Name: תרבות של מבוגר דג הזברה טראנסגנטי רשתית Explants עבור Live- תא הדמיה ידי multiphoton מיקרוסקופי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 55 s
Description: למדו הדמיית תאים חיים של נדידה גרעינית בין-קינטית ברשתית דג הזברה באמצעות מיקרוסקופיית מולטי-פוטון. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התנהגות תאים מתמירים בזמן אמת לחקר מנגנוני התחדשות רטינלית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מעריכים את התמיכה שמספקת ויליאם ארצ&#39;ר ואת מתקן ההדמיה המשולבת נוטרדאם. תודה מיוחדת מופנים הטכנאים מדעי החיים פריימן לעזרה רציפה שלהם וטיפול בבעלי שלהם של דג הזברה. מחקר זה נתמך על ידי מענקים מהמכון הלאומי עין של NIH כדי DRH (R01-EY018417, R01-EY024519) והמרכז דג הזברה מחקר, אוניברסיטת נוטרה דאם, נוטרה דאם, IN.

<ol><li>Fausett, B. V., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+alpha1+tubulin-expressing+Muller+glia+in+regeneration+of+the+injured+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci%22%5BJournal%5D)">A role for alpha1 tubulin-expressing Muller glia in regeneration of the injured zebrafish retina.</a> J.Neurosci. 26 (23), 6303-6313 (2006).</li>
<li>Kassen, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+analysis+of+gene+expression+during+light-induced+photoreceptor+cell+death+and+regeneration+in+albino+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Time course analysis of gene expression during light-induced photoreceptor cell death and regeneration in albino zebrafish.</a> Dev.Neurobiol. 67 (8), 1009-1031 (2007).</li>
<li>Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-induced+rod+and+cone+cell+death+and+regeneration+in+the+adult+albino+zebrafish+%28Danio+rerio%29+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Light-induced rod and cone cell death and regeneration in the adult albino zebrafish (Danio rerio) retina.</a> J.Neurobiol. 44 (3), 289-307 (2000).</li>
<li>Bernardos, R. L., Barthel, L. K., Meyers, J. R., Raymond, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late-stage+neuronal+progenitors+in+the+retina+are+radial+Muller+glia+that+function+as+retinal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci%22%5BJournal%5D)">Late-stage neuronal progenitors in the retina are radial Muller glia that function as retinal stem cells.</a> J.Neurosci. 27 (26), 7028-7040 (2007).</li>
<li>Nelson, C. M., Ackerman, K. M., O'Hayer, P., Bailey, T. J., Gorsuch, R. A., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+necrosis+factor-alpha+is+produced+by+dying+retinal+neurons+and+is+required+for+Muller+glia+proliferation+during+zebrafish+retinal+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tumor necrosis factor-alpha is produced by dying retinal neurons and is required for Muller glia proliferation during zebrafish retinal regeneration.</a> J.Neurosci. 33 (15), 6524-6539 (2013).</li>
<li>Lahne, M., Li, J., Marton, R. M., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin-Cytoskeleton-+and+Rock-Mediated+INM+Are+Required+for+Photoreceptor+Regeneration+in+the+Adult+Zebrafish+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci%22%5BJournal%5D)">Actin-Cytoskeleton- and Rock-Mediated INM Are Required for Photoreceptor Regeneration in the Adult Zebrafish Retina.</a> J.Neurosci. 35 (47), 15612-15634 (2015).</li>
<li>Nagashima, M., Barthel, L. K., Raymond, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-renewing+division+of+zebrafish+Muller+glial+cells+generates+neuronal+progenitors+that+require+N-cadherin+to+regenerate+retinal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A self-renewing division of zebrafish Muller glial cells generates neuronal progenitors that require N-cadherin to regenerate retinal neurons.</a> Development. 140 (22), 4510-4521 (2013).</li>
<li>Sauer, M. E., Walker, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioautographic+study+of+interkinetic+nuclear+migration+in+the+neural+tube%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.Soc.Exp.Biol.Med%22%5BJournal%5D)">Radioautographic study of interkinetic nuclear migration in the neural tube.</a> Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 101 (3), 557-560 (1959).</li>
<li>Pearson, R. A., Luneborg, N. L., Becker, D. L., Mobbs, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gap+junctions+modulate+interkinetic+nuclear+movement+in+retinal+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gap junctions modulate interkinetic nuclear movement in retinal progenitor cells.</a> J.Neurosci. 25 (46), 10803-10814 (2005).</li>
<li>Baye, L. M., Link, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interkinetic+nuclear+migration+and+the+selection+of+neurogenic+cell+divisions+during+vertebrate+retinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci%22%5BJournal%5D)">Interkinetic nuclear migration and the selection of neurogenic cell divisions during vertebrate retinogenesis.</a> J.Neurosci. 27 (38), 10143-10152 (2007).</li>
<li>Del Bene, F., Wehman, A. M., Link, B. A., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+neurogenesis+by+interkinetic+nuclear+migration+through+an+apical-basal+notch+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Regulation of neurogenesis by interkinetic nuclear migration through an apical-basal notch gradient.</a> Cell. 134 (6), 1055-1065 (2008).</li>
