30 באוגוסט 2017
המבחן זיהוי האובייקט (אורט) הוא assay פשוט ויעיל להערכת בלמידה ובזיכרון בעכברים. המתודולוגיה המתוארת להלן.
המטרה הכוללת של מבחן התנהגותי זה היא לבחון היבטים שונים של למידה וזיכרון בעכברים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות רבות בתחום הקוגניציה של מכרסמים, החל מהיסודות של פיתוח הבנה עמוקה יותר, עבור היבטים מסוימים של למידה בזיכרון ובעכברים, כמו גם נושאים מורכבים יותר, כגון ליקוי קוגניטיבי, כולל מודלים של מחלות, כגון מחלת אלצהיימר, ועד לחקר שיפור קוגניטיבי פוטנציאלי. היתרון העיקרי של ה-ORT, הוא הפשטות, היעילות והגמישות שלו ולימוד הלמידה והזיכרון בעכברים.
מי שידגים את ההליך הזה יהיה אנדריי ג'לטי, טכנאי מעבדה מהמעבדה שלנו. התחל בבחירת אובייקטים בגודל שומה שניתן להבחין בהם בקלות על ידי בעל החיים אך יש להם דרגת מורכבות דומה בתכונות, כגון מרקם, צורה או בהירות כדי למזער כל העדפה פוטנציאלית של אובייקט מושרה שעלולה להטות את התוצאות. בנוסף, כדי להפחית עוד יותר את ההעדפות המושרות, ודא שעכברים מסוגלים לטפס על שני האובייקטים או אף אחד מהאובייקטים.
היכולת לטפס על אובייקט עשויה להגביר את העניין בחקר. לאחר מכן, כדי למזער את הלחץ של תאורה בהירה, השתמש בתאורה נמוכה מנוטרלת כשמרכז המבוך מואר בסביבות 20 מזל. התאקלמו עכברים בכל חדרי בדיקה חדשים לפחות שעה אחת לפני השימוש בכל יום ושמרו על הטמפרטורה והלחות דומים לתנאי הדיור הרגילים.
שימו לב, יש לטפל בעכברים פעם עד פעמיים ביום למשך דקה אחת לפחות, במהלך שבוע עד שבועיים לפני הבדיקה. לבסוף, עבור הזירה המרכזית, השתמש בתא מרובע העשוי מפלסטיק לבן או שחור שאינו נקבובי בניגוד לצבע העכבר. התחל בהוצאת העכבר מהכלוב הביתי שלו והצבתו באמצע הזירה הריקה הפתוחה.
אפשר לחקור את הזירה בחינם למשך חמש דקות. לאחר שהכלוב הביתי ריק, שמור אותו לשימוש ככלוב למחרת. בתום חמש דקות, הסר את העכבר והנח אותו בכלוב אחיזה.
אל תחזיר את העכבר לכלוב הבית המקורי שלו, אחרת הדבר עלול להשפיע על התנהגותם של העכברים הנותרים לבדיקה. לאחר מכן נקו היטב את המכשיר בין עכברים, תוך שימוש באתנול של 70% נפח לנפח. לאחר מכן, התחל את שלב האימונים או T1, על ידי הצבת שני אובייקטים זהים בריבועים מנוגדים של הזירה.
לדוגמה, אחד בפינה הצפון-מערבית ואחד בפינה הדרום-מזרחית. מהדקים את כל החפצים הקלים מדי לרצפה בעזרת מרק הרכבה להסרה. איזון נגד השימוש בכל סט של חפצים כמו גם המיקום של האובייקט החדש בכל אחת מארבע פינות הזירה.
הקפידו לדעת, באיזה אלכסון משתמשים לאיזו חיה, כך שהשימוש באלכסון ביום האימון יהיה הצורה כמו ביום המבחן לכל עכבר. 24 שעות לאחר ההתרגלות, הוציאו את העכבר מהכלוב הביתי שלו והניחו אותו במרכז הזירה, במרחק שווה משני האובייקטים הזהים כדי להתחיל באימון. אפשר חקירה חופשית למשך חמש דקות לפחות, אם ממזגים זן של עכברים שידוע שיש להם פעילות תנועה או חקר נמוכה, האריכו את הניסוי ל-10 דקות עבור כל העכברים בקבוצות.
בתום ניסיון האימון, הסר את העכבר והנח אותו בכלוב האחיזה. לאחר שהכלוב הביתי ריק, שמור אותו לשימוש ככלוב החזקה ביום הבדיקה. הקפד לנקות את המכשיר והחפצים בין עכברים.
לאחר מכן, התחל את שלב הבדיקה או T2, על ידי הצבת האובייקט המוכר ששימש במהלך האימון וחפץ חדש אחד ברבעים מנוגדים של הזירה. השתמש באותם מיקומים שבהם אתה משתמש במהלך האימון עבור כל עכבר. במרווח הבחירה T1 עד T2, הוציאו את העכבר מכלוב הבית שלו והניחו אותו בזירה המרכזית, במרחק שווה מהאובייקט המוכר ומהאובייקט החדש.
