Name: הקלטה EEG בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: למד שיטה חדשנית להקלטת EEG בחולדות ניאונטליות בתנועה חופשית. השיטה מאפשרת מעקב יציב במשך שבוע ומסייעת בחקר אפילפסיה ניאונטלית ובאבחון הפרעות נוירולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן למדעי הטבע של סין (31171355) ואת הקרן למדעי הטבע של גואנגדונג (S2011010003403, 2014A030313440).

טיפול בבעלי חיים, הליך כירורגי, ונהלי הקלטה היו בהתאם להנחיות עבור דרום סין רגיל אוניברסיטת בעלי חיים טיפול ועדת שימוש. 1. הכנת אלקטרודה (איור 1A-C) הערה: מחשב סיכת loci הוא פשוט קשר בעל שיניים כחלק ממשק האות בהתקני תקשורת. הוא מורכב ממחבר זכר המתחבר למחבר הנשי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להפריד את סיכות זכר ונקבה מהסיכה המחשב לוקוסים ( איור 1 א ) בעזרת המלקחיים. חבר את הפינים זכר ונקבה יחד כדי ליצור אלקטרודה וליישם cyanoacrylate ליצור קשר דבק חזק ( איור 1 ג ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את האלקטרודות לתוך כוס מלאה מים מזוקקים עבור ומניחים אותו לניקוי קולי במשך 10 דקות. להעביר אותם לתנור ייבוש על 45 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. לעקר את האלקטרודות באמצעות אור UV למשך 30 דקות. </li></ol> 2. הליך כירורגי (איור 1D-F) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את כלי ניתוח מעוקרים ומנגנון stereotaxic. להרדים את הגורדה עכברוש ילוד באמצעות הרדמה isoflurane (2.5%) עם האוויר. כאשר הגור הוא הרדים עמוקים, להתאים את המינון של isoflurane ל 1.0%. בצע זנב או קמצוץ הבוהן לפני הניתוח כדי להבטיח את העומק הנכון של הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לתקן את הראש של הגור במנגנון stereotaxic על ידי הנחת פסי האוזן לתוך תעלות האוזן מעט הידוק אותם. הערה: אין להדק יתר על המידה את פסי האוזן, שכן הגולגולת הניאונטלית רכה מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשמור על שדה כירורגית סטרילית על ידי ריסוס כל הציוד עם אתנול 70%. לעשות חתך 15 מ&quot;מ על הראש באמצעות אזמל. בעזרת מלקחיים, בעדינות למשוך את הקרקפת הרחק קו האמצע בארבע הפינות. שים קצת מלוחים ספוג מים מתחת לעור כדי לשמור את החתך פתוח לרווחה ( איור 1D ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מצא את נקודות ברגמה ולבדה על הגולגולתולסמן אותם בעיפרון. השתמש מחט מזרק (26 G) לעשות שני חורים בר לתוך קליפת המוח הקדמי (PFC) והיפוקמפוס. הערה: PFC ממוקם ב 1 מ&quot;מ מ&quot;מ האחורי כדי bregma ו -0.5 מ&quot;מ לרוחב לקו האמצע, בעוד ההיפוקמפוס ממוקם ב -2.0 מ&quot;מ הקדמי כדי ברגמה ± 0.5 מ&quot;מ לרוחב לקו האמצע ( איור 1D ו- E ). עומק האלקטרודה לא צריך להיות יותר מ 2 מ&quot;מ מתחת משטח קליפת המוח כדי למזער נזק מוחי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במלקחיים להחזיק את האלקטרודות ולהכניס את הפניה אלקטרודות ההקלטה לתוך PFC ו היפוקמפוס, בהתאמה. החל משחה erythromycin סביב האלקטרודה, כדי למנוע זיהום אפשרי. תקן את האלקטרודה באמצעות cyanoacrylate. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן מלט אקרילי שיניים כך יש עקביות דביק צמיג. החל את מלט שיניים לכסות את האלקטרודות ואת שאר הגולגולת. הערה: יש לייבש את הגולגולת ביסודיות לפני החלת מלט השיניים. </li&gt; <li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 5% חומצה picric על האלקטרודות כדי להגן עליהם. הערה: ההליך כולו צריך להיעשות מכסה המנוע biosafety לשמור על תנאים סטריליים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את החיה מן המסגרת stereotaxic להזריק 300 μL של 10% גלוקוז תת עורית. מניחים אותו על שמיכה מחומם להתאוששות. ודא כי החיה היא חמה (37 מעלות צלזיוס) ו אמבולטורי ( כלומר, התאושש לחלוטין). ניהול buprenorphine intraperitoneally (0.05 מ&quot;ג / ק&quot;ג) עבור כאבים שלאחר ניתוח. הערה: אל תעזוב בעל חיים ללא השגחה עד שהוא יחזור להכרה מספקת (כלומר, התנהגות רגילה ותנועה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחזיר את הגור לכלוב הביתה עם הסכר שלהם לאחר שהוא חוזר להכרה. המתן יומיים עד שהחיה תושלם במלואה. </li></ol> 3. הקלטה EEG <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר החלמה מלאה, לחבר את האלקטרודות מושתל על הגולגולת של הגור אל המגבר בכלוב שלה. חבר את המגבר לכדי אנלוגי לדיגיטליעל ממיר ולהצמיד את הממיר למחשב; את הקווים המחוברים צריך לטפל בזהירות, כך שהם לא מקבלים מסובך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר לפחות 10,000 דגימה קצב הדגימה על יחידת רכישת נתונים להקלטת (רוחב הפס של המשדר הוא 1-100 הרץ). ודא שהנתונים נדגמו כראוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קבלת הקלטה בסיסית, להזריק את הגור intraperitoneally עם חומצה kainic (KA) (2 מ&quot;ג / ק&quot;ג) כדי לגרום התקפים אפילפטיים. 15 דקות לאחר הזרקת KA לצפות ולתעד את הפרשות אפילפטי. התפיסה לייצר דרך KA הם בדרך כלל פיזית. הערה: משך ה- iictal-tonic הוא בערך 15.2 ± 0.9 s, משך ההתקפים הוא בערך 62 ± 5 שניות. ניתן למנוע התקפים בחולדה הניאונטלית על ידי מתן הזרקה IP של הידרל כלורל (400 מ&quot;ג / ק&quot;ג). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את הנתונים דיגיטליים ולנתח אותו באמצעות חבילות עיבוד אותות, כגון spike2. לחשוף את רמת הכוח של רכיבי תדר שונים האות neagatal EEG ידי perfאו ניתוח של ספקטרום הספק. לחשב את הכוח של מסגרת זמן 1 דקות על ידי מציאת משרעת ממוצע מרובע שורש מ 1 עד 100 הרץ (הלהקה EEG) 9 . </li></ol>

