Name: מכשיר לביצוע נדידת תאים / ריפוי פצעים צלחת 96-ובכן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: למדו פרוטוקול לביצוע מבחן נדידת תאים בפורמט 96-באר באמצעות מכשיר מכני ליצירת שריטות. השיטה מאפשרת מעקב אחר השפעת טיפולים שונים על נדידת תאים בצורה יעילה ומהירה ללא ציוד יקר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מבקשים להודות למר תם Po ליונג, מר וונג צ&#39;י Kin ואת הצוות הטכני של סדנת הפקולטה למדעי הטבע, אוניברסיטת המטביל הונג קונג עבור כישורים טכניים שלהם וייעוץ בקבלת האבטיפוס של wounder זה.

1. מבוא החלק Wounder (איור 1) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את בעל פינים ידי תיקון סיכות ופציעתם במרחקים שווים. החזק את הטיפים פיפטה ולהתאים את גובה הטיפ על ידי הזזת הסיכות ופציעתם מתכווננת מעלה ומטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאימו את המנחה-בר מתכווננת על מותגים שונים של צלחות תרבות 96-היטב להבטיח שהאזור ופציעתם נמצא בעמדה קבועה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את הסיכה ופציעתם מתכווננת על ידי הידוק בורג hex. תקן את הבר המנחה בעמדה ידי הידוק כמוס ראשי קץ hex בשני הקצוות. </li></ol> 2. הגדרת הרוחב של מחזיק הפין (איור 2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את כמוסות ראשי קץ hex עם מפתח ברגים hex M5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מספר מתאים של התאמת טבעות לשני הצדדים של בעל פינים כך הסורגים המנחים להתאים באופן מושלם עם הרוחב של הצלחת התרבות 96-היטב. הערה: קורנינג Iwaki צלחות דורשים 1 זוג טבעות גדולות 1 זוג טבעות קטנות. פלקון pl Nuncאטס צריך 1 זוג טבעות גדולות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדקו את ראשי קץ hex caps לתקן הבר המנחה. </li></ol> 3. התאמת ברי המנחים (איור 3) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הסיכות ופוצעים עם טיפי פיפטה פלסטיק 10 μL סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שחרר את כמוסות ראשי קץ hex עם מפתח ברגים hex M5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את wounder וטובל את הסיכות ופציעתם לתוך עמודה אחת של צלחת תרבות 96-היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הגובה של הסורגים המנחים עד כל הטיפים בקושי לגעת בתחתית הבארות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדק את הכמוסות ראש קץ hex. ודא כי wounder עכשיו מתאים באופן מושלם על הצלחת התרבות כי הפינים-ממוצבים היטב באמצע הבארות. </li></ol> 4. כיול של פיני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזק את wounder בניצב משטח שטוח סטרילית (צלחת פטרי כלומר) לשחרר את כל הברגים hex עם מפתח ברגים hex M3. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקש על wounder עד כל הטיפים שווה לגעת משטח סטרילי שטוח. &lt;/ Li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזק את ברגי hex שוב לנעול את הסיכות בעמדה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את השוויון של כל קצה על ידי קשה על wounder בעדינות על המשטח סטרילי השטוח. </li></ol> 5. וגרד תא חד שכבתי (איור 4) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרע אנושי לתאי אנדותל כלי הדם הטבורי על צלחת תרבית תאים 0.1% ג&#39;לטין מצופה 96-היטב. תאי תרבות בינונית 199 בתוספת 20% בסרום שור עובר מומת חום, 1% פניצילין / סטרפטומיצין ו הפרין 0.09 g / L. שמור על תאים בתוך חממה humidified עם פחמן דו חמצני 5% ב 37 ºC לילה לפני בשימוש. תאים צריכים להגיע ל -100% confluency לפני ופצע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח את הטיפים ופציעתם על השמאלי ביותר (או הימני ביותר) הצד של כל טוב בתוך באותו הטור של הצלחת התרבות. חלק את wounder פני לצד השני של הבאר; לוודא את הטיפים ופציעתם נוגעות בתחתית הבאר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על מגרד (שלב 5.2) עבור כל העמודות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר פציעה, שנזרק tהוא בינוני בכל טוב ולהחליף עם תרכובות בדיקות המכיל בינוני טרי. </li></ol> 6. קליטת נתונים וניתוח תמונה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונה כולה גם עם הפצע מכני על monolayer התא באמצעות מיקרוסקופ צריכת חשמל נמוכה עם מצלמה דיגיטלית (אובייקטיבי למשל 10X) מיד לאחר ופצעו (t = 0 ח). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף תרכובות בדיקה אם רוצה דגירה במשך האורך הרצוי של זמן. תמונה כולה היטב עם אזור הפצע שוב לאחר זמן דגירה הרצוי (t = Δh). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות תוכנת ניתוח תמונה כגון ImageJ ( <a href="https://imagej.nih.gov/ij/">https://imagej.nih.gov/ij/</a> ), למדוד את השטח הפצוע על התמונה באמצעות כלי ביד החופשי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב אחוזי סגירת הפצע: <img alt="משוואה" src="/files/ftp_upload/55411/55411eq1.jpg" /></li></ol>

