263 (1993).</li>
<li>Gregson, J. D. Ticks. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGregson%2C+JD+%22Insect+Colonization+and+Mass+Production%22">Insect Colonization and Mass Production</a>. Smith, C. N. , Academic Press. New York. 49-72 (1966).</li>
<li>Sonenshine, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSonenshine%2C+DE+%22Biology+of+Ticks%22">Biology of Ticks</a>. 2, Oxford University Press. New York. (1993).</li>
<li>Bouchard, K. R., Wikel, S. K. Care, maintenance, and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBouchard%2C+KR+%22Biology+of+Disease+Vectors%22">Biology of Disease Vectors</a>. Marquaedt, W. C. , Elsevier. New York. 705-711 (2005).</li>
<li>Schumaker, T. S., Barros, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+cycle+of+Ornithodoros+%28Alectorobius%29+talaje.+%28Acari%3AArgasidae%29+in+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Entomol%22%5BJournal%5D)">Life cycle of Ornithodoros (Alectorobius) talaje. (Acari:Argasidae) in laboratory.</a> J Med Entomol. 32, 249-254 (1995).</li>
<li>Banks, C. W., Oliver, J. H., Hopla, C. E., Dotson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+life+cycle+of+Ixodes+woodi+%28Acari%3AIxodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Laboratory life cycle of Ixodes woodi (Acari:Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 35, 177-179 (1998).</li>
<li>James, A. M., Oliver, J. H. Jr Feeding and host preference of immature Ixodes dammini,I.scapularis,and I.pacificus.(Acari:Ixodidae). <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Feeding+and+host+preference+of+immature+Ixodes+dammini%2CI.scapularis%2Cand+I.pacificus.(Acari%3AIxodidae)">J. Med. Entomol</a>. 27, 324-330 (1990).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול חשוב יש כמה רמות של אמצעי בטיחות כאשר גידול קרציות כדי למנוע בריחת בשוגג. שימוש סרט דביק וחפיר מים הם קריטיים כדי להבטיח בטיחות. חשוב לשמור על העכבר הרדים על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורה קבועה בגוף. גם מצאנו כי גילוח העכבר אינו מספק שום תועלת נוספת מצורף לתקתק. עכבר פרט יכול להישמר באותו הכלוב למשך שבוע ב &quot;חדר לתקתק&quot; מיועד אשר קשרו למגבלות נוספות של קרציות עם אנשים. <p ...

קרציות הן לחייב ectoparasites hematophagous של בעלי חוליות, ומופצים ברחבי העולם. בארצות הברית, לפחות 11 מינים של קרציות הם וקטורים של פתוגנים חשיבות 1 בריאות הציבור. Scapularis קרצית אחראי להעברת מספר פתוגנים כגון סוכני סיבתי של מחלת ליים (burgdorferi Borrelia) ההתקפי חום (miyamotoi ב), anaplasmosis granulocytic האנושי (phagocytophilum Anaplasma), ו babesiosis (SPP babesia.). למרות החשיבות של I. scapularis כוקטור מחלה, איסוף arachnids אלה בשפע מן פרא ללימודים במעבדה הוא לא תמיד אפשרי. לכן, הפקת קרציות מעבדה-שגדל בריאה חיונית מחקרים על ביולוגית קרציה, וסמן-הפתוגן אינטראקציות. מחזור החיים של כל קרציות קשה (משפחה Ixodidae), כולל scapularis I., מורכב Activ ביצה ושלושהבשלבי דואר: זחל, נימפה, מבוגר. כל שלב פעיל נזון שורת חוליות. את יחסי הגומלין המורכבים המתרחשים בין קרציות המארחים שלהם על פני כמה ימים של קובץ מצורף והאכלה הם כמעט בלתי אפשריים לשחזר באמצעות מתקני האכלה מלאכותיות, וכן צפויים לספק מספרים מספיקים של הפד קרציות עבור המוני גידול 2, 3, 4. לכן, עכברים וארנבים חיים משמשים לרוב כמארחים לגידול בשלה (זחלים ונימפות), וכן בשלבים בוגרים (מבוגרים) של קרציות, בהתאמה. הדרישה של מארחים מרובים עבור האכלת דם במהלך כל שלב התפתחותי מסבך גידול קרציה, ואת הזמן ועלות 5 אינטנסיבית, 6, 7. רוב פרוטוקולי גידול לתקתק דורשים שמירת עכברים בכלוב רצפת רשת תיל מושעה 7, 8 או CA גליליGE בקנה מידה כזה שהיה החיה לא יכולה לנוע בחופשיות וחתן עצמו 6, 9, 10. כלובי גלילי אלה מועברים לאחר מכן לכלוב קופסת נעליים עם רשת תיל. צבה, קרציות מנותקת אז נאספים המים מתחת. עם זאת, תוצאות בשיטה זו בחשיפת הפד קרציות למים מזוהמים עם שתן וצואה שיכולה להגדיל את צמיחת פטריות וקרציות תמותה 9. בנוסף, הוא מגביר את האפשרות של בריחת קרצייה מן השוקת כמו גם גורם ללחץ על עכברים. כדי לעקוף את הבעיות הללו, אנו כאן להפגין האכלה לתקתק זחל על עכברים בתוך כלובי הפנויה קופסא נעליים מסוג הפלסטיק. שיטה זו מאפשרת התנהגות נורמלית של עכברים, מגדילה צבה התאוששות קרציה, ומקטין תמותה לתקתק עקב זיהום.

