Name: הכנה ואפיון של נוזל HDL מחקה ננו-חלקיקים עבור אנקפסולציה גורם העצב הגדילה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: למדו הכנה ואפיון של ננו-חלקיקים מחקי HDL לאנקפסולציה של גורם העצב הגדילה באמצעות הומוגניזציה פשוטה. השיטה משפרת את יעילות האנקפסולציה ומאפשרת מחקר מדויק במערכות משלוח תרופות נוירונליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NIH R03 NS087322-01 ל- Dong, X.

הערה: מחקרים בבעלי חיים שנכללו בכל ההליכים אושרו על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ושימוש הוועדה באוניברסיטת צפון טקסס בריאות המרכז למדע. 1. הכנת חלקיקי NGF HDL מחקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים את ה- excipients, phosphatidylcholine (PC), sphingomyelin (SM), phosphatidylserine (PS), cholesteryl oleate (CO), ו- D-α-tocopheryl פוליאתילן גליקול succinate (TPGS), באתנול להכין פתרונות מלאי ב 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל. הערה: פתרונות המניות היו aliquoted ומאוחסנים ב -20 מעלות צלזיוס. האוליאט הצ&#39;ולסטרי היה מאוחסן בבקבוקים כהים. ה- PC, SM, PS, ו- CO פתרונות מלאי היו יציבים עד 6, 3, 12, ו 12 חודשים, בהתאמה, ב -20 מעלות צלזיוס. הפתרון TPGS היה יציב לפחות 12 חודשים ב -20 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים 10 μL של NGF (1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​במים) עם 10 μL של פרוטמין USP (1 מ&quot;ג / מ&quot;ל ​​במים) בצינור microcentrifuge 1.5 מ&quot;ל ולתת לו לעמוד במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר כדיטופס מורכב. הערה: NGF ופתרונות מניות פרוטמין היו aliquoted ומאוחסנים ב -20 מעלות צלזיוס. הקפאה חוזרת והפשרה לא מומלצות במלאי NGF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 59 μL של המחשב, μL 11 של SM, 4 μL של PS, 15 μL של CO, ו 45 μL של TPGS בקבוקון זכוכית. מערבבים להתאדות אתנול תחת זרם חנקן עדין במשך כ 5 דקות; כל excipients צריך טופס שמנוני, סרט דק בתחתית בקבוקון זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים 1 מ&quot;ל של ultrapure (סוג 1) מים בקבוקון homogenize ב 9,500 סל&quot;ד (8,600 xg) במשך 5 דקות בטמפרטורת החדר כדי ליצור את NPs אב טיפוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את המורכב מוכן בשלב 1.2 כדי NPs אב טיפוס ו דגירה על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות עם ערבוב באמצעות סרגל ערבוב קטן בקבוקון זכוכית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מגניב את NPs למטה על ידי ערבוב בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות נוספות. לאחר זה מתקרר, להוסיף 106 μL של Apo AI (1.49 מ&quot;ג / מ&quot;ל) ומערבבים בטמפרטורת החדר בן לילה כדי ליצור הסופיNGF HDL מחקה NPs. </li></ol></li></ol> 2. אפיון של חלקיקי NGF HDL מחקה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את גודל החלקיקים ואת הפוטנציאל zeta באמצעות Analyzer החלקיקים (ראה את לוח החומרים) בהתאם להוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בטור צולב agarose ג&#39;ל chromatography סינון כדי להפריד בין NGF פריקה מן nps HDF מחקה NPs ולקבוע את יעילות מלכודת של NGF. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להכנת הכנה, להעביר 15 מ&quot;ל של השערת ספרוס 4B-CL על כוס 50 מ&quot;ל. מערבבים את החרוז ההשעיה באמצעות מוט זכוכית לשפוך קצת לתוך עמודה (30 ס&quot;מ אורך × 1 ס&quot;מ קוטר, עם frit זכוכית בתחתית). בעדינות הקש על הטור כדי להיפטר בועות. אפשר ממס לניקוז החרוזים להתיישב במשך כמה דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך להוסיף את ההשעיה הנותרת. שוטפים את הקיר הפנימי של העמוד כדי לנקות את החרוזים. מסננים את הממס עד רמת הממס מעטBove בראש השלב נייח. שטפו את העמודה עם 20 מ&quot;ל של 1x פוספט שנאגרו מלוחים (PBS, המכיל 137 מ&quot;מ NaCl, 2.7 מ&quot;מ KCl, 8 מ&quot;מ Na 2 HPO 4 , ו 2 mM KH 2 PO 4 ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע את שברים המכילים NGF פריקה, לטעון 200 μL של פתרון NGF (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל) על עמודה סינון ג&#39;ל (25 ס&quot;מ אורך x 1 ס&quot;מ קוטר) ו elute עם 1x PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאסוף סך של 12 שברים (1 מ&quot;ל עבור כל חלק) ולמדוד את הריכוז של NGF בכל חלק באמצעות ערכת כריך ELISA עבור NGF. