Name: באמצעות חיישנים ביולוגיים מבוססי Enzyme למדוד טוניק ו phasic גלוטמט בעכברי מודל אלצהיימר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 46 s
Description: למד למדוד רמות גלוטמט טוניות ופאזיות בהיפוקמפוס של עכברים טרנסגניים עם אלצהיימר באמצעות מערכי מיקרואלקטרודות מבוססות אנזימים. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת בחללים מוחיים ספציפיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי למדעי הרפואה הכללית (MNR; U54GM104942), NIA (MNR; R15AG045812), איגוד האלצהיימר (MNR; NIRG-12-242,187), גרנט הסנאט סגל מחקר WVU (MNR), ו WVU PSCOR גרנט (MNR).

<ol><li>Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+concentrations+of+free+amino+acids+and+other+electrolytes+in+cerebrospinal+fluid%2C+in+vivo+dialysate+of+brain%2C+and+blood+plasma+of+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">The concentrations of free amino acids and other electrolytes in cerebrospinal fluid, in vivo dialysate of brain, and blood plasma of the dog.</a> J Neurochem. 13 (11), 1057-1067 (1966).</li>
<li>Cavus, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+metabolites+in+the+cortex+and+hippocampus+of+epileptic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Extracellular metabolites in the cortex and hippocampus of epileptic patients.</a> Ann Neurol. 57 (2), 226-235 (2005).</li>
<li>Montgomery, A. J., Lingford-Hughes, A. R., Egerton, A., Nutt, D. J., Grasby, P. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17492764">The effect of nicotine on striatal dopamine release in man: A [11C]raclopride PET study.</a> Synapse. 61 (8), 637-645 (2007).</li>
<li>Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2953244/">Overview of brain microdialysis.</a> Curr Protoc Neurosci. , Chapter 7 Unit 7.1 (2009).</li>
<li>Hu, S., Sheng, W. S., Ehrlich, L. C., Peterson, P. K., Chao, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokine+effects+on+glutamate+uptake+by+human+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimmunomodulation%22%5BJournal%5D)">Cytokine effects on glutamate uptake by human astrocytes.</a> Neuroimmunomodulation. 7 (3), 153-159 (2000).</li>
<li>He, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+association+between+CCL2+polymorphisms+and+drug-resistant+epilepsy+in+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Epileptic+Disord%22%5BJournal%5D)">The association between CCL2 polymorphisms and drug-resistant epilepsy in Chinese children.</a> Epileptic Disord. 15 (3), 272-277 (2013).</li>
<li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+High-Frequency+Mesoscale+Intracortical+Maps+Using+the+Genetically+Encoded+Glutamate+Sensor+iGluSnFR%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Resolution of High-Frequency Mesoscale Intracortical Maps Using the Genetically Encoded Glutamate Sensor iGluSnFR.</a> J Neurosci. 36 (4), 1261-1272 (2016).</li>
<li>Marvin, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+fluorescent+probe+for+visualizing+glutamate+neurotransmission%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">An optimized fluorescent probe for visualizing glutamate neurotransmission.</a> Nat Methods. 10 (2), 162-170 (2013).</li>
<li>Hefendehl, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+synaptic+glutamate+transporter+dysfunction+in+vivo+to+regions+surrounding+Abeta+plaques+by+iGluSnFR+two-photon+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mapping synaptic glutamate transporter dysfunction in vivo to regions surrounding Abeta plaques by iGluSnFR two-photon imaging.</a> Nat Commun. 7, 13441(2016).</li>
<li>Hinzman, J. M., Thomas, T. C., Quintero, J. E., Gerhardt, G. A., Lifshitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruptions+in+the+regulation+of+extracellular+glutamate+by+neurons+and+glia+in+the+rat+striatum+two+days+after+diffuse+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Disruptions in the regulation of extracellular glutamate by neurons and glia in the rat striatum two days after diffuse brain injury.</a> J Neurotrauma. 29 (6), 1197-1208 (2012).</li>
<li>Thomas, T. C., Hinzman, J. M., Gerhardt, G. A., Lifshitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypersensitive+glutamate+signaling+correlates+with+the+development+of+late-onset+behavioral+morbidity+in+diffuse+brain-injured+circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Hypersensitive glutamate signaling correlates with the development of late-onset behavioral morbidity in diffuse brain-injured circuitry.</a> J Neurotrauma. 29 (2), Epub 2011 Dec 2011 187-200 (2011).</li>
<li>Hinzman, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffuse+brain+injury+elevates+tonic+glutamate+levels+and+potassium-evoked+glutamate+release+in+discrete+brain+regions+at+two+days+post-injury%3A+an+enzyme-based+microelectrode+array+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Diffuse brain injury elevates tonic glutamate levels and potassium-evoked glutamate release in discrete brain regions at two days post-injury: an enzyme-based microelectrode array study.</a> J Neurotrauma. 27 (5), 889-899 (2010).</li>