<li>Norden, C., Young, S., Link, B. A., Harris, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actomyosin+is+the+main+driver+of+interkinetic+nuclear+migration+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Actomyosin is the main driver of interkinetic nuclear migration in the retina.</a> Cell. 138 (6), 1195-1208 (2009).</li>
<li>Becker, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiphoton+imaging+of+chick+retinal+development+in+relation+to+gap+junctional+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J.Physiol%22%5BJournal%5D)">Multiphoton imaging of chick retinal development in relation to gap junctional communication.</a> J.Physiol. 585 (Pt 3), 711-719 (2007).</li>
<li>Surzenko, N., Crowl, T., Bachleda, A., Langer, L., Pevny, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SOX2+maintains+the+quiescent+progenitor+cell+state+of+postnatal+retinal+Muller+glia%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">SOX2 maintains the quiescent progenitor cell state of postnatal retinal Muller glia.</a> Development. 140 (7), 1445-1456 (2013).</li>
<li>Nickerson, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+and+analysis+of+postnatal+mouse+retinal+development%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev.Biol%22%5BJournal%5D)">Live imaging and analysis of postnatal mouse retinal development.</a> BMC Dev.Biol. 13, 24(2013).</li>
<li>Suzuki, S. C., Bleckert, A., Williams, P. R., Takechi, M., Kawamura, S., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cone+photoreceptor+types+in+zebrafish+are+generated+by+symmetric+terminal+divisions+of+dedicated+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A%22%5BJournal%5D)">Cone photoreceptor types in zebrafish are generated by symmetric terminal divisions of dedicated precursors.</a> Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 110 (37), 15109-15114 (2013).</li>
<li>Johnson, T. V., Martin, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+an+adult+retinal+explant+organotypic+tissue+culture+system+as+an+in+vitro+intraocular+stem+cell+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.Ophthalmol.Vis.Sci%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of an adult retinal explant organotypic tissue culture system as an in vitro intraocular stem cell transplantation model.</a> Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 49 (8), 3503-3512 (2008).</li>
<li>Bull, N. D., Johnson, T. V., Welsapar, G., DeKorver, N. W., Tomarev, S. I., Martin, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+an+adult+rat+retinal+explant+model+for+screening+of+potential+retinal+ganglion+cell+neuroprotective+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.Ophthalmol.Vis.Sci%22%5BJournal%5D)">Use of an adult rat retinal explant model for screening of potential retinal ganglion cell neuroprotective therapies.</a> Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 52 (6), 3309-3320 (2011).</li>
<li>Kustermann, S., Schmid, S., Biehlmaier, O., Kohler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival%2C+excitability%2C+and+transfection+of+retinal+neurons+in+an+organotypic+culture+of+mature+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Survival, excitability, and transfection of retinal neurons in an organotypic culture of mature zebrafish retina.</a> Cell Tissue Res. 332 (2), 195-209 (2008).</li>
<li>Williams, P. R., Morgan, J. L., Kerschensteiner, D., Wong, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+imaging+of+retinal+whole+mounts%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro imaging of retinal whole mounts.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2013, (2013).</li>
<li>Johnson, T. V., Oglesby, E. N., Steinhart, M. R., Cone-Kimball, E., Jefferys, J., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-Lapse+Retinal+Ganglion+Cell+Dendritic+Field+Degeneration+Imaged+in+Organotypic+Retinal+Explant+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.Ophthalmol.Vis.Sci%22%5BJournal%5D)">Time-Lapse Retinal Ganglion Cell Dendritic Field Degeneration Imaged in Organotypic Retinal Explant Culture.</a> Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 57 (1), 253-264 (2016).</li>
<li>Roehlecke, C., Schumann, U., Ader, M., Knels, L., Funk, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+blue+light+on+photoreceptors+in+a+live+retinal+explant+system%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.Vis%22%5BJournal%5D)">Influence of blue light on photoreceptors in a live retinal explant system.</a> Mol.Vis. 17, 876-884 (2011).</li>
<li>Coutu, D. L., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probing+cellular+processes+by+long-term+live+imaging--historic+problems+and+current+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.Cell.Sci%22%5BJournal%5D)">Probing cellular processes by long-term live imaging--historic problems and current solutions.</a> J.Cell.Sci. 126 (Pt 17), 3805-3815 (2013).</li>
<li>Thomas, J. L., Thummel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+light+damage+paradigm+for+use+in+retinal+regeneration+studies+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.Vis.Exp%22%5BJournal%5D)">A novel light damage paradigm for use in retinal regeneration studies in adult zebrafish.</a> J.Vis.Exp. 80, e51017(2013).</li>
