Name: הדור של Organoids Human Brain iPSC הנגזרות למודל הפרעה נוירו-התפתחותית מוקדמת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: למדו ליצור אורגנואידים של מוח אנושי מ-iPSC לחקר הפרעות נוירו-התפתחותיות מוקדמות כולל מיקרוצפליה. שיטה זו מספקת מודל מהיר ואמין לתוצאות ברות-השגה מקווי תאים של מטופלים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי פריץ תיסן קרן (Az.10.14.2.152). אנו מודים למתקן הטבעת רקמות ואת מתקן גרעין מיקרוסקופ של CMMC. אנו מודים על הדיונים ותמיכה טכנית מסופק על ידי חברי המעבדה לביולוגיה centrosome ו נוגדנים. אנו מודים לי מינג Gooi להגהה את כתב היד.

<ol><li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501, 373-379 (2013).</li>
<li>Eiraku, M., Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+embryonic+stem+cell+culture+for+generation+of+three-dimensional+retinal+and+cortical+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Mouse embryonic stem cell culture for generation of three-dimensional retinal and cortical tissues.</a> Nat Protoc. 7, 69-79 (2012).</li>
<li>Nakano, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-formation+of+optic+cups+and+storable+stratified+neural+retina+from+human+ESCs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Self-formation of optic cups and storable stratified neural retina from human ESCs.</a> Cell Stem Cell. 10, 771-785 (2012).</li>
<li>Gabriel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CPAP+promotes+timely+cilium+disassembly+to+maintain+neural+progenitor+pool%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">CPAP promotes timely cilium disassembly to maintain neural progenitor pool.</a> EMBO J. 35 (8), 803-819 (2016).</li>
<li>Al-Dosari, M. S., Shaheen, R., Colak, D., Alkuraya, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+CENPJ+mutation+causes+Seckel+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Genet%22%5BJournal%5D)">Novel CENPJ mutation causes Seckel syndrome.</a> J Med Genet. 47, 411-414 (2010).</li>
<li>Wollnik, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+common+mechanism+for+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">A common mechanism for microcephaly.</a> Nat Genet. 42, 923-924 (2010).</li>
<li>Thornton, G. K., Woods, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+microcephaly%3A+do+all+roads+lead+to+Rome%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Primary microcephaly: do all roads lead to Rome?</a> Trends Genet. 25, 501-510 (2009).</li>
<li>Barbelanne, M., Tsang, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+cellular+basis+of+autosomal+recessive+primary+microcephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Molecular and cellular basis of autosomal recessive primary microcephaly.</a> Biomed Res Int. 2014, 547986(2014).</li>
<li>Homem, C. C., Repic, M., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferation+control+in+neural+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Proliferation control in neural stem and progenitor cells.</a> Nat. Rev. Neurosci. 16, 647-659 (2015).</li>
<li>Gabriel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CPAP+promotes+timely+cilium+disassembly+to+maintain+neural+progenitor+pool%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">CPAP promotes timely cilium disassembly to maintain neural progenitor pool.</a> EMBO J. 35, 803-819 (2016).</li>
<li>Mak, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecules+greatly+improve+conversion+of+human-induced+pluripotent+stem+cells+to+the+neuronal+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Int%22%5BJournal%5D)">Small molecules greatly improve conversion of human-induced pluripotent stem cells to the neuronal lineage.</a> Stem Cells Int. , (2012).</li>
<li>Morizane, A., Doi, D., Kikuchi, T., Nishimura, K., Takahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+inhibitors+of+bone+morphogenic+protein+and+activin%2Fnodal+signals+promote+highly+efficient+neural+induction+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Small-molecule inhibitors of bone morphogenic protein and activin/nodal signals promote highly efficient neural induction from human pluripotent stem cells.</a> J. Neurosci. Res. 89, 117-126 (2011).</li>
<li>Shi, Y., Kirwan, P., Livesey, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+cerebral+cortex+neurons+and+neural+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human pluripotent stem cells to cerebral cortex neurons and neural networks.</a> Nat Protoc. 7, 1836-1846 (2012).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+induction+of+neural+conversion+in+human+ESCs+and+human+induced+pluripotent+stem+cells+with+a+single+chemical+inhibitor+of+transforming+growth+factor+beta+superfamily+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">High-efficiency induction of neural conversion in human ESCs and human induced pluripotent stem cells with a single chemical inhibitor of transforming growth factor beta superfamily receptors.</a> Stem Cells. 28, 1741-1750 (2010).</li>
<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+pluripotent+stem+cells+from+adult+human+fibroblasts+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Induction of pluripotent stem cells from adult human fibroblasts by defined factors.</a> Cell. 131, 861-872 (2007).</li>
<li>Okita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+more+efficient+method+to+generate+integration-free+human+iPS+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A more efficient method to generate integration-free human iPS cells.</a> Nat Methods. 8, 409-412 (2011).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+induced+pluripotent+stem+cells+free+of+vector+and+transgene+sequences%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Human induced pluripotent stem cells free of vector and transgene sequences.</a> Science. 324, 797-801 (2009).</li>
<li>Lieu, P. T., Fontes, A., Vemuri, M. C., Macarthur, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+induced+pluripotent+stem+cells+with+CytoTune%2C+a+non-integrating+Sendai+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of induced pluripotent stem cells with CytoTune, a non-integrating Sendai virus.</a> Methods Mol. Biol. 997, 45-56 (2013).</li>
<li>Bai, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+analysis+of+genome+alterations+induced+by+single-cell+passaging+in+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Temporal analysis of genome alterations induced by single-cell passaging in human embryonic stem cells.</a> Stem Cells Dev. 24, 653-662 (2015).</li>
