Name: ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: למד טכניקת אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית רב-פרמטרית לזיהוי וספירת תת-אוכלוסיות תאי T בסרטן שקדים. שיטה זו מאפשרת הערכת תאי חיסון במיקרו-סביבת הגידול ותומכת בסיווג חולים לטיפולים אימונולוגיים ממוקדים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

סימון פונט נתמכה על ידי הענקת UL2010-4801 מן האגודה ההולנדית לסרטן. ברצוננו להודות לכל המחברים השותפים של המאמר המקורי כי פרוטוקול זה מבוסס על: אמילי א. דרונקרס, מארי ג&#39;יי.פי וולטרס, רנסקה גודמן, סנאדה קולנוביץ &#39;, אליזבת בלומנה, פיטר ג&#39;ף סנייגרס, ארקו גורט, וסוורד ואן בית Seating

דגימות החולה טופלו על פי הנחיות האתיקה הרפואית המתוארות בקוד ההתנהגות לשימוש משני משני של רקמת האדם של הפדרציה ההולנדית של אגודות מדעיות ביו רפואיות (www.federa.org). 1. הכן שקפים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השגת חומר רקמה משוכפל (כל סוג של רקמה) ממחלקת הפתולוגיה לאחר קבלת ועדת אתית רפואית רשות להשתמש בחומר רסקטד. הערה: עבור הניסוי הנוכחי, דגימות הגידול לפני הטיפול התקבלו מגידולים ראשוניים אוופרינגליים שאובחנו במרכז הרפואי של אוניברסיטת ליידן, ליידן, הולנד בין השנים 1970 ו -2011, שנבחרו כמתואר לעיל (n = 162) 13 . גודל הרקמה היה מוגבל רק על ידי דרישה כמות מספקת של רקמת הגידול באופן אמין לקחת 4 תמונות מיקרוסקופיות בתוך הגידול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את הרקמה בפורמלין 4% שנאגרו עבור מינימום של 12 שעות. מייבשים את הרקמה ב agסדרה ממוצעת של אתנול. שטפו אותו קסילן ו לשבץ אותו שעווה פרפין באמצעות מעבד רקמות אוטומטיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור 4 מיקרומטר עבה פורמלין קבוע, paraffin- מוטבע (FFPE) סעיפים רקמות על שקופיות זכוכית באמצעות microtome. מניחים את בלוק רקמה מחזיק רקמות microtone באמצעות נהלים סטנדרטיים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך סרטים של רקמות ולהניח אותם על פני המים באמבטיה המכילים מים deionized ב 45 מעלות צלזיוס. השתמש שקופית מתאימה מכתים אימונוהיסטוכימי לדוג קטע על ידי הצבת השקופית במים ישירות מתחת לסעיף. בזהירות להזיז את השקופית למעלה בזווית, לוקח את הקטע מתוך המים דבק אותו על השקופית. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו השקופיות יבש לילה ב 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Deparaffinize שקופיות FFPE ידי immersing אותם לחלוטין קסילן 100% טרי, שלוש פעמים במשך 5 דקות כל אחד. Rehydrate את השקופיות על ידי שקוע אותם פעמיים אתנול 100% טרי, אתנול 70%, ואתנול 50% 5 דקות כל אחד. </li></ol> 2. ביצוע אחזור אנטיגן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את השקופיות במים deionized במשך 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים Tris-ethylenediaminetetraetetic חומצה (EDTA) חיץ (10 מ&quot;מ טריס בתוספת 1 מ&quot;מ EDTA, pH 9.0) לטמפרטורת רותחים באמצעות מיקרוגל. לבצע אחזור אנטיגן על ידי שקע שקופיות החיץ EDTA שחון מראש שמירה על המאגר בטמפרטורה זו במשך 10 דקות במיקרוגל. הערה: ניתן להשתמש במיקרוגל עם הספק של 900 W. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תן את השקופיות להתקרר במאגר במשך 2 שעות. </li></ol> 3. כתם רקמות שקופיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את השקופיות פעמיים עם פוספט שנאגרו מלוחים (PBS) במשך 5 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר מעגל סביב הרקמה עם עט הידרופובי כדי למנוע נוגדנים מדולל מן נשפך את השקופית. לשטוף שוב עם PBS; זה אופציונלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה את הרקמה עם נוגדנים ראשוניים (אנטי CD3 1:50, אנטי FoxP3 1: 200, אנטי IL-17 1:50) בדילול של 1% w / v שור בסרום aLbumin (BSA) ב- PBS בטמפרטורת החדר למשך הלילה. הערה: נפח לכל שקופית תלוי בגודל הרקמה, אבל זה בדרך כלל 50-150 μL. תחליף את הנוגדנים הראשוניים עם נוגדנים מאותו סוג איסוטייפ, עם סגוליות לא ידועה לשקופיות הבקרה השליליות באותו דילול כמו הנוגדנים CD3, CD8 ו- FoxP3 ( כלומר, נוגדנים לבקרת איגוט של ארנבת Ig, עכבר IgG1 נוגדן שליטה איסוטיפ, ועז IgG נוגדן שליטה איזוטופית). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את השקופיות שלוש פעמים עם PBS במשך 5 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור את הרקמה עם שילוב של נוגדנים משני שכותרתו fluorescently המכוונים מינים נוגדנים העיקריים ו / או איסוטיפים ( כלומר, 1: 200 חמור אנטי עז IgG Alexa 488, חמור נגד ארנבת IgG A546, חמור נגד עכבר A647) מדולל ב 1% BSA ב PBS בטמפרטורת החדר למשך 1 שעות. הערה: נפח לכל שקופית תלוי בגודל הרקמה אבל הוא בדרך כלל 50-150 μL. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחרהוספת נוגדנים משני, לשמור את השקופיות מוגן מפני האור ככל האפשר על ידי אחסון אותם בתיבת כהה או על ידי גלישת התיבה בנייר אלומיניום. </li></ol></li></ol> 4. הר ו Counterstain רקמות שקופיות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את השקופיות שלוש פעמים PBS במשך 5 דקות כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר השקופיות באמצעות המדיום הרכבה אנטי דהייה מימית המכילה counterstain גרעיני ( למשל, DAPI). לנתח את השקופיות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בהקדם האפשרי (בתוך שבועיים). אחסן את השקופיות בחושך על 4 מעלות צלזיוס עד ניתוח. </li></ol> 5. ניתוח מוכתם רקמות Slides <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השג ארבע תמונות של כל שקופית באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד מטרה 20 - 25X. קחו תמונות במקומות אקראיים בכל אזור הגידול הכולל הכלול בשקופית כדי ללכוד חלק מייצג של הגידול. הערה: יש להשתמש בהגדלה סטנדרטית של 250X. כל פלואורסצנטיR לייזר סריקת מיקרוסקופ ניתן להשתמש, ובלבד יש את המסננים לייזרים צורך לדמיין את fluorochromes בשימוש. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להדמיה של Alexa 488, השתמש מקסימום עירור של 490 ו מקסימום פליטה של ​​525; עבור ויזואליזציה של Alexa 546, להשתמש מקסימום עירור של 556 ו מקסימום פליטה של ​​573; עבור ויזואליזציה של Alexa 647, להשתמש מקסימום עירור של 650 ו פליטה מקסימלית של 665; ו להדמיה של DAPI, להשתמש מקסימום עירור של 358 ו מקסימום פליטה של ​​461. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את התמונות כמו קבצי תמונה ( כלומר, jpeg ו טיף) בתוכנה הזמינה למשתמש. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להפלות בין אפיתל הגידול לאזורים stroma הגידול מבוסס על צורות גרעיניות וסלולריות של תאים אפיתל לעומת תאים סטרומה לאחר התייעצות פתולוג. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לקבוע את השטח הכולל שטח סטרומה, למתוח קו סביב כל השטח (ים) שנכבשו על ידי תאים סטרומה (ולא תאים סרטניים) ו recorד שטח השטח באמצעות תוכנת ניתוח התמונה המסופקים על ידי היצרן מיקרוסקופ. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ על הכרטיסייה &quot;שכבה&quot; שמתחת לתמונה; לבחור את &quot;סגור פולי&quot; קו צורה ולחץ על זה. סמן את הגבול בין שדות אפיתל סרטניים ושדות סטרומה על ידי לחיצה על האזור עד להגיע לנקודה הראשונה .; זה מספק מדד לאותו אזור. הערה: לאחר סגירת הצורה, יופיע מספר ליד הצורה המקיפה את פני השטח של התמונה הנבחרת (A = x מיקרומטר 2 ). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחלץ משטח זה משטח השטח הכולל השטח התמונה (בתנאי תכונות תמונה) כדי לחשב את השטח משטח אפיתל. לא לכלול אזורים וסקולריים, נמק, ו autofluorescent על ידי ציור קו סביבם, הקלטה בגודל של השטח המסופק חיסור כי משטח השטח אפיתל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור את כל שטח השטח מספרים בקובץ גיליון אלקטרוני כדי לחשב את שטח פני השטח הממוצעמספרי טלפון לכל שקופית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות תוכנת ניתוח התמונה, לקבוע אם התאים הם בודדים, פעמיים, או משולשת חיובית על ידי בדיקת הקרינה של כל ארבעת הערוצים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים בודדים, פעמיים, משולשת חיובי בכל תמונה באמצעות ImageJ. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הורד תמונה. פתח תמונה על ידי לחיצה על &quot;קובץ&quot; ו &quot;פתח&quot; ובחירת התמונה כדי לנתח. לחץ לחיצה ימנית על &quot;נקודת כלי&quot; (ריבוע אדום באמצע ארבע שורות) ובחר את &quot;Multi-Point כלי&quot;. לחץ פעמיים על &quot;Multi-Point כלי&quot; ולספור את מספר סוגי תאים שונים בתמונה על ידי בחירת מספר נגד שונים עבור כל סוג התא. הערה: ספירת כל התאים של כל סוג תא שונה, כפי שזוהו על ידי נוכחות של אחד, שניים, או כל שלושת צבעי ניאון. לא לכלול DAPI, כמו counterstain גרעיני זה נמצא בכל התאים והוא משמש להפלות תאים סרטניים מתאי החיסון. כל סוג תא נספרבאמצעות מספר מונה שונה. ספירת מספרי התא של כל סוג תא בנפרד באזור הגידול אפיתל ו סטרומה על ידי בחירת מספר מונה שונים בכל פעם. אין לספור תאים בתוך כלי הדם באזורים autofluorescent בעיקר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רשום את מספר התאים שנותחו בכל אחד מהדפים הנגדיים עבור כל תמונה בקובץ גיליון אלקטרוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחלקים את המספר הכולל של תאים עבור כל סוג תא על פני השטח הכולל של השטח של אפיתל הגידול הגידול stroma ניתח. </li></ol></li></ol></li></ol></li></ol> 6. ניתוח סטטיסטי הערה: יש לנתח את כל הניתוחים הסטטיסטיים עם סטטיסטיקאי כדי להבטיח את איכות הנתונים. לקבלת נתונים סטטיסטיים כלליים, השתמש בכל מדריך סטטיסטיקה רפואית 14 . <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את המתאמים בין תדרי תאים באמצעות מבחן Rear של קורלציה דרגה של Spearman. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את ההבדלים הסטטיסטיים במספרים של cel חיוביLs בין קבוצות המטופלים באמצעות מבחן Wilcoxon Mann-Whitney. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את המתאמים בין מספרי תאים לבין הישרדות ללא מחלה ( כלומר, זמן מאבחנה עד להישנות מקומית או רחוקה של מוות או מחלה) על ידי חלוקת החולים בקבוצות בהתבסס על מספר חתוך של תאים באמצעות הדור עקומת קפלן-מאייר ולוג ניתוח דרגה 15. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע ניתוחים רב משתנים באמצעות ניתוח רגרסיה סיכון יחסי Cox. </li></ol>