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זיהוי NGF מ שברים 6-10 באמצעות ערכת סנדוויץ ELISA. קבל chromatogram של NGF פריקה על העמודה. שטפו את הטור עם 20 מ&quot;ל של PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע את שברים המכילים NGF HDL מחקה NPs, לטעון 200 μL של NPs על עמודה elute עם 1x PBS. לאסוף סך של 12 שברים (1 מ&quot;ל עבור כל חלק) ולמדוד את עוצמתם של חלקיקים בכל שבר Uלשיר את מנתח גודל החלקיקים. זיהוי NPs NGF מ שברים 2 עד 4. הערה: האינטנסיביות היא פרמטר נמדד על ידי מנתח החלקיקים, אשר מספר כיצד חלקיקים רבים עשויים להתקיים פתרון הבדיקה. ככל שיותר NPs קיימים בפתרון, כך העוצמה גבוהה יותר. לפי גישה זו, אנו יכולים לאשר כי הטור יכול להפריד NPs NPs מ NGF פריקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למדוד את יעילות מלכודת של NGF, לטעון 200 μL של NGF HDL- מחקה NPs על עמודה elute עם 1x PBS. לאסוף סך של 12 שברים (1 מ&quot;ל עבור כל חלק). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למדוד את ריכוז NGF פריקת מ שברים 6 עד 10 באמצעות ערכת סנדוויץ ELISA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים את כמויות NGF הנמדד מ שברים 6-10 יחד כמו NGF פריקה ולחשב את יעילות מלכודת של NGF באמצעות המשוואה הבאה. % EE = (1 - פריקה NGF / NGF הכולל נוספה לתוך NP) x 100% משוואה (1) </li></ol></li></ol> 3. במהדורה חוץ גופית של NGF HDLמחקה ננו-חלקיקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחקר חינם NGF (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​במים, n = 4) ו NGF HDL מחקה NPs (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל, n = 4) במקביל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום לטפל 8 צינורות דיאליזה (חתך משקל מולקולרי: 300 kDa) על ידי ביצוע הוראות היצרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 5% אלבומין בסרום שור (BSA) ב PBS כמו המדיום שחרור. הוסף 30 מ&quot;ל של המדיום שחרור צינור 50-מ&quot;ל צנטריפוגות לחמם אותו עד 37 מעלות צלזיוס שייקר עם מהירות סל&quot;ד 135 רועד. מקום אחר 50 מ&quot;ל של המדיום שחרור שייקר להחלפה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 400 μL של המדיום שחרור לתוך צינור דיאליזה במהירות להוסיף 200 μL של המדגם נבדק לעשות מספיק נפח עבור דיאליזה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגור את הצינור במהירות לשים את צינור דיאליזה לתוך המדיום שחרור (צינור צנטריפוגה). מהר לסגת 100 μL של המדיום שחרור מן צינור דיאליזה בחוץ כמו המדגם עבור הזמן 0. מיד לשים את המדגם לתוך -20 מעלות צלזיוס לניתוח מאוחר יותר. הוסף 100 μL של טרי מחדשבינוני השכירות לתוך צינור צנטריפוגה להחליף את המדגם נסוגה. הפעל את הטיימר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48, ו 72 שעות, למשוך 100 μL של המדיום שחרור ולהחליף אותו עם 100 μL של המדיום הטרי. מיד לשים את דגימות נסוג לתוך -20 מעלות צלזיוס לניתוח מאוחר יותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 72 שעות, להוציא את כל הדגימות מ -20 ° C ולהפשיר אותם בטמפרטורת החדר. למדוד את ריכוזים NGF של דגימות שחרור באמצעות ערכת סנדוויץ ELISA. </li></ol> 4. Bioactivity של NGF HDL מחקה חלקיקים (מחקר Neurite Outgrowth) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התרבות תאים PC12 ב RPMI-1640 בינוני בתוספת 10% החום- inactivated בסרום בסרום, 5% בסרום שור עוברית, 100 מיקרוגרם / מ&quot;ל ​​סטרפטומיצין, ו 100 יחידות / פניצילין מ&quot;ל. לשמור על תאים חממה humidified ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התאים מגיעים ~ 70-80% מפגש, להסיר את המדיום תרבות לשטוף את התאים עם 1x PBS (כ 2 מ&quot;ל לכל 10 ס&quot;מ &lt;Sup&gt; 2 משטח משטח התרבות). הסר את הפתרון לשטוף. Trypsinize התאים על ידי הוספת 0.25% פתרון טריפסין-EDTA (0.25% טריפסין ו 1 מ&quot;מ EDTA, 0.5 מ&quot;ל לכל 10 ס&quot;מ 2 שטח פני השטח תרבות) כדי הבקבוק ו דגירה על 37 מעלות