Name: שריר פולשנית הטבעה (MIME) - טכניקה ניסיוני הרומן כדי להקל על Myogenesis התורם-תאית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 17 s
Description: למדו את טכניקת MIME להשתלת שריר תורם בשריר מארח בעכברים, לקידום מיוגנזה מבוססת תאי תורם. שיטה זו מציעה פתרון פוטנציאלי לטיפול בדיסטרופיות שרירים ולשיקום רקמת שריר.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו התאפשרה על ידי מענק טייס מהברית המחקר שיקום רגנרטיבית ו להכשרת (AR3T) ואת חבילת ההפעלה סגל מן ויין סטייט לכד. AR3T נתמך על ידי יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי הילד לבריאות, והתפתחות האדם (NICHD), המכון הלאומי של הפרעות נוירולוגיות, שבץ מוחי (NINDS), ואת הלאומית המכון של ביו הדמיה בביו-הנדסה (NIBIB ) של המכונים הלאומיים לבריאות תחת P2CHD086843 מספר פרס. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים.

<ol><li>Mauro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+cell+of+skeletal+muscle+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biophys+Biochem+Cytol%22%5BJournal%5D)">Satellite cell of skeletal muscle fibers.</a> J Biophys Biochem Cytol. 9, 493-495 (1961).</li>
<li>Robertson, T. A., Grounds, M. D., Papadimitriou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidation+of+aspects+of+murine+skeletal+muscle+regeneration+using+local+and+whole+body+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Elucidation of aspects of murine skeletal muscle regeneration using local and whole body irradiation.</a> J Anat. 181 (Pt 2), 265-276 (1992).</li>
<li>Charge, S. B., Rudnicki, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+molecular+regulation+of+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Cellular and molecular regulation of muscle regeneration.</a> Physiol Rev. 84 (1), 209-238 (2004).</li>
<li>Brack, A. S., Rando, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+stem+cells%3A+lessons+from+the+skeletal+muscle+satellite+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific stem cells: lessons from the skeletal muscle satellite cell.</a> Cell Stem Cell. 10 (5), 504-514 (2012).</li>
<li>Krag, T. O., Hauerslev, S., Sveen, M. L., Schwartz, M., Vissing, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Level+of+muscle+regeneration+in+limb-girdle+muscular+dystrophy+type+2I+relates+to+genotype+and+clinical+severity%5BTitle%5D)+AND+%22Skelet+Muscle%22%5BJournal%5D)">Level of muscle regeneration in limb-girdle muscular dystrophy type 2I relates to genotype and clinical severity.</a> Skelet Muscle. 1 (1), 31(2011).</li>
<li>Skuk, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dystrophin+expression+in+myofibers+of+Duchenne+muscular+dystrophy+patients+following+intramuscular+injections+of+normal+myogenic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Dystrophin expression in myofibers of Duchenne muscular dystrophy patients following intramuscular injections of normal myogenic cells.</a> Mol Ther. 9 (3), 475-482 (2004).</li>
<li>Beauchamp, J. R., Morgan, J. E., Pagel, C. N., Partridge, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+myoblast+transplantation+reveal+a+discrete+minority+of+precursors+with+stem+cell-like+properties+as+the+myogenic+source%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Dynamics of myoblast transplantation reveal a discrete minority of precursors with stem cell-like properties as the myogenic source.</a> J Cell Biol. 144 (6), 1113-1122 (1999).</li>
<li>Sakellariou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+electrical+stimulation+promotes+development+in+mice+of+mature+human+muscle+from+immortalized+human+myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Skelet+Muscle%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular electrical stimulation promotes development in mice of mature human muscle from immortalized human myoblasts.</a> Skelet Muscle. 6 (1), 4(2015).</li>
<li>Collins, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+function%2C+self-renewal%2C+and+behavioral+heterogeneity+of+cells+from+the+adult+muscle+satellite+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Stem cell function, self-renewal, and behavioral heterogeneity of cells from the adult muscle satellite cell niche.</a> Cell. 122 (2), 289-301 (2005).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skeletal+muscle+xenograft+as+a+new+preclinical+model+for+muscle+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Human skeletal muscle xenograft as a new preclinical model for muscle disorders.</a> Hum Mol Genet. 23 (12), 3180-3188 (2014).</li>