<li>Garitaonandia, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+risk+of+genetic+and+epigenetic+instability+in+human+embryonic+stem+cells+associated+with+specific+culture+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Increased risk of genetic and epigenetic instability in human embryonic stem cells associated with specific culture conditions.</a> PLoS One. 10, e0118307(2015).</li>
<li>Ohnuma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzyme-free+passage+of+human+pluripotent+stem+cells+by+controlling+divalent+cations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Enzyme-free passage of human pluripotent stem cells by controlling divalent cations.</a> Sci. Rep. 4, 4646(2014).</li>
<li>Currle, D. S., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flash+freezing+and+cryosectioning+E12.5+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flash freezing and cryosectioning E12.5 mouse brain.</a> J Vis Exp. , (2007).</li>
<li>Yingling, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroepithelial+stem+cell+proliferation+requires+LIS1+for+precise+spindle+orientation+and+symmetric+division%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Neuroepithelial stem cell proliferation requires LIS1 for precise spindle orientation and symmetric division.</a> Cell. 132, 474-486 (2008).</li>
<li>Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small+step+for+the+cell%2C+a+giant+leap+for+mankind%3A+a+hypothesis+of+neocortical+expansion+during+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A small step for the cell, a giant leap for mankind: a hypothesis of neocortical expansion during evolution.</a> Trends Neurosci. 18, 383-388 (1995).</li>
<li>Hu, B. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+follows+developmental+principles+but+with+variable+potency%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Neural differentiation of human induced pluripotent stem cells follows developmental principles but with variable potency.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 4335-4340 (2010).</li>
<li>Wilson, P. G., Stice, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+differentiation+of+neural+rosettes+derived+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews%22%5BJournal%5D)">Development and differentiation of neural rosettes derived from human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Reviews. 2, 67-77 (2006).</li>
<li>Dhara, S. K., Stice, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Neural differentiation of human embryonic stem cells.</a> J. Cell Biochem. 105, 633-640 (2008).</li>
<li>Christie, V. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+evaluation+of+synthetic+retinoid+derivatives+as+inducers+of+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Org+Biomol+Chem%22%5BJournal%5D)">Synthesis and evaluation of synthetic retinoid derivatives as inducers of stem cell differentiation.</a> Org Biomol Chem. 6, 3497-3507 (2008).</li>
<li>Kim, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+enhancement+of+neural+differentiation+from+human+ES+and+iPS+cells+regardless+of+their+innate+difference+in+differentiation+propensity%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews%22%5BJournal%5D)">Robust enhancement of neural differentiation from human ES and iPS cells regardless of their innate difference in differentiation propensity.</a> Stem Cell Reviews. 6, 270-281 (2010).</li>
<li>Gabriel, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Zika+Virus+Isolates+Induce+Premature+Differentiation+of+Neural+Progenitors+in+Human+Brain+Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Recent Zika Virus Isolates Induce Premature Differentiation of Neural Progenitors in Human Brain Organoids.</a> Cell stem cell. , (2017).</li>
<li>Wu, J., Hunt, S. D., Xue, H., Liu, Y., Darabi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+Characterization+of+a+MYF5+Reporter+Human+iPS+Cell+Line+Using+CRISPR%2FCas9+Mediated+Homologous+Recombination%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Generation and Characterization of a MYF5 Reporter Human iPS Cell Line Using CRISPR/Cas9 Mediated Homologous Recombination.</a> Sci. Rep. 6, 18759(2016).</li>
<li>Li, H. L., Gee, P., Ishida, K., Hotta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genomic+correction+methods+in+human+iPS+cells+using+CRISPR-Cas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Efficient genomic correction methods in human iPS cells using CRISPR-Cas9 system.</a> Methods. 101, 27-35 (2016).</li>
<li>Grobarczyk, B., Franco, B., Hanon, K., Malgrange, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Isogenic+Human+iPS+Cell+Line+Precisely+Corrected+by+Genome+Editing+Using+the+CRISPR%2FCas9+System%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reviews%22%5BJournal%5D)">Generation of Isogenic Human iPS Cell Line Precisely Corrected by Genome Editing Using the CRISPR/Cas9 System.</a> Stem Cell Reviews. 11, 774-787 (2015).</li>
<li>Camp, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cerebral+organoids+recapitulate+gene+expression+programs+of+fetal+neocortex+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Human cerebral organoids recapitulate gene expression programs of fetal neocortex development.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 112, 15672-15677 (2015).</li>
<li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-Region-Specific+Organoids+Using+Mini-bioreactors+for+Modeling+ZIKV+Exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Brain-Region-Specific Organoids Using Mini-bioreactors for Modeling ZIKV Exposure.</a> Cell. 165, 1238-1254 (2016).</li>
<li>Jo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Midbrain-like+Organoids+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Contain+Functional+Dopaminergic+and+Neuromelanin-Producing+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Midbrain-like Organoids from Human Pluripotent Stem Cells Contain Functional Dopaminergic and Neuromelanin-Producing Neurons.</a> Cell Stem Cell. 19, 248-257 (2016).</li>
<li>Mariani, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FOXG1-Dependent+Dysregulation+of+GABA%2FGlutamate+Neuron+Differentiation+in+Autism+Spectrum+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">FOXG1-Dependent Dysregulation of GABA/Glutamate Neuron Differentiation in Autism Spectrum Disorders.</a> Cell. 162, 375-390 (2015).</li>
<li>D'Avanzo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+in+3D+culture%3A+challenges+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Bioessays%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's in 3D culture: challenges and perspectives.</a> Bioessays. 37, 1139-1148 (2015).</li>
</ol>