צלזיוס עד רוב התאים מנותקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף שני כרכים של המדיום תרבות ספין למטה ב XG 180 במשך 5 דקות. הסר את supernatant ו resuspend תא גלולה ב 5 מ&quot;ל של המדיום תרבות. סנן את התאים באמצעות מחט G 22, ½ אינץ &#39;לשבור אשכולות התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיצול התאים ביחס של 1: 3 לתוך בקבוק חדש תרבות התא. לאחר הדגירה בן לילה, להסיר תאים PC12 ללא חיבור. אפשר לתאים המצורפים להישאר לצמיחה נוספת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על הליך זה עבור 3 מעברים כדי לבחור את תת התרבות של PC12 כי יש תכונה הדבקה חזקה. מראש מעיל צלחת 6-היטב עם 800 μL / גם של זנב חולדה זנב קולגן סוג אני (100 מיקרוגרם / מ&quot;ל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinize PC12 תאים שנבחרו כמתואר בשלב 4.2 ולסנן אותם דרך22 G, חצי אינץ מחט לשבור את אשכולות התא. לספור את התאים עם hemocytometer. זרע את התאים לילה בצפיפות של 10,000 תאים / גם צלחת מראש מצופה היטב 6 בשלב 4.5 כדי לאפשר לתאים לצרף את הצלחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל חינם NGF (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל) ו NGF HDL לחקות NPs (10 מיקרוגרם / מ&quot;ל) עם המדיום התרבות (המתואר בשלב 4.1) להכין 0.5, 1, 5, 10, 50, 100 ng / מ&quot;ל ​​ריכוזים. הסר 2 מ&quot;ל של מדיום מכל היטב ולהחליף עם 2 מ&quot;ל של NGF חינם מדולל או NGF HDL מחקה NPs. תרבות במשך 4 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 4, שנה את המדיום בינוני עד טרי (המתואר בשלב 4.1) המכיל את הטיפול המתאים ולהמשיך את הטיפול במשך 3 ימים נוספים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 7, לדמיין את התאים עם מיקרוסקופ אור הפוכה ואת התמונה כל היטב כתמים אקראיים תחת הגדלה 10X. </li></ol> 5. Biodistribution של NGF HDL- מחקה חלקיקים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש מבוגר BALB / c עכברים (זכר, 25-30 גרם) כדי tEst את התפלגות רקמות NGPs NGF. באופן אקראי לחלק את העכברים לשלוש קבוצות של 3 עכברים לכל קבוצה. השתמש קונוס פלסטיק בצורת קונוס ( למשל, decapicone) כדי לרסן עכבר ולנגב את הזנב עם אתנול כדי לקדם vasodilation ואת הנראות של הווריד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק 100 μL של מלוחים או NGF חינם, או NGF HDL לחקות NPs לכל קבוצה של עכברים (3 קבוצות) דרך הוורידים הזנב במינון של 40 מיקרוגרם / ק&quot;ג של NGF. השתמש מחט 30½ G המצורפת מזרק 1 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ב 30 דקות לאחר ההזרקה, להרדים את העכברים באמצעות isoflurane בשאיפה 3% (בחמצן בקצב הזרימה של 2 L / min). בצע זנב קמצוץ קמצוץ כדי לקבוע את עומק ההרדמה. איסוף דם על ידי לנקב לב. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משוך כ 1 מ&quot;ל של דם מהלב. להרדים כל עכבר על ידי נקע בצוואר הרחם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את פגר העכבר בשכיבה הגב. פתח את הבטן באמצעות מספריים כירורגיים להעביר שומן ומעי בצדבאמצעות צמר גפן כדי לחשוף את הכבד, הטחול והכליות. קציר אלה רקמות ולשטוף אותם 1x PBS לנקות את הדם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיד צנטריפוגה דגימות דם ב 3,400 XG ו 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות כדי לקבל את הפלזמה. חנות פלזמה ורקמות ב -80 מעלות צלזיוס עד הניתוחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לנתח את דגימות רקמה, להזיז את הדגימות מ -80 מעלות צלזיוס עד 4 מעלות צלזיוס ו להשעות 100 מ&quot;ג של מדגם רקמה בנפח 10x של חיץ החילוץ (0.05 M אצטט אצטט, 1.0 M כלורי נתרן, 1% טריטון X-100, 1% BSA, 0.2 mM phenylmethanesulfonyl פלואוריד, ו 0.2 mM benzethonium כלורי). Homogenize ב 10,000 סל&quot;ד ו 4 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להקריב שני עכברים untreated לאסוף ריק פלזמה ורקמות, כמתואר צעדים 5.3 ו - 5.4. הכן פתרונות סטנדרטיים NGF באמצעות הומוגנטים ריק פלזמה ריק או homogenates ריק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקבוע את ריכוזי NGF ב homogenates פלזמה ורקמות באמצעות ערכת סנדוויץ ELISA, כמתואר לעיל. </li></ol>