<li>Juhas, M., Engelmayr, G. C. Jr, Fontanella, A. N., Palmer, G. M., Bursac, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+engineered+muscle+with+capacity+for+vascular+integration+and+functional+maturation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Biomimetic engineered muscle with capacity for vascular integration and functional maturation in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (15), 5508-5513 (2014).</li>
<li>Lin, H., Cheng, A. W., Alexander, P. G., Beck, A. M., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+tissue+engineering+application+of+injectable+gelatin+hydrogel+with+in+situ+visible-light-activated+gelation+capability+in+both+air+and+aqueous+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Cartilage tissue engineering application of injectable gelatin hydrogel with in situ visible-light-activated gelation capability in both air and aqueous solution.</a> Tissue Eng Part A. 20 (17-18), 2402-2411 (2014).</li>
<li>Latil, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+stem+cells+adopt+a+dormant+cell+state+post+mortem+and+retain+regenerative+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle stem cells adopt a dormant cell state post mortem and retain regenerative capacity.</a> Nat Commun. 3, 903(2012).</li>
<li>Maykel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD-scidIl2rg+%28tm1Wjl%29+and+NOD-Rag1+%28null%29+Il2rg+%28tm1Wjl%29+%3A+a+model+for+stromal+cell-tumor+cell+interaction+for+human+colon+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">NOD-scidIl2rg (tm1Wjl) and NOD-Rag1 (null) Il2rg (tm1Wjl) : a model for stromal cell-tumor cell interaction for human colon cancer.</a> Dig Dis Sci. 59 (6), 1169-1179 (2014).</li>
<li>Casar, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparan+sulfate+proteoglycans+are+increased+during+skeletal+muscle+regeneration%3A+requirement+of+syndecan-3+for+successful+fiber+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Heparan sulfate proteoglycans are increased during skeletal muscle regeneration: requirement of syndecan-3 for successful fiber formation.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 1), 73-84 (2004).</li>
<li>Hardy, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Study+of+Injury+Models+for+Studying+Muscle+Regeneration+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparative Study of Injury Models for Studying Muscle Regeneration in Mice.</a> PLoS One. 11 (1), e0147198(2016).</li>
<li>Roberts, P., McGeachie, J. K., Grounds, M. D., Smith, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+and+duration+of+myogenic+precursor+cell+replication+in+transplants+of+intact+skeletal+muscles%3A+an+autoradiographic+study+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Initiation and duration of myogenic precursor cell replication in transplants of intact skeletal muscles: an autoradiographic study in mice.</a> Anat Rec. 224 (1), 1-6 (1989).</li>
<li>Tidball, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+muscle+injury%2C+repair%2C+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Compr+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of muscle injury, repair, and regeneration.</a> Compr Physiol. 1 (4), 2029-2062 (2011).</li>
</ol>

המחברים יש אין אינטרסים כלכליים מתחרים.

כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט הטכניקה ניסיוני הרומן המכונה MIME, שפותחו במעבדה שלנו, כדי השתל רקמת השריר התורם לתוך רקמת השריר המארח. זהו עיבוד של שריר פתוח הרכבה טכניקה כבר הוכיח כיעיל בקידום התורם-תאית myogenesis ב-10,179,שרירים המארח.
המטרה של MIME היא לא לאפשר engraftment של רקמת שריר התורם עצמו לתוך השריר המארח (כיום אין אנו יודעים אם מצב זה מתרחש), אלא לספק מקור של התורם SCs יכול לתרום myogenesis בשריר המארח תחת תנאים המעודדים m uscle התחדשות. תקוותנו היא כי לאחר MIME אופטימיזציה של נבדק במחקרים בסיסיים, פרה, זה יכולה לספק תובנות מדריך קליני טיפולים שמטרתם הגדלת שריר התחדשות בשרירי השלד שעברו אובדן שרירים myogenic.