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

MCPH היא הפרעה נוירו-התפתחותיות מורכבות אנושית שלא ניתן לסכם במודלים של בעלי חיים in vivo או תרבית תאים אנושיים פשוטים גישות במבחנה. הביטוי הקליני של MCPH מתחיל להופיע במהלך הטרימסטר הראשון, כאשר בתחילת נוירוגנסיס מתחיל. לפיכך, organoids מוח 3D מייצג מערכת ניסיונית אמינה מודל פיתוח MCPH. בנוסף, organoids המוח האנושי 3D הוא גישה אידיאלית מאז i) הם מאפשרים ההתאמה של ספקטרום של דגימות חולות עם רקע גנטי שונה, ii) הם מציגים רקמות מאורגנות המכילות סוגי תאים עצביים שוני...

פרעות התפתחותיות אדם, כגון ממיקרוצפלוס-, ניתן ללמוד בצורה גרועה רק במודלים של בעלי חיים בשל העובדה כי מוח האנושי יש משטח קליפת מוח מורחב, תכונה ייחודית ושונת חיות לא אנושיות. היבט זה עושה התפתחות המוח האנושי תהליך מורכב כי לא ניתן ללמוד מספיק בתוך 2D, במערכת תרבית תאים במבחנה. מתעוררים טכניקות התרבות 3D לאפשר לדור של organoids דמויי רקמה מתאי גזע מושרים (iPSCs). במבחנת הבידול של תאי גזע פלוריפוטנטיים בתרבות השעית 3D מאפשר ההיווצרות של סוגי תאים שונים במועד ובאזור ספציפי, והוליד רקמות מאורגנות, מרובדת 1, 2, 3. הודות מעבד כי חלוץ בטכנולוגיות תרבות 3D ו demystified המורכבת של היווצרות איברים, החלה מתאי גזע,פתחנו שיטה חזקה של יצירת organoids המוח להתוות אירועים מוקדמים של התפתחות מוח אנושית מודל ממיקרוצפלוס- במבחנה 1, 2, 3. ראוי לציין כי התאמנו בשיטה המקורית שפיתח לנקסטר ואח. 1 כדי ליצור organoids מוחין. שיטה זו שונתה על פי דרישות הניסוי שלנו. מטרת מחקר מ ואח &#39;גבריאל. היה לנתח את המנגנונים התאיים ומולקולריים של תחזוקת תאי גזע עצבית במהלך התפתחות המוח. על מנת לעשות זאת, מחקר המכניסטי בוצע באמצעות ניתוח ובתאים עצביים (NPCs) ב organoids מוח 3D נגזר חולה ממיקרוצפלוס- 4. החולה הזה נשא מוטציה CPAP, חלבון centrosomal נשמר הנדרשים biogenesis centrosome 5. היפו מקובלהתזה היא כי ממיקרוצפלוס- הוא התוצאה של דלדול של ברכת NPC, זה עלול לנבוע גם למוות של תאים או בידול מוקדם 1, 6, 7, 8, 9. על ידי ניתוח אזורי חדרית (VZs) של organoids המוח ממיקרוצפלוס-, הודגם כי מספר משמעותי של NPCs לעבור חלוקת התא סימטרית, בניגוד organoids המוח נגזר מתורם בריא 4. ניתוחים מיקרוסקופים וביוכימיים נרחבים של organoids מוח microcephalic חשפו תפקיד לא צפוי עבור CPAP מבולגן ריסים בזמן 4. באופן ספציפי, CPAP מוטציה מזוהה עם פירוק cilium מפגר מחדש כניסת מחזור התא מתעכבת, מה שמוביל את הבידול המוקדם של NPCs 4. תוצאות אלו מצביעות על תפקיד עבור ריסים ב ממיקרוצפלוס- ו המעורבות EIR במהלך מלא הנוירוגנזה גודל המוח 10. חלקו הראשון של פרוטוקול זה הוא תיאור של שיטת שלושת השלבים ליצירת organoids המוח הומוגנית. כפי שהוזכר קודם לכן, הפרוטוקול לנקסטר המקורי הותאם ו שונה שמתאים למטרות שלנו 1. ראשית, iPSCs אדם מתורבת מצב מזין ללא מוגדר על Engelbreth-הולם-הנחיל (EHS) מטריקס. צעד זה ימנע את הווריאציות של תרביות תאי גזע פלוריפוטנטיים מזין תלוי. בפרוטוקול זה, בדומה להשפעת בידול העצבי להקים אפיתל עצבית מתחילה ישירות iPSCs. אם תדלג גוף embryoid (EB) צעד ההיווצרות, את ההתמיינות העצבית בצורה מבוקרת יותר וביים. גישה זו מגבילה את ההיווצרות הספונטנית undirected של שכבות תאי ניבט אחרות, כגון המזודרם ו endoderm. על ידי יישום פרוטוקול זה, neurospheres המכיל רוזטות עצבית ניתן לקצור ביום 5 עבור EHS הטבעת מטריקס ותרבות השעיה נייחת. מדיום organoid המשמש את הצעד השלישי של הפרוטוקול שלנו הוא השלים עם dorsomorphin ו SB431542. Dorsomorphin הוא מעכב מולקולות קטנות של חלבון העצם morphogenic (BMP), וכן SB431542 מעכב את TGFβ / Activin / מסלול איתות קטרים. השילוב של גורמים אלה יכול לקדם בידול עצבי בצורה יעילה יותר מאשר חומצה רטינואית לבד 11, 12, 13, 14. בסך הכל, שינויים אלה מאפשרים לדור לשחזור של organoids המוח, עם וריאציות מינימאליות ברחבי organoids. חשוב לציין, שיטה זו יושמה כדי ליצור organoids המוח microcephalic וחסונה מן iPSCs החולה, הנושאות מוטציות בגנים המשפיעים centrosomes והדינמיקה מחזור התא. החלק השני של פרוטוקול זה נותן הוראות להכנת brAin organoids לניתוח ופרשנות של ליקויים הסלולר ממיקרוצפלוס-. זה כולל קיבוע, cryosectioning, מכתים immunofluorescent, ואת ניתוח מיקרוסקופי confocal. פרוטוקול זה יספק את הקורא עם תיאור מפורט של תוצאות צפויות ובליווי לפרשנות.

