Name: דגירה ממושכת של רקמות חריפות עצביות עבור Electrophysiology ו-הדמית סידן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: למד שיטה חדשנית לשמירה על רקמות עצביות חריפות ליותר מ-24 שעות באמצעות מערכת Braincubator. השיטה מאפשרת הקלטות אלקטרופיזיולוגיות והדמיית סידן באיכות גבוהה תוך הפחתת מספר בעלי החיים הנדרשים למחקר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לקולין סימונס וג'יימס רייט על הסיוע הטכני. עבודה זו נתמכה על ידי מענק מימון ראשוני (WSU) ל-Y.B. ולמשרד החדשנות באוניברסיטת מערב סידני. M.C. נתמך על ידי מלגת ARC (DECRA).

הפרוטוקול להלן מתאר את הכנת C57BL / 6 ו C3H / הוא (retinally מנוונת) עכבר רקמות עצביות, אך בטכניקות דומות ניתן ליישם מינים אחרים. כל בעלי החיים היו בריאים מטופלים עם תנאים סטנדרטיים של טמפרטורה, לחות, 12 שעות אור / חושך מחזור, גישה חופשית למזון ומים, וללא גירויי מתח מיועדים. כל הניסויים אושרו ובוצעו בהתאם טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת מערב סידני ואתיקה הוועדה ועל פי השימוש בבעלי חיים והנחיות טיפול (A9452 # רשות המחקר בבעלי חיים, # A10396 ו A8967 #). 1. הכנת פרוסת המוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החיה על ידי שאיפה של isoflurane (5%) לערוף באמצעות גיליוטינה מכרסם. הסר את המוח במהירות, כפי שתואר לעיל 9 ולמקם אותו לתוך פתרון פיזיולוגי קר כקרח (aCSF) המכיל (מ&quot;מ): 125 NaCl, KCl 2.5, 1 MgCl 2, 1.25 לאא 2 PO 4, 2 CaCl 2, 253 NaHCO, 25 דקסטרוז, ורווי carbogen (95% O 2/5% תערובת CO 2; 310 mOsm; pH 7.4). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים פרוסות המוח, באזור של עניין, 300 מיקרומטר עבה עם microtome רוטט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבר פרוסות למערכת דגירה שהותקנה מנטרת מקרוב ושולט רמות pH (pH 7.2 - 7.4), זרימת carbogen, וטמפרטורה כפי שתואר לעיל 10, 11. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גדר טמפרטורה בתא ראשונית עד 35 מעלות צלזיוס במשך 15 - 30 דקות, ולאחר מכן להפחית לאט עד 15 - 16 מעלות צלזיוס כפי שמוצג באיור 1C. ואז דגירה פרוסה במערכת הדגירה עד צורך, גם עבור electrophysiology או הדמיה. הערה: אם פרוס לשמש הדמית סידן, בצע את השלבים הבאים לפני קירור רקמות מתחת RT. </li></ol> 2. רשתית Wholemount כן פנימי להסרת ממברנה הגבלה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן wholemounts רשתית תחת ל&#39;רגילבתנאי תאורה במעבדה או אור אדום / אינפרא-אדום עמום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים בעלי חיים על ידי נקע בצוואר הרחם ועיניים enucleate מיד. ביצוע חתך קטן לאורך serrata אורה, ומניחים מדיה או איימס, או aCSF המכיל (מ&quot;מ): 125 NaCl, 25 NaHCO 3, 3 KCl, 2 2 CaCl, 1 2 MgCl, 10 גלוקוז, 0.5 L- גלוטמין, ו להרוות עם carbogen (95% O 2/5% CO 2 תערובת; ~ 300 mOsm; pH 7.4), ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד להסיר את הקרנית, העדשה זגוגי על ידי חיתוך לאורך serrata אורה עם מספריים קטנים הסרת העדשה זגוגי עם מלקחיים. מניחים רקמות במערכת הדגירה ב RT. הערה: רקמת רשתית יכולה להישמר כוס העין, לאחר הפחתת טמפרטורה איטית עד 15 - 16 מעלות צלזיוס, עבור&gt; 24 שעות במערכת הדגירה עד הצורך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להסיר את ILM, להעביר את כוס העין שמכילה את הרשתית צנצנת זכוכית קטנה שהכילה 30 פפאין U / mL, 1 מ&quot;מ L- ציסטין, 0.5 mM EDTA ו 0.005% DNase ב Earl&#39;s-תמיסת מלח מאוזנת (BSS) על 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. החל 95% O 2/5% CO 2 לפתרון דרך המכסה אבל לא בועה. אם אתה משתמש רקמות מחיות צעירות (&lt;6 שבועות), לדלל את תמיסת לחץ הכח. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עצור עיכול אנזימטי, בעצם הצבתה של רקמות בתוך ovomucoid (10 מ&quot;ג / מ&quot;ל) ו BSA (10 מ&quot;ג / מ&quot;ל) פתרון עבור 10 דקות ב BSS של ארל. רקמות לשטוף ביסודיות עם aCSF לפני ההעברה למערכת הדגירה ולהפחית טמפרטורה עד 15 - 16 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על רקמת הרשתית ב-כוס העין עד הצורך. להעברה המיקרוסקופ, לבודד את הרשתית מהגביע-העין וחותך ל -4 חתיכות עם סכיני גילוח. אם הרשתית כולה נדרשת, לעשות ארבעה חתכים קטנים בפריפריה של הרשתית כדי לאפשר לו לשכב. הערה: בניסויי הדמיה, עומס עם סידן צבע לפני ההעברה למערכת הדגירה, ראה להלן. </li></ol> 3. שמירה על רקמות בחממה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li&gt; רקם מקום בתא הראשי המכיל בדיקות למדידות pH וטמפרטורה (איור 1 א &#39;, ב&#39;). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפץ aCSF באמצעות בתא שני (תא UVC, בנויה כפי שתוארו לעיל 12) מבודד מהאולם הראשי חשוף 1.1 W אור UVC (254 ננומטר, 5W / 2P מעקר מנורת UV) על מנת eradiate חיידקים צפים הפתרון (איור 1A). בקרת UVC עיתוי אור באמצעות טיימר לתכנות באמצעות תכונה אקראית המפעילה בזמנים משתנים בין 15 ל 26 דקות כל 15 - 30 דקות כדי למנוע חימום יתר של aCSF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את קצב הזרימה בתא UVC ל -12 mL / min כפי שדווח בעבר 12. מכסה את תא UVC עם רדיד אלומיניום על מנת למנוע תאורת UVC מחוץ לתא, אשר עלול לגרום ניזק לרקמות עצביות. הערה: לקבלת רקמת רשתית כהה מותאם, חל כיסוי מחוייט לתא הראשי להוציא לאור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש משאבת peristaltic כדי circulate הפתרון (aCSF) דרך השני תאי צלחת קרה ותרמית פלטייה קרירה משני מגניבים או לחמם את החדר הראשי הטמפרטורה הרצויה בטווח של 0 - 50 ° C. לאינקובטורים רקמה אופטימליים, להשתמש 15 - 16 מעלות צלזיוס למשך כדאיות לטווח ארוכה. </li></ol> טוען 4. סידן דיי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר צבעי סידן על בסיס ההעדפה של חוקר הפרט. כאן אנו משתמשים פורעה-02:00, Fluo-08:00 או Fluo-04:00. עם זאת, ניתן ליישם שיטה זו כדי צבעים אחרים כמו גם: לפזר צבעים סידן ב DMSO פתרון 1 מ&quot;מ ו 1% קופולימרים לחסום (למשל, חומצה-127 pluronic) לנפח סופי של 50 μL sonicate במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת פתרון aCSF לריכוז סופי של 10 מיקרומטר, קופולימרים לחסום 0.01% עבור פרוסות מוח, ו -20 מיקרומטר (רשתית), קופולימרים לחסום 0.02% עבור הרשתית. בשנת רשתיות (פפאין מטופלים) ופרוסות המוח מפני בעלי חיים צעירים, עומס באמבטיה במשך 45 דקות ב 37 מעלות צלזיוס (פורעה -2 AM) או ב RT (Fluo-4 בבוקר; Fלואו-8 בבוקר). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור בעלי חיים בוגרים, (&gt; 12 שבועות) פיפטה הצבעים (50 μL) ישירות על גבי פרוסות המוח, ולשמור למשך 75 דקות כדי לאפשר חדירה טובה יותר של הצבע לתוך השכבות העמוקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להבטיח חמצון נאותה של הפרוסה שקוע במהלך הדגירה לצבוע, להכין קאמרית טעינת זכוכית עם מכסה סגור (כד עגול בקוטר 2.5 ס&quot;מ, 3.5 ס&quot;מ גובה) עם צבעים סידן מדולל 2.5 מ&quot;ל של aCSF. חמצן ברציפות עם 95% O 2/5% CO 2. האם לא בועה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות טעינת צבע, לשטוף את הרקמה עם aCSF והעביר למערכת הדגירה, לאט להפחית את הטמפרטורה ל 15 - 16 מעלות צלזיוס עד לשימוש ניסיוני. </li></ol> 5. הקלטות אלקטרו והדמיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח רקמות בתא הקלטה שקועה תחת מיקרוסקופ, ו perfuse עם aCSF מחומצן בקצב זרימה של 4 - 5 מיליליטר / דקה או ב RT (~ 22 ° C) או טמפרטורה פיזיולוגית (~ 35 ° C). חולד הרקמה במקום באמצעות מנהג עשה &#39;&#39; נבל &#39;&#39;, עשוי חוטי ניילון או זהב נמתחו ומודבקים על פני פיסה בצורת U זהב או חוט פלטינה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבלת אלקטרופיזיולוגיה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כן טפטפות הקלטה מ -1.5 מ&quot;מ (1.19 מזהה מ&quot;מ) הזכוכית בורוסיליקט באמצעות חולץ micropipette להשיג התנגדות סופית של 5-6 MΩ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלאו את פיפטה עם 3 - 4 μL של פתרון פנימי כפי שתואר לעיל 13 ולדמיין התאים תחת התערבות ההפרש לעומת אינפרא אדום (IR-DIC) באמצעות מצלמת CCD. הפתרון התאי צריך להיות מותאם בקפידה כל ניסוי כדי להשיג תוצאות ניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה עמדה, תוך שמירה על לחץ חיובי להחיל דרך יציאת יניקה על בעל פיפטה, על קרומית התא באמצעות micromanipulator. מאז ILM הוסר מהרשתית, לא גירוד קרום לפני נדרש. ברגע פיפטה הוא על התא, להחיל שלילי עדיןלחץ פיפטה להשיג חותם gigaohm. ואז לקרוע את קרום התא עם כמות קצרה של לחץ שלילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך כל תא קלטות שוטפות או מתח- clamp באמצעות טכניקות סטנדרטיות על פי צורך. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סידן הדמיה: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור הדמיה ratiometric של פורעה -2, השתמש במחליף גל מהירות גבוהה במיוחד כדי לספק אורכי גל עירור של 340 ננומטר ו -380 ננומטר. Pass אור נפלט תאים בודדים באמצעות מסנן פליטה של ​​510 ± 20 ננומטר, וללכוד עם מצלמה דיגיטלית, במהירות גבוהה רגישות גבוהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור גל עירור יחיד של Fluo-4, אור עירור מסנן דרך 460 - לעבור סינון 490 ננומטר להקת אור נפלט דרך 515 - מסנן מעביר פס 550 ננומטר. עבור ההקלטה המהירה הרגישה ביותר להשתמש במצלמה דיגיטלית במהירות גבוהה כל כך. לרכוש תמונות כנדרש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד שינויי קרינה כפונקציה של זמן או בכל אורך גל יחיד (Fluo-4) או באמצעות יחס אורך הגלשיטה (פורעה-2), כמתואר 8 בעבר, 14. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Colbert, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+cortical+brain+slices+for+electrophysiological+recording%5BTitle%5D)+AND+%22Meth+mol+biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of cortical brain slices for electrophysiological recording.</a> Meth mol biol. 337, Clifton, N.J. 117-125 (2006).</li>