<ol><li>Pereda, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+synapses+and+their+functional+interactions+with+chemical+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrical synapses and their functional interactions with chemical synapses.</a> Nat Rev Neurosci. 15 (4), 250-263 (2014).</li>
<li>Chorev, E., Epsztein, J., Houweling, A. R., Lee, A. K., Brecht, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+recordings+from+behaving+animals--going+beyond+spikes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological recordings from behaving animals--going beyond spikes.</a> Curr Opin Neurobiol. 19 (5), 513-519 (2009).</li>
<li>Freeborn, D. L., McDaniel, K. L., Moser, V. C., Herr, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+electroencephalography+%28EEG%29+to+assess+CNS+changes+produced+by+pesticides+with+different+modes+of+action%3A+effects+of+permethrin%2C+deltamethrin%2C+fipronil%2C+imidacloprid%2C+carbaryl%2C+and+triadimefon%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Appl+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Use of electroencephalography (EEG) to assess CNS changes produced by pesticides with different modes of action: effects of permethrin, deltamethrin, fipronil, imidacloprid, carbaryl, and triadimefon.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 282 (2), 184-194 (2015).</li>
<li>Werhahn, K. J., Hartl, E., Hamann, K., Breimhorst, M., Noachtar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Latency+of+interictal+epileptiform+discharges+in+long-term+EEG+recordings+in+epilepsy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Seizure%22%5BJournal%5D)">Latency of interictal epileptiform discharges in long-term EEG recordings in epilepsy patients.</a> Seizure. 29, 20-25 (2015).</li>
<li>Staba, R. J., Stead, M., Worrell, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+biomarkers+of+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological biomarkers of epilepsy.</a> Neurotherapeutics. 11 (2), 334-346 (2014).</li>
<li>Nimmrich, V., Draguhn, A., Axmacher, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+Network+Oscillations+in+Neurodegenerative+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromolecular+Med%22%5BJournal%5D)">Neuronal Network Oscillations in Neurodegenerative Diseases.</a> Neuromolecular Med. 17 (3), 270-284 (2015).</li>
<li>Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+Continuous+EEG+Monitoring+in+Small+Rodent+Models+of+Human+Disease+Using+the+Epoch+Wireless+Transmitter+System%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long-term Continuous EEG Monitoring in Small Rodent Models of Human Disease Using the Epoch Wireless Transmitter System.</a> J Vis Exp. (101), e52554(2015).</li>
<li>Zayachkivsky, A., Lehmkuhle, M. J., Fisher, J. H., Ekstrand, J. J., Dudek, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recording+EEG+in+immature+rats+with+a+novel+miniature+telemetry+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Recording EEG in immature rats with a novel miniature telemetry system.</a> J Neurophysiol. 109 (3), 900-911 (2013).</li>
<li>Dzhala, V. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NKCC1+transporter+facilitates+seizures+in+the+developing+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">NKCC1 transporter facilitates seizures in the developing brain.</a> Nat Med. 11 (11), 1205-1213 (2005).</li>
<li>Tucker, A. M., Aquilina, K., Chakkarapani, E., Hobbs, C. E., Thoresen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+amplitude-integrated+electroencephalography+and+interburst+interval+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Development of amplitude-integrated electroencephalography and interburst interval in the rat.</a> Pediatr Res. 65 (1), 62-66 (2009).</li>
<li>Savard, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+neuronal+IL-1beta+in+acquired+brain+lesions+in+a+rat+model+of+neonatal+encephalopathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Involvement of neuronal IL-1beta in acquired brain lesions in a rat model of neonatal encephalopathy.</a> J Neuroinflammation. 10, 110(2013).</li>
<li>Cuaycong, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+to+the+study+of+hypoxia-ischemia-induced+clinical+and+subclinical+seizures+in+the+neonatal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A novel approach to the study of hypoxia-ischemia-induced clinical and subclinical seizures in the neonatal rat.</a> Dev Neurosci. 33 (3-4), 241-250 (2011).</li>
</ol>