<table><tbody><tr><td>נוגדן משני נגד עכבר 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-11001</td><td>נוגדן משני נגד עכבר IgG (H+L), אלקסה פלואור 488</td></tr><tr><td>נגד ארנב 647</td><td>Invitrogen</td><td>A-21245</td><td>נוגדן משני נגד ארנב עיזים IgG (H+L), אלקסה פלואור 647</td></tr><tr><td>Arl13b</td><td>פרוטאינטק</td><td>17711-1-AP</td><td>ARL13B נוגדן רב-שבטי ארנב&nbsp;</td></tr><tr><td>מערכת CELLSPIN</td><td>IBS Integra Bioscience</td><td>183001</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich, US</td><td>32670</td><td>4&prime;,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>DMEM/F-12</td><td>Gibco, US</td><td>31331093</td><td>מדיום הנשר השונה של Dulbecco: תערובת נוטריאנטים F-12&nbsp;</td></tr><tr><td>דורסומורפין</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>P5499</td><td>תרכובת C; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>הטמעת מדיום</td><td>AppliChem</td><td>A9011, 0100</td><td>Mowiol; מדיום הטבעה; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>מטריצת Engelbreth-Holm-Swarm (EHS)</td><td>Corning</td><td>354277</td><td>Matrigel מטריצה מוסמכת hESC; חשוב: ג'לטין דגים מוסמך hESC</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"</td>ב <td>G7765-250 מ"ל</td><td>ג'לטין מעור דגי מים קרים; ספקים מרובים; חיטוי לאחר הוספה ל-PBS להמסה ועיקור, יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות; C</td></tr><tr><td>גליצין</td><td>AppliChem</td><td>A1067,1000</td><td>גליצין לביולוגיה מולקולרית; ספקים מרובים&nbsp;</td></tr><tr><td>לולאת חיסון עם מחט, חד פעמית (1 ומיקרו; L)</td> <td>סיגמא אולדריץ', ארה"ב</td><td>BR452201-1000EA</td><td>ספקים מרובים&nbsp;</td></tr><tr><td>אינסולין</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>I3536-100MG</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>גיבקו, ארה"ב</td><td>25030081</td><td>L-גלוטמין (200 מ"מ)</td></tr><tr><td>טכנולוגיות תאי גזע</td> <td>בינוניות A</td><td>#05850</td><td>mTeSR1 (מדיום hiPSC)</td></tr><tr><td>טכנולוגיות תאי גזע</td> <td>בינוניות B</td><td>#05835</td><td>מדיום אינדוקציה עצבית (NIM); מדיום התמיינות עצבית</td></tr><tr><td>בינוני C</td><td>Gibco, ארה"ב</td><td>21103049</td><td>עצבי בזאלי בינוני</td></tr><tr><td>MEM</td><td>Gibco, ארה"ב</td><td></td><td>11140035 תמיסת חומצות אמינו לא חיוניות MEM (100x)</td></tr><tr><td>ערכת זיהוי מיקופלזמה MycoAlert</td><td>לונזה, שוויץ</td><td>#LT07-218</td><td>ערכת זיהוי מיקופלזמה; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>Nestin</td><td>Novus biologicals</td><td>NBP1-92717</td><td>נוגדן חד שבטי של עכבר נסטין (4D11)</td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד (PFA)</td><td>AppliChem</td><td>A3813, 0500</td><td>4% ב-PBS, פתרון אחסון ב-20 מעלות; C; זהירות: יש ללבוש מגן עור ועיניים ולעבוד מתחת למכסה המנוע&nbsp;</td></tr><tr><td>טבליות PBS</td><td>Gibco, ארה"ב</td><td>18912014</td><td>ראה יצרן&חריף; הוראות; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין (10.000 יח'/מ"ל)</td><td>גיבקו, ארה"ב</td><td>15140122</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>תמיסת פולי-L-ליזין (PLL)</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>P8920-100ML</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>pVim</td><td>MBL</td><td>D076-3S</td><td>פוספו-וימנטין (Ser55)</td></tr><tr><td>מגיב A&nbsp;</td><td>טכנולוגיות תאי גזע</td> <td># 05872</td><td>הערה לפרוטוקול 1.1.1.2; ReLSR (מגיב לבחירת תאי ES ו-iPS אנושיים ללא אנזימים); אנא עקוב אחר manufactorer&acute; פרוטוקול s; מוצרים חלופיים מספקי muliple זמינים</td></tr><tr><td>Reagent B&nbsp;</td><td>סיגמא-אולדריץ', ארה"ב</td><td>A6964-100ML</td><td>פתרון Accutase הוא פתרון אנזימטי לדיסוציאציה של תא בודד; ספקים מרובים; פרוטוקול 1.1.2 "פתרון דיסוציאציה של תאים אנזימטיים" &nbsp;</td></tr><tr><td>מחקר Cryostat Leica CM3050 S</td><td>Leica biosystems</td><td>CM3050 S</td><td>מספר ספקים</td></tr><tr><td>SB431542</td><td>Selleckchem.com</td><td>S1067</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>בקבוק ספינר 250 מ"ל</td><td>IBS Integra Bioscience</td><td>182026</td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>AppliChem</td><td>A4734, 1000</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>Superfrost אולטרה פלוס מיקרוסקופ שקופיות</td><td>תרמו מדעי, ארה"ב</td><td>J3800AMNZ</td><td>יש לסמן את השקופיות עם "+" וטעון חיובית</td></tr><tr><td>תוסף 1</td><td>Gibco, US</td><td>17502048</td><td>תוסף N-2 (100x)</td></tr> <tr><td>תוסף 2 w/o ויטמין A</td><td>Gibco, US</td><td>12587010</td><td>תוסף B-27 (50x), מינוס ויטמין A; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>Sakura, NL</td><td>4565</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. תרכובת</td><td>Sakura, NL</td><td>4583</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>AppliChem</td><td>A1388,0500</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>TUJ1</td><td>Sigma-Aldrich, ארה"ב</td><td>T2200</td> <td>& beta;-טובולין III (ארנב פוליקלונלי)</td></tr> <tr><td>בדיקת TUNEL Promega</td><td>, ארה"ב</td><td>G3250</td><td>DeadEnd פלואורומטרי מערכת TUNEL; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>Tween 20 לביולוגיה מולקולרית</td><td>AppliChem</td><td>A4974,0500</td><td>ספקים מרובים</td></tr><tr><td>גיליון עמיד למים</td><td>חברת BEMIS, בע"מ.</td><td>PM996</td><td>Parafilm " M&rdquo;; ספקים מרובים</td></tr><tr><td>Y-27632&nbsp;</td><td>Selleckchem.com</td><td>S1049</td><td>מעכב רוק (Y-27632 2HCL); ספקים מרובים</td></tr><tr><td>&-מרקפטואתנול</td><td>Gibco, ארה"</td>ב <td>31350010</td><td>2-מרקפטואתנול (50 מ"מ); ספקים מרובים</td></tr></tbody></table>