<ol><li>Bruno, B. J., Miller, G. D., Lim, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basics+and+recent+advances+in+peptide+and+protein+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Ther+Deliv%22%5BJournal%5D)">Basics and recent advances in peptide and protein drug delivery.</a> Ther Deliv. 4 (11), 1443-1467 (2013).</li>
<li>Mo, Z. C., Ren, K., Liu, X., Tang, Z. L., Yi, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-density+lipoprotein-mediated+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">A high-density lipoprotein-mediated drug delivery system.</a> Adv Drug Deliv Rev. 106 (Pt A), 132-147 (2016).</li>
<li>Lacko, A. G., Sabnis, N. A., Nagarajan, B., McConathy, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL+as+a+drug+and+nucleic+acid+delivery+vehicle%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">HDL as a drug and nucleic acid delivery vehicle.</a> Front Pharmacol. 6, 247-252 (2015).</li>
<li>Vaishya, R., Khurana, V., Patel, S., Mitra, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+delivery+of+protein+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Long-term delivery of protein therapeutics.</a> Expert Opin Drug Deliv. 12 (3), 415-440 (2015).</li>
<li>Lasic, D. D., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLasic%2C+DD+%22Medical+application+of+liposomes%22">Medical application of liposomes</a>. , Elsevier. (1998).</li>
<li>Samad, A., Sultana, Y., Aqil, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomal+drug+delivery+systems%3A+an+update+review%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Liposomal drug delivery systems: an update review.</a> Curr Drug Deliv. 4 (4), 297-305 (2007).</li>
<li>Bezemer, J. M., Radersma, R., Grijpma, D. W., Dijkstra, P. J., van Blitterswijk, C. A., Feijen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microspheres+for+protein+delivery+prepared+from+amphiphilic+multiblock+copolymers%3A+2.+Modulation+of+release+rate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Microspheres for protein delivery prepared from amphiphilic multiblock copolymers: 2. Modulation of release rate.</a> J Control Release. 67 (2-3), 249-260 (2000).</li>
<li>Patel, A., Patel, M., Yang, X., Mitra, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+protein+and+peptide+drug+delivery%3A+a+special+emphasis+on+polymeric+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Pept+lett%22%5BJournal%5D)">Recent advances in protein and peptide drug delivery: a special emphasis on polymeric nanoparticles.</a> Protein Pept lett. 21 (11), 1102-1120 (2014).</li>
<li>Kuai, R., Li, D., Chen, Y. E., Moon, J. J., Schwendeman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoproteins%3A+nature%27s+multifunctional+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">High-density lipoproteins: nature's multifunctional nanoparticles.</a> ACS Nano. 10 (3), 3015-3041 (2016).</li>
<li>Gursky, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+stability+and+functional+remodeling+of+high-density+lipoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Structural stability and functional remodeling of high-density lipoproteins.</a> FEBS Lett. 589 (19 Pt A), 2627-2639 (2015).</li>
<li>McMahon, K. M., Thaxton, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoproteins+for+the+systemic+delivery+of+short+interfering+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">High-density lipoproteins for the systemic delivery of short interfering RNA.</a> Expert Opin Drug Deliv. 11 (2), 231-247 (2014).</li>
<li>McMahon, K. M., Foit, L., Angeloni, N. L., Giles, F. J., Gordon, L. I., Thaxton, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+high-density+lipoprotein-like+nanoparticles+as+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treat+Res%22%5BJournal%5D)">Synthetic high-density lipoprotein-like nanoparticles as cancer therapy.</a> Cancer Treat Res. 166, 129-150 (2015).</li>
<li>Lerch, P. G., Förtsch, V., Hodler, G., Bolli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+characterization+of+a+reconstituted+high+density+lipoprotein+for+therapeutic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Production and characterization of a reconstituted high density lipoprotein for therapeutic applications.</a> Vox Sang. 71 (3), 155-164 (1996).</li>
<li>Zhang, Z., Chen, J., Ding, L., Jin, H., Lovell, J. F., Corbin, I. R., Cao, W., Lo, P. C., Yang, M., Tsao, M. S., Luo, Q., Zheng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL-mimicking+peptide-lipid+nanoparticles+with+improved+tumor+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">HDL-mimicking peptide-lipid nanoparticles with improved tumor targeting.</a> Small. 6 (3), 430-437 (2010).</li>
<li>Kim, Y., Fay, F., Cormode, D. P., Sanchez-Gaytan, B. L., Tang, J., Hennessy, E. J., Ma, M., Moore, K., Farokhzad, O. C., Fisher, E. A., Mulder, W. J., Langer, R., Fayad, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+step+reconstitution+of+multifunctional+high-density+lipoprotein-derived+nanomaterials+using+microfluidics%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Single step reconstitution of multifunctional high-density lipoprotein-derived nanomaterials using microfluidics.</a> ACS Nano. 7 (11), 9975-9983 (2013).</li>
<li>Prathipati, P., Zhu, J., Dong, X. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+novel+HDL-mimicking+%CE%B1-tocopherol-coated+nanoparticles+to+encapsulate+nerve+growth+factor+and+evaluation+of+biodistribution%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharm+and+Biopharm%22%5BJournal%5D)">Development of novel HDL-mimicking α-tocopherol-coated nanoparticles to encapsulate nerve growth factor and evaluation of biodistribution.</a> Eur J Pharm and Biopharm. 108, 126-135 (2016).</li>
</ol>