המחברים אינם מכריזים על ניגוד עניינים.

כאן, אנו מדווחים על ניתוח והליכי ההקלטה לרכישת EEG בחופשיות העברת גורים עכברוש ילודים על ידי שיטת חוטית ( איור 3 ). זה כבר הציע כי גורד עכברוש P7-P12 הוא בגיל ההתפתחות המתאים לטווח קצר של היילוד האנושי 10 , 11 . זה קשה מבחינה טכנית להשיג איכות גבוהה EEG נתוני ההקלטה בעת עבודה עם גורים עכברוש בקבוצת גיל זו. בנוסף, זה דורש טיפול מיוחד טיפול גדול 8 . <p class="jove_content" style="...

ידוע היטב כי תקשורת מתמשכת בין נוירונים נדרשת כדי להשיג תפקוד תקין של המוח. תקשורת interneuronal מתרחשת בעיקר בסינפסות, שבו מידע נוירון אחד מועבר נוירון השני. שידור סינפטי זה מתווכת על ידי שני סוגים של הסדרים מבניים ייעודיים: סינפסות חשמליות או כימיות 1 . Electrophysiology הוא השדה אשר לוכד את הפוטנציאל החשמלי המיוצר במהלך תקשורת interneuronal כי השליטה על פונקציות הגוף הכולל והתנהגות 2 . EEG היא השיטה הנפוצה ביותר בין טכניקות אלקטרו רבות. EEG היא טכניקה המשמשת לזהות שינויים אותות חשמליים המיוצרים על ידי גירויים פנימיים או חיצוניים. יתר על כן, זהו מבחן חיוני לאבחון קליני ולניבוי תוצאות של תנאים נוירולוגיים שונים כגון אפילפסיה, מחלת פרקינסון ואלצהיימרE, כמו גם ההשפעות של סוכני פרמקולוגיים וטוקסיקולוגיים 3 . בדרך כלל, חולה אפילפטי מראה היפראקסיסטיות וליקוי קישוריות תפקודית בתוך המוח; אלה מסוכמים כמו הפרשות epileptiform interictal (IEDs) והוא יכול להיות מוקלט על ידי EEG בצורה של קוצים חדים, חולף; גלים חדים; מתחמי גל ספייק; או polyspikes 4 . המאפיין העיקרי של המוח האפילפטי הוא ההתרחשות הספונטנית של התקפים אפילפטיים, אשר ניתן להקליט או מהקרקפת או מתוך פרנכימה במוח על מנת לאתר את אזור המוח האחראי על ההתקפים 5 . יתר על כן, EEG יש גם השלכות חשובות מאוד הפרעות ניווניות כמו מחלת אלצהיימר (AD). מחקרים מראים כי שינויי EEG השתנו ורשתות נכות נפגעות בחולי AD הם נפוצים. עם זאת, הידע שלנו על פתופיזיולוגיה של תנודות הרשת במחלות neurodegenerative iS מפתיע חלקית ואת צריכה להיות נוספת לחקור 6 . בפרוטוקול זה, עיצבנו אלקטרודה פשוטה שבה ניתן להקליט EEG כדי להבין את התקשורת החשמלית הן במוח הנורמלי הפתולוגי. השתלה כירורגית בשיטה זו הוא זול יותר מאשר נהלים אחרים זמינים 7 . יתר על כן, שיטה זו יכולה לשמש כדי להקליט באיכות גבוהה ויציבה אותות EEG עבור timeframes יותר ( כלומר, 2-4 שעות בכל יום במשך שבוע 1). בנוסף, השתמשנו אלקטרודות מצית (במשקל של כ 26 מ&quot;ג) המאפשרים לבעלי החיים להתנהג באופן טבעי יותר 8 . שיטה זו מיושמת באופן נרחב על המחקר של EEG ב גורים עכברוש ילודים הדורש את המגבר ואת digitizer, נפוץ במעבדה electrophysiology ואינו דורש שום התקנים נוספים.

<table><tbody><tr><td>סיכת</td><td></td><td></td><td></td>מחשב</tr><tr><td>Pincer</td><td>DELI Group Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>502 דבק</td><td>סופר DELI קבוצה ושות', בע"מ</td><td>7144</td><td></td></tr><tr><td>תנור ייבוש</td><td>Boxun</td><td>GZX-9140MBE</td><td></td></tr><tr><td>איזופלואורן</td><td>RWD מדעי החיים</td><td>902-0000-522</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר סטריאוטקסי</td><td>RWD מדעי החיים</td><td>900-0068-507</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר הרדמה</td><td>RWD מדעי החיים</td><td>902-0000-510</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר חימום הומותרמי</td><td>מכשיר הרווארד</td><td>K 024509</td><td></td></tr><tr><td>מגבר דגם 3000&nbsp;</td><td>A-M Systems</td><td>61558</td><td></td></tr><tr><td>Micro1401 ממיר דיגיטלי אנלוגי</td><td>קיימברידג' עיצוב אלקטרוני בע"מ</td><td>4383</td><td>יחידת רכישת נתונים</td></tr><tr><td>Spike2</td><td>קיימברידג' עיצוב אלקטרוני בע"מ</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הקלטה eeg בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