<li>Conner, C., Ackerman, K. M., Lahne, M., Hobgood, J. S., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repressing+notch+signaling+and+expressing+TNFalpha+are+sufficient+to+mimic+retinal+regeneration+by+inducing+Muller+glial+proliferation+to+generate+committed+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.Neurosci%22%5BJournal%5D)">Repressing notch signaling and expressing TNFalpha are sufficient to mimic retinal regeneration by inducing Muller glial proliferation to generate committed progenitor cells.</a> J.Neurosci. 34 (43), 14403-14419 (2014).</li>
<li>Nelson, C. M., Gorsuch, R. A., Bailey, T. J., Ackerman, K. M., Kassen, S. C., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stat3+defines+three+populations+of+Muller+glia+and+is+required+for+initiating+maximal+muller+glia+proliferation+in+the+regenerating+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J.Comp.Neurol%22%5BJournal%5D)">Stat3 defines three populations of Muller glia and is required for initiating maximal muller glia proliferation in the regenerating zebrafish retina.</a> J.Comp.Neurol. 520 (18), 4294-4311 (2012).</li>
<li>Gorsuch, R. A., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+Muller+glial+dependent+neuronal+regeneration+in+the+damaged+adult+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of Muller glial dependent neuronal regeneration in the damaged adult zebrafish retina.</a> Exp.Eye Res. 123, 131-140 (2014).</li>
<li>Zhao, X. F., Wan, J., Powell, C., Ramachandran, R., Myers, M. G., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leptin+and+IL-6+family+cytokines+synergize+to+stimulate+Muller+glia+reprogramming+and+retina+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.Rep%22%5BJournal%5D)">Leptin and IL-6 family cytokines synergize to stimulate Muller glia reprogramming and retina regeneration.</a> Cell.Rep. 9 (1), 272-284 (2014).</li>
<li>Wan, J., Ramachandran, R., Goldman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HB-EGF+is+necessary+and+sufficient+for+Muller+glia+dedifferentiation+and+retina+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.Cell%22%5BJournal%5D)">HB-EGF is necessary and sufficient for Muller glia dedifferentiation and retina regeneration.</a> Dev.Cell. 22 (2), 334-347 (2012).</li>
<li>Lenkowski, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+regeneration+in+adult+zebrafish+requires+regulation+of+TGFbeta+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Retinal regeneration in adult zebrafish requires regulation of TGFbeta signaling.</a> Glia. 61 (10), 1687-1697 (2013).</li>
<li>Weber, I. P., Ramos, A. P., Strzyz, P. J., Leung, L. C., Young, S., Norden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitotic+position+and+morphology+of+committed+precursor+cells+in+the+zebrafish+retina+adapt+to+architectural+changes+upon+tissue+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.Rep%22%5BJournal%5D)">Mitotic position and morphology of committed precursor cells in the zebrafish retina adapt to architectural changes upon tissue maturation.</a> Cell.Rep. 7 (2), 386-397 (2014).</li>
<li>Magidson, V., Khodjakov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circumventing+photodamage+in+live-cell+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Circumventing photodamage in live-cell microscopy.</a> Methods Cell Biol. 114, 545-560 (2013).</li>
<li>Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inhibitor+of+phagocytosis%2C+O-phospho-L-serine%2C+suppresses+Muller+glia+proliferation+and+cone+cell+regeneration+in+the+light-damaged+zebrafish+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.Eye+Res%22%5BJournal%5D)">The inhibitor of phagocytosis, O-phospho-L-serine, suppresses Muller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina.</a> Exp.Eye Res. 91 (5), 601-612 (2010).</li>
<li>Lee, J. E., Liang, K. J., Fariss, R. N., Wong, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+dynamic+imaging+of+retinal+microglia+using+time-lapse+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.Ophthalmol.Vis.Sci%22%5BJournal%5D)">Ex vivo dynamic imaging of retinal microglia using time-lapse confocal microscopy.</a> Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 49 (9), 4169-4176 (2008).</li>
<li>Zhao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+phagocytosis+of+living+photoreceptors+contributes+to+inherited+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Mol.Med%22%5BJournal%5D)">Microglial phagocytosis of living photoreceptors contributes to inherited retinal degeneration.</a> EMBO Mol.Med. 7 (9), 1179-1197 (2015).</li>
<li>Peri, F., Nusslein-Volhard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+neuronal+degradation+by+microglia+reveals+a+role+for+v0-ATPase+a1+in+phagosomal+fusion+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Live imaging of neuronal degradation by microglia reveals a role for v0-ATPase a1 in phagosomal fusion in vivo.</a> Cell. 133 (5), 916-927 (2008).</li>
<li>Morsch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+microglial+engulfment+of+dying+neurons+in+the+zebrafish+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Front.Cell.Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of microglial engulfment of dying neurons in the zebrafish spinal cord.</a> Front.Cell.Neurosci. 9, 321(2015).</li>
</ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