הדור של organoids human brain ipsc הנגזרות למודל הפרעה נוירו-התפתחותית מוקדמת

Generation of iPSC-derived Human Brain Organoids to Model Early Neurodevelopmental Disorders

הזמינות המוגבלת של מודלים מתאימים במבחנה שיכולים לייצג באופן אמין התפתחות מוח אנושית מורכבת היא צוואר בקבוק משמעותי המגביל את התרגום של מחקר מוח בסיסי ליישום קליני. בעוד שתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs) החליפו את תאי הגזע העובריים האנושיים המפוקפקים מבחינה אתית, מחקרי התמיינות עצבית מבוססי iPSC נותרו תיאוריים ברמה התאית אך אינם מספקים כראוי את הפרטים שניתן להפיק מרקמת מוח אנושית מורכבת ותלת מימדית. 
הפער הזה מתמלא כעת באמצעות יישום של אורגנואידים תלת-ממדיים במוח שמקורם ב-iPSC, "מוחות בצלחת", שמדגימים מאפיינים רבים של התפתחות מוחית אנושית מורכבת. כאן מתוארת שיטה ליצירת אורגנואידים תלת-ממדיים במוח שמקורם ב-iPSC. האורגנואידים יכולים לסייע במידול מיקרוצפליה ראשונית אוטוזומלית רצסיבית (MCPH), הפרעה נוירו-התפתחותית אנושית נדירה. הסבר מקובל למום המוחי ב-MCPH הוא דלדול מאגר תאי הגזע העצביים בשלבים המוקדמים של התפתחות המוח האנושי, פגם התפתחותי שקשה לשחזר או להוכיח במבחנה. 
כדי לחקור MCPH, יצרנו iPSCs מפיברובלסטים שמקורם בחולה הנושאים מוטציה בחלבון הצנטרוזומי CPAP. על ידי ניתוח אזור החדרים של אורגנואידים תלת-ממדיים במוח מיקרוצפליה, הראינו את ההתמיינות המוקדמת של אבות עצביים. אורגנואידים תלת-ממדיים אלה במוח הם מערכת מבחנה רבת עוצמה שתהיה חיונית במידול הפרעות מוח מולדות הנגרמות על ידי כימיקלים נוירוטוקסיים, זיהומים נגיפיים נוירוטרופיים או מוטציות גנטיות תורשתיות.

הדור של organoids המוח דורש לפחות שלושה שבועות של culturing רציפה (איור 1A). כדי להשיג תוצאות לשחזור, אנו ממליצים כי החוקר מתעד כל צעד, חשוב, ימנע שינויים כלשהם לגבי רכיבים בינוניים, בנקודות זמן, וטיפול תא. הנה, אנחנו נותנים תמצית כיצד להעריך אם אבני דרך קריטיות מתקבלות על מנת לקבל organoids באיכות מספקת בסוף הניסוי. היווצרות neurospheres בתוך צלחת 96-היטב צריכה להיות בבירור מיום 4. Neurospheres יכול להיות מוכר מוגדרים היטב בתחומים...

מידול התפתחות המוח האנושי נפגע עקב המורכבות חסרת התקדים של רקמת האפיתל העצבית. כאן מתוארת שיטה לייצור חזק של אורגנואידים במוח כדי לתאר אירועים מוקדמים של התפתחות המוח האנושי ולדגמן מיקרוצפליה במבחנה.