אפשר חקירה חופשית למשך 10 דקות. לבסוף, בתום ניסוי הבדיקה, הסר את העכבר והנח אותו בכלוב האחזקה. לצורך ניתוח, חקירה מוגדרת כאף המכוון לעבר האובייקט בטווח של שניים עד שלושה סנטימטרים עם חיוניות פעילה סוחפת.
עם זאת, העכבר היושב על האובייקט, אינו נספר לזמן החקירה. גם עבור T1 וגם עבור T2, ציינו את חמש הדקות הראשונות וחשבו את זמן החקירה הכולל עבור שני האובייקטים עבור כל מפגש. אם העכבר אינו עומד בזמן החקירה המינימלי של 20 שניות עבור שני האובייקטים, המשך להבקיע מעבר לחמש דקות עד שהחקירה הכוללת תעלה על 20 שניות.
האריכו את זמן T1 ו-T2 ל-10 דקות עבור זני עכברים בעלי חקירה נמוכה ואינם עומדים בקריטריון מינימלי זה בחמש דקות כפי שנצפה במהלך בדיקות הפיילוט. לבסוף, אם עכברים לא מגיעים למינימום של 20 שניות של חקירה עבור שני העצמים עבור T1 או T2 ב-10 דקות, אל תכלול אותם בניתוח מכיוון שלא ניתן לאשר שהחיה בילתה מספיק זמן בחקירה כדי ללמוד ולהבחין. מטלת זיהוי האובייקטים היא שיטה יעילה וגמישה לחקר למידה וזיכרון בעכברים, שבה הוכח כי מעכבי פוספודיאסטראז 2 משתפרים במהלך משימה זו.
בהשוואה לרכב, מתן מעכבי PDE2 במפרצים 60-7550 או ND7001, שיפר משמעותית את הזיכרון באופן תלוי מינון, כאשר ניתן 30 דקות לפני האימון. כאשר ניתן בנקודות זמן שונות, יחסית לאימונים ולבדיקות, מעכב PDE2 bay 60-7550 שיפר משמעותית את הזיכרון שלו כאשר ניתן 30 דקות לפני האימון, כמו גם מיד לאחר האימון ו-30 דקות לפני ההיזכרות. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך יומיים-שלושה אם היא מבוצעת כראוי.
בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לבצע מחקרי פיילוט ולבחור בקפידה את המרווח T1 עד T2, מכיוון שבחירה במרווח שגוי עלולה לגרום להשפעה שגויה. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו מבוך האסם על מנת לענות על שאלות נוספות כמו הבדלים בלמידה, שלא ניתן לטפל בהן באופן מלא באמצעות מבחני זיהוי אובייקטים. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הלמידה והזיכרון לחקור את המנגנונים הביולוגיים הבסיסיים של הזיכרון, כמו גם לחקור מנגנונים פוטנציאליים של ליקויים קוגניטיביים שונים במכרסמים.
לאחר צפייה בסרטון זה, אתם אמורים להבין היטב כיצד להגדיר ולעצב ניסוי מתאים באמצעות מבחן זיהוי האובייקטים, כולל הפעלת מחקרי פיילוט, בחירת אובייקטים ובחירת המרווח המתאים בין T1 ל-T2. תודה על הצפייה ובהצלחה בניסויים שלך.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מבחן זיהוי חפצים (ORT) הוא בדיקה התנהגותית נפוצה להערכת למידה וזיכרון בעכברים. פרוטוקול זה כולל הרגלה, אימון עם חפצים זהים ובדיקה עם חפץ חדש כדי להעריך זיכרון זיהוי המבוסס על העדפה מולדת של בעל החיים לחידוש. ה-ORT מוערך בשל פשטותו, יעילותו והתאימות שלו לצרכים ניסויים שונים, כולל מניפולציות פרמקולוגיות וגנטיות.
מבחן זיהוי חפצים (ORT) מספק מערך התנהגותי חסון ובעל רמת מתח נמוכה להערכת למידה וזיכרון במודלים פרה-קליניים של עכברים. הפשטות והגמישות שלו מאפשרות בדיקה יעילה של השערות לגבי תפקוד קוגניטיבי, ובכך תומכות באישור מטרות בשלבים מוקדמים ובצמצום סיכונים מכניסטיים במחקרים נוירופסיכיאטריים ונוירודגנרטיביים. התוצאים הכמותיים והגמישות של מבחן ה-ORT הופכות אותו לכלי בעל ערך למיון תיקי פיתוח ולרציפות תרגומית בגילוי תרופות למערכת העצבים המרכזית (CNS).
ORT ממוקמת החל משלב הגילוי המוקדם, דרך זיהוי המולקולה המובילה (lead identification) ועד לתיקוף פרה-קליני, ובכך היא מספקת גשר בין מחקרים מכניסטיים לבין נקודות סיום תרגומיות.