מחקרים חוקרים את המנגנונים השולטים התחדשות של המבוגר הפגום רשתית דג זברה בעיקר שיטות immunocytochemical משומשות 5, 25, 26, 27, 28, 29, 30. קביעת תנאים כדי explants תרבות ברשתית לבצע הדמיה תא חי על תופעות, כגון INM, לספק לנו טכניקה להשיג לעומק מרחבית מ...

בניגוד לבני האדם, דג זברה (Danio rerio) תערוכת תגובת התחדשות חזקה על מוות של תאים של נוירונים ברשתית 1, 2, 3, 4. Α גורם גידול הנימק, מולקולת איתות כי הוא שוחרר מהמוות נוירונים ברשתית גורמת גליה מולר המתגוררת השכבה הפנימית גרעין הבסיס (INL) של הרשתית, להתרבות 5 ולייצר ובתאים עצבים ממשיכים להתרבות לפני ההבחנה לתוך התאים העצביים סוגים כי מת 2, 3, 4. בשלב השגשוג של תגובת ההתחדשות, הגרעינים של גליה מולר ו ובתאים העצביים הנגזרות מהם לעבור דפוס נודד חוזר בשלב עם מחזור התא (ההגירה הגרעינית Interkinetic, INM) 6 </sup<html> &gt;, 7. גרעינים מיקומו של INL הבזליים לשכפל DNA שלהם לפני המעבר לשכבה החיצונית גרעיני (ONL) שבו הם מחלקים לפני הגרעינים הנובעים לחזור basally אל INL. תהליך זה תואר לראשונה במהלך התפתחות neuroepithelial בשיטות היסטולוגית, תוך גישות הדמית תא חי מאוחר יותר אשרו את הפרשנות על ידי סואר 8, 9, 10, 11, 12. שתי הגישות הדמיה histochemical ולחיות תאים שימשו כדי לקבוע המנגנונים INM ותפקודו בפיתוח neuroepithelia כולל הרשתית 9, 11, 12, 13. עם זאת, המנגנונים השולטים INM ב המבוגר התחדשות הרשתית לא נחקרו בפירוט רבXref &quot;&gt; 6, 7. הדמיה של תא חי תהיה גישה לא יסולא בפז כדי לקדם את הידע שלנו של מסלולי איתות השולטים INM ברשתית התחדשות מבוגר. עד לאחרונה, הדמית תא החי של INM ברשתית הוגבלה או עוברי דג זברה לחיות או חומוס עוברי או עכבר לאחר לידת explants רשתית 9, 10, 11, 12, 14, 15, 16. בעוד explants רשתית מחיות בוגרת מגוון של מינים, כוללים עכבר, חולדת דג זברה כבר נוצל עבור תאים שונים גישות ביולוגיות 17, 18, 19, 20, ניסויי הדמיה לחיות תאים באמצעות חה explants הרשתיתve הוגבלה לתדרך את פרקי הזמן בהם ולא הוצאו להורג באופן רציף ולאורך כמה שעות 21, 22. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט כדי רשתית דג זברה מבוגרת אור פגוע התרבות לבצע ניסויי הדמיה לחיות תאי INM ניטור באמצעות מיקרוסקופ רב פוטון 6. גישות הדמיה תאים חיים הם יתרון על פני שיטות immunohistochemical כאשר חוקרים את מנגנוני השליטה INM, הדינמיקה של INM, למשל, מהירויות עלול להיפגע במקום המיקום של מיטוזה, אשר באופן פוטנציאלי לא יהיה מזוהה באמצעות immunocytochemistry. בעתיד, בשיטה זו יש גם פוטנציאל להיות שונה כדי לחקור תהליכים דינמיים אחרים במהלך רגנרציה רשתית, כגון phagocytosis למות קולטני האור על ידי גליה מולר או התנהגות של שריר כלשהו.

<table><tbody><tr><td>מלקחיים של Dumont #5</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>14098</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים של Dumont #5, 45&deg; זווית</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>14101</td><td></td></tr><tr><td>מספריים McPherson-Vannas</td><td>מכשירי דיוק עולמיים</td><td>501233</td><td></td></tr><tr><td>מכשירי</td><td>דיוק עולמיים</td><td>FD35-100</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Nikon&nbsp;</td><td>SMZ-1B</td><td>סוג דומה של סטריאומיקרוסקופ דיסקציה יעבוד</td></tr><tr><td>ארון בטיחות ביולוגי סוג A2</td><td>Labconco</td><td></td><td>סוג שווה ערך יעבוד</td></tr><tr><td>חממת תרבית רקמות</td><td>תרמו-מדעית</td><td>HEPA-class 100</td><td>סוג שווה ערך יעבוד</td></tr><tr><td>מנורות פלורסנט סילבניה OSFP5835HOECO</td><td>Bulbtronics</td><td>31850</td><td></td></tr><tr><td>0.2 ומיקרו; מסנן מזרק Acrodisc בגודל נקבוביות</td><td>m VWR</td><td>4192</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק Luer-lok</td><td>VWR</td><td>BD309604</td><td></td></tr><tr><td>60 מ"ל מזרק Luer-lok</td><td>VWR</td><td>BD309653</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>FischerScientific</td><td>S233-500</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>ThermoScientific</td><td>C79-500</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>EMD Millipore</td><td>5980</td><td></td></tr><tr><td>HBSS w/o Ca2+/Mg2+, ללא פנול אדום, Gibco</td><td>ThermoScientific</td><td>14175-095</td><td></td></tr><tr><td>MEM עם פנול אדום, Gibco</td><td>ThermoScientific</td><td>5100-038</td><td></td></tr><tr><td>סרום סוסים,</td><td>ThermoScientific</td><td>26050-070</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>VWR</td><td>16777-164</td><td></td></tr><tr><td>נקודת התכה נמוכה אולטרה-טהורה agarose</td><td>ThermoScientific</td><td>16520-100</td><td></td></tr><tr><td>אתנול, מוחלט</td><td>ThermoScientific</td><td>BP2818-4</td><td></td></tr><tr><td>2-פנוקסיאתנול</td><td>סיגמא</td><td>77699</td><td></td></tr><tr><td>תאי קורנינג Cell-Tak ודבק רקמות&nbsp;</td><td>VWR</td><td>354240</td><td></td></tr><tr><td>נוזל מדד שבירה&nbsp;</td><td>Cargille Lab</td><td>1803Y</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ מולטיפוטון Nikon A1 המצויד בלייזר</td><td></td><td></td> אינפרא אדום MaiTai <td>מערכת מקבילה לניקון תעבוד</td></tr><tr><td>40X Apo מטרת טבילה במים למרחקים ארוכים (NA 1.15)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>תא סביבתי מצויד בתוספת ל-35 מ"מ פטריצ'ישים</td><td>מערכת שווה ערך</td><td>Okolab</td><td></td> תעבוד</tr><tr><td>תוכנת</td> <td>ניתוח NISניקון</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