<li>Stephens, M. L., Quintero, J. E., Pomerleau, F., Huettl, P., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+glutamate+release+in+the+CA3+and+dentate+gyrus+of+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in glutamate release in the CA3 and dentate gyrus of the rat hippocampus.</a> Neurobiol Aging. 32 (5), Epub 2009 Jun 2017 811-820 (2009).</li>
<li>Nickell, J., Salvatore, M. F., Pomerleau, F., Apparsundaram, S., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+plasma+membrane+surface+expression+of+GLAST+mediates+decreased+glutamate+regulation+in+the+aged+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Reduced plasma membrane surface expression of GLAST mediates decreased glutamate regulation in the aged striatum.</a> Neurobiol Aging. 28 (11), 1737-1748 (2006).</li>
<li>Hascup, E. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3970435/">An allosteric modulator of metabotropic glutamate receptors (mGluR(2) ) (+)-TFMPIP, inhibits restraint stress-induced phasic glutamate release in rat prefrontal cortex.</a> J Neurochem. 122 (2), Epub 02012 Jun 07713 619-627 (2012).</li>
<li>Rutherford, E. C., Pomerleau, F., Huettl, P., Stromberg, I., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+second-by-second+measures+of+L-glutamate+in+the+central+nervous+system+of+freely+moving+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Chronic second-by-second measures of L-glutamate in the central nervous system of freely moving rats.</a> J Neurochem. 102 (3), 712-722 (2007).</li>
<li>Matveeva, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+vesicle-associated+membrane+protein+2+expression+leads+to+a+kindling-resistant+phenotype+in+a+murine+model+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Reduction of vesicle-associated membrane protein 2 expression leads to a kindling-resistant phenotype in a murine model of epilepsy.</a> Neuroscience. 202, Epub 2011 Dec 2013 77-86 (2011).</li>
<li>Matveeva, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kindling-induced+asymmetric+accumulation+of+hippocampal+7S+SNARE+complexes+correlates+with+enhanced+glutamate+release%5BTitle%5D)+AND+%22Epilepsia%22%5BJournal%5D)">Kindling-induced asymmetric accumulation of hippocampal 7S SNARE complexes correlates with enhanced glutamate release.</a> Epilepsia. 53 (1), Epub 02011 Dec 0334 157-167 (2012).</li>
<li>Hunsberger, H. C., Rudy, C. C., Batten, S. R., Gerhardt, G. A., Reed, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P301L+tau+expression+affects+glutamate+release+and+clearance+in+the+hippocampal+trisynaptic+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">P301L tau expression affects glutamate release and clearance in the hippocampal trisynaptic pathway.</a> J Neurochem. 132 (2), 169-182 (2015).</li>
<li>Hunsberger, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Riluzole+rescues+glutamate+alterations%2C+cognitive+deficits%2C+and+tau+pathology+associated+with+P301L+tau+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Riluzole rescues glutamate alterations, cognitive deficits, and tau pathology associated with P301L tau expression.</a> J Neurochem. 135 (2), 381-394 (2015).</li>
<li>Hunsberger, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripherally+restricted+viral+challenge+elevates+extracellular+glutamate+and+enhances+synaptic+transmission+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Peripherally restricted viral challenge elevates extracellular glutamate and enhances synaptic transmission in the hippocampus.</a> J Neurochem. , (2016).</li>
<li>Obrenovitch, T. P., Urenjak, J., Zilkha, E., Jay, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitotoxicity+in+neurological+disorders--the+glutamate+paradox%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Excitotoxicity in neurological disorders--the glutamate paradox.</a> Int J Dev Neurosci. 18 (2-3), 281-287 (2000).</li>
<li>Hillered, L., Vespa, P. M., Hovda, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+neurochemical+research+in+acute+human+brain+injury%3A+the+current+status+and+potential+future+for+cerebral+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Translational neurochemical research in acute human brain injury: the current status and potential future for cerebral microdialysis.</a> J Neurotrauma. 22 (1), 3-41 (2005).</li>
<li>Burmeister, J. J., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-referencing+ceramic-based+multisite+microelectrodes+for+the+detection+and+elimination+of+interferences+from+the+measurement+of+L-glutamate+and+other+analytes%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Self-referencing ceramic-based multisite microelectrodes for the detection and elimination of interferences from the measurement of L-glutamate and other analytes.</a> Anal Chem. 73 (5), 1037-1042 (2001).</li>
<li>Burmeister, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+ceramic-based+multisite+microelectrode+for+rapid+measurements+of+L-glutamate+in+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved ceramic-based multisite microelectrode for rapid measurements of L-glutamate in the CNS.</a> J Neurosci Methods. 119 (2), 163-171 (2002).</li>