<ol><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li>
<li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prespecification+and+plasticity%3A+shifting+mechanisms+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li>
<li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li>
<li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A. Jr, Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration%3A+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li>
<li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound%3A+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li>
<li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980(2015).</li>
<li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing%2C+a+comparsion+of+image-based+readout+methods%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21(2004).</li>
<li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li>
<li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration%2F+wound+healing+in+96-well+plates%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li>
<li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg%281%29+in+vivo+and+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li>
<li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li>
</ol>

החוקרים מצהירים כי אין להם אינטרסים כלכליים מתחרים.

יש wounder התא שלנו כמה תכונות ייחודיות בפתרון הבעיות של מבחני נדידת תאים מסורתיים. Wounder התא מכני 8 ערוצים עשוי נירוסטה ציון גבוה (פלדה 304) עם אורך חיים ארוך כי ניתן לעקר על ידי מעוקר. כמעט כל המותגים המסחריים של תרבות צלחות 96-היטב הקיימים בשוק ניתן להשתמש עם wounder התא מכני זה בגלל הבר המנחה מתכווננת. העיצוב של הבר מנחה מתכווננת גם מבטיח כי האזור המגרד נמצא במרכז של כל טוב. הפצע בעמדה מרכזית של הבאר יכול להקל לכידת תמונה באמצעות מיקרוסקופ. התמונות להחזיק כמה וריאציות בעוד נ...

נדידת תאים ממלאת תפקיד חשוב בתהליכים תאיים, כגון עובר, נוירוגנזה, אנגיוגנזה, ריפוי פצעים, תיקון רירי, אפיתל mesenchymal-מעבר בפיתוח נורמלי למחלת מצב 1. זהו תהליך מסובך שכרוך התיאום של רבי אירועים בין-תוך תאי כולל אינטראקציות מולקולת איתות, קיטוב תא, ארגון מחדש cytoskeletal, שיפוץ מטריקס, בליטת הממברנה אפנון הידבקות תאי תאים דינמיים 2. על ידי לימוד נדידת תאים, הגילוי והאימות של כימיקלים או ביומולקולות מובילה תנועת תא הביוכימיים הקשורים אליה ניתן לקבוע. תהליך בסיסי זה יכול לשמש לטובה כמו פרוקסי עבור יישומים שונים, כגון טיפול במחלות התרופה מיקוד. את assay והפצע הוא אחת מבחני נדידת תאים 3. הנה,מדגם בודד של תאים יוסר באופן חלקי על ידי אמצעים מכאניים לייצר אזור ערומים שבו תאים יעברו כדי לכסות את האזור. אחוז ההחלמה בנקודת זמן מסוימת יהיה פיקוח. בעת טיפול מספר גדול של דגימות, בעיות כגון עלות הניסיונית בין זיהום בתוך דגימות יכולות להיות בעייתיות. למרות כלי מבחנים מסחריים רבים זמינים לחקר תא גירה 4, 5, 6, רבים מהם נדרשים ציוד יקר ומתוחכם ושיפורים נדרשים עדיין. מסיבות אלו, wounder תא מכאני 8 ערוצים (איור 1) מפותח. 8 ערוצי wounder התא המכאני שלנו מאגד כמה תכונות ייחודיות בפתרון הבעיות הנ&quot;ל. הוא מספק את הגמישות לבצע נדידת תאים / ופצע מבחנים בפורמט צלחת תרבות 96-היטב. ג.א. מתכווננתעיצוב בר iding מבטיח שאזור השריטה נמצא במצב המרכזי של כל טוב. כמו כן, בעיצומה של הברים המנחים יכול להיות מותאם כך wounder ישימה עבור מותגים שונים של צלחות תרבית. לבסוף, עיצוב הסיכה ופציעתם מתכווננת מאפשר גם איש קשר של הטיפים פיפטה עם פני צלחת התרבות להשיג ופציעתם סימולטני לשחזור 7, 8.