למחברים אין מה לחשוף.

במחקר זה, אנו מדגימים שיטה פשוטה להכין NPs HDL מחקה עבור אנקפסולציה NGF. מערכות שונות של משלוח NP נחקרו על מנת לספק חלבונים. נכון לעכשיו, ההכנות NP רבים כוללים דיאליזה, משקעים ממס, ואת הסרט הידרציה. תהליכים אלה הם בדרך כלל מסובך ומאתגר בקנה מידה. במהלך פיתוח NP זה, נקבע כי השומנים היו הדבקה חזקה על הקיר זכוכית של המכולה, אשר הובילה את הקשיים לחות את הסרט הדק ומערבבים ביעילות את excipients. בהתחשב במספר רכיבים טבעי HDL NPs, ערבוב הפך מאוד מאתגר חיוני להכנת NPs HDL מחקה. על פי התוצא...

מקרומולקולות, כגון חלבונים, פפטידים וחומצות גרעין, החלו להופיע כתרופות מבטיחות וזכו לתשומת לב רבה בעשורים האחרונים 1 , 2 . בשל היעילות הגבוהה שלהם ואת מצבי פעולה ספציפיים, הם מפגינים פוטנציאל טיפולי נהדר לטיפולים של סרטן, מחלות החיסון, HIV, ותנאים קשורים 3 , 4 . עם זאת, תכונות פיזיוכימיות, כגון גודל המולקולרי הגדול שלהם, מבנה תלת מימדי, חיובים משטח, וטבע הידרופילי, להפוך את vivo המסירה של מקרומולקולות אלה מאתגר מאוד. זה פוגע במידה ניכרת בשימוש הקליני שלהם. ההתקדמות האחרונה במערכות מסירת תרופות, כגון מיקרו-חלקיקים, חלקיקים פולימריים (NP), ליפוזומים ושפכי שומנים בדם, התגברה על אתגרים אלו ושיפרה משמעותית את המשלוח ב- vivo של מקרומולקולות. הואנו חושפים כמה חסרונות לגבי המטענים הללו, כולל יכולת טעינה נמוכה של סמים, יעילות מלכודת נמוכה, מחצית חיים קצרה, אובדן ביו-אקטיביות ותופעות לוואי לא רצויות 5 , 6 , 7 , 8 . מערכות הספק אפקטיביות נותרו תחום עניין מחקרי. יתר על כן, הפיתוח של שיטות אנליטיות לאפיין NPs נטען סמים הוא מאתגר יותר עבור מקרומולקולות מאשר מולקולות קטנות. ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה (HDL) הוא NP טבעי המורכב מליבת שומנים המצופה על ידי אפוליפופרוטאינים ו monolayer phospholipid. HDD אנדוגני ממלא תפקיד קריטי בהעברת ליפידים, חלבונים וחומצות גרעין באמצעות האינטראקציה עם קולטני היעד, כגון SR-BI, ABCAI ו- ABCG1. הוא נבדק ככלי להעברת סוכני טיפול שונים 9, 10 , 11 , 12 . שיטות שונות פותחו כדי להכין HDL מחקה NPs. דיאליזה היא גישה פופולרית. בשיטה זו, NPs נוצרים על ידי לחות סרט השומנים באמצעות פתרון cholate נתרן. מלח מוסר מכן באמצעות דיאליזה של יומיים עם שלושה מאגרים 13 . שיטות Sonication לפברק NPs ידי sonicating תערובת השומנים עבור 60 דקות תחת תנאי חימום; NPs הם מטוהרים נוספת באמצעות כרומטוגרפיה ג&#39;ל 14 . Microfluidics מייצר NPs באמצעות מכשיר microfluidic, אשר מתערבב phospholipids ו apolipoprotein AI (Apo AI) פתרונות על ידי יצירת microvortices בדפוס מיקוד 15 . ברור, שיטות אלה יכול להיות זמן רב, קשה, וקשה עבור התעשייה בקנה מידה למעלה. במאמר זה, אנו מציגים את הכנה ואפיון של NPs חדש HDL חיקוי עבור עצבאנקפסולציה של גורם גדילה (NGF). NGF הוא homiodimer polycptide דיסולפיד מקושר המכיל שני מונומרים פוליפפטיד 13.6-kDa. נוהל חדש להכנת NPs על ידי homogenization, ואחריו אנקפסולציה של NGF לתוך NPs, פותחה. NGP HDL - חיקוי NPs אופיינו עבור גודל החלקיקים, התפלגות גודל, פוטנציאל zeta, ו במבחנה לשחרר. ביואקטיביות שלהם הוערך עבור תולדה neurite בתאי PC12. הפצה ביולוגית של NGP-nff HDL מחקה הושווה לזו של NGF חופשי לאחר הזרקה תוך וריידית בעכברים.

<table><tbody><tr><td>רקומביננטי בטא-NGF</td><td>Creative Biomart</td><td>NGF-05H</td><td></td></tr><tr><td>L-&alpha;-פוספטידילכולין (PC)</td><td>Avanti</td><td>131601P</td><td>95%, ביצים,</td></tr><tr><td>ספינגומיאלין עוף (SM)</td><td>Avanti</td><td>860062P</td><td>מוח,</td></tr><tr><td>חזיר פוספטידילסרין (PS)</td><td>Avanti</td><td>840032P</td><td>מוח, חזיר</td></tr><tr><td>כולסטריל אולאט (CO)</td><td>Sigma</td><td>C9253</td><td></td></tr><tr><td>D-&alpha;-טוקופריל פוליאתילן גליקול סוקסינט (TPGS)</td><td>BASF</td><td>9002-96-4</td><td>ויטמין E פוליאתילן גליקול סוקסינט</td></tr><tr><td>פרוטמין סולפט</td><td>סיגמא</td><td>P3369</td><td>עומד במפרטי הבדיקה של USP</td></tr><tr><td>אפוליפופרוטאין A1, פלזמה אנושית</td><td>אתונה מחקר & טכנולוגיה</td><td>16-16-120101</td><td>1 מ"ג ב-671 ומיקרו; L 10 מ"מ NH4HCO3, pH 7.4</td></tr><tr><td>Sepharose 4B-CL</td><td>Sigma</td><td>CL4B200</td><td>אגרוז צולב, &nbsp; חומר מילוי עמודה כרומטוגרפיה סינון ג'ל</td></tr><tr><td>ערכת ELISA עבור NGF</td><td>R& D system</td><td>DY008</td><td></td></tr><tr><td>בקר סרום אלבומין</td><td>סיגמא</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 בינוני</td><td>GE Healthcare Life Science</td><td>SH30096.02</td><td></td></tr><tr><td>סרום סוסים</td><td>GE Healthcare Life Science</td><td>SH30074.03</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>תאי PC12</td><td>ATCC</td><td>CRL-1721</td><td></td></tr><tr><td>זנב חולדה קולגן מסוג I</td><td>Sigma</td><td>C3867</td><td></td></tr><tr><td>נתרן אצטט</td><td>Sigma</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>Sigma</td><td>31414</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>פנילמתאן סולפוניל פלואוריד (PMSF)</td> <td>Sigma</td><td>P7626</td><td></td></tr><tr><td>בנזטוניום כלוריד</td><td>Sigma</td><td>B8879</td><td></td></tr><tr><td><חזק> שם</חזק></td><td><חזק>חברה</חזק></td><td><חזק>מספר קטלוגי</חזק</td><td>><חזק>הערות</חזק></td></tr><tr><td><חזק>ציוד</חזק></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר</td><td>Tekmar T</td><td>25-S1</td><td></td></tr><tr><td>מנתח חלקיקים Delsa Nano HC</td><td>בקמן-קולטר</td><td>Delsa Nano HC</td><td></td></tr><tr><td>Float-A-Lyzer G2 מכשירי דיאליזה</td><td>ספקטרום מעבדות</td><td>G235036</td><td>מולקולה Cutoff 300 kDa</td></tr><tr><td>צנטריפוגה</td><td>Eppendoff</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>הומוגנייזר פוליטרון</td><td>Kinematica</td><td>PT 1200C</td><td></td></tr><tr><td>DecapiCone</td><td>&nbsp; בריינטרי סיינטיפיק בע"מ</td><td>DC-M200</td><td></td></tr></tbody></table>