<li>Gibb, A., Edwards, F. <a target="_blank" href="http://www.utdallas.edu/~tres/microelectrode/microelectrodes_ch10.pdf">Patch clamp recording from cells in sliced tissues.</a> Microelect Techniq. , 255-274 (1994).</li>
<li>Kantevari, S., Buskila, Y., Ellis-Davies, G. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+characterization+of+cell-permeant+6-nitrodibenzofuranyl-caged+IP3%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem+photobiol+sci%22%5BJournal%5D)">Synthesis and characterization of cell-permeant 6-nitrodibenzofuranyl-caged IP3.</a> Photochem photobiol sci. 11 (3), 508-513 (2012).</li>
<li>Blankenship, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+and+Extrasynaptic+Factors+Governing+Glutamatergic+Retinal+Waves%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Synaptic and Extrasynaptic Factors Governing Glutamatergic Retinal Waves.</a> Neuron. 62 (2), 230-241 (2009).</li>
<li>Sargoy, A., Barnes, S., Brecha, N. C., Perez De Sevilla Muller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+and+Calcium+Imaging+Methods+in+Wholemount+Rat+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical and Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina.</a> J Vis Exp. (92), e51396(2014).</li>
<li>Kulkarni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Ca2%2B+dynamics+in+cone+photoreceptor+axon+terminals+of+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Imaging Ca2+ dynamics in cone photoreceptor axon terminals of the mouse retina.</a> J Vis Exp. (99), e52588(2015).</li>
<li>Velte, T. J., Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+potentials+in+the+dendrites+of+retinal+ganglion+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Action potentials in the dendrites of retinal ganglion cells.</a> J neurophysiol. 81 (3), 1412-1417 (1999).</li>
<li>Cameron, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+imaging+of+AM+dyes+following+prolonged+incubation+in+acute+neuronal+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Calcium imaging of AM dyes following prolonged incubation in acute neuronal tissue.</a> PLoS ONE. 11 (5), (2016).</li>
<li>Buskila, Y., Morley, J. W., Tapson, J., van Schaik, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adaptation+of+spike+backpropagation+delays+in+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The adaptation of spike backpropagation delays in cortical neurons.</a> Front Cell Neurosci. 7, (2013).</li>
<li>Breen, P. P., Buskila, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Braincubator%3A+An+incubation+system+to+extend+brain+slice+lifespan+for+use+in+neurophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Eng+Med+Biol+Soc%22%5BJournal%5D)">Braincubator: An incubation system to extend brain slice lifespan for use in neurophysiology.</a> Eng Med Biol Soc. , 4864-4867 (2014).</li>
<li>Buskila, Y., Breen, P., Wright, J. Device for storing a tissue sample. WIPO Patent. , WO2015021513A1 (2015).</li>
<li>Buskila, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+the+viability+of+acute+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Extending the viability of acute brain slices.</a> Sci Rep. 4, 4-10 (2014).</li>
<li>Buskila, Y., Farkash, S., Hershfinkel, M., Amitai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+reactive+nitric+oxide+production+by+astrocytes+in+mouse+neocortical+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Rapid and reactive nitric oxide production by astrocytes in mouse neocortical slices.</a> Glia. 52 (3), 169-176 (2005).</li>
<li>Barreto-Chang, O. L., Dolmetsch, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+imaging+of+cortical+neurons+using+Fura-2+AM%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM.</a> J Vis Exp. (23), e3-e5 (2009).</li>
<li>Buskila, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Astrocytic+Nitric+Oxide+Production+and+Neuronal+Modifications+in+the+Neocortex+of+a+NOS2+Mutant+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Enhanced Astrocytic Nitric Oxide Production and Neuronal Modifications in the Neocortex of a NOS2 Mutant Mouse.</a> PLoS ONE. 2 (9), 9(2007).</li>
<li>Russell, W. M. S., Burch, R. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRussell%2C+WMS+%22The+Principles+of+Humane+Experimental+Technique%22">The Principles of Humane Experimental Technique</a>. , Methuen. London, UK. (1959).</li>
</ol>