<table><tbody><tr><td>צלחת תרבית תאים 96 בארות</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td>ניתן להשתמש גם במותגים אחרים של צלחת תרבית תאים 96 בארות</td></tr><tr><td>קצות פיפטה P10</td><td>Axygen</td><td>301-03-051</td><td>קצה פיפטה P10 קצר קל יותר ליצור פצע ברור</td></tr><tr><td></td><td>Wounder R& P Technology Limited</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>Sigma</td><td>M2520-1L</td><td>לתרבית תאים של תאי אנדותל וריד טבורי אנושי. השתמש במדיום תרבית מתאים ומצב עבור סוג אחר של תאים.</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td>לתרבית תאים של תאי אנדותל וריד טבורי אנושי. השתמש במדיום תרבית מתאים ומצב לסוג אחר של תאים.</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>לתרבית תאים של תאי אנדותל וריד טבורי אנושי. השתמש במדיום תרבית מתאים ומצב עבור סוג אחר של תאים.</td></tr><tr><td>מלח נתרן הפרין מרירית מעי חזיר</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td>לתרבית תאים של תאי אנדותל וריד טבורי אנושי. השתמש במדיום תרבית מתאים ומצב לסוג אחר של תאים.</td></tr><tr><td>ג'לטין מעור בקר</td><td>Sigma</td><td>G9391</td><td>לתרבית תאים של תאי אנדותל של וריד הטבור האנושי. השתמש במדיום תרבית מתאים ומצב עבור סוג אחר של תאים.</td></tr></tbody></table>

מכשיר לביצוע נדידת תאים / ריפוי פצעים צלחת 96-ובכן

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

הגירת התא / ופצע assay היא שיטה נפוצה ללמוד נדידת תאים ותהליכים ביולוגיים אחרים, כגון אנגיוגנזה גרורה של גידולים. ב assay זה, תאים גדלים להקים monolayer ומחובר פצע מכנים נוצר על ידי גירוד עם התקן. ואז שיעור ההגירה של התאים לעבר אזור הערומים ניתן לנטר באמצעות הדמיה. wounder המכאני 8 הערוצים שלנו נועד להתמודד עם רוב הבעיות קשורות assay נדידת תאים. ראשית, wounder שלנו ניתן לעקר בקלות על ידי מעוקר או בחומרי חיטוי נפוץ. שנית, הפינים מתכווננת הבודדים אפילו לאפשר מגע עם צלחת תרבית תאים כך פצעים חדים לשחזור ניתן ליצור. שלישית, הברים המנחים משני צידי wounder ולהבטיח את מעמדה ופציעתם עקבית בכל טוב. שימוש טיפי פיפטה פלסטיק חד פעמיים עבור ופצע עוד יכול לספק טיפול טוב יותר של wounder וכן למזער צולבות contaminatיוֹן. לסיכום, wounder התא שלנו יכול לספק לחוקרים עם מכשיר ידידותי למשתמש לשחזור עבור ביצוע assay נדידת תאים באמצעות צלחת תרבות 96-היטב הסטנדרטית.