EEG היא שיטה שימושית לזיהוי פעילות חשמלית במוח. יתר על כן, זהו כלי אבחון בשימוש נרחב עבור תנאים נוירולוגיים שונים, כגון אפילפסיה והפרעות נוירודגנרטיבית. עם זאת, זה קשה מבחינה טכנית להשיג הקלטות EEG ב יילודים כפי שהוא דורש טיפול מיוחד טיפול רב. כאן, אנו מציגים שיטה חדש לרשום EEG ב גורים עכברוש ילודים (P8-P15). עיצבנו אלקטרודה פשוטה ואמינה באמצעות לוקוסים של המחשב; זה יכול להיות מושתל בקלות לתוך הגולגולת של גור עכברוש להקליט אותות EEG באיכות גבוהה במוח נורמלי אפילפטי. Pups קיבלו הזרקת intraperitoneal (IP) של חומצה kainic neurotoxin (KA) כדי לגרום התקפים אפילפטיים. השתלה כירורגית שבוצעה בהליך זה הוא זול יותר מאשר נהלים אחרים EEG עבור יילודים. שיטה זו מאפשרת להקליט אותות EEG באיכות גבוהה ויציבה במשך יותר משבוע אחד. יתר על כן, הליך זה יכול להיות מיושם גם על ra הבוגרתTs ועכברים כדי ללמוד אפילפסיה או הפרעות נוירולוגיות אחרות.

<html> אם ההליכים כירורגית לעיל מתבצע כראוי, ערוץ אחד העכברוש ילוד הגור EEG ההקלטה תבוצע בהצלחה. 10 דקות לאחר הזרקת KA, דפוס קבוע של סימנים התנהגותיים הופיעו בצורה של תנועות לא סדירות גירוד, רעידות, אובדן של איזון. איור 2 מציג את עקבות נציג EEG עקבות ו interictal, ictal-tonic, ו ictal-clonic מורחבת עקבות. דפוסים חוזרים ונשנים של אי-פריטי EEG ו- interctal ו- EECTAL החלו 15-60 דקות (30 ± 5.2 דקות, ממוצע ± SEM) לאחר הזרקת KA ( איור 2 א...

כאן, אנו מציגים טכניקה חדשנית שנועדה להקליט electroencephalography (EEG) בחופשיות נעורים אפילפטיים נעורים באופן חופשי ולתאר את הנהלים שלה, תכונות, ויישומים. שיטה זו מאפשרת אחד להקליט EEG במשך יותר מ 1 בשבוע.