הכנה ואפיון של נוזל hdl מחקה ננו-חלקיקים עבור אנקפסולציה גורם העצב הגדילה

Preparation and Characterization of Novel HDL-mimicking Nanoparticles for Nerve Growth Factor Encapsulation

מטרתו של מאמר זה היא להציג שיטות הכנה ואפיון עבור ננו-חלקיקים (NP) של גורם הגדילה העצבי (NGF) - נטען, בצפיפות גבוהה, ליפופרוטאין (HDL). HDLs הם NPs אנדוגני ו כבר נבדקו כמו כלי רכב עבור משלוח של סוכני טיפול. שיטות שונות פותחו כדי להכין HDL מחקה NPs. עם זאת, הם בדרך כלל מסובך, זמן רב, וקשה עבור התעשייה בקנה מידה. במחקר זה, צעד אחד homogenization שימש לערבב את excipients וליצור את NPs אב טיפוס. NGF הוא חלבון מסיס במים של 26 kDa. כדי להקל על אנקפסולציה של NGF לתוך הסביבה שומנים של HDL חיקוי NPs, protamine USP שימש ליצירת מורכבות זוג יון עם NGF לנטרל את החיובים על פני NGF. המתחם NGF / protamine הוכנס אז לתוך NPs אב טיפוס. Apolipoprotein AI היה סוף סוף מצופה על פני השטח של NPs. NGF HDL - חיקוי NPs הראה תכונות מועדפות בטווחS של גודל החלקיקים, הפצה גודל, יעילות מלכודת, שחרור במבחנה , bioactivity, ביודיסטריבוציזציה. עם תכנון זהיר של חקר homogenization ב HDL חיקוי NPs, ההליך היה פשוט מאוד, ואת NPs נעשו מדרגי. יתר על כן, אתגרים שונים, כגון הפרדת NGF פריקה מן NPs, ביצוע מחקרים אמינים במבחנה שחרור, ומדידת הפעילות הביולוגית של NPs, היו להתגבר.

ערכת הנדסה של HDL מחקה, α-tocopherol מצופה NGF NPs שהוכנו על ידי אסטרטגיה יון זוג מוצג באיור 1 . כדי לנטרל את המטענים על פני השטח של NGF, פרוטמין USP שימש כסוכן יון זוג כדי ליצור מורכבת עם NGF. כדי להגן על bioactivity, אב טיפוס HDL - חיקוי NPs היו מהונדסים, תחילה באמצעות homogenization; לאחר מכן, מורכבות NGF / protamine היה encapsulated לתוך NPs אב טיפוס. Homogenization בתנאי מספיק אנרגיה בהצלחה לקדם את ערבוב של excipients. לאחר ho...

Homogenization פשוט שימש להכנת רומן, צפיפות גבוהה, lipoprotein- חיקוי חלקיקים כדי לתמצת את גורם הגדילה העצבים. אתגרים, פרוטוקולים מפורטים להכנת nanoparticle, אפיון במבחנה , וכן ב vivo מחקרים מתוארים במאמר זה.

הכנה ואפיון של נוזל HDL מחקה ננו-חלקיקים עבור אנקפסולציה גורם העצב הגדילה

The objective of this article is to introduce preparation and characterization methods for nerve growth factor (NGF)-loaded, high-density, lipoprotein ...