<li>Diamond, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deriving+the+glutamate+clearance+time+course+from+transporter+currents+in+CA1+hippocampal+astrocytes%3A+transmitter+uptake+gets+faster+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Deriving the glutamate clearance time course from transporter currents in CA1 hippocampal astrocytes: transmitter uptake gets faster during development.</a> J Neurosci. 25 (11), 2906-2916 (2005).</li>
<li>Greene, J. G., Borges, K., Dingledine, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+transcriptional+neuroanatomy+of+the+rat+hippocampus%3A+evidence+for+wide-ranging%2C+pathway-specific+heterogeneity+among+three+principal+cell+layers%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Quantitative transcriptional neuroanatomy of the rat hippocampus: evidence for wide-ranging, pathway-specific heterogeneity among three principal cell layers.</a> Hippocampus. 19 (3), 253-264 (2009).</li>
<li>Borland, L. M., Shi, G., Yang, H., Michael, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltammetric+study+of+extracellular+dopamine+near+microdialysis+probes+acutely+implanted+in+the+striatum+of+the+anesthetized+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Voltammetric study of extracellular dopamine near microdialysis probes acutely implanted in the striatum of the anesthetized rat.</a> J Neurosci Methods. 146 (2), Epub 2005 Mar 2005 149-158 (2005).</li>
<li>Jaquins-Gerstl, A., Michael, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+brain+penetration+injury+associated+with+microdialysis+and+voltammetry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of the brain penetration injury associated with microdialysis and voltammetry.</a> J Neurosci Methods. 183 (2), Epub 2009 Jun 2025 127-135 (2009).</li>
<li>Azbill, R. D., Mu, X., Springer, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Riluzole+increases+high-affinity+glutamate+uptake+in+rat+spinal+cord+synaptosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Riluzole increases high-affinity glutamate uptake in rat spinal cord synaptosomes.</a> Brain Res. 871 (2), 175-180 (2000).</li>
<li>Gourley, S. L., Espitia, J. W., Sanacora, G., Taylor, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antidepressant-like+properties+of+oral+riluzole+and+utility+of+incentive+disengagement+models+of+depression+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Antidepressant-like properties of oral riluzole and utility of incentive disengagement models of depression in mice.</a> Psychopharmacology (Berl). 219 (3), Epub 2011 Jul 2021 805-814 (2011).</li>
<li>Frizzo, M. E., Dall'Onder, L. P., Dalcin, K. B., Souza, D. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Riluzole+enhances+glutamate+uptake+in+rat+astrocyte+cultures%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Riluzole enhances glutamate uptake in rat astrocyte cultures).</a> Cell Mol Neurobiol. 24 (1), 123-128 (2004).</li>
<li>Fumagalli, E., Funicello, M., Rauen, T., Gobbi, M., Mennini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Riluzole+enhances+the+activity+of+glutamate+transporters+GLAST%2C+GLT1+and+EAAC1%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Riluzole enhances the activity of glutamate transporters GLAST, GLT1 and EAAC1.</a> Eur J Pharmacol. 578 (2-3), Epub 2007 Oct 2025 171-176 (2008).</li>
<li>Day, B. K., Pomerleau, F., Burmeister, J. J., Huettl, P., Gerhardt, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microelectrode+array+studies+of+basal+and+potassium-evoked+release+of+L-glutamate+in+the+anesthetized+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Microelectrode array studies of basal and potassium-evoked release of L-glutamate in the anesthetized rat brain.</a> J Neurochem. 96 (6), Epub 2006 Jan 1625 1626-1635 (2006).</li>
<li>Kane, R. L., Martinez-Lopez, I., DeJoseph, M. R., Vina, J. R., Hawkins, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Na%28%2B%29-dependent+glutamate+transporters+EAAT1%2C+EAAT2%2C+and+EAAT3%29+of+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Na(+)-dependent glutamate transporters EAAT1, EAAT2, and EAAT3) of the blood-brain barrier.</a> J Biol Chem. 274 (45), 31891-31895 (1999).</li>
<li>Ramsden, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+neurofibrillary+tangle+formation%2C+neuron+loss%2C+and+memory+impairment+in+a+mouse+model+of+human+tauopathy+%28P301L%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Age-dependent neurofibrillary tangle formation, neuron loss, and memory impairment in a mouse model of human tauopathy (P301L).</a> J Neurosci. 25 (46), 10637-10647 (2005).</li>
<li>Oddo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Triple-transgenic+model+of+Alzheimer%27s+disease+with+plaques+and+tangles%3A+intracellular+Abeta+and+synaptic+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Triple-transgenic model of Alzheimer's disease with plaques and tangles: intracellular Abeta and synaptic dysfunction.</a> Neuron. 39 (3), 409-421 (2003).</li>
<li>Zang, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+reveals+neuronal+degeneration+in+the+brainstem+of+the+superoxide+dismutase+1+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging reveals neuronal degeneration in the brainstem of the superoxide dismutase 1 transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Eur J Neurosci. 20 (7), 1745-1751 (2004).</li>
</ol>