הקלטה EEG בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

המטרה הכללית של שיטה זו היא להקליט EEG מגורי חולדה ניונוטאלים הנעים בחופשיות, באמצעות מערך אלקטרודות חדשני היציב למשך שבוע או יותר. שיטה זו תספק מענה לשאלות מפתח בתחום מדעי העצבים ותהיה מועילה בחקר אפילפסיה ניונוטאלית. באמצעות שימוש בטכניקה זו, ניתן להקליט אותות EEG איכותיים ויציבים לאורך פרקי זמן ממושכים.דבר זה יסייע באבחון של הפרעות נוירו-פתולוגיות שונות. באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בשיטה זו יתקלו בקשיים, כיוון שחולדות רטנן ניאונטליות בגיל p8 עד p15 קשות מאוד לטיפול ומצריכות זהירות רבה. האלקטרודה דורשת מגע בעל פינים כדי לתפקד כממשק אות עם מכשירי התקשורת.פין מחשב מסוג lo sai ממלא תפקיד זה. הפר carefully את הפינים הזכריים והנקביים מפין מחשב lo sai באמצעות פליירים. לאחר מכן, חבר את הפינים הזכריים והנקביים זה לזה ליצירת אלקטרודה, ואבטח את החיבור באמצעות cyanoacrylate.הכינו מספר אלקטרודות באופן זה. לאחר שהדבקים התקשחו, הכניסו את האלקטרודות לכלי כימי (beaker) מלא במים מזוקקים למשך עשר דקות. לאחר מכן, הניחו אותן במכשיר ניקוי אולטרסוני כדי לנקות את האלקטרודות.לאחר מכן, העבירו את הכלי לתנור המכוון ל-45 °C, וחממו אותם במשך חצי שעה. לבסוף, עקרו את האלקטרודות באמצעות חשיפה ל-UV למשך 30 דקות. במCבב בטיחות ביולוגית, הכינו תחילה את כלי הניתוח המעוקרים ואת מכשיר הסטריאוטקסיס המעוקר לצורך הניתוח.לאחר מכן, הרדימו את גור החולדה הרך באמצעות 2.5% isoflurane. כאשר הגור מורדם עמוקות, הפחיתו את ריכוז ה-isoflurane ל-1%. לפני ההמשך, בצעו צביטה בבהו ל toes כדי לוודא שהחולדה מורדמת מספיק.בשלב הבא, קבעו את ראשו של הגולם במכשיר הסטריאוטקסי. מקמו את מוטות האוזניים בתעלות השמיעה והדקו את המוטות בעדינות. היזהרו: גולגולתו שלו שלו של היילוד רכה מאוד.כעת, בצעו חתך של 15 מילימטרים בקו האמצע של הגולגולת. לאחר מכן, הרחיבו בעדינות את החתך על ידי מתיחת קרקפת העור באמצעות פינצטה. כדי להשאיר את החתך פתוח, השתמשו בחתיכת כותנה ספוגה בתמיסת סלין.כעת, אתרו את ה-bregma וה-lambda, וסמנו אותם בעיפרון. השלבי הבאים של השתלת האלקטרודות הם קריטיים ויש לבצעם בדייקנות. ראשית, באמצעות מחט בכיול 26-gauge, בצעו חור קידוח (burr hole) אל תוך הקורטקס הפרה-פרונטלי, שני מילימטרים קדמה (anterior) ל-bregma ובטווח של 0.5 מילימטרים מקו האמצע.בשלב הבא, בצעו חור קידוח (burr hole) להיפוקמפוס בנקודה הנמצאת 1.8 מילימטרים מאחור ל-bregma ו-0.5 מילימטרים לצד קו האמצע. על המחט לא לחדור למעמקי המוח יותר משני מילימטרים מתחת לפני השטח של קליפת המוח כדי למזער את הנזק המוחי. כעת, באמצעות פינצטה, הכניסו את אלקטרודת הייחוס לחור בקליפת המוח, והכניסו את אלקטרודות ההקלטה לחור בהיפוקמפוס.