8 ערוצים זה wounder המכאני בנוי לגרד בשכבת תא על מנת לבצע את assay נדידת תאים. זהו מכשיר ידידותי למשתמש, כי יכול לבצע מבחני מגרד תא 96-גם צלחות בפחות מדקה ללא הכשרה מיוחדת. Wounder זה יכול להציג אזורי פצע על משטחי תא ברוחב אחיד של כ -600 מיקרומטר עם קצוות חדים (איורים 5, 6). רוחבו של פצעים תלוי המותג של טיפים פיפטה ואת הביצועים של המשתמש. מגוון זה של רוחב פצע מתאים תמונה נפוצה לכיד בהגדלת צריכת חשמל נמוכה (...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבצע assay נדידת תאי תפוקה למחצה גבוהה על צלחת תרבית תאי 96-היטב. פרוטוקול זה הוא שיטה מהירה, פשוטה וחסכונית ליצור פצעי שריטה עקביים על monolayer תא.

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

המטרה הכוללת של מכשיר זה ליצירת פצעים תאיים מכניים בעל שמונה תעלות היא לכמת את השפעת הטיפול על נדידה של תאים באמצעות בדיקת ריפוי פצעים (wound-healing assay) באופן מהיר ובקיבולת גבוהה למחצה, ללא שימוש בציוד יקר ומסובך. נדידה של תאים היא תהליך תאי חשוב בתנאים פיזיולוגיים שונים ובתנאים פיזיולוגים עוצמתיים. בדיקות ריפוי פצעים in vitro משמשות במחקרים שונים, כולל מחקרי סרטן, מחקרים וסקולריים ומחקרים דרמטולוגיים.היתרון המרכזי של שיטה זו הוא שניתן לנטר את ההשפעה על נדידת תאים בלוח של 96 מסילות, מה שמאפשר לבחון תנאי טיפול שונים בו-זמנית. את הפרוצדורה ידגים Ka Chun Ng, סטודנט לתארים מתקדמים מהמעבדה שלנו. כדי להתחיל בניסוי, הכינו את מחזיק הפינים על ידי קיבוע פיני הפציעה במרווחים שווים.החזיקו את קצות הפיפטות והזיזו את פיני הפציעה המתכווננים למעלה ולמטה כדי להתאים את גובה הקצה. לאחר מכן, התאימו את מוט ההנחיה המתכוונן על לוחות תרבית של 96 בארות ממותגים שונים, וודאו שאתר הפציעה נמצא במיקום קבוע. קבעו את פין הפציעה המתכוונן על ידי הידוק בורג האלן.קבע את מוט ההנחיה במקומו על ידי הידוק ברגי ראש המשש (hex socket head caps) בשני הקצוות. השתמש במפתח אלן M5 כדי לשחרר את ברגי הראש המשש. הכנס מספר מתאים של טבעות כיוון לשני צדי מחזיק הפינים, כך שמוטות ההנחיה יתאימו בדיוק לרוחב פלטת התרבית בעלת 96 הבארים.לאחר מכן, הדק את ברגי ראש המרובע (hex socket head caps) כדי לקבע את מוט ההנחיה. התחל בכיוון מוטות ההנחיה על ידי התאמת פיני הפציעה עם טיפים של פיפט פלסטיק סטריליים בנפח 10-microliter. לאחר מכן, שחרר את ברגי ראש המרובע באמצעות מפתח אלן M5.