GG הוא הבעלים הבלעדי של Quanteon, LLC שעושה מערכת הקלטה FAST-16 המשמש למדידות גלוטמט במחקר זה. JEQ הוא יועץ שילם עבור Quanteon.

טכניקת MEA מאפשרת מדידה של קינטיקה המהירה של שחרור הנוירוטרנסמיטר ספיג במבחנה ובחי. לפיכך, הטכנולוגיה מייצרת מגוון רחב של פלט נתונים כולל רמות הנוירוטרנסמיטר טוניק, שחרור הנוירוטרנסמיטר עורר, וסילוק הנוירוטרנסמיטר. עם זאת, בגלל השימוש MEAs היא הליך מורכב יחסית, ישנם גורמים רבים שעלולים צריך להיות מותאם לשימוש מוצלח. לדוגמה, במהלך הכיול, אפשר לציין כי אין גל אות (מסך אוסצילוסקופ) או כי התגובות לגירויים הן מינימליות, או נעדר. ככל הנראה עקב תקלה במערכת, הפעלה מחדש ש...

מדידת שינויים הנוירוטרנסמיטר במוח הוא כלי חיוני עבור מדעני מוח לומדים מחלות של מערכת העצבים המרכזית (CNS) כי מאופיינות לעתים קרובות הנוירוטרנסמיטר חוסר ויסות. למרות microdialysis בשילוב עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה (HPLC / EC) הייתה השיטה הנפוצה ביותר למדוד שינויים ברמות הנוירוטרנסמיטר תאיים 1, 2, 3, 4, ברזולוציה במרחב ובזמן של בדיקות microdialysis לא יכול להיות אידיאלי עבור נוירוטרנסמיטורים , כגון גלוטמט, כי מוסדר בחוזקה בחלל 5 התאים, 6. בגלל ההתקדמות בגנטיקה ודימות, ישנן שיטות נוספות שיכולות לשמש למיפוי גלוטמט in vivo. באמצעות כתבי ניאון גלוטמט מקודדים גנטיים (iGluSnFR) עלד הדמיה שני פוטונים, החוקרים מסוגלים לדמיין שחרור גלוטמט על ידי נוירונים האסטרוציטים הן במבחנה in vivo 7, 8, 9. יש לציין, זה מאפשר הקלטה משדה גדול יותר של נוף ואינו לשבש את החיבור המהותי של המוח. בעוד שיטות האופטיות החדשות אלה מאפשרות להדמיה של קינטיקה גלוטמט ומדידה של תגובות חושיות ומתחזקות פעילות עצבית, הם חסרים את היכולת לכמת את כמות הגלוטמט שטח תאי מוח באזורים דיסקרטיים. שיטה חלופית היא מערך microelectrode enzyme-linked (MEA) שיכול למדוד באופן סלקטיבי רמות הנוירוטרנסמיטר תאיות, כגון גלוטמט, באמצעות ערכת הקלטה בהפניה עצמית. טכניקת MEA נוצלה בעבר ללמוד שינויי גלוטמט התאים הבאים מוחי טראומטיפציעה 10, 11, 12, הזדקנות 13, 14, מתח 15, 16, אפילפסיה 17, 18, 19 מחלת אלצהיימר, 20, ו הזרקה של 21 ויראלי לחקות ומייצג שיפור לעומת מגבלות המרחב והזמן הגלום microdialysis. בעוד microdialysis מגביל את היכולת למדוד בקרבת הסינפסות 22, 23, יש MEAs רזולוציה מרחבית גבוהה המאפשרת אמצעים סלקטיבית של זליגת גלוטמט תאי ליד הסינפסות 24, 25. שנית, ההחלטה הזמנית הנמוכה של microdialysis (1 - דק 20) מגבילה את היכולת לחקור אתדינמיקה מהירה של שחרור גלוטמט וסילוק המתרחשת האלפית השני כדי הטווח שני 26. בגלל הבדלי השחרור או השחרור של גלוטמט לא יכולים להיות ברורים במדדים של טוניק, נחים רמות גלוטמט, זה עשוי להיות חיוני כי שחרור גלוטמט וסילוק להימדד ישירות. MEAs לאפשר אמצעים כאלה עקב הרזולוציה הגבוהה הזמנית שלהם (2 הרץ) ומגבלות נמוכות של זיהוי (&lt;1 מיקרומטר). שלישית, MEAs מאפשרים לבחון וריאציות תת-ב נוירוטרנסמיטורים בתוך אזור במוח מסוים, כגון בהיפוקמפוס חולדה או עכבר. לדוגמא, באמצעות MEAs אנחנו בנפרד יכולים למקד gyrus המשוננת (DG), קורנו ammonis 3 (CA3) ו קורנו ammonis 1 (CA1) של ההיפוקמפוס, אשר מחוברים באמצעות במעגל trisynaptic 27, לבחון הבדלים תת-ב גלוטמט התאי. בשל גודלו של בדיקות microdialysis (1 - 4 מ&quot;מ אורך) ואת הנזק שנגרם על ידי השתלת 28 &lt;/ sup&gt;, 29, הבדלים תת-קשים להתמודד. יתר על כן, המערכות האופטיות רק מאפשרות גירוי באמצעות גירויים חיצוניים, כגון גירוי שפם או הבהוב אור, אשר אינו מאפשר תת-גירוי 7. יתרון סופי של MEAs פני שיטות אחרות הוא היכולת ללמוד אזורי משנה אלה in vivo מבלי לשבש הקשרים החיצוניים ו פנימיים שלהם. כאן, אנו מתארים כיצד מערכת הקלטה (למשל, FAST16mkIII) בשילוב עם MEAs, מורכב microelectrode ריבוי אתרי קרמיקה מבוססת, יכולה להיות מצופית באופן דיפרנציאלי על אתרי הקלטה כדי לאפשר להתערב סוכנים כדי להיות גילוי והסרה מן האות אנליטי. אנחנו גם להדגים ניתן להשתמש במערכים אלה ללימודי מבוססי amperometry של רגולציה גלוטמט in vivo בתוך DG, CA3, ואת אזורי המשנה בהיפוקמפוס CA1 של RTG הרדים (TauP301L) 4510 עכברים, מ נפוץמודל יד הבית של מחלת אלצהיימר. בנוסף, אנו מספקים אישור של רגישות מערכת MEA לדינמיקה המהירה של שחרור גלוטמט וסילוק ידי טיפול בעכברים עם riluzole, תרופה לראות במבחנה כדי להקטין שחרור גלוטמט ולהגדיל ספיגת גלוטמט 30, 31, 32, 33, והוכחת השינויים האלה בהתאמה in vivo במודל עכבר TauP301L.