<table><tbody><tr><td>משחה וטרינרית Puralube</td><td>אמזון</td><td></td><td>זמין בכל חנות חיות או חנות מקוונת</td></tr><tr><td>כלוב עכבר חד פעמי</td><td>&nbsp; Innovive, סן דייגו, קליפורניה&nbsp;</td><td>MV 2</td><td>סט תחתית ומכסה</td></tr><tr><td>מצעי אלפא דרי לבנים&nbsp;</td><td>אספקת מעבדה, פורט וורת', טקסס</td><td>&nbsp; ALPHA-Dri&TRADE;</td><td></td></tr></tbody></table>

rearing<em&gt; scapularis קרצית,</em&gt; את הטיק השחור רגליים: האכלת שלבי immature על עכברים

Rearing Ixodes scapularis, the Black-legged Tick: Feeding Immature Stages on Mice

Scapularis קרצית, הווקטור של מחלת ליים, הוא אחד וקטורי המחלה החשובים ביותר במזרח ובמערב התיכון ארצות הברית. מין זה הוא קרציה שלושה מארח הדורש ארוחת דם שורה החולייתנים עבור כל שלב פיתוח, והנקבות המבוגרות דורשות ארוחת דם לצורך הרבייה. הזחל קרציות לצרף המארח שלהם במשך 3 - 5 ימים על האכלה להשיל המארח כאשר צבה מלא. תלות זו בכמה צבאות שונים וזמן המצורף הממושך עבור גודש המסבך לתקתק גידול בסביבת המעבדה. עם זאת, כדי להבין ביולוגיה לתקתק וקרציות-הפתוגן אינטראקציות, ההפקה של קרציות בריאה, שגדל-מעבדה חיונית. הנה, אנחנו מדגימים פרוטוקול פשוט, חסכוני עבור לתקתק בשלה האכלה על עכברים. שינינו את הפרוטוקולים הקיימים עבור מתח ירד על עכברים וגדילה לתקתק האכלת הצלחה והישרדות באמצעות כלובים פנויים ללא תחתית רשת כדי למנוע מגע של Wi קרציותמים מזוהמים עם שתן עכברים וצואה.

שינינו פרוטוקולים קיימים הגברת טיק 6 , 10 לשיפור יעילות האכלה ואת הלחץ מופחת על המארח העכבר. התוצאות מראות כי הסטנדרטים סטנדרטיים בסגנון נעל בסגנון העכבר מתאימים לגידול טיק. המצעים הלבנים סיפקו ניגוד טוב לאוסף קל של טדסים מוזנים. רוב קרציות טיפס על הקירות של המכולות לאחר האכלה והיה קל לאסוף. בנוסף, מכסה הדוק של קופסאות פלסטיק חד פעמי (המשמש באופן שגרתי עבור דיור עכברים ב אונר) מנע הבריחה סמ...