ישנן שאלות רבות אשר טרם ענה לגבי איך MIME יכול להיות מתורגם טיפול קליני, לדוגמה: כיצד נוכל לשלוט האיכות של רקמה? איך נוכל לשלוט הדחייה החיסונית של התורם רקמות ותאים? הרקמה מנוקה לאחר מתן תאים myogenesis או מותיר מאחור שהותירה צלקת? משפיע סוג סיבי השריר התורם ו/או מארח את התורם-תאית myogenesis? אילו שרירים כמעט יכולים להפיק תועלת MIME? אנחנו כעת מתרחבים המחקרים שלנו כדי להעריך אם MIME הוא בטוח ויעיל, לזהות טיפולי משלים זה יכול להגדיל את התורם, נגזר myogenesis, וענה רבות מהשאלות, המפורטים לעיל.
לאחר השלמת הבדיקות שלנו של עכבר השתלת allogeneic עם פנטומימה, הצעד הבא הוא לבצע MIME האדם-כדי-עכבר עם רקמה אנושית cadaveric כדי להעריך את הפוטנציאל myogenic של רקמת השריר cadaveric. אנו צופים כי ניסויים אלה תוביל קו חדש של מחקר בסיסי והתרגום, שכרוך רקמת השריר מתורמים, הרשומים ביוזמות כגון התוכנית מעזבונו הגוף לחינוך, התוכנית מתנת החיים עבור תרומת איברים .
נציג הנתונים שהוצגו בכתב יד זה מציע כי ב 14 ימים לאחר MIME, ישנם מספר myofibers קיימא או חוסר GFP יש רמות נמוכות של GFP. הפרשנות שלנו של נתונים אלה היא כי תאים הלוויין GFP-תורם תרמו myogenesis בשריר המארח. ביצענו ניסוי זה לקראת ההשתלה של רקמה אנושית cadaveric לתוך שריר בעכבר המחשב המארח. כדי להדגים באופן חד משמעי כי התאים בלוויין התורם לתרום myogenesis בשריר מארח בעקבות MIME, זה יהיה שימושי כדי להשתיל רקמה שמבטא כתב פלורסנט, אשר ניתן בקלות להבדיל בין GFP (למשל, אדום חלבון פלואורסצנטי לבטא רקמה מושתל לתוך GFP + מארח שריר).
טכניקה זו מוגבל בעיקר עקב אופיה של ה-SCs נוכח הרקמה. אם ה-SCs ברקמה התורם קיימא, שהטכניקה סביר להקל על myogenesis התורם-תאית, בעוד אם הם לא להתקיים, myogenesis לא יכול להתרחש. עם זאת, היות SCs גמישים מאוד קיימא עבור בערך שבועיים פוסט-מורטם, סביר מאוד כי למטרות ניסוי, רקמה זה הוא מושתל בתוך דקות ספורות לאחר הקציר יקל על התורם-תאית myogenesis13 . בנוסף, כפי הנאמר לעיל, זה אפשרי כי מאז לרקמת שריר שלם (המכיל SCs, בוגרת סיבי השריר, כמו גם שרירים תושב fibroblasts) מוטבע לתוך השריר המארח, פיברוזיס יכול להתרחש. אולם, הנחה זו צריך להיבדק מדעית. הספרות על נזק שרירים הנובעים התכווצויות השתחררות, cryoinjury ו- myotoxins ניסיוני, מרמז כי תאים חיסוניים (בעיקר macrophages) מסוגלים ביעילות ניקוי פסולת הסלולר מסיבי פגום, שיפוץ מטריצה חוץ-תאית18. לכן, זה אפשרי כי לאחר ההזרקה2 MIME ו- BaCl, כל עוד התאים החיסוניים של המארח יש גישה התורם המתנוונת סיבי השריר, הם יוכלו לנקות פסולת, משאיר מאחור רק התורם SCs. לבסוף, מידת myogenesis התורם, נגזר היא תלויה כמות רקמת השריר התורם שמוטבעת בתוך השריר המארח. על מנת תא שריר המארח יש לאכלס מחדש לחלוטין על ידי התורם-תא-derived myofibers, זה ידרוש שיטה כמו X - או גאמא-הקרנה ablate מארח שריר SCs, מחייבים הליכים MIME חוזרות ונשנות.