החזיקו את מכשיר הפציעה (wounder) וטבלו את סיכות הפציעה לתוך עמודה אחת של פלטת תרבית בעלת 96 בארות. לאחר מכן, כווננו את גובה מוטות ההנחיה עד שכל הקצוות נוגעים קלות בתחתית הבארות. הדקו את ברגי ראש המשש (hex socket head caps).וודאו כעת שהמכשיר ליצירת הפצעים (wounder) מתאים באופן מושלם לפיתח התרבית ושהפינים ממוקמים היטב במרכז הבארות. החזיקו את המכשיר בניצב למשטח סטרילי ושטוח, כגון צלחת פטרי, ושחררו את כל ברגי המשש באמצעות מפתח אלן M3. הקישו על המכשיר עד שכל הקצוות נוגעים במשטח באופן אחיד.לאחר שהקצוות נוגעים במשטח באופן אחיד, הדק שוב את ברגי המשש (hex screws) כדי לנעול את הפינים במקומם. לאחר מכן, בדוק את מידת האחידות של כל קצה על ידי הקשה עדינה של מכשיר הפציעה (wounder) על משטח סטרילי שטוח. זרע תאי אנדותל וסקולריים של חבל טבילה אנושי על פלטת תרבית תאים של 96 בארות מצופה ג'לטין בריכוז 0.1%.תרבתו את התאים במדיום 199 מועשר ב-20% fetal bovine serum שעבר ביטול פעילות בחום, 1% penicillin streptomycin, ו-0.09 grams per liter heparin. החזיקו את התאים באינקובטור לח עם 5% carbon dioxide ב-37 degrees Celsius למשך לילה לפני השימוש. ברגע שהתאים הגיעו ל-100% confluency, מקמו את קצות הפציעה (wounding tips) בצד השמאלי ביותר של כל באער בתוך אותה עמודה של פלטת התרבית.החליקו את מכשיר הפציעה לצד השני של הבאר. ודאו שקצות הפציעה נוגעים בתחתית הבאר. כדי להבטיח שהפצע בכל באר של cell molinar יהיה ממורכז ובאותו כיוון, הניפו את מכשיר הפ찌עה כך שיחצה את הבאר עד לקצה השני.חזרו על פעולת השריטה עבור כל העמודות. לאחר הפציעה, השליכו את המצע מכל באר והחליפו אותו במצע טרי המכיל את התרכובות הנבדקות. לאחר מכן, עברו לשלב רכישת הנתונים וניתוח התמונות.תמונות מייצגות של שורה ועמודה של בארות מיד לאחר ביצוע שריטה מאפשרות ניתוח כמותי של רוחב כל פצע. תמונות הפצעים התקבלו מתאי אנדותל של וריד טביליות אנושי ומפיברובלסטים של עור אנושי. הקו המקווקו מציין את אזור הפצע והקו הרציף מציין את אזור נדידת התאים.לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה כיצד להשתמש במכשיר זה לביצוע בדיקת ריפוי פצעים (wound-healing assay) בלוחית של 96 בארות באופן חצי-גבוה-תפוקה (semi-high throughput), ולהבטיח שכל בארה נשרטת על ידי כלי השריטה (wounder).