הדור של Organoids Human Brain iPSC הנגזרות למודל הפרעה נוירו-התפתחותית מוקדמת

The restricted availability of suitable in vitro models that can reliably represent complex human brain development is a significant bottleneck that ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה ליצירת אורגנואידים של מוח אנושי המופקים מ-iPSC היא לדגמן הפרעות נוירו-התפתחותיות מוקדמות בבני אדם. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום התפתחות המוח האנושי, כגון תפקידם של סינתסומים וריסונים בנוירוגנזה חדשה ובמיקרוצפליה ראשונית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מהווה מודל חסון ומהיר לקבלת תוצאות הניתנות לשחזור מאורגנואידים של מוח המופקים מ-iPSC של מטופלים.את הפרוצדורה תדגים Elke Gabriel, פוסט-דוקטורטורנט מהמעבדה שלי במרכז לרפואה מולקולרית, קלון. כדי להתחיל בפרוצדורה זו, אספו את הנוספירות (neurospheres) באמצעות מיקרופיפטה של 200 µL עם טיפ של 2 mm שנגזר מראש בעזרת מספריים סטריליים. לאחר מכן, הניחו את הנוספירות במרחק של כ-5 mL אחת מהשנייה על סרט פאראפין בתוך צלחת של 100 mL.הסר בזהירות כמה שיותר מהמדיום שנותר. לאחר מכן, הוסף טיפה של מטריצת EHS על כל נוירוספירה בודדת. הדגר את טיפות מטריצת ה-EHS יחד עם הנוירוספירות למשך 15 דקות ב-37 degrees celsius.לאחר מכן, שטפו בזהירות את הנוירוספרים (neurospheres) מסרט הפרפין על ידי שטיפתם במדיום לנוירוספרים. לאחר מכן, דגרו את הנוירוספרים במשך ארבעת הימים הבאים והוסיפו שני מיליליטרים של מדיום רענן לנוירוספרים ביום השני. בהליך זה, הוסיפו 100 מיליליטרים של מדיום לאורגנואידים של המוח לכל בקבוק ספינר (spinner flask) דרך זרועות הצד שלו.יש לחמם מראש את המצע באינקובטור בטמפרטורה של 37 °C למשך 20 דקות לפחות. לאחר מכן, יש לוודא שכל הנוירוספירות מופרדות זו מזו. במידה ושתיים או יותר מחוברות באמצעות מטריצת EHS, יש להפריד ביניהן על ידי חיתוך המטריצה המקשרת באמצעות סכין מנתחים.הגדירו תוכנית ערבוב במהירות של 25 RPM. העבירו בזהירות את הנוירוספירות המוטמעות במטריצת EHS לבקבוקי ספינר (spinner flasks) המכילים 100 milliliters של מצע אורגנואידים. לאחר מכן, סדרו את בקבוקי הספינר על פלטפורמת ערבוב מגנטית באינקובטור למשך 14 ימים בטמפרטורה של 37 degrees celsius.זהו היום אפס של תרבית האורגנואידים. יש להחליף את המצע פעם בשבוע על ידי הסרת מחצית מהמצע והוספה של כמות זהה של מצע טרי. בשלב זה, אסוף את האורגנואידים מתרבית בקבוק הספינר (spinner flask) ביום 14 באמצעות מיקרו-פיפט של 1 ml חתוך מראש.העבירו את כולם לצלוחית של 60 מילימטר ושטפו אותם פעם אחת עם 5 מיליליטר של DMEM F12 חמים למשך שלוש דקות. לאחר מכן, הכינו מבחנה של 1.5 מיליליטר עם 500 מיקרוליטר של 4% PFA חם. מקמו כל אורגנואיד בנפרד בכל מבחנה וקבעו אותם למשך 30-60 דקות בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, השתמש בלולאת הזרקה כדי להוציא את האורגנואידים. לאחר מכן, הסר את ה-PFA ושטוף את האורגנואידים המקובעים פעמיים למשך 10 דקות בכל פעם עם 1 ml של PBS. לאחר מכן, אחסן את האורגנואידים ב-1 ml של PBS בטמפרטורה של 4 °C למשך עד 7 ימים לשימוש עתידי.