לאחר מכן, מרחו משחת erythromycin מסביב לאלקטרודות, וקבעו את האלקטרודות במקומן באמצעות cyanoacrylate. בזמן שהדבק מתגבש, הכינו דבקי שיניים (dental cement) בעקביות דביקה וצמיגית. לצמיגות של דבק השיניים יש חשיבות קריטית.אם המלט הדנטלי דליל מדי, הדבר עלול להוביל להיווצרות של שכבה מבודדת בלתי רצויה מתחת לאלקטרודה. אם המלט דחוס מדי, האלקטרודות י detached בקלות רבה יותר בשל המסה העודפת. לפני מריחת המלט, ייבשו היטב את הגולגולת ואת האלקטרודות.לאחר מכן, קבעו את האלקטרודות לגולגולת באמצעות דבק שיניים. בעקבות זאת, מרחו מעט חומצה פיקרית על האלקטרודות כדי להוסיף להן שכבת הגנה נוספת. כעת, הוציאו את בעל החיים מהמסגרת הסטריאוטקסית, והזריקו 300 µL של תמיסת גלוקוז בריכוז של 10% תת-עורית.לאחר מכן, העבירו את בעל החיים לשמיכה מחוממת כדי לשמור על טמפרטורה של 37 degrees Celsius עד שיהיה מסוגל לנוע באופן עצמאי. ברגע שיהיה מסוגל לנוע, ניתן בופרנורפין (buprenorphine) לשיכוך כאבים לאחר הניתוח, והעבירו את הגור לכלוב ביתו יחד עם האם. לפני השימוש במשתב, המתינו לפחות יומיים עד להחלמתו של הגור.לאחר תקופת ההתאוששות, השקנו את הגור לבדו למשך כעשר דקות לצורך הקלטה, כדי שיgenius יתרגל לסביבה. חבר את האלקטרודות למגבר, ואת המגבר לממיר AD המחובר למחשב. הקפד לא לסבך את החיבורים הללו.שלב הבא, ביחידת רכישת הנתונים, בחרו קצב דגימה של לפחות 10,000 hertz להקלטה, ובדקו כי העברת הנתונים תקינה. בצעו הקלטת בסיס (baseline). לאחר ביצוע הקלטת הבסיס, מזריקו לגור חומצה קינית (kainic acid) תוך-peritoneal כדי להשרות התקפי אפילפסיה.חמש עשרה דקות לאחר ההזרקה, יש להשקיף ולתעד את הפריקות האפילפטיות. שמור את הנתונים הממומדים ונתח אותם באמצעות תוכנה לעיבוד אותות. חשוף את רמת ההספק של מרכיבי תדר שונים ב-EEGs של הרך-ולדות באמצעות ניתוח ספקטרום הספק.חשבו את ההספק מתוך מסגרות זמן של דקה אחת על ידי מציאת אמפליטודת השורש הממוצע של הריבוע (RMS) מ-1 עד 100 הרץ, המהווים את פס ה-EEG. עשר דקות לאחר ההזרקה של חומצה קאינית, נרשמו דפוסי פריקה של EEG איקטאליים ובין-איקטאליים חוזרים. הפרכוסים השכיחים ביותר שנרשמו היו מהסוג הטוני-קלוני.משך השלב הטוני האיקטלי ארך כחמישה עשר שניות. כמו כן, נצפה כי פריקה טונית ตามה בפרצי קלוניקה. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי אופן השתלת האלקטרודות והשגת הקלטות EEG באיכות גבוהה מגורי חולדה בני P8 עד P15.לאחר ההכנה, ניתן לבצע את השתלת הצוואר בפחות מעשר דקות, בהתאם למורכבות הניתוח.