ההפקה של קרציות מעבדה-שגדל בריאה חיונית מחקרים על ביולוגית קרציה, וסמן-הפתוגן אינטראקציות. כאן אנו מדגימים פרוטוקול פשוט עבור האכלה לתקתק בשלה כי היא חסכונית ופחות מלחיץ לעכברים.

Rearing<em&gt; Scapularis קרצית,</em&gt; את הטיק השחור רגליים: האכלת שלבי Immature על עכברים

Ixodes scapularis, the vector of Lyme disease, is one of the most important disease vectors in the eastern and Midwestern United States. This species is a ...

המטרה הכללית של פרוטוקול האכלה זה לקרציות היא לשפר את הסטנדרטים הקיימים על ידי הגדלת שיעורי ההישרדות של קרציות שהוזנו בדם, תוך הפחתת העקה עבור מכרסם העמאל. בנוסף לפישוט גידול מושבות קרציות, שיטה זו מספקת דרך קלה יותר לאסוף מספר רב של קרציות שהוזנו בדם ביום איסוף אחד, דבר החיוני למתן מענה לשאלות ביולוגיות מרכזיות בתחומי המקרוביולוגיה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהקרציות אינן נחשפות למים המכילים הפרשות עכברים, ובכך מופחתת תמותת הקרציות.בנוסף, ניתן לאסוף את הקרציות ביום אחד, דבר המפחית את הלחץ המופעל על העכבר. כדי לאחסן את מבחנות הקרציות לצורך ספירה, הכינו מיכל המאפשר בריחה מינימלית. הדביקו סרט דביק דו-צדדי מסביב לכל הקצוות העליונים של מיכל פלסטיק.לאחר מכן, מלאו את המכל בכשני סנטימטרים של מים. לאחר מכן, הניחו קופסה קטנה או צלח נוסף במרכז המכל, ומלאו אותם בכשני סנטימטר אחד של מים, כך שהם ישקעו ויישארו במקומם. אחסנו מבחנות של זחלי קרציות או נימפות בתוך קופסה או צלח זה.כדי לספור את הקרציות עבור הדבקה, השתמשו במיקרוסקופ ובמכחול עדין כדי להוציא לרוות או נימפות מהמבחנה. העבירו 50 לרוות או 25 נימפות למבחנת סינCillation. ברגע שמבחנה התמלאה לחלוטין, כסו אותה ברשת ניילון או בבד אורגנדי, והדקו את הכיסוי באמצעות גומיות חזקות.הקצו חדר נפרד לאכסון עכברים נגועים בקרציים. כדי למנוע בריחה מקרית של קרציים, הניחו מחצלת דביקה או סרט שטיח דו-צדדי מחוץ לחדר, והניחו מחצלת נוספת בחלק הפנימי של פתח החדר. ראשית, הכינו אזור לטיפול בקרציים בקרבת העכברים.השתמשו במשטח עבודה לבן או בהיר. הדביקו מסגרת של סרט דביק דו-צדדי סביב היקף אזור העבודה על השולחן. כעת, הרדימו עכבר באמצעות isoflurane.כאשר העכבר מוכן, העבירו אותו למחמם (heating pad) המכוסה בנייר סופג, וחברו קונו אף להגשה רציפה של isoflurane. בדקו את רמת ההרדמה באמצעות לחיצה על בהו ה🦶 (toe pinch). התאימו את מינון החומר המאלח בהתאם לתבנית הנשימה.קצב נשימה תקין הוא 80 עד 230 נשימות לדקה. יש להפחית את כמות ה-isoflurane אם הנשימה איטית יותר. כמו כן, יש למרוח משחה עינית על בסיס וזלין על העיניים.כעת, קחו מבחנה אחת המכילה 50 לרוות או 25 נימפות, ובעזרת מכחול, העבירו את הקרציות לעכבר. מקמו את הקרציות תחת הפרווה בראש, בין האוזניים. לאחר הנחת הקרצייה האחרונה, השאירו את העכבר תחת הרדמה למשך 20 דקות, כדי שהקרציות יוכלו להיצמד לפני שהעכבר ינסה להסיר אותן.