המטרה הכללית של מאמר זה היא להציג שיטות להכנה ולאפיון של ננו-חלקיקים המדמים ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה (HDL) וטעונים בגורם צמיחה עצבי (NGF). להכנת ננו-חלקיקים רגילים המדמים ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה נעשה שימוש בהומוגניזציה פשוטה. ההליך פשוט וניתן להרחבה.יתרה מכך, הננו-חלקיק שיפר משמעותית את יעילות הכלוא, גם עבור NGF ו-APOA1 בננו-חלקיקים. הושגו פתרונות למספר אתגרים באפיון הננו-חלקיק, כולל הפרדת NGF שאינו כלוא מננו-חלקיקי NGF, ביצוע מחקרי רדיוס אמינים in vitro, והזמינות הביולוגית של ננו-חלקיקי NGF. לתחילת הפרוטוקול, ערבבו 10 µL של NGF עם 10 µL של protamine USP במבחנה של מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 mL והניחו לתערובת לעמוד במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר להיווצרות הקומפלקס.בשלב הבא, הוסיפו 59 µL של phosphatidylcholine ו-11 µL של sphingomyelin לבקבוק זכוכית. הוסיפו גם 4 µL של phosphatidylserine,‏ 15 µL של cholesteryl oleate ו-45 µL של tocopheryl polyethylene glycol succinate. ערבבו ואפרו את האתנול תחת זרם עדין של חנקן למשך כחמש דקות.כל החומרים העזרים צריכים ליצור שכבה שומנית דקה בתחתית מבחנת הזכוכית. הוסף מיליליטר אחד של מים אולטרה-טהורים למבחנה והומוגניז ב-9,500 rpm למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר כדי ליצור את הננו-חלקיקים הראשוניים, או NPs. לאחר מכן, הוסף את התצורה שהוכנה ל-NPs הראשוניים.דגרו את התרחיף בטמפרטורה של 37 °C למשך 30 דקות תוך כדי ערבוב, באמצעות מוט ערבוב קטן בתוך מבחנה מזכוכית. קררו את ה-NPs על ידי ערבוב בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות נוספות. לאחר הקירור, הוסיפו 106 µL של apolipoprotein A-1 וערבבו בטמפרטורת החדר למשך הלילה כדי ליצור את ה-NGF HDL-mimicking NPs הסופיות.מדוד את גודל החלקיקים ואת פוטנציאל הזטא באמצעות מנתח חלקיקים בהתאם להוראות היצרן. עמודת כרומטוגרפיית סינון ג'ל בעלת קשרי צלב משמשת להפרדת ה-NGF שלא נטען מהננו-חלקיקים המדמים HDL-NGF, ולקביעת יעילות הכליאה של ה-NGF. להכנת העמודה, העבר 15 milliliters של תרחיף sepharose 4B CL לכלי כימי של 50 milliliters.ערבבו את תגלי התמיסה של החרוזים ושפכו חלק ממנה לתוך עמודה. הקישו בעדינות על העמודה כדי להסיר בועות אוויר. המתינו מספר דקות עד שהממס ינוער והחרוזים ישקעו.המשיכו להוסיף את שאר התמיהה. שטפו את הדופן הפנימית של העמודה כדי לנקות את החרוצים. נקזו את הממס עד שגובה הממס יהיה מעט מעל החלק העליון של הפאזה הנייחת.לאחר מכן, שטפו והכינו את העמודה באמצעות 20 milliliters של 1X phosphate-buffered saline. כדי למדוד את יעילות הלכידה של ה-NGF, טענו 200 microliters של NGF HDL-mimicking NPs על העמודה ובצעו אלוציה עם 1X PBS. כפי שנעשה קודם לכן, אספו סך הכל 12 פראקציות של one-milliliter.הכינו שמונה צינורות דיאליזה על פי הוראות היצרן. הוסיפו 30 מיליליטר של מzיווים לשחרור (release medium) לתוך מבחנה לצנטריפוגה בנפח של 50 מיליליטר. לאחר מכן, חממו את התמיסה ל-37 degrees Celsius במכשיר ניעור במהירות של 135 rpm.סגרו את צינור הדיאליזה והניחו אותו בתוך תמיסת השחרור. שאבו במהירות 100 µL מתמיסת השחרור מהחלק שמעבר לצינור הדיאליזה כדגימה לזמן אפס. העבירו מיד את הדגימה לטמפרטורה של 20°C- לצורך ניתוח מאוחר יותר.הוסיפו 100 µL של תווך שחרור טרי לתוך מבחנת הצנטריפוגה כדי להחליף את הדגימה שהוצאה. לאחר מכן, הפעילו את הטיימר. בנקודות הזמן של 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48 ו-72 שעות, הוציאו 100 µL מתווך השחרור והחליפו אותם ב-100 µL של תווך טרי.העבירו מיד את הדגימות שנשאבו לטמפרטורה של מינוס 20 מעלות צלזיוס לצורך אנליזה מאוחרת. לאחר הומוגניזציה של שלוש דקות, התקבלו גודלי חלקיקים עקביים עבור ננו-חלקיקי הפרוטוטיפ. לננו-חלקיקי ה-NGF הסופיים היה גודל חלקיקים של 170 ננומטר עם התפלגות גדלים צרה ומונו-דיספרסית.NGF שאינו טעון וננו-חלקיקים הופרדו באופן מלא בעמודת סינון ג'ל. הננו-חלקיקים נשטפו בפרקשנים שתיים עד ארבע. מדידת ELISA הצביעה על כך ש-NGF חופשי נשטף בפרקשן 7 עד פרקשן 10.יעילות הכליאה המחושבת של NGF הייתה כ-66%. שחרור in vitro של ננו-חלקיקי NGF מוצג כאן. על ידי הוספת PBS ו-BSA למדיום השחרור, NGF חופשי עבר דרך ממברנת הדיאליזה עם התאוששות של מעל 85%. לעומת זאת, ננו-חלקיקי NGF הראו פרופיל שחרור איטי, כאשר כ-10% מה-NGF השתחרר מהננו-חלקיקים לאורך 72 שעות. ננו-חלקיקי NGF עוררו צמיחת נוריטים בתאי PC12 במידה דומה לזו של NGF חופשי.צמיחת נוריטים נצפתה בבירור תחת המיקרוסקופ עבור שתי הקבוצות כאשר המינון היה 50 ng/mL. ננו-חלקיקי NGF הגדילו באופן משמעותי את הריכוז בפלזמה והפחיתו את הספיגה של NGF בכבד, בכליות ובטחול של העכברים. ננו-חלקיקים המדמים HDL סייעו ל-NGF, ובכך אפשרו זמן מחצית חיים ארוך ויציבות in vivo.לאחר השליטה בטכניקה, ניתן להכין ננו-חלקיקים מונו-דיספרסיים תוך שלוש דקות באמצעות שיטת הומוגניזציה, אם היא מבוצעת כהלכה. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור להשתמש בזרם חנקן עדין כדי לאדות את הממס, ולוודא שלא נשאר שארית ליפידים הדבקה על דופן המכל לאחר ההומוגניזציה. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה לגבי אופן הכנת ננו-חלקיקים דמויי HDL באמצעות שיטת הומוגניזציה, וכיצד לאפיין ננו-חלקיקים טעונים NGF.

preparation-characterization-novel-hdl-mimicking-nanoparticles-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

מקור: Rosenberg, M., et al. תכנון סרטי סיליקון נקבוביים כנשאים של גורם גדילה עצבי. J. Vis. Exp. (2019).סרטון זה מדגים את השימוש בסרט סיליקון נקבובי ננו-מובנה מתכלה (PSi) לשחרור מתמשך של גורם גדילה עצבי (NGF) כדי לתמוך בהתמיינות תאי PC12. NGF נספג על נקבוביות הסרט באמצעות אינטראקציות אלקטרוסטטיות ומשתחרר בהדרגה למדיה על ידי דיפוזיה ופירוק פיגומים. אספקה מבוקרת זו מקדמת את הישרדות תאי PC12 ומקלה על צמיחה והסתעפות של נויריטים לאורך תקופה ממושכת.