recording-eeg-in-freely-moving-neonatal-rats-using-a-novel-method

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרט זה מסביר את התיאוריה רקע של פעילות EEG היילודים ואת התגובות חושיות, ואחריו הפגנה חיה של ההקלטה שלהם ביחידה לטיפול נמרץ בילוד.

מוקדמת EEG: פרוטוקול נוירופיזיולוגי multimodal

סרטון זה מדגים שיטה להקלטת EEG ברזולוציה גבוהה במודל חולדה של אפילפסיה מוקדית. הוא מתאר את השלבים הכרוכים בהכנת החולדה, חיבור מיני-כובע EEG רב-ערוצי לקרקפת של החולדה, ורישום ה-EEG כדי לזהות אירועים הקשורים להתקפים האופייניים למודל האפילפסיה.

רישום אלקטרואנצפלוגרפיה במודל חולדה של אפילפסיה מוקדית

סרטון זה מדגים רישום אלקטרואנצפלוגרפי (EEG) של התקפים אפילפטיים בחולדות המושרות על ידי אפילפסיה. חולדה עם אלקטרודות שהושתלו בהיפוקמפוס הגחוני מחוברת למערכת רישום EEG וממוקמת בתא פרספקס. החולדה מורשית לנוע בחופשיות בזמן שפעילות המוח נרשמת כדי לעקוב אחר התרחשות ההתקפים.

רישום אלקטרואנצפלוגרפי של התקפים אפילפטיים בחולדות המושרות על ידי אפילפסיה

הסרטון מדגים הקלטה של אותות אלקטרואנצפלוגרם (EEG) מגורי חולדות הנגרמים על ידי התקפים. קחו גור שנע בחופשיות עם אלקטרודות המחוברות למערכת איסוף נתונים. רעלן עצבי מנוהל כדי לגרום להתקפים אפילפטיים, ופעילות ההתפוצצות החשמלית המתקבלת מנוטרת באמצעות אות EEG.