תרבות של מבוגר דג הזברה טראנסגנטי רשתית explants עבור live- תא הדמיה ידי multiphoton מיקרוסקופי

Culture of Adult Transgenic Zebrafish Retinal Explants for Live-cell Imaging by Multiphoton Microscopy

תוכנית התחדשות אנדוגני הוא שיזם גליה מולר של דג הזברה מבוגר (Danio rerio) הרשתית בעקבות נזקים עצביים ומוות. גליה מולר להזין מחדש את מחזור התא לייצר ובתאים עצביים העוברים סיבובים הבאים של חלוקות תא להתמיין לסוגי התאים העצביים האבודים. שתי גליה מולר ו תא אב עצבי גרעינים לשכפל DNA שלהם ועוברים מיטוזה ב מיקומים שונים של הרשתית, כלומר הם נודדים בין השכבה הפנימית גרעין הבסיס (INL) ואת השכבה החיצונית הגרעינית (ONL), בהתאמה, בתהליך המתואר Interkinetic הגירה גרעינית (INM). INM נחקרה בעיקר ברשתית מתפתחת. כדי לבחון את הדינמיקה של INM ב מבוגר התחדשות רשתית דג זברה בפירוט, הדמית תא החי של גליה fluorescently שכותרתו מולר / ובתאים עצביים נדרשה. כאן, אנו מספקים את התנאים לבודדי רשתיות הגבו תרבותמ Tg [GFAP: nGFP] דג הזברה mi2004 שנחשפו אור חזק מתמיד במשך 35 שעות. כמו כן, אנו מראים כי בתרבויות רשתית אלה הם קיימא לבצע ניסויי הדמיה לחיות תאים, רכישה ברציפות Z- מחסנית תמונות ברחבי העובי של explant הרשתית עד 8 שעות באמצעות מיקרוסקופ multiphoton לפקח על התנהגות הנדידה של GFAP: nGFP תאי -positive . בנוסף, אנו מתארים את הפרטים לבצע ניתוח הדמיה פוסט כדי לקבוע את המהירות של INM apical ואת הבסיס. לסיכום, הקמנו תנאים כדי ללמוד את הדינמיקה של INM במודל בוגרת ההתחדשות הנוירונים. זה יקדם את הבנתנו בתהליך הסלולר המכריע הזה ולאפשר לנו לקבוע את המנגנונים השולטים INM.

הבידוד של הרשתית על פי ההליך המתואר ב סכמטית באיור 1 מאפשר culturing של הרשתית הגבי בברוטליות ממבוגר אור פגועי Tg [GFAP: nGFP] דג הזברה mi2004 על פני תקופה של 24 שעות לפחות ב 5% CO סביבת 2 / אוויר. שטוח הרכוב אלה explants הרשתית ניתן להשתמש כדי מטוסי מוקדי תמונה ברמות רקמות עמוקות. דוגמה לכך היא גליה מולר / גרעיני תאים ובתאים עצביים שכותרתו עם GFP מן GFAP אמרגן גליה ספציפית מולר (גלי...

התחדשות רשתית דג זברה בעיקר נחקרה באמצעות רשתית קבועה. עם זאת, תהליכים דינמיים כגון הגירה גרעינית interkinetic להתרחש במהלך תגובת המשובים ודורשים דימות תאי חיים כדי לחקור את המנגנונים. כאן אנו מתארים תנאי תרבות והדמיה לפקח הגירה הגרעינית Interkinetic (INM) בזמן אמת באמצעות מיקרוסקופ multiphoton.

תרבות של מבוגר דג הזברה טראנסגנטי רשתית Explants עבור Live- תא הדמיה ידי multiphoton מיקרוסקופי

An endogenous regeneration program is initiated by M&#252;ller glia in the adult zebrafish (Danio rerio) retina following neuronal damage and death. The ...