לאחר 20 דקות, החזירו את העכבר לכלוב בית חד עם מצע לבן לשיפור הנראות של הקרציות. הוסיפו מספר צעצועים ואפשרו גישה חופשית (ad lib) למים ולמזון. השתמשו בקופסאות חד-פעמיות עם מכסים אטומים.לאחר מכן, הניחו את כלוב הבית בתוך כלוב חולדות או גרבילים גדול יותר, שעל הדופן הפנימית העליונה של קירותיו מודבק סרט דבק דו-צדדי. לאחר מכן, מלאו את הרווח בין הכלובים בכ-שלושה סנטימטרים של מים. קרציות בשלבי התפתחות ראשוניים יסתירו את עצמן לאחר שלושה עד שישה ימי האכלה.מהיום השלישי והלאה, בדקו את הכלובים ואת המים שסביבם מדי יום כדי לאתר קרציות ששבעו דם. אספו את הקרציות שהתנתקו באמצעות מברשת צבע או פינצטה רכה, והעבירו אותן לבקבוקי סינצילציה נקיים, הסגורים בעזרת בדי רשת ניילון המהודקים בגומיות.בנוסף, בדקו היטב את המצע, את תבנית האוכל ואת המים. לאחר מכן, בצעו המתה לעכבר ועקרו באוטוקלאב את הכלובים החד-פעמיים, את המצע, את בקבוק המים ואת תבנית האוכל כדי להשמיד קרציות שנותרו. השקינו את הקרציות השבעות באינקובטור מבוקר.בתוך 12 עד 18 שבועות, על הקרציות להגות. יש לבדוק את הקרציות תחת המיקרוסקופ לפחות פעם בשבוע כדי לאתר עובש. אם מזוהה עובש, יש לשטוף את הקרציות ששרדו ב-70% ethanol למשך חמש דקות.לאחר מכן, שטפו את השורדים במים והעבירו אותם לנייר מסנן לייבוש. לאחר שהיו נקיים ויבשים, העבירו את הקרציות למבחנות חדשות ונקיות, והמשיכו במחזור חייהן. מרבית הקרציות טיפסו על דפנות המכלים לאחר ההאכלה, והיו קלות לאיסוף.קרציות הצליחו במקרים נדירים בלבד לברוח מכלובי העכברים. המצע הלבן סיפק ניגודיות טובה לזיהוי קרציות לאחר האכלה. במהלך האיסופים, מרבית הקרציות ניתקו עד היום הרביעי.מספר קרצים המתינו עד היום החמישי כדי להשתחרר, ועד היום השביעי, אף עכבר לא נשא קרציים. כ-2/3 מהקרציים הצליחו להיצמד ולהזין עד לשלב הבשילה. כל העכברים נותרו בריאים ולא הראו סימנים לאי-נוחות.לאחר שליטה בשיטה זו, ניתן להשיג מאות קרציות שהוזנו בדם ביום איסוף אחד. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור ללבוש ציוד מגן אישי (PPE) מלא כדי למנוע היצמדות מקריתה של קרציות באופן מקרי.

rearing-ixodes-scapularis-black-legged-tick-feeding-immature-stages

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

אוסף של hemolymph לתקתק נגוע, בלוטות הרוק, ורוק חשוב ללמוד איך לתקתק נישאים פתוגנים לגרום למחלה. בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד לאסוף את בלוטות הרוק hemolymph ו מ...

רוק, בלוטות הרוק, וכן אוסף Hemolymph מ קרציות קרצית Scapularis

מחלת ליים היא המחלה וקטור הנישא ביותר המדווח בדרך כלל בצפון אמריקה. הסוכן סיבתי, Borrelia burgdorferi הוא חיידק החיידק מועבר על ידי קרציות Ixodid. הילוכים וזיהוי של זיהום במודלים של בעלי חיים מותאם על ידי השימוש בהאכלה לתקתק, שאנו מתארים כאן.