<table><tbody><tr><td>FAST-16mkIII-8 ערוץ</td><td>Quanteon</td><td>16mkIII</td><td></td></tr><tr><td>מערכי מיקרואלקטרודות</td><td>CenMet</td><td>W4 או 8-TRK</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר אלבומין (BSA)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A-3059</td><td>10 גרם (פג תוקף לאחר חודש)</td></tr><tr><td>גלוטראלדהיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G-6257</td><td>100 מ"ל (פג תוקף לאחר 6 חודשים)</td></tr><tr><td>גלוטמט אוקסידאז</td><td>US ביולוגי או סיגמא אולדריץ'</td><td>G4001-01 או 100646</td><td>50 UI (פג תוקף לאחר 6 חודשים)</td></tr><tr><td>מזרקי המילטון</td><td>המילטון</td><td>#80383</td><td>2 מזרקים</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>BDH</td><td>UN1230</td><td>4 ליטר</td></tr><tr><td>m-פנילאנדיאמין דיהידרוכלוריד (mPD)</td><td>ACROS Organics</td><td>1330560250</td><td>25 גרם</td></tr><tr><td>אלקטרודות ייחוס (RE-5B)</td><td>BAS</td><td>MF-2079</td><td>3 אלקטרודות</td></tr><tr><td>מגנטי המופעל על ידי סוללה צלחת ערבוב</td><td>Cole-parmer</td><td>EW-04804-01</td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>גלוטמט</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>G-1626</td><td>100 גרם</td></tr><tr><td>חומצה אסקורבית</td><td>TCI</td><td>50-81-7</td><td>500 גרם</td></tr><tr><td>דופמין הידרוכלוריד</td><td>אלפא Aesar</td><td>62-31-7</td><td>5 גרם</td></tr><tr><td>חומצה פרכלורית</td><td>VWR</td><td>UN2920</td><td>500 מ"ל</td></tr><tr><td>פוסטסיום כלוריד</td><td>VWR</td><td>7447-40-7</td><td>1 ק"ג</td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>VWR</td><td>7647-40-7</td><td>1 ק"ג</td></tr><tr><td>סידן כלוריד</td><td>MP</td><td>153502</td><td>100 גרם</td></tr><tr><td>נתרן הידרוקסיד</td><td>BDH</td><td>1310732</td><td>500 גרם</td></tr><tr><td>זכוכית פיפטות פליטה בלחץ</td><td>CenMet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שעווה דביקה</td><td>Kerrlab</td><td>625</td><td>יכול לרכוש מספק שונה</td></tr><tr><td>Microsyringe</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G-5</td><td></td></tr><tr><td>דוגמנות חימר</td><td>WalMart</td><td></td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>Picospritzer III</td><td>Parker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Silver</td><td>חוט AM מערכות</td> <td>#786500</td><td></td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>BDH</td><td></td><td>7647010 2.5 ליטר</td></tr><tr><td>חוט פלטינה</td><td>AM מערכות</td><td>778000</td><td></td></tr><tr><td>אקדח הלחמה</td><td>Lowes או הום דיפו</td><td></td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>מולטימטר</td><td>וולמארט</td><td></td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>PhysioSuite</td><td>Kent Scientific</td><td></td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>SomnoSuite</td><td>Kent Scientific</td><td></td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>מכשיר</td> <td>סטריאוטקסיStoelting</td><td></td><td>ניתן לרכוש מספק</td></tr><tr><td>שונה מעבדה דיגיטלית סטנדרטית</td><td>Stoelting</td><td></td><td>ניתן לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>Meiji EMZ מיקרוסקופ Meiji EMZ-5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>מקדחה</td><td>Dremel</td><td>Micro</td><td></td></tr><tr><td>Metricide</td><td>Metrex</td><td>102800</td><td></td></tr><tr><td>אזמל</td><td>VWR</td><td></td><td>ניתן לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>מספריים לניתוח</td><td>VWR</td><td></td><td>ניתן לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>ספוגיות כותנה סטריליות</td><td>Puritan</td><td>25806</td><td>ניתן לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>משחת עיניים</td><td>Puralube משחה</td><td></td> וטרינרית <td>להשיג מהווטרינר</td></tr><tr><td>ספוגיות יוד</td><td>VWR</td><td>S48050</td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>ספוגיות אלכוהול</td><td>חנות תרופות מקומית</td><td></td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>וילון ניתוח סטרילי</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>מי מלח סטריליים</td><td>Teknova</td><td>S5815</td><td>יכול לעשות הלמה משלו באמצעות מסננים</td></tr><tr><td>מי חמצן (3%)</td> <td>בית מרקחת</td><td></td> מקומי <td>יכול לרכוש מספק אחר</td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>WalMart</td><td></td><td>יכול לרכוש משונה הספק</td></tr></tbody></table>

באמצעות חיישנים ביולוגיים מבוססי enzyme למדוד טוניק ו phasic גלוטמט בעכברי מודל אלצהיימר

Using Enzyme-based Biosensors to Measure Tonic and Phasic Glutamate in Alzheimer's Mouse Models

שיבוש עצבי הוא לעתים קרובות מרכיב מרכזי של מחלות של מערכת העצבים המרכזית (CNS), משחק תפקיד פתולוגיה שבבסיס מחלת אלצהיימר, פרקינסון, דיכאון, וחרדה. באופן מסורתי, microdialysis כבר את הטכניקה הנפוצה ביותר (שיבח) כדי לבחון שינויים הנוירוטרנסמיטר המתרחשים הפרעות אלה. אבל בגלל microdialysis יש את היכולת למדוד איטיים 1-20 שינויים דקים על פני שטחים גדולים של רקמה, יש לו את החסרון של הפולשנות, פוטנציאל להרוס חיבור מהותי בתוך המוח יכולת דגימה איטית. טכניקה חדשה יחסית, מערך microelectrode (MEA), יש יתרונות רבים למדידת שינויים הנוירוטרנסמיטר ספציפיים בתוך אזורים במוח הבדידים כפי שהם מתרחשים, מה שהופך את גישה מדויקת במרחב ובזמן. בנוסף, באמצעות MEAs היא פולשנית, המאפשרת מדידה של שינויים הנוירוטרנסמיטר in vivo. במעבדה שלנו, אנו חהכבר יש מתעניינים במיוחד לשינויים הנוירוטרנסמיטר גלוטמט, הקשורים לפתולוגיה מחלת האלצהיימר. ככזה, השיטה המתוארת כאן נעשה שימוש כדי להעריך שיבושים בהיפוקמפוס פוטנציאליים גלוטמט במודל של עכברים טרנסגניים של מחלת אלצהיימר. בקצרה, השיטה נהוגה כרוך ציפוי microelectrode רב באתר עם אנזים מאוד סלקטיבית של הנוירוטרנסמיטר עניין בשימוש באתרים המתייחסים לעצמו להפחית את רעשי רקע ואת interferents. לאחר ציפוי וכיול, את MEA ניתן לבנות עם micropipette והוריד לתוך אזור במוח של עניין באמצעות מכשיר stereotaxic. כאן, השיטה המתוארת כרוך בהרדמת RTG (TauP301L) 4510 עכברים באמצעות מכשיר stereotaxic כדי למקד תת אזורים (DG, CA1, ו CA3) של ההיפוקמפוס.