המטרה הכוללת של הליך בידוד זה היא לאפשר דימות של תאים חיים עבור התאים המתחלקים העוברים נדידה גרעינית בין-קינטית (interkinetic nuclear migration) בתרביות של רסס רשתית (retinal explant) מדגי zebrafish פגועים. שיטה זו יכולה לספק תשובות לשאלות מפתח ברגנרציה של הרשתית, כגון אילו מנגנונים מניעים את הנדידה הגרעינית הבין-קינטית, או האם תאי גליא מילר (Muller glia) בתהליך נדידה גרעינית בין-קינטית של תאי אב לרשתית מוסדרים באופן דומה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שניתן לנטר את ההתנהגות הדינמית של התאים המתחלקים העוברים נדידה גרעינית בין-קינטית במהלך הרגנרציה, דבר המאפשר חקירה של מנגנונים ספציפיים לשלב במחזור התא.אף ששיטה זו יכולה לספק תובנות לגבי נדידה גרעינית אינטרקינטית (interkinetic nuclear migration), ניתן להחיל אותה גם על תחומי מחקר רטינליים אחרים, כגון חקירת התנהגות מיקרוגליה או פגוציטוזה של נוירונים גוססים על ידי תאי גליאל מסוג Muller. התחילו את הפרוצדורה על ידי העברת דג הזברה למגבת נייר יבשה. לאחר מכן, הסירו את אחת העיניים באמצעות פינצטה מעוקלת והעבירו אותה ל-FluoroDish.תחת מיקרוסקופ סטריאו, כוון את העין כך שהאישון פונה לזכוכית המכסה של ה-FluoroDish, באופן שבו העצב האופטי בחלק האחורי של העין גלוי. לאחר מכן, הסר את העצב האופטי קרוב ככל האפשר לחלק האחורי של העין. בנוסף, הסר את רקמת החיבור שמחוץ לעין.החזיקו את העין בין הצד הנזאלי לצד הטמפורלי באמצעות פינצטה, ובצעו חתך בבסיס העצב האופטי על ידי חדירה דרך ה-lamina cribrosa עם להב מספריים אחד וחיתוך לאורך שני הצדדים, הנזאלי והטמפורלי, של העין. לאחר מכן, הפרידו בין הצד הדורסלי לצד הוונטרלי של הרשתית. הסירו את הסקלרה מהרשתית הדורסלית באמצעות זוג פינצטות אחד, תוך כדי החזקת העדשה המחוברת לרשתית באמצעות זוג פינצטות שני.לאחר מכן, הסר את העדשה ואת הגוף הזגוגי מבלי לפגוע ברשתית. לאחר מכן, השטח את הרשתית כך ששכבת תאי הגנגליונים תפנה לעבר זכוכית הכיסוי של ה-FluoroDish. לאחר מכן, הקיף את הרשתית ב-10 µL של 1% low melting point agarose.יש לוודא שהרשתית אינה מורמת על ידי האגרוז הנוזלי, שכן אפילו הרמה קלה עלולה להשפיע על היכולת למקד את הפוקוס דרך הרקמה. אם נצפתה הרמה, יש להשתמש בפיפט כדי להסיר את האגרוז. זה קריטי שהאגרוז לא ירים את הרקמה מכיסוי הזכוכית (coverslip), שכן הדבר מפחית את היכולת להשיג תמונות באיכות גבוהה.חזור על הליך זה מספר פעמים לפני הוספת 1% low melting point agarose כדי לכסות את ה-FluoroDish כולו. לאחר שהאגרוז התמצק, הוסף 1.5 milliliters של מצע גידול לרקמה. בתוכנת רכישת התמונות, פתח את החלונות A1 MP GUI TI pad, A1 compact GUI ו-ND acquisition.עבור דימוי רב-פוטוני, וודאו כי אפשרות ה-IRNDD נבחרה בחלון ה-GUI של ה-A1 compact. לאחר מכן, בשדה ההגדרות, בחרו ב-IRDM עבור המראה הדיכרואית הראשונה ובדקו שמסנן ה-band pass מוגדר ל-525 to 50 לצורך רכישת פלואורסצנציית GFP. לאחר מכן, הפעילו את לייזר ה-IR בחלון ה-GUI של ה-A1 MP.ייקח מספר דקות עד שהלייזר יהיה מוכן. לאחר מכן, הגדירו את אורך הגל ל-910 nanometers כדי לעורר פלואורסצנציית GFP וכווננו את הלייזר על ידי לחיצה על כפתור הכיוון האוטומטי (auto-alignment). לאחר הנחת תרבית הרשתית על במת מיקרוסקופ המולטי-פוטון, ודאו שתאורת החדר והציוד כבויה לפני פתיחת התריס כדי למנוע חשיפת יתר של שפופרת הכפלת הפוטונים (photo multiplier tube).כדי להפחית את רמות הרעש, מקמו את המיקרוסקופ בסביבה חשוכה. רכשו תמונות של שדה ראייה של 300 על 300 פיקסלים בזום של 2, המוגדרים בחלון אזור הסריקה (scan area), וזמן שהייה של פיקסל של 4.8 microseconds לפיקסל שנבחר בחלון ה-A1 compact GUI. הגדירו באופן גס את עוצמת הלייזר על ידי שינוי אזור הרכישה בחלון ה-A1 MP GUI וההגבר (gain) בחלון ה-A1 compact GUI.