כדי להטמיע את האורגנואידים לצורך חיתוך קריוגני (cryosectioning), הסיר את ה-PBS והוסף 1 milliliter של תמיסת sucrose בריכוז 30% לכל מבחנה כדי לייבש את האורגנואידים לפני הקפאתם. לאחר הוספת תמיסת ה-sucrose, האורגנואידים צריכים לצוף על פני השטח. אחסן את האורגנואידים למשך לילה בתמיסת ה-sucrose בטמפרטורה של ארבע degrees celsius.עד למחרת, האורגנואידים אמורים לשקוע לתחתית המבחנה. לאחר מכן, מלאו תבנית דגימה מויניל ב-400 milliliters של תרכובת OCT. השתמשו בלולאת הזרקה כדי להניח אורגנואיד במרכז התבנית.סמנו את שולי התבנית בשם הדגימה. לאחר מכן, הקפיאו את התבנית המכילה את האורגנואיד בטמפרטורה של 80- °C עד לביצוע החיתוך הקריוסטטי (cryosectioning). לאחר מכן, טפלו את זכוכית של נשאי הקריו-חתכים (cryoslides) ב-0.1% PLL ו-PBS למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, הניחו לשקופיות להתייבש במשך שלוש שעות. אחסנו את השקופיות בטמפרטורה של 4 °C וחממו אותן לטמפרטורת החדר לפני השימוש. לאחר מכן, בצעו חיתוך של האורגנואידים שהוקפאו בשיטת cryo-freezing לפרוסות בעובי 20 עד 50 µm על גבי שקופיות קריו מזכוכית מצופות PLL.הניחו לחתכים להתייבש במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר ואחסנו את החתכים ב-80°C- עד לעיבוד נוסף. דימוי אימונופלואורסצנטי של אורגנואידים שנחתכו בשיטת קריו-סקציונינג המציגים VZ טיפוסי ואת הלוח הקורטקלי ראשוני (primitive cortical plate). ה-VZ משתרע מהצד האפיקלי לצד הבסיל.שימו לב כי התאים בתוך ה-VZ מציגים גרעינים דמויי גדר (palisade-like), מה שמעיד על כך שהם תאי גליאל רדיאליים. הפאנל הימני מציג צביעה אימונופלורסצנטית של NPCs חיוביים בתוך ה-VZ ושל נוירונים חיוביים ל-TUJ1 בלוח הקורטקלי הראשוני (primitive cortical plate). מוצגות כאן שתי דוגמאות של VZs שנצבעו עם PVIM ו-ARL 13B.האזורים המסומנים בריבועים לבנים הם מוגדלים. תאי גליאל רדיאליים אפקליים המתחלקים בצד האפקלי של ה-VZ הם חיוביים ל-PVIM. מישור החלוקה של תא באנפזה הוא אופקי לקו פני השטח של הלומן, המסומן על ידי צביעת ARL 13B.ברגע שהטכניקה נשלטת, ניתן לבצעה בתוך 23 ימים אם היא מבוצעת כראוי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לבצע בדיקות איכות תקופתיות ובדיקות מיקרו-פלזמה על התרביות. לאחר פיתוחה, סללה טכניקה זו את הדרך עבור חוקרים בתחום ההתפתחות בנוירוביולוגיה לחקור את מנגנוני ההתפתחות העצבית באורגנואידים של מוח אנושי.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להפיק אורגנואידים של מוח אנושי מקווי תאי iPSC שונים, כולל קווי תאים של מטופלים עם תפקודים תאיים פגומים.

generation-ipsc-derived-human-brain-organoids-to-model-early

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

הסרטון מדגים שיטה ליצירת אורגנואידים במוח אנושי מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים. זה מראה כיצד הנוירוספירה יוצרת שכבה neuroectodermal, אשר מדכא את היווצרות של שכבות נבט אחרות. הנוירוספרות משובצות במטריצת ג'ל תלת ממדית ויוצרות ניצנים נוירואפיתליאליים. כאשר מודגרים עם מדיה אורגנואידים, ניצנים נוירואפיתליאליים אלה מתמיינים לאזורי מוח ספציפיים, וכתוצאה מכך נוצרים אורגנואידים בוגרים במוח.