יוסי בוסקילה ופול ברין מצהירים כי הם בעלים משותפים של PAYO Scientific Pty Ltd, חברה המתמחה בבניית מערכות דגירה לרקמות עצביות חריפה. כל המחברים האחרים אינם מדווחים על אינטרסים פיננסיים או ניגודי אינטרסים פוטנציאליים הקשורים למחקר הנוכחי.

מאמר זה מתאר שיטת דגירה להאריך את הכדאיות של רקמות עצביות חריפות לניסויי הדמית אלקטרו, ובכך להפחית את מספרי החיה הדרושים כדי להשלים מטרות ניסוי. שני תהליכים עיקריים הקובעים את ההידרדרות של רקמה עצבית לאורך זמן: i) רמות חיידקים מוגברים, וגידול ליווי רעלן פנימי חיידקים שוחרר, ii) יתר רעיל אשר עוקב אחר הליך החיתוך הטראומתי 10. כמו רקמה עצבית חריפה היא הגנה על איכות הסביבה, רגולציה הדוקה של הסביבה רקמות באמצעות מעקב צמוד של pH, טמפרטורה ורמת חיידקים חיונית לשמי...

Electrophysiology והדמיה תפקודית (סידן, מתח צבעים רגישים) הם שתיים ניסיונותיי בטכניקות הנפוצות ביותר במדעי המוח. מוח הכנות פרוסות wholemount ברשתית, אשר תיבחן כאן, לספק אמצעי לבחון תכונות אלקטרו וקישוריות הסינפטי ללא זיהום הרדמה או מרפי שרירים. פרוסות רשתית המוח wholemount לשמור על שלמות מבנית שלהם, בניגוד תרבויות או homogenates התא, וכך מתאפשר לחקר מעגלים ספציפיים ורשתות המוח 1. הקלטות מרקמות מבודדות יש יתרונות על פני הקלטות vivo כתנועות הקשורים פעילות הלב והנשימה בוטלו. יתר על כן, להדמיה ישירה מאפשרת שיעורים ספציפיים של תאים להיות ממוקד, יישום מקומי של כלי התרופתי 2, 3. הקלטות תיקון מהדק ו Calcium צבען טעינת wholemount רשתית הוא מסובך בשל הקיום של Inner הגבלת ממברנה (ILM), אשר מכסה את תא גנגליון רשתית (RGC) השכבה ומונעת גישה ישירה אל התאים. בדרך כלל, קרום זה שגירד עם טפטפת זכוכית כדי לאפשר יישום ישיר של תיקון פיפטה היווצרות חותם gigaohm על תא בודד. בנוסף, צבעי סידן מיושם אמבטיה לא לחצות את ILM ואו חייב להיות מוזרק מתחת קרום זה 4, retrogradely מועברים ההזרקה הבאה עצב הראייה 5 או electroporated דרך הרקמה 6. יתר על כן, כאשר ניצול מודל מכרסם של רטיניטיס פיגמנטוזה, עכבר rd / rd, את ILM הוא עבה יותר חדיר. כאן, אנו משתמשים בטכניקה כדי להסיר את ILM עם עיכול אנזימטי 7, כדי לאפשר הן סידן נמצא בכל מקום טעינת צבע, וגישה ישירה לתאי הגנגליון ברשתית עבור recordi תיקון- clampNGS 8. הקלטות מוצלחות מ פרוס או מוח או wholemount רשתית תלויות לנתיחת דגירה של רקמה עצבית קיימא. בדרך כלל, רקמה מופקת בבוקרו של הניסוי וטופחה בנוזל מלאכותי השדרתי (aCSF) עד שהוא משמש להקלטות. בדרך כלל, רקמה נשארת קיימא עבור 6 - 8 שעות, עם השפלה משמעותית הבאים חלון זמן זה. עם זאת, הן פרוסות המוח והכנות רשתיות wholemount בדרך כלל לייצר יותר רקמות מאשר ניתן להקליט בתוך פרק זמן קצר זה. כתוצאה מכך, רקמה נמחקת לעתים קרובות בסוף היום לנתיחה תושלם שוב בימים שלאחר מכן. משמעות דבר היא חיה אחרת מנוצלת ו ~ 2 שעות של התקנה לנתיחה / מכתים חזר. הפרוטוקול הבא מתאר שיטה עבור הארכת החיים של רקמות עצביות במשך יותר מ -24 שעות, כלומר פחות בעלי חיים מנוצלים, ועוד זמן ניסוי זמין. הכדאיות רקמות wכפי שהוערך באמצעות רישום תכונות אלקטרו ודינמיקה סידן, ומאפיינים אלה אי אפשר היה להבחין בין &lt;ג 4 ו&gt; 24 שעות postdissection. תוצאות אלו מצביעות כי לא רק הם המאפיינים תא בודד ללא פגע ופונקציונלי לאחר דגירה ממושכת, אך פעילות הרשת, כפי שהוערך על ידי סידן הדמיה הקלטות אלקטרו, הוא ללא שינוי&gt; 24 שעות postdissection. יתר על כן, אנו מראים כי צבעי סידן יכולים להישאר בתאים לתקופות ממושכות מבלי לגרום השפעות מזיקות. יישום של פרוטוקול זה מוכיח כי הפעילות התפקודית של נוירונים ברקמה עצבית חריפה יכולה להישמר במשך תקופות ארוכות, פעם הסביבה החיצונית היא פיקוח הדוק. יתר על כן, כפי כדאיויות רקמות משתנות במידה רבה בין מעבדות עקב פרוטוקולי דגירה שונים, שיטה זו קובעת סטנדרט זהב הפרמטרים האידיאליים כי יש להחיל להפחית השתנות בבריאות neu החריפהרקמת רונאל.