כעת, התמקד בשכבת תאי הגנגליון והגדר את מישור המיקוד העליון של ה-z stack בחלון המשני של ה-z בתוך חלון הרכישה של ה-ND. הזז את מישור המיקוד דרך גובה השכבה הגרעינית החיצונית, המאופיינת בנוכחות תאים עמומים עם סימון GFAP ו-GFP שהם עגולים ומורחבים ביחס למקביליהם בשכבה הגרעינית הפנימית. הגדר מישור זה כתחתית ה-z stack.בשלב הבא, הגדירו את גודל הצעד בציר z בין 0.7 ל-1 מיקרומטר. כדי להגדיר את תיקון העוצמה בציר z, פתחו את חלון תיקון העוצמה ב-z ובחרו ב-ND להגדרת טווח ה-z stack. לאחר מכן, לחצו על מישור המיקוד התחתון בחלון תיקון העוצמה ב-z והגדירו את עוצמת הלייזר ואת ההגבר (gain).לאחר מכן, לחצו על החץ לצד ערכי ה-z בחלון תיקון עוצמת ה-z כדי לאשר את ההגדרות שיוצגו לאחר מכן תחת הגדרות המכשיר בחלון תיקון עוצמת ה-z עבור מישור המוקד הנבחר. חזרו על התהליך עבור המישורים האמצעי והעליון, תוך הגדלת הספק הלייזר והגבר (gain). הגדירו את אזור הרכישה בחלון ה-A1 MP GUI והימנעו מבחירה של אזור רכישה הגדול מ-15 והגבר הגבוה מ-126 בתחילת הדימות כדי למנוע פוטו-بلیச்சிנג (photo bleaching) ורמות רעש מוגברות.לאחר מכן, בחרו בתיקון עוצמה יחסי (relative intensity correction) בחלון תיקון עוצמת z. בתת-חלון סדרת הזמנים (time series) של חלון רכישת ה-ND, הגדירו את משך הזמן ל-8 שעות ואת המרווח ללא השהיה (no delay). לאחר מכן, לחצו על הפעלת תיקון z (run z correction) בתת-חלון ה-z stack של חלון רכישת ה-ND כדי לרכוש סדרת זמנים תלת-ממדית.בפרוצדורה זו, חתכו אזור המכיל גרעין חולק חיובי ל-GFAP ו-GFP. בחרו אזור חתון המכיל לפחות גרעין אחד שאינו עובר INM, וזאת כדי לקבוע נקודת ייחוס למדידה עוקבת של המרחקים שבהם נדד הגרעין החולק ביחס ל-INL הבזאלי. הכנת שחזור תלת-ממדי עשויה לסייע בתהליך.באמצעות פונקציית תצוגת הפרוסות (show slices), צור היטלים אורתוגונליים. לאחר מכן, שנה את המצב מפרוסה (slice) להטלת עוצמה מרבית (maximum intensity projection). לאחר מכן, בטל את תצוגת ה-XY של ההטלה האורתוגונלית בעוצמה מרבית.בהתאם לאוריינטציה שבה הגרעין הנודד והמתחלק נראה בצורה הטובה ביותר, כבו גם את תצוגת ה-XZ או את תצוגת ה-YZ. לחצו עם המקש הימני של העכבר על התמונה שנותרה והוציאו את סדרת תמונות ה-XZ או ה-YZ באמצעות פונקציית create new document from this view. במידת הצורך, סובבו את התמונה.באמצעות פונקציית המדידה הידנית, שרטטו קו אופקי לרוחב התמונה בגובה התחתון של הגרעין שנותר ב-INL הבזאלי ואינו עובר INM. מדדו את המרחק בין קו הייחוס לנקודה הבזאלית של הגרעין הנודד עבור סדרת הזמנים, באמצעות כלי מדידת הקו בתוכנת הניתוח. מוצגת כאן ההקרנה המקסימלית של ציר YZ של סדרת תמונות z stack של שתלי הרשתית בנקודות זמן שונות של הקלטת ה-time lapse שנרכשה באמצעות מיקרוסקופיה רב-פוטונית.באמצעות כלי הקו תחת פונקציית המדידה הידנית, הונח קו אופקי בגובה תא הייחוס המסומן בכוכבית. קו מדידה אנכי מוקם כך שיחל מהקו האופקי וימתח עד למיקומה הבזאלי של הגרעין החיובי ל-GFP ו-GF AP הנודד. מרחק זה מייצג את הנדידה האפיקלית של התא, F0, שנמדדה באיור הקודם, ואת הנדידה הבזאלית של תאי הבת הנוצרים, D1 ו-D2, בהקלטת ה-multi photon time lapse.הקו האדום מציין את המדידות עבורן חושבה מהירות הנדידה האפיקלית, בעוד שהקוים השחור והאפור מציינים את המדידות ששימשו לחישוב מהירויות הנדידה הבזאליות עבור D1 ו-D2 בהתאמה. המרחק שורטט כפונקציה של הזמן עבור נדידה אפיקלית לפני פירוק המעטפת הגרעינית ועבור שלב הנדידה הבזאלית המהירה של תא הבת D1. ברגע שהפעולה נלמדת היטב, ניתן לבצע בידוד רשתות של שלושה דגים בתוך 60 עד 90 דקות, אם הדבר מבוצע כראוי. זמן זה אינו כולל את שלבי ההכנה.בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לעבוד במהירות האפשרית כדי להבטיח את חיוניותו של נתח הרשתית (retinal explant). כמו כן, קריטי להצמיד את הרשתית בצורה שטוחה ככל האפשר כדי לאפשר דימוי בשכבות רקמה עמוקות יותר. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי אופן הבידוד וההצמדה של רשתיות מדגי zebrafish, וביצוע דימוי של תאים חיים לצורך ניטור נדידה גרעינית בין-קינטית (interkinetic nuclear migration) וקביעת מהירויות הנדידה.