<ol><li>Westra, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+face+of+head+and+neck+cancer+in+the+21st+century%3A+the+impact+of+HPV+on+the+epidemiology+and+pathology+of+oral+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck+Pathol%22%5BJournal%5D)">The changing face of head and neck cancer in the 21st century: the impact of HPV on the epidemiology and pathology of oral cancer.</a> Head Neck Pathol. 3 (1), 78-81 (2009).</li>
<li>Rietbergen, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+papillomavirus+detection+and+comorbidity%3A+critical+issues+in+selection+of+patients+with+oropharyngeal+cancer+for+treatment+De-escalation+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Human papillomavirus detection and comorbidity: critical issues in selection of patients with oropharyngeal cancer for treatment De-escalation trials.</a> Ann Oncol. 24 (11), 2740-2745 (2013).</li>
<li>Wallis, S. P., Stafford, N. D., Greenman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+relevance+of+immune+parameters+in+the+tumor+microenvironment+of+head+and+neck+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Clinical relevance of immune parameters in the tumor microenvironment of head and neck cancers.</a> Head Neck. 37 (3), 449-459 (2015).</li>
<li>Ye, J., Livergood, R. S., Peng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+regulation+of+human+Th17+cells+in+tumor+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The role and regulation of human Th17 cells in tumor immunity.</a> Am J Pathol. 182 (1), 10-20 (2013).</li>
<li>Amedei, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+analysis+of+pancreatic+cancer-infiltrating+T+lymphocytes+reveals+that+ENO-specific+Tregs+accumulate+in+tumor+tissue+and+inhibit+Th1%2FTh17+effector+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Ex vivo analysis of pancreatic cancer-infiltrating T lymphocytes reveals that ENO-specific Tregs accumulate in tumor tissue and inhibit Th1/Th17 effector cell functions.</a> Cancer Immunol Immunother. 62 (7), 1249-1260 (2013).</li>
<li>Whiteside, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+regulatory+T+cells+%28Treg%29+regulating+in+cancer+and+why%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">What are regulatory T cells (Treg) regulating in cancer and why?</a> Semin Cancer Biol. 22 (4), 327-334 (2012).</li>
<li>Punt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angels+and+demons%3A+Th17+cells+represent+a+beneficial+response%2C+while+neutrophil+IL-17+is+associated+with+poor+prognosis+in+squamous+cervical+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Angels and demons: Th17 cells represent a beneficial response, while neutrophil IL-17 is associated with poor prognosis in squamous cervical cancer.</a> Oncoimmunology. 4 (1), e984539(2015).</li>
<li>Bamias, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significant+differences+of+lymphocytes+isolated+from+ascites+of+patients+with+ovarian+cancer+compared+to+blood+and+tumor+lymphocytes.+Association+of+CD3%2BCD56%2B+cells+with+platinum+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Significant differences of lymphocytes isolated from ascites of patients with ovarian cancer compared to blood and tumor lymphocytes. Association of CD3+CD56+ cells with platinum resistance.</a> Gynecol Oncol. 106 (1), 75-81 (2007).</li>
<li>Gasparoto, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patients+with+oral+squamous+cell+carcinoma+are+characterized+by+increased+frequency+of+suppressive+regulatory+T+cells+in+the+blood+and+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Patients with oral squamous cell carcinoma are characterized by increased frequency of suppressive regulatory T cells in the blood and tumor microenvironment.</a> Cancer Immunol Immunother. 59 (6), 819-828 (2010).</li>
<li>Jordanova, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+leukocyte+antigen+class+I%2C+MHC+class+I+chain-related+molecule+A%2C+and+CD8%2B%2Fregulatory+T-cell+ratio%3A+which+variable+determines+survival+of+cervical+cancer+patients%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Human leukocyte antigen class I, MHC class I chain-related molecule A, and CD8+/regulatory T-cell ratio: which variable determines survival of cervical cancer patients?</a> Clin Cancer Res. 14 (7), 2028-2035 (2008).</li>
<li>van Esch, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+classical+and+nonclassical+HLA+expression+in+recurrent+and+progressive+HPV-induced+usual+vulvar+intraepithelial+neoplasia+and+implications+for+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Alterations in classical and nonclassical HLA expression in recurrent and progressive HPV-induced usual vulvar intraepithelial neoplasia and implications for immunotherapy.</a> Int J Cancer. 135 (4), 830-842 (2014).</li>
<li>Heeren, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+effect+of+different+PD-L1+expression+patterns+in+squamous+cell+carcinoma+and+adenocarcinoma+of+the+cervix%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Prognostic effect of different PD-L1 expression patterns in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of the cervix.</a> Mod Pathol. 29 (7), 753-763 (2016).</li>
<li>Punt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beneficial+tumor+microenvironment+in+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+is+characterized+by+a+high+T+cell+and+low+IL-17%28%2B%29+cell+frequency%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">A beneficial tumor microenvironment in oropharyngeal squamous cell carcinoma is characterized by a high T cell and low IL-17(+) cell frequency.</a> Cancer Immunol Immunother. 65 (4), 393-403 (2016).</li>
<li>Kirkwood, B. R., Sterne, J. A. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKirkwood%2C+BR+%22Essential+Medical+Statistics%22">Essential Medical Statistics</a>. , 2nd ed, Wiley-Blackwell. (2003).</li>
<li>Kleinbaum, D. G., Klein, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKleinbaum%2C+DG+%22Survival+Analysis%3A+A+Self-Learning+Text%22">Survival Analysis: A Self-Learning Text</a>. , 2nd ed, Springer. (2005).</li>
<li>Fabre, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+Tumor+Microenvironment%3A+The+Protumor+Effects+of+IL-17+Related+to+Cancer+Type%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Targeting the Tumor Microenvironment: The Protumor Effects of IL-17 Related to Cancer Type.</a> Int J Mol Sci. 17 (9), (2016).</li>
<li>Feng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multispectral+imaging+of+formalin-fixed+tissue+predicts+ability+to+generate+tumor-infiltrating+lymphocytes+from+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Multispectral imaging of formalin-fixed tissue predicts ability to generate tumor-infiltrating lymphocytes from melanoma.</a> J Immunother Cancer. 3 (47), (2015).</li>
</ol>