<table><tbody><tr><td>נתרן כלורי</td><td>סיגמא אולדריץ' VETEC</td><td>V800372</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>N-מתיל-D-גלוקמין</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>M2004&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>D-גלוקוז</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>נתרן ביקרבונט</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט מונו-בסיסי</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>S2554</td><td></td></tr><tr><td>מגנזיום כלוריד</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>M9272&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>סידן כלורי&nbsp;</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>מערכת דיסוציאציה פפאין</td><td>וורת'ינגטון&nbsp;</td><td></td><td></td>LK003150</tr><tr><td>דימתיל סולפוקסיד נטול מים</td><td>סיגמא אולדריץ'</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>פלורוניק F-127 ספיגת UV נמוכה*</td><td>טכנולוגיות חיים</td><td>P-6867</td><td>תמיסה 20% ב-DMSO&nbsp;</td></tr><tr><td>פורה-2 AM&nbsp; &nbsp;</td><td>Anaspec</td><td>84017</td><td></td></tr><tr><td>Fluo-4 AM&nbsp; &nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>F23917</td><td></td></tr><tr><td>Fluo-8 AM</td><td>Abcam</td><td>Ab142773</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטום להב רוטט&nbsp;</td><td>Leica Biosystem</td><td>VT1200 S</td><td>מצויד ב- Leica ' s Vibrocheck &trade; מכשיר מדידה&nbsp;</td></tr><tr><td>שולחן אנטי רטט</td><td>מערכות קינטיות ויברפלין&nbsp;</td><td>ויברפליין 9100/9200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>שלב קבוע מיקרוסקופ זקוף</td><td>אולימפוס</td><td>BX51WI&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אובייקטיבי</td><td>אולימפוס</td><td>XLUMPlanFLN 20x/1.00w</td><td>20X&nbsp;</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ אובייקטיבי</td><td>אולימפוס</td><td>LUMPlanFLN 60x/1.00w</td><td>60X</td></tr><tr><td>CCD מצלמה</td><td>אנדור</td><td>איקסון +</td><td></td></tr> <tr><td>מחליף אורך גל במהירות גבוהה</td><td>מכשיר סאטר</td><td>Lambda DG-4&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מגבר מהדק תיקון</td><td>התקנים מולקולריים</td><td>MultiClamp 700B</td><td></td></tr><tr><td>מערכת רכישת נתונים</td><td>התקנים מולקולריים</td><td>Digidata 1440A</td><td>Axon Digidata&reg; מערכת</td></tr><tr><td>נימי זכוכית בורוסיליקט</td><td>Sutter Instrument Co</td><td>BF150-86-10</td><td></td></tr><tr><td>חולץ מיקרואלקטרודות</td><td>Sutter Instrument Co</td><td>P-97</td><td>חולץ מיקרופיפטה מסוג בוער / חום</td></tr> תא <tr><td>הקלטה / זלוף</td><td>Warner Instruments</td><td>RC-40LP</td><td>פרופיל נמוך תאי אמבטיה פתוחים</td></tr><tr><td>תוכנה</td><td>התקנים מולקולריים</td><td>pClamp 10.2</td><td></td></tr><tr><td>Andor iQ Live Cell Imaging</td><td>Software Andor</td><td>iQ3</td><td></td></tr><tr><td>Braincubator</td><td>Payo Scientific</td><td>BR26021976</td><td>www.braincubator.com.au</td></tr><tr><td>Peltier-Thermoelectric Cold Plate Cooler</td><td>TE Technology</td><td>CP-121</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה</td><td>TE Technology</td><td>TC-36-25 RS232</td><td></td></tr></tbody></table>

דגירה ממושכת של רקמות חריפות עצביות עבור electrophysiology ו-הדמית סידן

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

חריפת הכנות רקמות עצביות, פרוסות מוח wholemount רשתית, בדרך כלל יכול להישמר רק 6 - 8 שעות לאחר ניתוח. עובדה זו מגבילה את זמן הניסוי, ומגדיל את מספר בעלי החיים בהם נעשה שימוש לכל מחקר. מגבלה זו משפיעה באופן ספציפי פרוטוקולים כגון הדמית סידן הדורשים דגירה מראש ממושך עם צבעים להחיל אמבטיה. גידול מעריכי חיידקים תוך 3 - 4 שעות לאחר החיתוך מתואם היטב עם ירידת בריאות רקמות. מחקר זה מתאר שיטה להגביל את ההתפשטות של חיידקים בהכנות חריפות לשמור רקמות עצביות קיימא עבור פרק הזמן ממושך (&gt; 24 ח) ללא הצורך באנטיביוטיקה, נהלים סטרילית, או תקשורת ותרבות רקמה המכילה גורמי גדילה. ידי רכיבה על אופני נוזל החוץ-התאים באמצעות קרינת UV ו לשמור על שלמות הרקמה בתא חזק מותאם אישית ב 15 - 16 מעלות צלזיוס, הרקמה מראה שום הבדל תכונות אלקטרו, או סי סידןgnaling באמצעות צבעים סידן תאיים ב&gt; 24 שעות postdissection. שיטות אלה לא רק להרחיב את זמן הניסוי עבור אלה באמצעות רקמה עצבית חריפה, אך תפחית את מספר בעלי החיים הנדרשים כדי להשלים מטרות הניסוי, ותציב סטנדרט הזהב הדגירה רקמה עצבית חריפה.

רגולציה הדוקה של העומס חום חיידקים של aCSF במהלך הדגירה היא חיונית כדי לשמור על כדאיות רקמות עצבית. זה יכול להיות מותאם באמצעות הקרנת אור UVC ושמירה על הטמפרטורה של aCSF ב 15 - 16 ° C (איור 1). יתר על כן, aCSF פרמטרים החותם (APS; איור 1 ג) מספק הנסיין עם רקורד של התנאים הסביבתיים (pH ואת זמנים.), ובכך להציע סטנדרט זהב פרמטרים כאשר דוגר רקמה עצבית, אשר, אם בעקבותיו, תפחית השתנות בין ניסויים. <p class="jove_conte...