זה הוכח, כי בניתוח חשיפת שריר המארח, תפירת פיסת רקמה לתוך השריר המארח יכול להקל התורם-תאית myogenesis9,10,17. גישה כירורגית פתוחה זו שימש בעבר כדי לעקוב אחר ההתקדמות של myogenesis וכדי ליצור עכבר מודלים של מחלות שריר אנושי. ההיבט החדשני של הטכניקה MIME הוא זה היא פולשנית, אינה כרוכה בניתוח חשיפת השריר המארח. זה מפחית את הסיכון של זיהום iatrogenic את מידת אי הנוחות של הפונדקאי, לכן הפיכתה יותר ריאלי לביצוע MIME שוב ושוב על השריר המארח אותו במידת הצורך.
אנו צופים כי הטכניקה MIME עשוי להיות עידון מתאימים את הגישה כירורגי פתוח נוהגים כיום להשתיל רקמת השריר התורם לתוך עכבר המחשב המארח. זה יכול לזרז את הדור של העכבר humanized דגמים, על ידי שתילת הכוח האנושי ביופסיה בשריר בעכבר המחשב המארח. בנוסף, על סמך הראשוניים שלנו של עכבר הרכבה, אנו צופים כי MIME יהיה אפקטיבי להשגת התורם-תאית myogenesis מרקמה אנושית cadaveric כל עוד תורם SCs הם קיימא. לבסוף, עם בדיקות נוספות, אימות, אנו מקווים כי הטכניקה MIME יעזור לפתח טיפולים חדשים כדי להקל על התורם-תאית myogenesis אצל בני אדם במחלות שריר.
ההצלחה של טכניקת MIME הוא ביקורתי תלויים בדיוק הטבעה הרקמה בתוך תא fascial (epimysium) של השריר מארח. רק אם הרקמה ממוקם בתוך תא השריר מארח, הוא לא מסוגל לספק SCs לשריר המארח באופן מדויק. אם הרקמה התורם ממוקם מחוץ לשריר המארח, לא ברור מה יהיה גורלה. במודל ניסיוני שלנו עבור MIME, אנו משתמשים לשריר TA בתור השריר המארח, שכן הוא בולט ומוקם באופן שטחי בהיבט anterolateral של הרגל. הגודל, הכיוון והמיקום האנטומי של שריר TA, מקל לאשר כי הרקמה הוכנסה כהלכה בתוך השריר מארח ת א לאחר MIME. בנייר זה, שאנו מספקים ראיות זה הרקמה מחדשעיקריות מוטבע בתוך המארח שריר ת א ב- MIME שלאחר 3 ימים, וזה שם הוא תורם-תאית myogenesis בשריר מארח ב- פוסט-MIME 14 ימים.