המחברים אינם מכריזים על ניגוד אינטרסים מסחרי או כספי.

עבור הפרוטוקול המתואר, אחד הצעדים הקריטיים ביותר היא לקבוע את הדילול הנכון של הנוגדנים העיקריים בשימוש. הדילול של נוגדנים משניים שכותרתו היה 1: 200, כפי שמומלץ על ידי היצרן של אלה נוגדנים ספציפיים שכותרתו Alexa. הדילול של הנוגדנים העיקריים צריך להיקבע על ידי דילול סדרתי, עדיף באמצעות שתי דגימות שונות של סוג הרקמה המיועדת (במקרה זה, OPSCC). דילול העבודה האופטימלי הוא הדילול שבו מתקבל איתות ברור, ללא רעש רקע ובהיעדר אות לבקרה שלילית באותו ריכוז. שינויים ניתן לעשות לגבי סוג של נוגדני...

קרצינומה של תאי הקשקש (OPSCC) של תאי הקשקש (OPSCC) הם קבוצה הטרוגנית של סרטן תאי קשקש שמקורם ב- oopharynx. גורמי הסיכון של OPSCC כוללים זיהום פפילומארוס (HPV) אנושי ושימוש באלכוהול ובטבק 1 , 2 . תפקידה של התגובה החיסונית וכיצד להשתמש בה במסגרת קלינית הוא רק מתחיל להיות בחנו. Microenvironment הגידול הוא שחדר על ידי תאים החיסונית נמשכים לאתר הסרטן. למרות CD8 גבוה + T ציטוטוקסיים תאי תדר כבר מתואם עם הישרדות משופרת בחולי OPSCC 3, תפקידיו של תת תאי T אחרים, כוללים תאי Tregs ו TH17, עדיין לא ברורים 4. בעוד תאי Th1 ו- TH17 אמורים לסייע לתאי הגידול מיקוד התגובה החיסונית, Tregs ידועים ביכולות שלהם כדי לדכא את הפעילות של תאי T אחרים 5. עם זאת, נוכחותו של Tובתקנות כבר נמצאו בקורלציה היא בתגובות חיוביות ושליליות ב סוגי גידולים שונים 6. מאחר שלא כל תאי החיסון הנמצאים בדם חודרים לגידול באותה מידה, לימוד המיקרו-סביבה של הגידול המקומי מספק את המדד הכי אמין לתגובה החיסונית המכוונת כנגד הגידול. מטרת המחקר היא לקבוע את המתאם בין המספרים וסוגי תאי החיסון לבין התוצאה הקלינית. השתמשנו ארבע צבע פלואורסצנטי הדמיה IHC לנתח את מספר לוקליזציה של תת שונות subpopulations T OPSCC האדם. התמקדנו בלימפוציטים מסוג T (CD3 + ), בתאי ה- TH17 וב- FoxP3 + טרגס החיסוני, אשר מסלול ההבחנה שלהם קשור קשר הדוק לתאי ה- TH17. תאי ה- TH17 מתאפיינים בשילוב של CD3 ו- IL-17. הציטוקין IL-17 יכול גם להיות מיוצר על ידי תאים שאינם T 7 . קבענו את ההתפלגות של intra-epitתאי tials, T17, ו- IL-17 + שאינם תאי T בסדרה גדולה של מקרים OPSCC ונותחו את המתאמים עם הישרדות המטופל. Multicolor פלואורסצנטי IHC שימש כדי לזהות את הביטוי של CD3, Foxp3, ו- IL-17, בשילוב עם Counterstain DAPI. Assay זה איפשר זיהוי קל וברור של שני תאים סרטניים (באמצעות מכתים גרעיני DAPI) ואוכלוסיות תאי T חדיר (באמצעות שילוב של סמנים שונים). בעקבות הכנת המדגם מכתים, מיקרוסקופ פלואורסצנטי תוכנות הדמיה שימשו להפריד בין צבעים פלואורסצנטיים שונים המשמשים כדי לקבוע את מספר וסוג התאים הנוכחי הן אפיתל הגידול הגידול stroma הקשורים. Assay חלופי לכמת פנוטיפ אוכלוסיות תאים החיסון הוא זרימת cytometry זרימה, או cytometry לפי זמן הטיסה (CyTOF) ניתוח, של דגימות הגידול או היקפי ( כלומר, דם או מיימת). באמצעות זהטכניקה, כל המידע על לוקליזציה והפצה יחסית של סוגי תאים שונים הולך לאיבוד. השימוש וניתוח של דגימות היקפי גם אינו מספק מידע על אילו תאים מסוגלים לחדור microenvironment הגידול. דם ו ASCite תאים חיסוניים ניתוחים הוכחו לא כדי לשקף את הפנוטיפ ואת התדירות של חיסון התא החיסונית של רקמת הגידול 8 , 9 . חלופה נוספת היא השימוש במיקרוסקופ שדה בהיר. יתרון של טכניקה זו על הדמיה פלואורסצנטי הוא היעדר autofluorescence רקמות. למרות כמה דגימות להכיל יותר autofluorescence, במיוחד אריתרוציטים, אבל גם סוגי תאים אחרים, כולל גרנולוציטים נויטרופילי, אזורים אלה יכולים בקלות להסיר את הניתוח של כמעט כל הדגימות. Immunofluorescence מציעה את היתרון של ניתוח סמנים מרובים במדגם אחד באמצעות פאנל של fluoresce ממוקדאורכי גל. זה כרגע בלתי אפשרי באותה מידה עבור מיקרוסקופ שדה בהיר בשל היעדר מספר מספיק של תוויות ואיזוטופים נוגדן זמין מסחרית עבור אנטיגן מסוים. טכניקת ה- IHC של הקרינה הרב-גונית המתוארת כאן שימשה בסוגי סרטן רבים ושילובים שונים של נוגדן כדי לחקור אוכלוסיות תאים חיסוניות שונות, כמו גם מולקולות של תאים המופיעים בתאים, כגון אנטיגנים של לויקוציטים אנושיים (HLA) ו- PD-L1 10 , 11 , 12 . הפרוטוקול הוקם ו תוקף באמצעות סוגים שונים של דגימות ונוגדנים.