שיטת מבחנה ליצירת אורגנואידים אנושיים במוח

סרטון זה מדגים בדיקה ליצירת אורגנואידים מוחיים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs). תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים אנושיים ליצירת גופים עובריים (EBs). ה- EBs מתורבתים על פיגום פולימרי באמצעות מדיום אינדוקציה, המקדם התמיינות לתאי גזע עצביים, תאי אב ונוירונים לא בוגרים. לבסוף, EBs מוטמעים במטריצה ומועברים למדיום תחזוקה ליצירת אורגנואידים מוחיים.

יצירת אורגנואידים מוחיים פלוריפוטנטיים המושרים שמקורם בתאי גזע

Organoids מוחי לייצג מערכת מודל חדש לחקור מוקדם המוח האנושי לפיתוח במבחנה. מאמר זה מספק את המתודולוגיה מפורט לייצר ביעילות organoids הומוגנית מסוג הקדמי הגבי מתאי גזע pluripotent המושרה האנושי כולל שלבים קריטיים איפיון ואימות.

דור של Organoids מוחי סטנדרטית ו לשחזור הקדמי-סוג של האדם המושרה בתאי גזע Pluripotent

פרוטוקול זה נוצר כאמצעי לייצר אורגנואידים המוח באופן פשוט, עלות נמוכה ללא גורמי צמיחה אקסוגני או מטריקס קרום המרתף תוך שמירה על מגוון של סוגי תאי המוח ותכונות רבות של ארגון הסלולר.

שיטת בימוי עצמי סטטי ליצירת אורגנואידים המוח מתאי גזע האדם העובריים

אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים ליצירה ואפיון של תאים גזע פלוריפוטנטיים דו-ממדיים ותלת-ממדיים המושרים על ידי בני אדם (hIPSC) מודלים מבוססי התפתחות ניאוקורטית, כמו גם מתודולוגיות משלימות המאפשרות ניתוח איכותי וכמותי של ביוגניזיס סיליום ראשוני (PC) ותפקוד.

מודלים מבוססי תאי גזע פלוריפוטנטיים דו-ממדיים ותלת-ממדיים אנושיים לניתוח מעורבות סיליום ראשוני במהלך התפתחות ניאוקורטיקלית

אנו מתארים פרוטוקול מפורט ליצירת אורגנוידים במוח המושרים תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים והשימוש בהם בדוגמנות מחלות מיטוכונדריאליות.

דור אורגנוידים במוח האדם למידול מחלות מיטוכונדריאליות

כאן אנו מתארים פרוטוקול ליצירת אורגנוידים במוח מתאי גזע פלוריפוטנטיים הנגרמים על ידי בני אדם (IPSCs). כדי להשיג אורגנוידים במוח בכמויות גדולות ובאיכות גבוהה, אנו משתמשים ביו-רה-קטרים מיני תוצרת בית.

דור אורגנויד במוח מתאי גזע פלוריפוטנטים מושרים במיני ביו-רהקטורים תוצרת בית

במחקר זה, אנו מספקים טכניקה מפורטת למערכת תרבית אורגנואידים פשוטה אך חזקה בקליפת המוח באמצעות תרביות hPSC סטנדרטיות ללא הזנה. זהו פרוטוקול מהיר, יעיל וניתן לשחזור ליצירת אורגנואידים המדגימים היבטים של סנסנציית המוח במבחנה.

דור חזק וניתן לשחזור של אורגנואידים במוח קליפת המוח למידול סנסנציה עצבית במוח במבחנה

אנו מציגים פרוטוקול ליצירת אורגנואיד מוח אנושי עם מיקרוגליה תושבת על ידי שילוב תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSC) בהתפתחות אורגנואידים.

גזירה של אורגנואיד מוח אנושי עם התפתחות מיקרוגליה

התפתחותיות תהליכים כגון התפשטות ההעברה, תוצר neurite לעיתים קרובות מוטרד מנוטלי מחלות. לפיכך, אנו מציגים פרוטוקולים להעריך במהירות, reproducibly אלה בתהליכי התפתחותיות NPCs נגזר iPSC אנושי. פרוטוקולים אלה מאפשרות גם להערכת ההשפעות של גורמי גדילה הרלוונטיים הרפוי על פיתוח NPC.

זיהוי מהיר של פנוטיפים התפתחותיות בתאי האדם קודמן עצבית (NPCs)

למדו ליצור אורגנואידים של מוח אנושי מ-iPSC לחקר הפרעות נוירו-התפתחותיות מוקדמות כולל מיקרוצפליה. שיטה זו מספקת מודל מהיר ואמין לתוצאות ברות-השגה מקווי תאים של מטופלים.

הדור של Organoids Human Brain iPSC הנגזרות למודל הפרעה נוירו-התפתחותית מוקדמת

גלה סרטונים נוספים