הוסר לאחר מהגוף, רקמה עצבית היא השפיעה מאוד על ידי תנאים סביבתיים, המוביל השפלה הסופי של רקמות לאחר 6 - 8 שעות. באמצעות שיטת דגירה ייחודית, אשר מקיימים מעקב קפדני אחרת ומסדירה את הסביבה התאית של הרקמות, כדאיויות רקמות ניתן להאריך באופן משמעותי עבור&gt; 24 שעות.

דגירה ממושכת של רקמות חריפות עצביות עבור Electrophysiology ו-הדמית סידן

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

המטרה הכוללת של טכניקה זו היא לשמר רקמה נוירונלית לתקופות ממושכות ללא התדרדרות משמעותית של הרקמה. באמצעות שיטה זו, ניתן לבצע רישומי אלקטרופיזיולוגיים ודימויי סידן יותר מ-24 שעות לאחר הפקת הרקמה. שיטה זו תגדיל משמעותית את החיות של רקמה נוירונלית שהופקה באופן אקוטי ותשמור על חיותה למשך יותר מ-24 שעות, ובכך תקבע סטנדרט זהב חדש לדגירה של רקמה אקוטית.היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא הגדלה משמעותית של פרק הזמן הניסויי שבו ניתן להשתמש ברקמה. דבר זה מפחית את מספר בעלי החיים הדרושים וממקסם את כמות הנתונים שניתן להפיק מכל ניסוי. ה-Braincubator הוא מערכת אוטומטית השומרת על טמפרטורת הרקמה ומונעת התרבות חיידקים בנוזל החוץ-תאי.שלב זה מספק סביבה מבוקרת היטב עבור הרקמה. את הפרוצדורה יעגילו אורסוליה קקשי ואלבה בלוט-סאז, דוקטורנטיות מהמעבדה שלי. להכנת פרוסות מוח, הכין באמצעות ויברטום פרוסות מוח בעובי 300 מיקרומטר המכילות את אזור העניין.לאחר מכן העבירו את הפרוסות למערכת אינקובציה מותאמת אישית, שבה זרימת ה-carbogen, רמות ה-pH והטמפרטורה מבוקרות. הגדירו את טמפרטורת התא הראשונית ל-35 °C למשך 15 עד 30 דקות, ולאחר מכן הפחיתו אותה באיטיות ל-15 °C. לאחר מכן, דגרו את הפרוסות במערכת האינקובציה עד לביצוע ההקלטה האלקטרופיזיולוגית או הדימות.להכנת דגימת רשתית שלמה (whole mount), הוצא את העיניים מיד מבעל חיים שהורדמה. בצע חתך קטן לאורך ה-ora serrata והנח את העיניים בתוך Ames'media או aCSF עם אספקת קרבוגן בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, הסר מיד את הקרנייה, העדשה והזגוגית על ידי חיתוך לאורך ה-ora serrata בעזרת מספריים קטנים והסר אותם בעזרת פינצטה.הניחו את הרקמה במערכת האינקובציה בטמפרטורת החדר. להסרת הממברנה המגבילה הפנימית (inner limiting membrane), העבירו את כוס העין המכילה את הרשתית לצנצנת זכוכית קטנה המכילה papain, L-cysteine, EDTA ו-DNase בטמפרטורה של 37 °C למשך 20 דקות. הזרים carbogen אל התמיסה דרך המכסה, אך ללא ביצוע בועות (bubbling).עצרו את העיכול האנזימטי על ידי הנחת הרקמה בתמיסת ovomuccoid ו-BSA למשך 10 דקות ב-Earle's BSS. לאחר מכן, שטפו את הרקמה ביסודיות עם aCSF. לאחר מכן, העבירו את הרקמה למערכת האינקובציה והפחיתו את הטמפרטורה לכ-15 עד 16 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, העבירו את רקמת הרשתית למיקרוסקופ. בדלו את הרשתית מתוך גביע העין וחתכו אותה לארבעה חלקים באמצעות להב תער. אם נדרשת הרשתית כולה, בצעו ארבעה חתכים קטנים בפריפריה של הרשתית כדי לאפשר לה להישכב באופן שטוח.ניתן כעת להעביר רקמה זו למיקרוסקופ לצורך אלקטרופיזיולוגיה או לשמר אותה ב-Braincubator. הרקמה נשמרת בתא הראשי המכיל את הגשים למדידות pH וטמפרטורה. תא שני מבודד מהתא הראשי והוא נחשף לאור UVC בעוצמה של 1.1 watts במטרה להקרין חיידקים הצפים בתמיסה.השתמש במשאבה פריסטלטית להזרמת aCSF דרך שני התאים, ובפלטה קרה תרמו-אלקטרית מסוג Peltier כדי לקרר או לחמם את התא הראשי. בהליך זה, המס צבע סידן ב-DMSO כדי להכין תמיסה בריכוז של 1 millimolar. הוסף 1% pluronic acid F-127 לתערובת כדי להגיע לנפח סופי של 50 µL.לאחר מכן, בצעו סוניקציה למשך 10 דקות. הכינו תא טעינה מזכוכית עם צבע סידן מדולל ב-2.5 milliliters של aCSF כדי להגיע לריכוז סופי של 10 micromolar עבור פרוסות מוח, ו-20 micromolar עבור רשתית. עבור רשתית ופרוסות מוח מבעלי חיים צעירים, הדגירו את הדגימה באמבט למשך 45 דקות.