<table><tbody><tr><td>Pathos Delta Ultra Rapid Tissue Processor</td><td>Milestone and Histostar</td><td></td><td>מעבד רקמות אוטומטי</td></tr><tr><td>Histostar</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>מכונת הטמעת בלוק רקמות</td></tr><tr><td>פורמלדהיד</td><td>בייקר</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קסילול</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אתנול</td><td>Merck</td><td></td><td></td></tr><tr><td>milliQ מים</td><td>Elaga Purelab Chorus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שעוות פרפין/Paraclean</td><td>Klinipath</td><td>5079A</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק רקמות מיקרוטום</td><td>Leica</td><td>RM225</td><td></td></tr><tr><td>Flex IHC צד</td><td>Dako</td><td></td><td>רקמות שקופיות</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Merk-Milipore</td><td>1,083,821,000</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Baker</td><td>1073</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Bio-Rad</td><td>BUF036A</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>ארנב אנטי-CD3</td><td>Abcam</td><td>ab828</td><td>טיטראט נדרש דילול נוגדנים</td></tr><tr><td>עכבר IgG1 anti-FoxP3</td><td>Abcam</td><td>ab20034</td><td>טיטראט נדרש דילול</td></tr><tr><td>נוגדנים עז IgG אנטי-IL-17</td><td>R& D Systems</td><td>AF-317-NA</td><td>טיטראט נדרש דילול נוגדנים</td></tr><tr><td>ארנב Ig איזוטיפ בקרת נוגדן</td><td>Abcam</td><td>ab27472</td><td>השתמש באותו ריכוז סופי כמו נוגדן בקרת איזוטיפ IgG1 נגד CD3</td></tr><tr><td>עכבר</td><td>Abcam</td><td>ab91353</td><td>השתמש באותו ריכוז סופי כמו נוגדן בקרת איזוטיפ IgG נגד FoxP3</td></tr><tr><td>עז ThermoFisher</td><td>Scientific</td><td>02-6202</td><td>השתמש באותו ריכוז סופי כמו אנטי-IL-17</td></tr><tr><td>חמור נגד ארנב IgG A546</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A10040</td><td>לדלל 1:200 ב-1% BSA/PBS</td></tr><tr><td>חמור נגד עכבר-A647</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A31571</td><td>לדלל 1:200 ב-1% BSA/PBS</td></tr><tr><td>חמור נגד עזים IgG A488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A11055</td><td>לדלל 1:200 ב-1% BSA/PBS</td></tr><tr><td>VectaShield המכיל DAPI</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי LSM700&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LCI Plan-Neofluar 25x/0.8 Imm Korr DIC M27 objective</td><td>Zeiss</td><td>420852-9972-720</td><td></td></tr><tr><td>LSM Zen Software</td><td>Zeiss</td><td>גרסה 2009</td><td></td></tr><tr><td>LSM דפדפן תמונה</td><td>Zeiss</td><td>גרסה 4.2.0.121</td><td>זמין להורדה בכתובת www.zeiss.com/microscopy/int/website/downloads/lsm-image-browser.html.</td></tr><tr><td>SPSS</td><td>IBM Corp.</td><td>גרסה 20.0</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td></td><td>גרסה 1.50i</td><td>זמינה להורדה ב-http://rsb.info.nih.gov/ij.</td></tr></tbody></table>