culture-adult-transgenic-zebrafish-retinal-explants-for-live-cell

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

אנו להדגים פרוטוקול ליצור עוברי דג הזברה chimeric להתנהגות הדמיה לחיות הסלולר במהלך embryogenesis.

השתלה של ה-GFP-לבטא בלסטומרים עבור הדמיה חיה של התפתחות המוח ואת רשתית עוברי דג הזברה chimeric

בסרטון הזה, טכניקות הדמיה ססגוניות זמן לשגות confocal ו אבלציה תא ממוקד מסופקים. זמן לשגות הדמיה משמש כדי לפקח על התנהגותם של תאים מסוגים שונים של...

ססגוניות זמן לשגות הדמיה של דג הזברה טראנסגנטי: חזותי בתאי גזע רשתית הופעל על ידי אבלציה ממוקד תאים עצביים

תאים מתים נמתחים מרקמות אפיתל על ידי התכווצות מתואמת של תאים שכנים מבלי לשבש תפקוד מחסום. בהירות אופטית של דג הזברה מתפתח מספק מערכת מצוינת להמחיש שחול לחיות epithelia. כאן אנו מתארים שיטות לגרום ו שחול התמונה האפידרמיס דג הזברה הזחל ברזולוציה הסלולר.

הדמיה חיה של שחול Cell מן האפידרמיס של דג הזברה פיתוח

הסרטון מדגים שיטה לגידול תאי גנגליון רשתית ראשוניים מעוברי דגי זברה. עוברים בשלב מוקדם עוברים דיסקציה כדי לבודד את העיניים, אשר לאחר מכן מנותקים מכנית לתוך השעיה של תאי גנגליון הרשתית. תרחיף תאים זה מתורבת על גבי כיסויים המצופים בחלבוני דבק כדי להקל על התפתחות האקסון.

יצירת תרביות תאי גנגליון רשתית ראשוניים מעוברי דגי זברה

מקור: Lahne, M., et.al. תרבית של צמחי רשתית של דג זברה טרנסגני בוגר להדמיית תאים חיים על ידי מיקרוסקופ מולטיפוטון. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים הדמיה של תא חי של נדידת גרעין גליה של מולר באקספלנטים של רשתית דג הזברה המשובץ באגרוז בעקבות נזק לקולטני אור המושרה על ידי אור. גורם נמק גידול-אלפא (TNF-α) המשתחרר על ידי קולטני אור פגומים מפעיל תאי גליה של מולר, ומפעיל נדידה גרעינית דרך השכבות הגרעיניות הפנימיות והחיצוניות למיטוזה ויצירת אבות עצביים. התמונות שצולמו חושפות את הדינמיקה של הגירה...

הדמיית תאים חיים של נדידת גרעין גליית מולר במהלך התחדשות רשתית דג הזברה

מעקב חיה של אבות רשתית WT בודדים רקע גנטי מובהק מאפשר הערכה של תרומת איתות שאינו אוטונומי התא במהלך הנוירוגנזה. כאן, שילוב של מציאת גן, דור הכימרה באמצעות השתלה העובר בתחום הדמית confocal זמן לשגות vivo נוצל למטרה זו.

In vivo הדמיה של ביטוי מהונדס ג&#39;ין הפרט רשתית אבות ב Chimeric דג הזברה עוברים לחקר השפעות Cell Nonautonomous

הדמיה רקמת רשתית יכול לספק מידע מתא בודד לא יכול להיות שנאספו שיטות ביוכימיות מסורתיות. פרוטוקול זה מתאר הכנה של הרשתית פרוסות דג זברה הדמיה קונפוקלי. פלורסנט מקודדים גנטית חיישנים או מחוון צבע לאפשר הדמיה של תהליכים ביולוגיים רבים סוגי תאים ברשתית ברורים.

הכנת פרוסות דג זברה למבוגרים עבור לשעבר Vivo הדמיה ניסויים ברשתית טריים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להראות איך תא photoconversion מושגת באמצעות חשיפה UV על אזורים מסוימים להביע החלבון הניאון, אאוס, בבעלי החיים.

Photoconversion תא בודד בהמחיה שלם דג זברה

אנו מציגים פרוטוקול יעיל, קל לשימוש עבור הכנת תרביות תאים הראשי של דג זברה העוברים על תרביות תאים, תא חי הדמיה, כמו גם פרוטוקול להכין ראשי תאים מהמוח דג זברה למבוגרים.

תרבות, תרביות תאים תאים ראשי דג זברה

פרוטוקול זה מתאר גישה לתיוג תותוג טומוטו והדמיה רב ממדית של התפתחות עיניים מוקדמות של דגי זברה. אנו מתארים תיוג, הטמעה והדמיה בארבעה ממדים (4D) באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית לסריקת לייזר, ושיקולים למיטוב רכישת ערכות נתונים לניתוח מנגנונים של מורפוגנזה של אופטית.

הדמיה תלת מימדית של מורפוגנזה של גביע זברה אופטי

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במי חמצן מקודד גנטית (H2O2)-biosensor בנוירונים זברה בתרבית וזחלים להערכת תפקידי האיתות הפיזיולוגיים של H2O2 במהלך התפתחות מערכת העצבים. זה יכול להיות מיושם על סוגי תאים שונים ושונה עם טיפולים ניסיוניים לחקור מינים חמצן תגובתי (ROS) בפיתוח כללי.

ROS הדמיית תאים חיים במהלך התפתחות עצבית

למדו הדמיית תאים חיים של נדידה גרעינית בין-קינטית ברשתית דג הזברה באמצעות מיקרוסקופיית מולטי-פוטון. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר התנהגות תאים מתמירים בזמן אמת לחקר מנגנוני התחדשות רטינלית.

תרבות של מבוגר דג הזברה טראנסגנטי רשתית Explants עבור Live- תא הדמיה ידי multiphoton מיקרוסקופי

גלה סרטונים נוספים