האכלה של קרציות בבעלי חיים להילוכים וXenodiagnosis במחקר מחלת ליים

במחקר זה, מערכת האכלה עבור שלבי נימפה וזחל של קרצייה קשה פותחה באמצעות כמוסה המחוברת לעכבר מעבדה. קפסולת ההאכלה עשויה מחומרים גמישים ונשארת מחוברת היטב לעכבר למשך שבוע אחד לפחות ומאפשרת ניטור נוח של הזנת קרציות.

מודל מבוסס קפסולה לשריצה בשלבי קרציות קשות לא בוגרים בעכברי מעבדה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה להזרקת עוברי קרציות. הזרקת עובר היא הטכניקה המועדפת למניפולציה גנטית ליצירת קווים מהונדסים.

טכניקת הזרקת עוברים לעריכת גנים בקרצייה שחורת הרגליים, Ixodes scapularis

מוצגת כאן שיטה להאכלת קרציות במבחנה באמצעות מערכת ממברנות מלאכותית המאפשרת גודש חלקי או מלא של מגוון שלבי חיים של הקרציות.

קרציות האכלת קרום מלאכותי עבור Ixodes scapularis

מאמר זה מציג את המתודולוגיה לחשיפת בני אדם לזחל Ixodes scapularis לצורך מחקר קליני. הטכניקה פשוטה יחסית, נסבלת על ידי מתנדבי המחקר, וניתנת לשינוי בהתאם לצרכי הניסוי. מחקר כזה בבני אדם חייב להתבצע תחת פרוטוקולי מחקר קליני שאושרו על ידי הרשויות הרגולטוריות המתאימות.

מודל לחשיפה ניסיונית של בני אדם לקרציות זחל Ixodes scapularis

שיטה זו מתארת את פיתוח מערכת הזנת דם מקרציות במבחנה , המשלבת תא מודפס בתלת-ממד וממברנת סיליקון מעבדתית. המערכת מאפשרת האכלה מלאכותית של קרציות, ומאפשרת דגימה קלה בשלבים שונים של האכלה ושימוש בכמויות דם נמוכות, ומספקת כלי יקר ערך לחקר קרציות איקסודיד.

דם קרציות המזין דרך ממברנה מלאכותית בתא מודפס בתלת-ממד במחקר קרציות איקסודיד

ליים מחלות מחקר מחקרים לעיתים קרובות דורשים דור של קרציות נגוע הפתוגן Borrelia burgdorferi, תהליך זה לוקח בדרך כלל מספר שבועות. כאן אנו מדגימים microinjection מבוססי זיהום סמן הליך זה יכול להתבצע תוך שעות ספורות. אנחנו גם להדגים שיטה immunofluorescence עבור בלוקליזציה באתרו של B. burgdorferi בתוך קרציות.

שיטות העברה מהירים לוקליזציה של פתוגנים מחלת ליים בתוך גוט טיק

השיטה המתוארת כאן מנצלת הזרקה ישירה של חיידקי entomopathogenic לhemocoel...

גידול והזרקה של<em&gt; Manduca סקסטה</em&gt; זחלים להערכה ארסית קטריאלי

תגובות אלרגיות, המתאפיינות בהפעלת תאי מאסט ובזופילים, מונעות על ידי הקישור הצולב של IgE והשחרור של מתווכים מעודדי דלקת. הערכה כמותית של תגובות אלרגיות יכולה להיות מושגת על ידי שימוש בצבע כחול אוונס לעקוב אחר שינויים בחדירות כלי דם לאחר אתגר אלרגן.

מדידת אנפילקסיס המקומי בעכברים

למד פרוטוקול חדשני להאכלת קרציות צעירות על עכברים ללא חשיפה למים מזוהמים. השיטה מגבירה שרידות הקרציות, מפחיתה מתח בעכברים ומאפשרת איסוף יעיל ביום אחד למחקר ביולוגי.

Rearing

גלה סרטונים נוספים