רישום התקפים מושרים באמצעות אלקטרואנצפלוגרפיה בגורי חולדות הנעים בחופשיות

סרטון זה מדגים הקלטה של אותות מוחיים מחזרזיר הנע בחופשיות. מנקים את ראשו של חזרזיר, והאלקטרודות מחוברות. אלקטרודות אלה מחוברות לאחר מכן ליחידת טלמטריה. ההתקנה מאובטחת בגומי סיליקון. חזרזיר מותר להתאקלם לפני הקלטת נתונים.

הקלטת אותות מוחיים מחזרזירים הנעים בחופשיות

כאן אנו מדגימים את השימוש בטכנולוגיה אלחוטית המאפשרת אלקטרואנצפלוגרמה (EEG) במודלים של מכרסמים בילודים של מחלות אנושיות. עם טלמטריה, אין חיבורים מכבידים, ובכך מאפשרים התנהגויות טבעיות.

ניטור EEG הרציף ארוך טווח במודלים של מכרסמים קטנים של מחלות אנושיות באמצעות מערכת אפוק משדר אלחוטי

פרוטוקול זה מתאר שיטה פשוטה עבור הקלטה בו זמנית של שותף מקומי אלקטרואנצפלוגרם (EEG) ו- multi-למינריות שדה מקומי פוטנציאל עכברוש anesthetized. חור burr בתלמידים הגולגולת עבור הכניסה של microelectrode מוצג לייצר עיוות זניח של האות EEG.

הקלטה בו זמנית של שותף מקומי אלקטרואנצפלוגרם ופוטנציאל שדה מקומי במכרסם

מדידת כאב בחולי-מילולית היא אתגר. במחקר זה אנו משלבים EEG הקלטה עם גירוי באמצעות בדיקה שטוח-טיפ כדי לזהות פעילות מוחית יתמודד עורר בצורה אובייקטיבית.

מדידות אלקטרופיזיולוגיות של פעילות המוח יתמודד עורר Neonates באמצעות בדיקה שטוח-טיפ מצמידים אלקטרואנצפלוגרם

מחקר זה מציג שיטה עבור ההקלטה סימולטני של שדה מקומי פוטנציאל המוח, electrocardiograms, electromyograms, ונשימה אותות של חולדה נעה בחופשיות. טכניקה זו, אשר מפחית את עלויות ניסיוני ומפשטת את ניתוח הנתונים, יתרום להבנה של אינטראקציות בין המוח לבין איברים היקפיים בגוף.

הקלטות סימולטני של פוטנציאל קורטיקלית שדה מקומי, רל, Electromyogram נושם קצב מעכברוש נעה בחופשיות

כאן, אנחנו מציגים פרוטוקול electroencephalograms שיא telemetric (האא ג) לנוע בחופשיות חזירונים ישירות באבי ללא שימוש הרגעה, מהצנרת להקליט דפוסי EEG אופייני במהלך ללא השינה, כמו ציר התפרצויות.

EEG לא פולשנית הקלטות לנוע בחופשיות חזירונים

פרוטוקול זה פותח כדי ליצור מערכת אמינה ונגישה לרישום EEG של מכרסמים הנעים בחופשיות.

פרוטוקול חסכוני וזעיר פולשני לרישום אלקטרואנצפלוגרפיה כרונית מרובת אתרים בעכברים הנעים בחופשיות

למד שיטה חדשנית להקלטת EEG בחולדות ניאונטליות בתנועה חופשית. השיטה מאפשרת מעקב יציב במשך שבוע ומסייעת בחקר אפילפסיה ניאונטלית ובאבחון הפרעות נוירולוגיות.

הקלטה EEG בחופשיות העברת חולדות neonatal בשיטת רומן

גלה סרטונים נוספים