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של t- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש

Four-color Fluorescence Immunohistochemistry of T-cell Subpopulations in Archival Formalin-fixed, Paraffin-embedded Human Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma Samples

ארבעת צבעים אימונוהיסטוכימיה (IHC) הטכניקה היא שיטה לכמת אוכלוסיות תאים עניין תוך לקיחה בחשבון ההפצה היחסית שלהם לוקליזציה ברקמה. טכניקה זו יושמה בהרחבה כדי לחקור את החיסון החיסוני בסוגי הגידול השונים. Microenvironment הגידול הוא שחדר על ידי תאים החיסונית נמשכים לאתר הגידול. אוכלוסיות תאים חיסוניים שונים נמצאו לשחק תפקידים שונים microenvironment הגידול יש השפעה שונה על תוצאות המחלה. כתב יד זה מתאר את השימוש multifarameter פלואורסצנטי IHC על קרצינומה של תאי קשקש אורופרינגל (OPSCC) כדוגמה. טכניקה זו יכולה להיות מורחבת דגימות רקמות אחרות סוגי תאים של עניין. במחקר המוצג, ניתחנו את תא intraepithelial ו stromal של קבוצה גדולה OPSCC (n = 162). התמקדנו בלימפוציטים מסוג T (CD3 + ), immunosuppressive regulatאו תאי T (Tregs, כלומר, FoxP3 + ) ו T עוזר 17 (תאים TH17) ( כלומר, IL + 17 + CD3 + ) באמצעות counterstain גרעיני להבחין אפיתל הגידול מ stroma. נמצא כי מספר גבוה של תאי T נמצא בקורלציה עם הישרדות משופרת ללא מחלה בחולים עם מספר נמוך של תאי IL-17 + שאינם תאי T. דבר זה מצביע על כך שתאי ה- IL-17 + T עשויים להיות מתואמים עם תגובה חיסונית ירודה ב- OPSCC, אשר עולה בקנה אחד עם המתאם המתואר בין IL-17 להישרדות ירודה בחולי סרטן. נכון לעכשיו, רומן multiparameter פלואורסצנטי IHC טכניקות מפותחים באמצעות עד 7 fluorochromes שונים יאפשר אפיון מדויק יותר לוקליזציה של תאים חיסוניים microenvironment הגידול.

סדרה של דגימות גידול של FFPE, שהתקבלו בגידולים ראשוניים אוופרינגליים שאובחנו במרכז הרפואי של אוניברסיטת ליידן, ליידן, הולנד בין השנים 1970 ו -2011, שנבחרו כמתואר לעיל (n = 162), הוכתמו באמצעות הפרוטוקול המתואר 13 . אחת לארבע תמונות אקראיות של כל שקופית נותחו ( איור 1 ). כמה תאים autofluorescent מסומנים, אשר ניתן להבחין בבירור על ידי המראה המלא שלהם צהוב. תאים באמת כפול או משולשת חיובי רק כתם חיו...

Multiparameter פלואורסצנטי אימונוהיסטוכימיה ניתן להשתמש כדי להעריך את המספר, הפצה יחסית, ולוקליזציה של אוכלוסיות תאים החיסון microenvironment הגידול. כתב היד מתאר את השימוש בטכניקה זו כדי לנתח תת-תאים של תאי T בסרטן הלוע.

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש

The four-color fluorescence immunohistochemistry (IHC) technique is a method to quantify cell populations of interest while taking into account their ...