בעוד הטכנולוגיה הזו יכולה לשמש כדי למדוד שינויים glutamatergic איתות בסוגים רבים של מודלים בבעלי חיים, כגון פגיעה מוחית טראומטית, הזדקנות, מתח, ואפילפסיה, כאן אנו מדגימים כיצד הטכנולוגיה MEA יכול לשמש כדי לבחון שינויים glutamatergic במודל עכבר מהונדס של tauopathy האנושי 19, 20. RTG (TauP301L) 4510 העכבר מבטא את המוטציה P301L ב טאו הקשורים דמנציה פרונטו-טמפורלית ו פרקינסון קשורה כרומוזום 17,...

כאן, אנו מתארים את ההתקנה, תוכנת ניווט, וניתוח נתונים עבור שיטה מרחבית מדויקת ובזמן של מדידת טוניק ושינויי גלוטמט תאי פאזית in vivo באמצעות מערכי microelectrode enzyme-linked (MEA).

באמצעות חיישנים ביולוגיים מבוססי Enzyme למדוד טוניק ו phasic גלוטמט בעכברי מודל אלצהיימר

Neurotransmitter disruption is often a key component of diseases of the central nervous system (CNS), playing a role in the pathology underlying ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא למדוד שינויים טוניים ופאזיים של גלוטמט חוץ-תאי in vivo באמצעות מערכי מיקרו-אלקטרודות (MicroElectrode Arrays) מקושרים לאנזימים. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום מדעי המוח, כגון האם רמות של מוליכים עצביים חוץ-תאיים והדינמיקה המהירה של שחרור ופינוי מוליכים עצביים משתנות במצבים מחלה. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שמערכי המיקרו-אלקטרודות יכולים למדוד שינויים ספציפיים במוליכים עצביים בתוך אזורי מוח מובחנים, מה שהופך אותה לגישה מדויקת מרחבית וזמנית תוך שהיא פולשנית באופן מינימלי.את הפרוצדורה ידגימו Holly Hunsberger ו-Ryan Heslin מהמעבדה שלי. כדי להתחיל בפרוצדורה זו, יש לצפות זוג אתרי הקלטה על MEA באנזים הרצוי וזוג אתרי הקלטה שונה במטריצת חלבון לא פעילה. לאחר מכן, יש לשאוב את הגלוטמט אוקסידאז או את מטריצת החלבון באמצעות מזרק Hamilton של 10 µL.לחצו בעדינות על הבוכנה כדי להוציא טיפה קטנה של תמיסה מקצה המזרק. כדי להגיע לאתרי ההקלטה של ה-MEA, תחת מיקרוסקופ דיסקציה, מרחו את התמיסה על אתרי ההקלטה המתאימים על ידי מגע קצר של טיפת התמיסה עם אתרי ההקלטה, דבר המהווה שכבה אחת. כוונו טיימר לדקה אחת בין יישומי הציפוי על אתרי ההקלטה.כעת, הכניסו את אלקטרודת הייחוס דרך הפתח בזרוע הפלסטיק. הורידו את אלקטרודת הייחוס אל תוך כלי כימי (beaker) המכיל PBS וודאו שהיא אינה נוגעת בתחתית הכלי. לאחר מכן, חברו את אלקטרודת הייחוס לראש הבמה (head stage) וחברו את ה-MEA ל-mPD המחובר לראש הבמה.הנמיקו את ה-MEA אל תוך כוס הביקר עם התמיסה כך שרק קצה ה-MEA יהיה טבול בתמיסה. אין לטבול את קצה ה-MEA בנוזל מעבר לבועה השחורה. פעולה זו עלולה לגרום נזק ל-MEA.לאחר מכן, בחרו את סמל הציפויים חשמליים בשולחן העבודה. בתפריט כלי הציפויים החשמליים, ודאו שהגדרות נכונות הוזנו. לאחר מכן, בחרו ביציאה מהתוכנה כדי לסיים את הציפוי החשמלי.שטפו את קצות האלקטרודות המצופות mPD במים מזוקקים (DI water) ואחסנו אותן למשך 24 שעות לפני הכיול. בהליך זה, הפעילו פלטת חימום ל-37 °C וחברו את שלב הראש (head stage) למערכת הבקרה של ההקלטה. לאחר מכן, הכניסו את קצה ה-MEA לתוך 40 milliliters של 0.5 molar PBS תחת ערבוב.בשלב הבא, חברו את אלקטרודת הייחוס לראש הבמה (head stage). נערו את קצה אלקטרודת הייחוס כדי לוודא שאין בתוכה בועות אוויר. לאחר מכן, פתחו את תוכנת ההקלטה, ודאו שההגדרות נכונות, בחרו את מספר ה-MEA, לחצו על כיול (Calibration) ואז על התחל (start).המתינו חמש עד 10 דקות להשגה של שיווי משקל והתחילו בכיול ברגע שקו הבסיס התייצב. לאחר מכן, בחרו ב-Baseline והוסיפו 500 µL של חומצה אסקורבית. לאחר מכן, בחרו ב-Interferent ברגע שהזרם הגיע לרמה יציבה חדשה.אם ה-MEA עבר ציפוי חשמלי תקין, לא אמור להיראות שינוי. לאחר מכן, הוסף 40 µL של L-glutamate בריכוז 20 mM. ברגע שהזרם יגיע לרמה קבועה חדשה, סמן את ההוספה הראשונה כאנליט.חזור על הפעולה שלוש פעמים לסך של שלוש הוספות של glutamate. לאחר מכן, הוסף 40 microliters של dopamine. ובחר Test Substance.