בריא שרירי השלד, למרות שלאחר mitotic, בעל יכולת ההתחדשות מעולה בשל נוכחותם של תושב רקמת תאים myogenic המכונה תאים הלוויין (SCs)1,2; שנסקרה3,4. עם זאת, בתנאים פתולוגי הנגרם על ידי dystrophies שרירים, טראומה או הזדקנות מואצת, התחדשות השרירים עלול לא לשמור על קשר עם שריר התמוטטות, ומתרחשת לפיכך, סיבי השריר מתקדמת5. למרות שיטות יעילות פותחו כדי לבודד SCs מן השריר ולהרחיב אותם בתרבות כדי לייצר מספר גדול של myoblasts (ובהמשך myotubes), יש ניסיונות לייצר מספרים רלוונטי מבחינה פיזיולוגית של סיבי שריר שריר מארח הניב הצלחה מינימלית רק6. כמו עם סוגי תאים רבים אחרים, כאשר myoblasts מוזרקים לבד לתוך רקמות הפונדקאי, רוב התאים לא engraft7,8. אנחנו הראו כי גירוי עצבי חשמלי (NMES) מקלה על התורם-תא-נגזר myogenesis בשריר העכבר חשוכת-התחדשות מארח זה הוזרק עם האדם myoblasts8. אחרים הראו כי בניתוח הרכבה שריר ביופסיה או סיבי שריר בודד עם SCs המצורפת, להקל myogenesis מתון גם בלי NMES, רומז כי השתלת שכל סיבי השריר עם SCs עשוי להיות יתרון יותר מאשר השתלת תאים myogenic לבד9,10. מאז התורם או רקמת השריר המהונדס הושתל לשריר מארח מפיקה תוצאות טובות יותר מאשר משתילים תאים לבד, זה אפשרי רקמות או מבנים דמויי רקמה עשוי לספק רמזים מכריע עבור התורם-תא engraftment; תפיסה אשר הופך יותר ויותר ניכר טיפול בתאי מחקרים שכללו11,10,סוגי תאים שונים12.
נתונים עדכניים מראים כי SCs המתקבל בני יותר מ 2 שבועות אחרי המוות לייצר myotubes תרבות13. ולכן בכוונתנו להעריך אם ההשתלה של שריר רקמות שנקטפו פוסט-מורטם לתוך גוף חי תהפוך אובדן סיבי השריר. פיתחנו הרומן טכניקה הנקראת MIME כדי להשתיל רקמת השריר התורם לתוך רקמת שריר השלד של גוף חי על מנת לקדם את התורם-תא-נגזר myogenesis. MIME כרוך עובר מחט כירורגית דרך השריר המארח כדי ליצור מסלול המחט; לציור מקטע קטן של התורם רקמת שריר דרך במסלול המחט; עוזב את הרקמות של התורם מוטבע בתוך השריר מארח; לסגור את החורים מחט עם דבק רקמות. לאחר תרגול הטכניקה בעכברים לאללה למד בניסויים אחרים, אנחנו עכשיו ביצעתי MIME בעכברים לחיות כי הם immunodeficient ו ubiquitously express של חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP), ולאחר מעקב ב- 3 עד 14 ימים שלאחר באמצעות MIME. ב- MIME שלאחר 3 ימים, אנו אשר תורם עכבר (GFP-) EDL שריר מושתל לתוך עכבר המחשב המארח שריר (GFP +) ת א, נשאר בתוך השריר המארח. ב- פוסט-MIME 14 ימים, לאחר BaCl2 myotoxin פציעה כדי לגרום נזק, myogenesis, נאשר כי כ 5%, 26%, 26% ו- 43% של הסיבים מארח אחד TA שריר להראות לא מארח את התרומה, התרומה מארח מינימלי, המארח מתון התרומה ולאחר מקסימלי לארח את התרומה, בהתאמה. התגרענות המרכזית (סמן של בליה והתחדשות עוקבות) נתפסת כ- 95% של סיבי השריר ת א לאחר ההזרקה MIME ו- myotoxin.
