May 20th, 2017
מחקר זה מתאר את ההליכים כירורגית וטכניקות ניסיוני לביצוע cystometry ער בעכבר נע בחופשיות. בנוסף, הוא מספק ראיות ניסוייות לתמוך אופטימיזציה וסטנדרטיזציה.
המטרה הכוללת של הליך מיקרו-כירורגי זה היא להשתיל צינור תוך שלפוחית השתן בשלפוחית השתן ולתעד את תפקוד דרכי השתן התחתונות בעכבר ער. שיטה זו יכולה לסייע ברכישת נתונים ניסיוניים הניתנים לשחזור מציסטומטריה ערה ובדיקת תפקוד שלפוחית השתן במודלים של עכברים בריאים וחולים. המטרה העיקרית של טכניקה זו היא לספק שיטה סטנדרטית המבוססת על נתונים ניסיוניים לביצוע ציסטומטריית מילוי במודל עכבר.
כדי להכין את הצינור להשתלה, חתכו תחילה חתיכה של שבעה סנטימטרים של צינור pe10, והתקדמו לאט קצה אחד לעבר להבה פתוחה כדי ליצור התלקחות, ומשכו במהירות את הצינור ברגע שההתלקחות מתפתחת. לאחר מכן השתמש בהגדרת החום הנמוך על אקדח דבק כדי למרוח שלוש טיפות של דבק חם לכל מטרה במרחק של 4.5, 5 ו-5.5 סנטימטרים מהקצה המתרחב של הצינור. השתמש במספריים כדי לקצץ אי סדרים מבועות הדבק.
מרחו דבק חם על קצה אחד של מחט בגודל 30, שתשמש לחיבור צינור pe10 לאחר השתלתה. לאחר מכן אשר את חוסר התגובה לצביטה בבוהן ומרח משחה על עיני החיה. לאחר עיקור הגב העליון והבטן התחתונה עם אלכוהול ובטאדין, בצע חתך של 1.5 סנטימטר בין הסקרקפולה, והניח את החיה במצב שכיבה על גבי כרית חימום של 37 מעלות צלזיוס מכוסה בווילונות סטריליים תחת מיקרוסקופ מנתח.
כעת בצע חתך בעור הבטן בקו האמצע התחתון של 1.5 סנטימטר. לאחר מכן חתך תואם דרך הפאשיה לאורך הלינאה אלבה והשריר כדי לחשוף את הכיפה ואת המחצית העליונה של שלפוחית השתן. שמירה על לחות קרביים בבטן עם מי מלח פיזיולוגיים חמים, סובב את החיה על צידה כדי לגשת לחתך בעורף.
דחוף המוסטט צר תת עורי דרך החתך כדי להתחיל תעלה תת עורית בגב ולהמשיך לאורך הצד של החיה. לאחר שקצה המכשיר מגיע לתחתית כלוב הצלעות, סובב את הקצה לכיוון קו האמצע בחלק הפנימי של הבטן והמשך לקדם את המוסטט עד לחשיפת הקצה בחתך הבטן מתחת לשכבת השריר. ברגע שקצה ההמוסטט נמצא בתוך החתך, צבט את העור מעל הכתף והפעל מתיחה כדי לעזור לייצב את החיה עד שקצה המכשיר נראה בחתך הבטן.
כעת השתמש בהמוסטט כדי לתפוס את הקצה הלא מתרחב של הצינור ולמשוך לאט את ההמוסטט, למשוך את קצה הצינור מהחתך בחלק האחורי של הצוואר ולהתאים את הקצה המתרחב של הצינור כך שהוא נמצא ישירות מעל כיפת שלפוחית השתן. ייצב את שלפוחית השתן בעזרת גליל קטן של רקמה נטולת מוך. הנח תפר מונופילמנט 6-O קשור באופן רופף ולא נספג על גבי כיפת שלפוחית השתן.
בעזרת היד הלא דומיננטית ומלקחיים מיקרו מעוקלים של דומונט מספר שבע, אחוז בכיפת שלפוחית השתן והשתמש במחט בגודל 21 ביד הדומיננטית כדי לבצע כריתת ציסטוטומיה בקודקוד הכיפה. בדוק בעדינות את הציסטוטומיה עם זוג סגור של מיקרו מלקחיים מעוקלים מספר חמש כדי לוודא שהקטטר יכול לעבור בקלות דרך החור ולהניח את הקצה המתרחב של קטטר pe10 לתוך שלפוחית השתן, ולדחוף את ההתלקחות כלפי מטה אל צוואר שלפוחית השתן כדי שלא יחליק החוצה בזמן שהוא מאובטח. כאשר קשירת המונופילמנט ממוקמת בקדמת הצינור, הדק את תפר ה-6-O סביב כיפת שלפוחית השתן והצינורות גבוה ככל האפשר על שלפוחית השתן כדי למנוע הפחתה מלאכותית של קיבולת שלפוחית השתן.
לחלופין, הנח תפר רופף של חוט הארנק על כיפת שלפוחית השתן, בצע כריתת ציסטוטומיה כפי שהודגם זה עתה, והכנס את הקצה המתרחב של הקטטר לתוך הפנצ'ר. לאחר מכן קשרו את התפר סביב הכיפה והצינור כפי שמודגם עבור התפר השטוח. בכל מקרה, הקפד לאבטח את הצינור מבלי לגרום לפגיעה נרחבת בדופן שלפוחית השתן.