לאחר מכן, הוסף 40 µL של פרוקסיד. בחר ב-Test Substance ולחץ על כפתור העצירה ברגע שהכיול הסתיים. בשלב זה, מקם את המיקרופיפט במרכז בין ארבעת אתרי ההקלטה של הפלטינה והצמד אותו בגובה של 50 עד 100 µm מעל ה-MEA באמצעות שעווה דביקה וחימר פיסולי.באמצעות מתאם DC, חברו את החוט החיובי האדום לחוט הכסף שהוכן בצד פין הזהב, ואת החוט השלילי השחור לקתודת אמבט הפלטינה. לאחר מכן, חברו את מתאם ה-DC לחשמל ובדקו אם תהליך הציפוי מתבצע כראוי. בועות אמורות להופיע באלקטרודת האמבט, ואלקטרודת הייחוס אמורה להפוך לצבע אפור-כסוף.בפרוצדורה זו, מקמו את החיה במכשיר הסטריאוטקסי והשתמשו במוטי האוזניים כדי לייצב את ראשה. ודאו שהחיה מקובעת ושהראש אינו זז. לאחר מכן, מרחו משחה לעיניים באמצעות מקלוני צמר סטריליים.לאחר מכן, גלחו את הראש באמצעות תספורת (trimmer). הסִירו את הפרווה סביב האוזניים באמצעות מספריים כירורגיים קטנים. לאחר מכן, מרחו יוד ואחריו אלכוהול על הקרקפת שלוש פעמים לסירוגין.לאחר מכן, בצעו חתך במרכז הקרקפת והרחיבו את העור. ספגו דם רב בעזרת מקלוני צמר גפן סטריליים ומרחו מי חמצן כדי להקל על זיהוי ה-bregma וה-lambda. ודאו שהראש ממוקם כראוי על ידי מדידת המרחקים הדורסלי-ונטרלי והמדיאלי-לטרלי של ה-bregma וה-lambda.הגדירו את הקואורדינטות ב-bregma לאפס וסמנו את קואורדינטות היעד. לאחר מכן, קדחו מסביב לסימון. לאחר מכן, חברו את ה-MEA לבמה של הראש.מלאו שוב את הפ pipette בתמיסה הרצויה הראשונה. הקפידו להשאיר ב-pipette מרווח ללא תמיסה, כדי שניתן יהיה לבחון את התמיסה המגורשמת. לאחר מכן, חברו את הצינורית ל-micropipette מזכוכית.אתר את ה-bregma כאשר ה-MEA מחובר והגדר את הקואורדינטות לאפס. הזז את ה-MEA לקואורדינטות הרצויות והורד אותו באיטיות עד שהקצה נוגע במוח. לאחר מכן, אפס את הקואורדינטה הדורסלית-ונטרלית (גב-בטן) והורד באיטיות את ה-MEA אל תוך המוח.מקם את אלקטרודת הייחוס במיקום מרוחק מ-MEA כך שהיא עדיין תהיה במגע נוזלי עם המוח כדי להשלים את המעגל. בתוכנת ההקלטה, לחץ על האלקטרודה המכוילת הרצויה ולאחר מכן לחץ על perform experiment כדי להתחיל את ההקלטה. לאחר קבלת קו בסיס (baseline) יציב, הגדר את המשפריץ בלחץ (pressure ejector) ל-0.6 seconds ול-0.5 psi ולחץ על הכפתור האדום במשפריץ כדי לבצע את ההזרקה.רשמו את הזמן והלחץ וכן את סימוני הנפח שנעו בגיליון ההזרקה, והוסיפו הערות במידת הצורך. לאחר מכן, הסירו את ה-MEA יחד עם המיקרופיפט המחובר אליו, שטפו אותו במי DI והשרו אותו ב-PBS למשך לילה עד להסרה מלאה של הדם. באזורי CA3 ו-CA1 של ההיפוקמפוס, רמות הגלוטמט הטוניות עלו באופן משמעותי בעכברי TauP301L שטופלו ב-vehicle, אפקט שהופחת על ידי טיפול ב-riluzole.כאן, הקלטות מייצגות תואמות לבסיס של שחרור גלוטמט המושרה על ידי אשלגן כלוריד ב-CA3 הראו כי טיפול ברילוזול (riluzole) החליש את העלייה המשמעותית במשרעת שחרור הגלוטמט שנצפתה בעכברי Vehicle-TauP301L. יישום מקומי של אשלגן כלוריד גרם לעלייה חזקה בגלוטמט החוץ-תאי שחזרה במהירות לרמות טוניות. שחרור הגלוטמט המושרה על ידי אשלגן כלוריד שהיה מוגבר באופן משמעותי ב-DG, CA3 ו-CA1, אשר נצפה בעכברי TauP301L שטופלו ב-Vehicle לאחר יישום מקומי של אשלגן כלוריד, הוחלש בעקבות טיפול ברילוזול.סרט זה של ההיפוקמפוס, הצבוע ב-cresyl violet, מאשר את מיקום מסלולי ה-MEA ב-CA3 וב-CA1. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור את שלבי פתרון הבעיות המפורטים במאמר. לדוגמה, כדי להפחית אותות רעש, זכרו להארק את המערכת ולבצע את השלבים באופן עקבי ובזמן.

using-enzyme-based-biosensors-to-measure-tonic-phasic-glutamate

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

טראנסגנטי (TG) מודלים העכבר לספירה לספק הזדמנות מצוינת לחקור כיצד ומדוע רמות Aβ או טאו בשינוי CSF התקדמות המחלה בחולים אנושיים. כאן, אנו מדגימים מעודן צ'יסטרנה magna טכניקה לנקב הדגימה CSF סדרתי של העכבר.