אספקה מתמשכת של גורם גדילה עצבי באמצעות סרט סיליקון נקבובי בתאי Pheochromocytoma 12 של חולדה

מקור: Zhu, J., et. al., הכנה ואפיון של ננו-חלקיקים חדשים המחקים HDL עבור אנקפסולציה של גורם גדילה עצבי. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים את ההרכבה המדורגת של ננו-חלקיקים מחקי HDL טעוני NGF באמצעות אנקפסולציה בסיוע פרוטמין והרכבה עצמית מבוססת שומנים ליישומי אספקה נוירוטרופיים פוטנציאליים.

עטיפת גורם גדילה עצבי בננו-חלקיקים המחקים ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה

פרוטוקול זה משלב אלקטרו-ספינינג ומיקרוספירות כדי לפתח פיגומים מהונדסי רקמות להכוונת נוירונים. גורם הגדילה העצבי היה עטוף בתוך מיקרוספירות PLGA והוכנס לפיגומים סיביים של חומצה היאלורונית (HA).  הפעילות הביולוגית של החלבון נבדקה על ידי זריעת הפיגומים עם גרעיני שורש הגב של אפרוח ראשוני ותרבית במשך 4-6 ימים.

גורם הגדילה Electrospinning שחרור מיקרוסכמות לתוך סיביים פיגומים

מטרת פרוטוקול זה היא לשלב SDF-1α, גורם ביות של תאי גזע, בננו-חלקיקי דקסטרן סולפט-צ'יטוזן.  החלקיקים המתקבלים נמדדים לפי גודלם ופוטנציאל הזטה שלהם, כמו גם התוכן, הפעילות וקצב השחרור במבחנה של SDF-1α מהננו-חלקיקים.

הכנה ואפיון של SDF-1α-Chitosan-Dextran סולפט חלקיקים

ננו-חלקיק גביש נוזלי (LCNP) nanocarrier מנוצלת ככלי עבור במסירה מבוקרת של מטען הידרופובי אל קרום הפלזמה של תאים חיים.

משלוח הממברנה ממוקד על Encapsulated מטענים הידרופובי בנושאת Nanoparticle קריסטל נוזלת

כאן, אנו מציגים לפרוטוקול תכנון, הרכיבו nanostructured הסיליקון הנקבובי (PSi) סרטים כמו ספקים מתכלה עבור גורם הגדילה העצבי (גורם הגדילה העצבי). בידול עצביים, תוצר של PC12 תאים ועכברים העזוב שורש גנגליון (DRG) נוירונים מאופיינים בעת טיפול עם נשאים PSi שנטענו גורם הגדילה העצבי.

עיצוב הסיליקון הנקבובי סרטים כמו נשאים של גורם הגדילה העצבי

מאמר זה מתאר את ומגעים falcarindiol ב מצופים השומנים חלקיקים nm 74. ספיגת הסלולר של חלקיקים באמצעות תאי גזע אנושי לתוך טיפות השומנים מנוטרת על ידי הדמיה פלורסנט, קונפוקלי. חלקיקים מיוצרים בשיטת הזרקת מהירה של הממס הסטה, הגודל שלהם נמדד עם טכניקה פיזור אור דינאמי.

ספיגת של חלקיקים חדשים מצופים השומנים, המכיל Falcarindiol על ידי גזע אנושי Mesenchymal

מחקר זה מתאר לחות קלאסית באמצעות שיטת הסרט דק השומנים לקראת nanoliposome סוימים ואחריו ננו-חלקיק אפיון. 47 kDa-hydrophilic וחלבון כדורי, טארין, הוא כיום בהצלחה כאסטרטגיה כדי לשפר את היציבות, להימנע הרשאה מהירה, ולקדם שחרור מבוקר. ניתן להתאים את השיטה לעטיפת מולקולות הידרופובי.

הכנה ואפיון ננו-פוטזומים לצורך מלכודת הידרופיזיאליות של חלבונים ביולוגיים

חלקיקי שומנים מפותחים באמצעות גישה פלטפורמת ערבוב microfluidic עבור mRNA ו- DNA אנקפסולציה.

גיבוש ואפיון חלקיקי שומנים בדם לאספקת גנים באמצעות פלטפורמת ערבוב מיקרופלואידית

כאן אנו מתארים ייצור ואפיון של חומרים ביו-אקטיביים המכילים ננו-דיסקים. ננודיסקים של Amphotericin B נלקחים כדוגמה לתיאור הפרוטוקול בצורה מדורגת.

ניסוח ואפיון חומר ביו-אקטיבי המכיל ננודיסקים

למדו הכנה ואפיון של ננו-חלקיקים מחקי HDL לאנקפסולציה של גורם העצב הגדילה באמצעות הומוגניזציה פשוטה. השיטה משפרת את יעילות האנקפסולציה ומאפשרת מחקר מדויק במערכות משלוח תרופות נוירונליות.

הכנה ואפיון של נוזל HDL מחקה ננו-חלקיקים עבור אנקפסולציה גורם העצב הגדילה

גלה סרטונים נוספים