המטרה הכוללת של ניסוי זה היא לבצע הדמיה אימונוהיסטוכימית רב-צבעונית וספירה של תת-אוכלוסיות שונות של לימפוציטים מסוג T בקטעי רקמה משובצים בפרפין קבוע בפורמלין מדגימות קרצינומה של תאי קשקש אורו-לוע. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האימונו-אונקולוגי כגון, האם יש קשר בין רקמת גידול החודרת לתת-אוכלוסיות של תאי חיסון לבין פרוגנוזה של החולה. בעזרת טכניקה זו, אתה יכול לדמיין מספר סמנים ביולוגיים בקטע רקמה אחד.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול בסרטן, שכן הערכה בו זמנית של תאים חיסוניים מרובים או גורמים הקשורים למערכת החיסון עשויה לסייע בריבוד המטופל לטיפולים חיסוניים ספציפיים. התחל בשימוש בלשון מיקרו כדי להשיג קטעי רקמה משובצים בפרפין קבוע בפורמלין בעובי ארבעה מיקרומטר, והנח את סרטי הרקמה על פני אמבט מים נטול יונים של 45 מעלות צלזיוס כשהם נרכשים. כדי ללכוד את החלקים, הנח מגלשת זכוכית במים, ישירות מתחת לדגימת הרקמה והזיז בזהירות את השקופית כלפי מעלה בזווית.חלק זה יידבק למשטח הזכוכית כאשר המגלשה מורמת מהמים. לאחר ייבוש הדגימות למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס, יש להסיר את הפרפין מהרקמות בשלוש טבילות של חמש דקות ב-100% קסילול. לאחר השלמת הקטעים ללא פרפין, החזר את דגימות הרקמה עם שלוש טבילות אתנול יורדות.לאחר מכן שטיפה של חמש דקות במים נטולי יונים. לאחר מכן, טבלו את הדגימות במאגר EDTA רותח למשך 10 דקות במיקרוגל ותנו לשקופיות להתקרר במאגר למשך שעתיים. לסימון האנטיגנים המעניינים, שטפו את הדגימות בשתי שטיפות PBS של חמש דקות.לאחר השטיפה השנייה, דגרו על הרקמות עם הנוגדנים העיקריים ועניין מדולל באלבומין סרום בקר 1% ב-PBS בטמפרטורת החדר, למשך הלילה. למחרת בבוקר, שטפו את החלקים בשלוש שטיפות PBS של חמש דקות ודגרו את הדגימות עם הנוגדנים המשניים המתאימים המדוללים בסרום של 1% ב-PBS בטמפרטורת החדר למשך שעה. בתום הדגירה, שטפו את המגלשות שלוש פעמים ב-PBS כפי שהודגם זה עתה והרכיבו את המגלשות באמצעות מדיום הרכבה אנטי-דהייה מימי המכיל כתם נגד גרעיני.כדי לנתח את הדגימות, בחר תחילה את המטרה פי 20 עד 25 במיקרוסקופ פלואורסצנטי וצלם ארבע תמונות לכל שקופית באמצעות המסננים המתאימים לנוגדנים המשניים ולכתם הנגדי. שמור את התמונות כפי שהתקבלו. לאחר מכן, בתוכנת ניתוח התמונות המתאימה, פתח את התמונה הראשונה המעניינת ולחץ על לשונית השכבה.בחר את צורת קו הפולי הסגור כדי לסמן את גבול אזור העניין. כאשר הצורה סגורה, שטח הפנים של המדידה יופיע ליד אזור העניין. שמור את כל נתוני שטח הפנים בקובץ הגיליון האלקטרוני כדי לחשב את שטחי הפנים הממוצעים ומספרי הצלילים לכל שקופית.ייצא את התמונה כקובץ TIFF או JPG שייפתח ב- ImageJ. לאחר מכן, ב-ImageJ, פתח את התמונה הראשונה המעניינת ובחר את מונה התאים בתפריט התוספים. לאחר מכן, לחץ על אתחול, לחץ על סוג אחד ולחץ על כל תא המוגדר כסוג אחד.בחר סוג שונה עבור כל סוג תא כדי לספור את מספר סוגי התאים השונים בתמונה בהתאם לביטוי הפלואורוכרום. לבסוף, רשום את מספר התאים שנותחו בכל סל מונה עבור כל תמונה בקובץ הגיליון האלקטרוני. בניסוי מייצג זה, נותחו ארבע תמונות אקראיות מסדרה של דגימות גידול משובצות פרפין קבועות בפורמלין שהתקבלו מגידולים ראשוניים של הפה והלוע, שאובחנו במרכז הרפואי של אוניברסיטת ליידן בין השנים 1970 ל-2011, שהוכנו כפי שהודגם זה עתה.במדגם ניסיוני זה, נצפו כמה תאים אוטו-פלואורסצנטיים, כפי שהובחנו על ידי המראה הצהוב המלא שלהם, בעוד ששקופיות בקרה שליליות לא הדגימו צביעה ספציפית מעל אוטופלואורסצנציה של רקמת רקע. כל דגימות הגידול נקבעו כחדרות על ידי מספרים משתנים של תאי T חיוביים ל-fox p3, חיוביים ל-CD3 עם תת-קבוצה קטנה של תאי T המבטאת IL-17. דגימות מחולים עם מספר גבוה של תאי T חיוביים CD3 חודרים מדגימות מגמה של מתאם עם הישרדות משופרת ללא מחלה בהשוואה לדגימות חולים עם חברי תאי T נמוכים.יתר על כן, בדגימות עם מספר נמוך של תאים חיוביים ל-IL-17, מספר גבוה של תאי T חודרים נמצא גם בקורלציה עם הישרדות משופרת ללא מחלה, מה שמצביע על כך שהגידול היעיל החודר לתאי T בקרצינומה של תאי קשקש בפה ולוע עשוי להיות קשור למספר הנמוך של תאים חיוביים ל-IL-17 הקיימים. לאחר השליטה, ניתן להשלים את שלבי הכנת הדגימה הללו תוך יום וחצי לכל היותר 25 שקופיות לכל מפגש צביעה. חשוב מאוד לנטרל את הדגימה, אחרת תקבל הרבה רקע.לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחומי הפתולוגיה והאימונולוגיה. לחקר המיקרו-סביבה ללוקליזציה של תת-אוכלוסיות שונות של תאים חיסוניים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לדמיין חלבונים וסוגי תאים שונים בקטע רקמה ארכיוני יחיד.אל תשכח שעבודה עם סילו מסוכנת מאוד, אתה תמיד צריך לעבוד בארון זרימה.

four-color-fluorescence-immunohistochemistry-t-cell-subpopulations

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

כאן אנו מתארים שיטה לכמת הטרוגניות מולקולרית בסעיפים היסטולוגית של חומר הגידול באמצעות immunofluorescence כמותיים, ניתוח תמונה, מדד סטטיסטי של הטרוגניות. השיטה מיועדת לשימוש בפיתוח סמן ביולוגי ניתוח קליני.