אם לוקחים יותר מדי רקמה, קיבולת שלפוחית השתן תפחת. אם לוקחים מעט מדי, החיבור ידלוף. כדי לבדוק את האיטום והמיקום של הצינור בשלפוחית השתן, חבר מזרק אינסולין של 0.5 מיליליטר המצויד במחט מד 30 לקצה הדיסטלי של הצינור ומלא לאט את שלפוחית השתן ב-0.1 עד 0.2 מיליליטר של 0.9% נתרן כלורי עד להופעת טיפה בפתח השופכה.
אם האיטום אינו שלם, יש ללול את זנבות התפרים סביב שלפוחית השתן ולקשור מחדש. ואז רוקן את שלפוחית השתן על ידי שאיפה. אם לא מתרחשות דליפות בכיפה, חזקו את שלפוחית השתן עם זוג מיקרו מלקחיים מעוקלים ומשכו בעדינות את הצינור עד שההתלקחות מונחת על החלק הפנימי של כיפת שלפוחית השתן.
בדוק שוב את החותם בשיטה שתוארה קודם לכן. חתוך את זנבות התפר, הסר את גליל הרקמה והחזיר את שלפוחית השתן למקומה הרגיל. לאחר מכן השתמש בתפר 6-O רץ כדי לסגור את דופן הבטן בשתי שכבות.
וסובב בעדינות את החיה על בטנה. הכנס את החלק התת עורי של עוגן המתכת לתוך החתך התוך-סקופולירי, והשתמש במונופילמנט 6-O כדי לאבטח את הצינור והעוגן עם תפר מזרן אנכי. ודא כי בועת דבק נשארת מעל ומתחת לעור כדי למנוע מהצינור להישלף החוצה וחתוך את הצינור כשני סנטימטרים מעל העור.
לאחר מכן הכנס בעדינות פקק בגודל 30 לקצה הצינור כדי למנוע דליפת שתן החוצה. לפני ביצוע הקריאה, השתמש בצינורות pe50 כדי לחבר את משאבת העירוי, מתמר הלחץ וסיבוב 22 מד. לאחר מכן הנח את חיית הניסוי המורדמת במצב שכיבה והסר את הפקק בקוטר 30.
חבר את הקשירה לעוגן, החלק את צנתר שלפוחית השתן לקצה ה-pe50 והשתמש בדבק חם ליצירת אטימה אטומה למים. הנח את העכבר על רצפת החוט. והתחילו בהקלטה.
לאחר מכן, כאשר בעל החיים מתאושש מההרדמה ולחץ שלפוחית השתן מתייצב, התחל להחדיר 0.9% נתרן כלורי בקצב של 0.6 מיליליטר לשעה. בדרך כלל, ביום השני לאחר החדרת הצנתר, מתפתחת נפיחות תת-רירית חמורה התופסת מחצית מחתך שלפוחית השתן המובילה לחסימה של הלומן. ביום החמישי הבצקת נפתרת לחלוטין ומשאירה את האזורים התת-ריריים חדורים בתאים דלקתיים שפלשו חלקית לשרירים.
ההיקף הגדול ביותר של נפיחות הרקמות שנצפה ביום השני וביום השלישי נמצא בקורלציה עם ההתרוקנות ההתנהגותית המקבילה, כאשר בעלי החיים הדגימו פגיעה משמעותית בתפקוד שלפוחית השתן בנקודות זמן אלה. כצפוי מהנתונים ההיסטולוגיים, תדירות ההתרוקנות מנרמלת ביום החמישי שלאחר הניתוח. לחץ תוך-שלפוחית בבעל חיים ער הנע בחופשיות עם חפצי תנועה מינימליים מאופיין בלחץ בסיסי של 10 עד 15 סנטימטרים של מים שעשוי להישאר ללא שינוי או לעלות בהדרגה בלא יותר מ-10 סנטימטרים של מים במהלך מחזור המילוי.
ואחריו עלייה וירידה פתאומית בלחץ בסגנון הדופק במהלך הריקון. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 30 דקות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור למזער את הנזק לשלפוחית השתן כדי לשמר את הפיזיולוגיה של הרקמה.
בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות, כמו ציסטומטריית מילוי מחזור יחיד כדי לענות על שאלות נוספות לגבי יכולת שלפוחית השתן התפקודית. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשתיל צינור מיקרוכירורגי בשלפוחית השתן ולהשתמש בציסטומטי מילוי ער כדי להעריך את תפקוד דרכי השתן התחתונות בעכברים.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
מחקר זה מתאר הליך מיקרו-כירורגי להשתלת צינור תוך-שלפוחית השתן לשלפוחית השתן של עכבר ער. שיטה זו נועדה לסטנדרטיזציה של קבלת נתונים ניסויים חוזרים ונשנים עבור ציסטומטריה של עכבר ער.
Standardized microsurgical techniques for awake cystometry in mouse models enable reproducible assessment of lower urinary tract function, supporting target validation in urology drug discovery. By minimizing movement artifacts and establishing post-operative recovery timelines, this method improves predictive confidence in bladder physiology studies. It facilitates mechanistic de-risking of therapeutic candidates affecting urinary continence, bladder capacity, or voiding patterns in preclinical pipelines.
This method fits within the discovery continuum from target validation through preclinical efficacy testing, particularly for urological indications where bladder function is a key biomarker.