a-device-for-performing-cell-migrationwound-healing-in-a-96-well-plate

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

בשימוש נפוץ, שיטות נגישות ביותר לבחינת נדידת תאים ופלישה במבחנה מתוארות. השיטה הראשונה היא assay סגירת פצע תא המודד את תנועתיות תא. השיטה השנייה היא assay ההגירה והפלישה transwell שמעריך את chemotactic וקיבולת פולשני של תאים.

נדידת תאים במבחנה ומבחני פלישה

MRP4 מסדיר אירועי איתות נוקלאוטיד תלוי מחזוריים שונים, כולל תפקיד הובהר לאחרונה נדידת תאים. אנו מתארים גישה ישירה, אך רבה לפענח את המטרות המולקולריות במורד הזרם של MRP4 וכתוצאה מכך ההזדהות של interactome MRP4 ייחודי שמנגן תפקידי מפתח בוויסות מכוונת-הקנס של הגירה פיברובלסטים.

שיטות לחקר Mrp4 המכילים מכלולים Macromolecular בחוק הסדרת פיברובלסטים הגירה

המטרה של פרוטוקול זה היא להעריך את ההשפעה של גורמים פרו - ו אנטי - migratory על נדידת תאים בתוך מטריצה תלת מימדי פיברין.

אפיון נדידת תאים בתוך תלת מימדי במבחנה פצע סביבות

המחקר מדווח על שתי שיטות שונות לניתוח של הפלישה תא והעברה: וזמינותו קאמרית בוידן, במבחנה וידאו מבוסס-מיקרוסקופ ריפוי פצע וזמינותו. הפרוטוקולים עבור שני ניסויים אלה מתוארים, היתרונות והחסרונות שלהם מושווים.

הערכה של הפלישה התא, תהליך ההעברה: השוואה של השריטה מבוסס-מיקרוסקופ וידאו פצע Assay ואת וזמינותו קאמרית בוידן

כתב יד זה מתאר איך חתך דמוי נגעים על monolayers בתרבית תאים אפיתל בנוחות דגם פצע ריפוי במבחנה, ומאפשר הדמיה על ידי קונאפוקלית או סריקה מיקרוסקופ לייזר, אשר יכול לספק באיכות גבוהה נתונים כמותיים ואיכותיים ללמוד בהתנהגות התא והן את המנגנונים המעורבים בהעברה.

מיקרוסקופ המבוסס על שיטות להערכה של נדידת תאים אפיתל במהלך במבחנה ריפוי הפצע

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך את ההשפעה של פפטידים על ההעברה של תאי אפיתל כנגד ברונכיט. שיטה זו מאפשרת הקניית מהיר ולא מאוד לשחזור נתונים כמותיים על מהירות הסגר ההעברה וגמר התא.

הרומן במבחנה פצע ריפוי הנועד להעריך את נדידת תאים

בפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה משולבת חוקרים נדידת תאים סרטן ופלישה על פלטפורמה אחת בזמן אמת, מתן אפשרות היעילה הדירים בקלות ללמוד ניידות תא ו מורפולוגיה.

זרימת עבודה פשוטה הגירה/הפלישה באמצעות Imager אוטומטיות של תאים חיים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור התיקון שריטות מבחנה באמצעות הפיברוכדורים העיקריים עבור vivo העור הפצע הריפוי הטיפול בעכברים. שניהם מספר שיטות ברורות כדי להעריך בתוך מבחנה וריפוי פצעים vivo.

שיטת העברת שריטות וחדר מתקפל לחלל מתורבת בניתוח Vivo של ריפוי פצעים

במאמר זה, עלון מודפס תלת-ממדי שעוצב לאחרונה מוצג כמודל של תרבית משותפת ומאומת באמצעות המחקר של התקשורת הבין-תאית הפרקרינית בין תאי אנדותל וקרטינוציטים.

עלון חדשני המודפס בתלת-ממד ונועד לאפשר תרביות תאים דו-ממדיות ותלת-ממדיות פשוטות

באמצעות שילוב של עיצוב חוויית אינטראקציה וניתוח דרישות משתמש, אנו מציגים מגרד תאים חדשני המשפר את מבחני ריפוי הפצעים התאיים במונחים של שחזור, אמינות, מעשיות, שלמות התא וחוויית המשתמש.

כלי ליצירת רווחים יציבים וניתנים לשחזור ללא תאים לשיפור האמינות של בדיקת ריפוי פצעים בתאים

פרוטוקול להערכה כמותית של נדידת תאים תלת מימדיים בתוך ולתוך הממשק של הידרוג'לים גרגירים מוצג כאן.

כימות נדידת תאים תלת מימדית בתוך ובתוך ביו-חומרים הידרוג'ל גרגירים

למדו פרוטוקול לביצוע מבחן נדידת תאים בפורמט 96-באר באמצעות מכשיר מכני ליצירת שריטות. השיטה מאפשרת מעקב אחר השפעת טיפולים שונים על נדידת תאים בצורה יעילה ומהירה ללא ציוד יקר.

מכשיר לביצוע נדידת תאים / ריפוי פצעים צלחת 96-ובכן

גלה סרטונים נוספים