הטרוגניות מיפוי של ביטוי חלבון בתוך גידולים באמצעות immunofluorescence כמותי

פרוטוקול מפורט עבור לוח שש-marker immunofluorescence מולטיפלקס אופטימיזציה שבוצעו, באמצעות הוספת גוון לסמלים אוטומטיות עבור תוצאות עקביות יותר זמן הליך קצר יותר. גישה זו ניתן להתאים ישירות על ידי כל מעבדה לחקר חיסונית-אונקולוגיה.

לוח Immunofluorescence מולטיפלקס אוטומטיות חיסונית-אונקולוגיה במחקרים על דגימות רקמה קרצינומה פורמלין-קבוע

וירוס הפפילומה האנושי (HPV) כרומוגניים בתוך היברידיזציה באתרו נחשב לאחד מתקני זהב לגילוי זיהום וירוס הפפילומה האנושי בתוך גידולים. זה מאפשר ויזואליזציה של HPV E6-E7 ביטוי mRNA עם לוקליזציה והערכה כמותית למחצה של האות שלה.

כרומוגניים היברידיזציה באתרו הכלי עבור אבחון הקשורות HPV וסרטן צוואר

כאן, אנו מתארים אסטרטגיה פשוטה ונגישה להמחיש, לכמת, ומיפוי תאים חיסוניים ב-formalin-קבוע פרפין מוטבע רקמת הגידול סעיפים. מתודולוגיה זו משלבת הדמיה קיימת טכניקות ניתוח דיגיטלי עם המטרה של הרחבת יכולת ריבוב וניתוח רב פרמטרים של הדמיה מספר.

הדמיה, קוונפיקציה, ומיפוי של אוכלוסיות תאים החיסונית במיקרו סביבה הגידול

אנו מתארים שיטת הצביעה מהירה לביצוע הדמיה רב ספקטראלית על רקמות קפואות.

שיטה מהירה לדימות מרובה ספקטרלי של רקמות קפואות

בעידן האימונותרפיה של הסרטן, העניין בהבהרת הדינמיקה של מיקרו-סביבה של הגידול גדל באופן בולט. פרוטוקול זה מפרט טכניקת הדמיה של ספקטרומטריית מסה ביחס לשלבי הצביעה וההדמיה שלה, המאפשרים אנליזה מרחבית מרובבת מאוד.

הרחבת ההבנה של המיקרו-סביבה של הגידול באמצעות הדמיית ספקטרומטריית מסה של דגימות רקמה קבועות פורמלין ומשובצות פרפין

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה של הכלאה פלואורסצנטית באתרו של RNA כדי למקם את lncRNA בתאי אוסטאוסרקומה אנושיים.

RNA פלואורסצנטי באתרו הכלאה ללוקליזציה ארוכה של RNA לא מקודד בתאי אוסטאוסרקומה אנושיים

פרוטוקול ניסיוני זה מתאר ומייעל שיטת צביעה של אימונוהיסטוכימיה מרובת אולמים (IHC), בעיקר על ידי אופטימיזציה של תנאי דגירה של נוגדנים חד-ערוציים והתאמת ההגדרות של נוגדנים ותעלות לפתרון בעיות של אוטופלואורסנציה ותקשורת צולבת ערוצים ברקמות סרטן ריאות ממוצא קליני.

צביעה אימונוהיסטוכימית מולטיפלקס לרקמת סרטן ריאות משובצת פרפין

אימונוהיסטוכימיה מחזורית מולטיפלקס מאפשרת זיהוי באתרו של סמנים מרובים בו זמנית באמצעות דגירה חוזרת של נוגדני אנטיגן, סריקת תמונה ויישור תמונה ואינטגרציה. כאן אנו מציגים את פרוטוקול הפעולה לזיהוי מצעי תאי מערכת החיסון בטכנולוגיה זו בסרטן ריאות ובדגימות גרורות מוחיות זוגיות.

אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית מחזורית מרובת משתתפים

דוח זה מתאר פרוטוקול אוטומטי לבדיקות אימונופלואורסצנטיות מרובות (mIF) על מכתים שקופיות אוטומטי. זה מדגים את יכולת השחזור הגבוהה של פרוטאומיקה מרחבית על צביעות רקמות סטנדרטיות בתפוקה גבוהה ומצלמות פלואורסצנטיות שלמות, שהיא אידיאלית עבור מבחני mIF מותאמים אישית על פני מספר רב של שקופיות רקמה במחקר תרגומי.

מבחני אימונופלואורסצנציה אוטומטיים מרובים בתפוקה גבוהה למחקר תרגומי

למד טכניקת אימונוהיסטוכימיה פלואורסצנטית רב-פרמטרית לזיהוי וספירת תת-אוכלוסיות תאי T בסרטן שקדים. שיטה זו מאפשרת הערכת תאי חיסון במיקרו-סביבת הגידול ותומכת בסיווג חולים לטיפולים אימונולוגיים ממוקדים.

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש (וידאו) | JoVE Journal

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית ​​השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש

גלה סרטונים נוספים

ארבע צבע הקרינה אימונוהיסטוכימיה של T- תאים subpopulations ב פורמולה קבוע פורמאלית, פרפין, מוטבע האדם דגימות שלפוחית השתן דגימות קרצינומה של תאי קשקש