טכניקה אוסף טורי של הנוזל השדרתי מן צ&#39;יסטרנה מגנה על עכבר

אחד המאפיינים הפתולוגיים של אלצהיימר היא היווצרות של חלבון הפלאק עמילואיד β חיובי מדלקת עצבים. בפרוטוקול זה נתאר שתי שיטות לאיתור פלאק מדלקת עצבים בעכברים הטרנסגניים מודל AD: זיהוי immunohistochemical באמצעות ABC ו-DAB שיטת זיהוי פלורסנט באמצעות שיטת מכתים S thioflavin.

איתור של הפלאק מדלקת עצבים במודל מחלת אלצהיימר עכבר

בסרטון זה, מערך מולטיאלקטרודות (MEA) המצופה בגלוטמט אוקסידאז מושתל ברקמת המוח של עכבר מורדם. תמיסת גלוטמט מוזרקת לחלל החוץ תאי שבו MEA מזהה את רמות הגלוטמט, ומאפשר ניטור בזמן אמת של ספיגת הגלוטמט על ידי האסטרוציטים.

ניטור גלוטמט בזמן אמת של In Vivo באמצעות מערך מיקרואלקטרודות מצופה אנזים

תיאר כאן היא מבוימת, התנהגות ההקרנה התנהגותית שניתן להשתמש בהם כדי המסך עבור תרכובות כי התערוכה יעילות vivo על התנהגויות מוטוריות קוגניטיבית ופונקציונלית מודלים עכבר מהונדס של עמילואידוזיס β ו tauopathy. שיטות אלה מותאמות לתצוגת תרכובות עבור פעילות במשימות זיכרון לטווח קצר ולזיכרון עבודה.

הערכה של חלופה ספונטנית, זיהוי אובייקטים רומנטי ו Clbing איברים מודלים עכבר מהונדס של Amyloid-β ו נוירופתולוגיה טאו

מאמר זה מפרט השימוש של הקלטות amperometric פוטנציאל קבוע באמצעות אלקטרודות סיב פחמן וטכנולוגיה ביוסנסור אנזימטיות כדי למדוד את שחרורו של דופמין, גלוטמט עם רזולוציה טמפורלית גבוהה במהלך טבעי מתגמל התנהגות אוגר נקבה.

מדידת In Vivo שינויים עצביים חוץ-תאית במהלך טבעי מתגמל בהתנהגויות של אוגרים סוריים הנשי

אנו מציגים פרוטוקול כדי להעריך את האיזון בין שחרור גלוטמט לבין הסיווג ב corticostriatal glutamatergic בודד בפרוסות חריפה מעכברים למבוגרים. פרוטוקול זה משתמש חיישן פלורסנט iGluu עבור זיהוי גלוטמט, מצלמה scmos עבור רכישת אותות והתקן עבור תאורה לייזר מוקד.

בודד סינפסה אינדיקטורים של גלוטמט שחרור ספיגה בפרוסות המוח חריפה מעכברים נורמלי הנטינגטון

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי למדוד במבחנה Ca2+ שטף בנוירונים המוח האמצעי ואת ההשפעות שלהם במורד הזרם על caspase-3 באמצעות תרביות המוח האמצעי של העכבר הראשי. מודל זה יכול להיות מועסק כדי ללמוד שינויים פתופיזיולוגיים הקשורים פעילות Ca2+ חריגה בנוירונים המוח האמצעי, ולסנן טיפולים רומן עבור תכונות אנטי אפופטוטיות.

כימות ספונטני Ca2+ שטף ואת ההשפעות במורד הזרם שלהם בעכבר ראשי נוירונים המוח האמצעי

אנו מתארים פרוטוקול להערכת עקומות מנה-תגובה לגירוי חוץ-גולגולתי במונחים של מדידות שדה חשמלי במוח וזרימת דם רלוונטית של סמן ביולוגי-מוחי. מכיוון שפרוטוקול זה כולל החדרת אלקטרודות פולשניות למוח, יש צורך בהרדמה כללית, כאשר נשימה ספונטנית עדיפה על פני נשימה מבוקרת.

מיקום אלקטרודות מעוררות חוץ-גולגולתיות ומדידת זרימת דם מוחית ושדות חשמליים תוך גולגולתיים בעכברים מורדמים

תכונה אחת של מחלת אלצהיימר היא העלאת...

הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס

הקמנו מודלים של העכבר לויקומלציה periventricular (PVL), את הפגיעה במוח השולט על פגים מאופיין periventricular נגעים בחומר הלבן. היפוקסיה / איסכמיה עם / בלי זיהום מערכתי הם הגורמים העיקריים של PVL. קשירת הראש חד צדדית וחשיפה היפוקסיה עם / בלי זריקה lipopolysaccharide יוצר PVL כמו נגעים בעכברים P6.

עכבר מודלים של לויקומלציה periventricular

למד למדוד רמות גלוטמט טוניות ופאזיות בהיפוקמפוס של עכברים טרנסגניים עם אלצהיימר באמצעות מערכי מיקרואלקטרודות מבוססות אנזימים. שיטה זו מאפשרת מעקב בזמן אמת בחללים מוחיים ספציפיים.

באמצעות חיישנים ביולוגיים מבוססי Enzyme למדוד טוניק ו phasic גלוטמט בעכברי מודל אלצהיימר

גלה סרטונים נוספים