עבור בעלי חיים בוגרים, טפטפו 25 µL של צבע ישירות על פרוסת המוח והמתינו 75 דקות כדי לאפשר חדירה טובה יותר של הצבע לשכבות העמוקות. כדי להבטיח חמצון הולם של הרקמה הטבולה במהלך דגירת הצבע, חמצנו אותה באופן רציף באמצעות carbogen דרך המכסה, אך ללא יצירת בועות. לאחר טעינת הצבע, שטפו את הרקמה ב-aCSF והעבירו אותה למערכת הדגירה.הפחית באיטיות את הטמפרטורה לכ-15 עד 16 °C עד למועד השימוש. לצורך הקלטה, הנח את הרקמה בתא הקלטה טבול תחת מיקרוסקופ, ובצע פרפוזיה עם aCSF מחומצן בקצב זרימה של 4 עד 5 mL/min. קיבע את הרקמה באמצעות נבל (harp) בהתאמה אישית.בשלב הבא, הכינו מספר פיפטות להקלטה באמצעות מושך מיקרו-פיפטות כדי להגיע להתנגדות סופית של חמישה עד שישה megaohms. מלאו פיפטה ב-3 עד 4 µL של תמיסה פנימית, ולאחר מכן הניחו את התמיסה על קרח. לאחר מכן, הדמינו את התאים באמצעות מצלמת CCD תחת IR-DIC.מקמו את הפ pipette על קרום התא באמצעות מיקרו-מניפולטור. שמרו על לחץ חיובי דרך פתח יניקה במחזיק ה-pipette. ברגע שה-pipette נמצאת על התא, הפעילו לחץ שלילי עדין על ה-pipette כדי להשיג אטם ג'יגה-אוהם (gigaohm seal).לאחר מכן, קרעו את ממבנה התא באמצעות לחץ שלילי קצר. בהמשך, התחילו הקלטה של זרם תא שלם או קיבוע מתח (voltage clamp). לצורך דימוי רציומטרי של Fura-2, השתמשו במחלף אורך גל במהירות גבוהה במיוחד כדי לספק אורכי גל עירור של 340 nanometers ו-380 nanometers.לאחר מכן, לכדו את האור שנפלט באמצעות מסנן פליטה בעזרת מצלמה דיגיטלית מהירה בעלת רגישות גבוהה. עבור אורך גל עירור בודד של Fluo-4, סננו את אור העירור באמצעות מסנן bandpass של 460 עד 490 nanometer, ואת האור הנפלט באמצעות מסנן bandpass של 515 עד 550 nanometer. לאחר העיכול, ניתן להדמיא בבירור תאי גנגליון ברשתית ותאי amacrine מוזזים תחת תאורת DIC, וניתן לסמן אותם להקלטות patch clamp ללא צורך בגרידה מוקדמת של הממברנה המגבילה הפנימית.הצגות מייצגות של הקלטות clamp של זרם מתא רשת גנגליוני מוצגות כאן. דפולריזציה של התא באמצעות פיפטת ה-patch גרמה להיווצרות פוטנציאלי פעולה תלויי-מינון, המעידים על חיוניות התאים לאחר טיפול בפפאין. הסרת ממברנת הגבול הפנימית אפשרה גם צביעה נרחבת של שכבת התאים הגנגליוניים באמצעות Fura-2 AM. והתאים הגיבו להחלת 30 millimolar של פוטסיום כלוריד בעלייה משמעותית בריכוז הסידן התאי, כפי שמעידה העלייה ביחס בין 342 ל-380 nanometer ביחס ל-F0. לאחר החלת הפוטסיום כלוריד, רמות הסידן חזרו לרמת הבסיס בעקבות הגרוי.ניתן היה לעורר את התאים לאחר מכן כדי להפיק תגובה בעוצמה דומה. יתרה מכך, תגובות אלו היו זהות בין רשתית שנמדדה פחות מארבע שעות לאחר הניתוח לבין רשתית שנמדדה יותר מ-24 שעות לאחר הניתוח. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור שרקמה עצבית חריפה (acute) אינה מוגנת סביבתית.לפיכך, בקרה הדוקה של ה-aCSF באמצעות ניטור קפדני של ה-pH, הטמפרטורה והרמות הבקטריאליות היא חיונית לשמירה על הפעילות התאית ושלמות הרשת. ניתן להשתמש בהליך זה כדי לשמר רקמה עצבית למשך יותר מ-24 שעות ללא צורך בטכניקות סטריליות או בשימוש במצעי תרבית המכילים גורמי גדילה או אנטיביוטיקה העלולים להשפיע על הפיזיולוגיה. אנו מקווים ששיטה זו תהווה את סטנדרט הזהב עבור הפרמטרים האידיאליים למקסום חיוניות הרקמה.פעולה זו מפחיתה את השונות במצב הבריאותי של הרקמה עצמה, ובהמשך מפחיתה את השונות הניסויית. שימוש בפרוטוקול פפאין לעיכול של הממברנה המגבילה הפנימית (inner limiting membrane) של הרשתית מאפשר להשיג צביעה גורפת באמצעות צבעי סידן. ניתן להשתמש בפרוטוקול זה גם כדי להשיג הקלטות תוך-תאיות ממספר נקודות מנוירונים של שכבת תאי הגנגליון.לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן לשמר רקמה חיונית למשך למעלה מ-24 שעות לצורך דימות וניסויי אלקטרופיזיולוגיה. זכרו כי עבודה עם אור על-סגול עלולה להיות מסוכנת. יש להקפיד על אמצעי זהירות, כגון הגנה על העיניים, בעת ביצוע פרוצדורה זו.

prolonged-incubation-acute-neuronal-tissue-for-electrophysiology

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

אנו מראים כיצד שינויים בריכוז התאי החופשיים הסיד ויעילות הסינפטית ניתן לפקח במקביל בהכנה של...

מעקב אחר שינויים בריכוז הסידן התאיים ויעילות הסינפטית ברכיכות<em&gt; Aplysia</em

סרטון זה מדגים שיטה לדגירת רקמה עצבית ממושכת ברשתית. משקפיים המכילים רשתית מתקבלים מעין עכבר; הקרום המגביל הפנימי (ILM) מתעכל אנזימטית כדי לחשוף את התאים העצביים של הרשתית, וכוס העין המטופלת או הרשתית המבודדת מועברת לאינקובטור מיוחד לדגירת ממושך בטמפרטורה נמוכה.

טכניקה לדגירת רקמה עצבית ממושכת של הרשתית

סרטון זה מדגים פרוטוקול לרישום מהדק טלאי של תא שלם והדמיית סידן של שני פוטונים בפרוסות בהיפוקמפוס במוח. שיטה זו מאפשרת ללמוד את הדינמיקה של Ca2+ transients המקומי (CaTs) בדנדריטים של סוגים עצביים שונים בפרוסות מוח חריפות.

יצירת תצורה של תאים שלמים להדמיית סידן דו-פוטון של פרוסות מוח

סרטון זה מדגים טכניקה למדידת פעילות עצבית בפרוסות מוח של עכבר באמצעות דימות סידן ורישומים אלקטרופיזיולוגיים. על ידי ערבוב הרקמה עם יוני אשלגן ורישום שינויים בסידן תוך תאי באמצעות הדמיה דיגיטלית במהירות גבוהה, שיטה זו חושפת תגובות עצביות בזמן אמת.

מדידת פעילות עצבית בפרוסת מוח של עכבר לאחר דגירה ממושכת

מתוארים נהלים לביצוע הקלטות בו זמנית של פוטנציאל הממברנה או זרם ושינויים בריכוז הסידן התוך תאי. נוירוני גרעין סופרכיאזמטיים ממולאים במחוון הסידן ביס-פורה-2 באמצעות אלקטרודת מהדק טלאי בכל תצורת מהדק התיקון של התא.

אלקטרו הקלטה בו זמנית ובסידן הדמיה של suprachiasmatic גרעין נוירונים

אנו מתארים את השילוב של תמונה-הפעלה מושרה UV מוקד של תרכובות נוירו פעיל עם כל תא תיקון מהדק והדמיה רב פוטון של עוברי נתרן תאיים בדנדריטים ועמוד שדרה של תאי עצב בהיפוקמפוס בחתכי רקמה חריפים של מוח העכבר.

רב פוטון תאית נתרן הדמיה בשילוב עם משחרר רפרוף מיקוד בתיווך UV של גלוטמט בCA1 פירמידת נוירונים

מערכת העצבים המעי (ENS) היא רשת של נוירונים וגליה הממוקמת בדופן המעי ושולטת ברפלקסים של המעי. פרוטוקול זה מתאר שיטות לרישום הפעילות של נוירונים מעיים וגליה בתכשירים חיים של ENS באמצעות הדמיית Ca2+.

בהדמיה 2 + Ca Situ של מערכת העצבים המעיים

אנו מציגים שיטת שילוב תאים כל תיקון-קלאמפ הקלטות והדמיה שני הפוטונים להקליט את Ca2 + שנחשולי דנדריטים עצביים במוח חריפה פרוסות.

שני הפוטונים סידן הדמיה של דנדריטים עצביים במוח פרוסות

כאן, אנו מתארים את השלבים החיוניים להקלטות תאים כל תיקון-קלאמפ זני הסובסטנציה gelatinosa (SG) נוירונים בתוך הפרוסה חוט שדרה במבחנה . שיטה זו מאפשרת את מאפייני קרום פנימי, הסינאפסית ואפיון מורפולוגי של ס ג נוירונים שילמדו.

הכנה של חוט השדרה חריפה פרוסות תאים כל תיקון-קלאמפ הקלטה בנוירונים הסובסטנציה Gelatinosa

מיקרוגלייה, תאים חיסוניים תושב של המוח, להגיב במהירות עם שינויים מורפולוגיים שינויים של סביבתם. פרוטוקול זה מתאר כיצד להשתמש מיקרוסקופ שני הפוטונים כדי לחקור את המשיכה של תהליכים microglial לכיוון סרוטונין או ATP פרוסות המוח חריפה של עכברים.

שני הפוטונים הדמיה של תהליכים Microglial המשיכה לכיוון ATP או סרוטונין המוח חריפה פרוסות

אנו מציגים פרוטוקול להכנת פרוסות חריפות מההיפוקמפוס הגבי-ביניים של עכברים. אנו משווים הכנה רוחבית זו עם חתך קורנל במונחים של איכות הקלטות ושמירה על תכונות מורפולוגיות של נוירונים מוקלטים.

הכנת פרוסות חריפות מהיפוקמפוס הגבי להקלטה של תא שלם ושחזור עצבי בGyrus דנטאטה של עכברים בוגרים

למד שיטה חדשנית לשמירה על רקמות עצביות חריפות ליותר מ-24 שעות באמצעות מערכת Braincubator. השיטה מאפשרת הקלטות אלקטרופיזיולוגיות והדמיית סידן באיכות גבוהה תוך הפחתת מספר בעלי החיים הנדרשים למחקר.

דגירה ממושכת של רקמות חריפות עצביות עבור Electrophysiology ו-הדמית סידן

גלה סרטונים נוספים