נלמד השרירים ת א 14 ימים לאחר MIME + BaCl2 כי נקודת זמן זו לוכדת בשלב ביניים של התחדשות, כאשר רוב הסיבים regenerated נמצאים מרכזי nucleated. אנחנו לומדים GFP + עכברים כפונדקאים עבור MIME, כך כאשר אנו בסופו של דבר השתלת שריר cadaveric אנושי לתוך המארח עכברים, נוכל להבחין בקלות בין סיבי השריר של המארח ומקור התורם. אנחנו להשתמש בעכבר אדי שרירים כמו רקמה ניסיוני, מאז יחיד סיבי השריר הזה הראו פוטנציאל myogenic גדול יותר שרירי ת א9. השריר אדי הוא גם סינרגטי את השריר ת א ובעל הרכב סיבים מסוג דומה. הראשוניים שלנו מראים כי MIME הוא לסייע התורם-תא-נגזר myogenesis בשריר המארח.

<table><tbody><tr><td>עכברי NSG-GFP</td><td>מעבדת ג'קסון (בר הרבור, מיין)</td><td>מלאי #021937</td><td>עכברים מארחים חסרי חיסון המבטאים בכל מקום עכברי חלבון פלואורסצנטי ירוק</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>מעבדת ג'קסון (בר הרבור, מיין)&nbsp;</td><td>מלאי #000664</td><td>בקרת עכברים תורמים</td></tr><tr><td>וופורייזר איזופלורן שולחני&nbsp;</td><td>VetEquip (ליברמור, קליפורניה)</td><td>פריט #901801</td><td>מערכת הרדמה בשאיפה</td></tr><tr><td>קסם מסיר שיער Crea</td><td>Softsheen Carson (ניו יורק, ניו יורק)</td><td>N/A</td><td>קרם להסרת שיער ללא כתער</td></tr><tr><td>4-0 תפרים משי, שחור, קלוע, לא נספגים</td><td>Roboz Surgical Instrument Co, Inc. (גייטרסבורג, מרילנד</td><td>)SUT106631</td><td>תפרים מנחים לרקמת תורם</td></tr><tr><td>דבק רקמות וטרינרי</td><td>VetBond 3M (מייפלווד, מינסוטה)</td><td>קטלוג #1469Sb</td><td>דבק רקמות וטרינרי לסגירת עור ללא תפרים</td></tr><tr><td>בריום כלוריד&nbsp;</td><td>חברת ריקה כימיקלים (ארלינגטון, טקסס)</td><td>מוצר #R0854000-500A 854-16&nbsp;</td><td>מיוטוקסין לגרימת נזק לשרירים ולעידוד התחדשות</td></tr><tr><td>כרית חימום ג'ל איזותרמית Deltaphase&nbsp;</td><td>בריינטרי סיינטיפיק (בריינטרי, מסצ'וסטס)</td><td>&nbsp; פריט #39DP</td><td>כרית חימום למתן תמיכה תרמית לבעלי חיים בזמן הרדמה</td></tr><tr><td>HM525NX קריוסטט&nbsp; &nbsp;</td><td>ThermoFisher (וולת'ם, מסצ'וסטס)</td><td>קטלוג #HM525NX&nbsp;</td><td>קריוסטט ליצירת חלקי שריר קפואים</td></tr><tr><td>Vectashield Antifade Medium</td><td>Vector Laboratories, Inc. (ברלינגיים, קליפורניה)</td><td>מספר קטלוגי: H-1000</td><td>Antifade medium לשימור הקרינה בדגימות עם תווית אימונו-פלואורסצנטית ארנב</td></tr><tr><td>נגד דסמין נוגדן</td><td>Labvision Thermo Scientific (פרמונט, קליפורניה)</td><td>RB9014P</td><td>ארנב נוגדן נגד דסמין לתיוג אימונופלואורסצנטי</td></tr><tr><td>עז אנטי ארנב Alexa 568 נוגדן</td><td>ThermoFisher (וולת'אם, מסצ'וסטס)</td><td>קטלוג#: A-21069</td><td>נוגדן משני נגד ארנב עז לתיוג אימונופלורסנט</td></tr><tr><td>4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול (DAPI)&nbsp;</td><td>Seracare (מילפורד, MA)</td><td>קטלוג #5930-0006 או 71-03-01</td><td>מגיב לתיוג פלואורסצנטי של גרעינים</td></tr><tr><td>Axio Scope.A1 מיקרוסקופ</td><td>קארל זייס (פיבודי, MA)&nbsp;</td><td>מוצר #Axio Scope.A1</td><td>מיקרוסקופ אור ופלואורסצנטי</td></tr><tr><td>Photoshop CS4</td><td>Adobe Systems (סן חוזה, קליפורניה)</td><td>תוכנת הדמיה Photoshop CS4</td><td>לביצוע אריחי תמונה</td></tr><tr><td>Image J</td><td>המכונים הלאומיים לבריאות (בת'סדה, מרילנד)</td><td>Image J עבור Windows תוכנת הדמיה של מערכת הפעלה 64 סיביות</td><td>לניתוח פלואורסצנטי כמותי</td></tr></tbody></table>

שריר פולשנית הטבעה (mime) - טכניקה ניסיוני הרומן כדי להקל על myogenesis התורם-תאית

Minimally Invasive Muscle Embedding (MIME) - A Novel Experimental Technique to Facilitate Donor-Cell-Mediated Myogenesis

שרירי השלד בעל יכולת ההתחדשות בשל רקמת תושב, יצירת סיבי שריר (myogenic) תאים הלוויין (SCs), אשר יכול ליצור סיבי שריר חדשים בתנאים הנכונים. למרות SCs ובביצים רקמת השריר ותרבותית במבחנה, התאים myoblast וכתוצאה מכך אינם יעילים מאוד בקידום myogenesis כאשר מושתלים לתוך השריר המארח. בניתוח חשיפת השריר מארח ואת הרכבה מקטעי רקמת השריר תורם או על סיבי השריר מבודד עם SCs שלהם על גבי המחשב המארח שריר, מקדם myogenesis טוב יותר בהשוואה השתלת myoblast. פיתחנו שיטה הרומן הזה שנקרא מינימלית פולשנית שריר הטבעת (MIME). MIME כרוך עובר מחט כירורגית דרך השריר המארח, ציור חתיכה של התורם רקמת השריר דרך במסלול מחט, ואז עוזב רקמה מוטבע בתוך השריר מארח כך רשאית לפעול כמקור SCs עבור שריר המארח. כאן נתאר בפירוט השלבים המעורבים בביצוע MIME במודל עכבר immunodeficient המבטאת חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) של כל התאים שלו. כשל חיסוני העכבר מארח מפחיתה את הסיכון של המערכת החיסונית דחיית הרקמה, ומאפשרת ביטוי GFP זיהוי קל של סיבי השריר המארח (GFP +) ותורם-תא-derived סיבי שריר (נולד ב- GFP). הנתונים הטייס שלנו מראים כי MIME יכול לשמש כדי להשתיל השריר של פושט האצבעות הארוך (EDL) מן העכבר התורם לתוך השריר השוקתי הקדמי (TA) של עכבר מחשב מארח. הנתונים שלנו מציע גם כאשר myotoxin (בריום כלוריד, BaCl2) מוזרק לתוך השריר המארח לאחר MIME, שיש הוכחות של תורם-תא-נגזר myogenesis בשריר המארח, עם 5%, 26%, 26% 43% של הסיבים מארח אחד ת א שריר מציג אין מארח את התרומה התרומה מארח מינימלי, התרומה מארח מתון, התרומה מארח מקסימלי, בהתאמה.

ב- MIME שלאחר 3 ימים, התורם אדי זה הוא מושתל מאת MIME נכלל בתוך תא השריר ת א מארח (איור 2A–C). כצפוי, חתכי רוחב של שריר TA של התורם עכברים, למד תחת קרינה פלואורסצנטית אופטיקה, אינם מראים פלורסצנטיות ירוק כי הם לא מבטא GFP (איור דו-ממדי). לעומת זאת, חתכי רוחב של שריר TA של עכברים המארח לא מושתלים עם רקמה, הצג פלורסצנטיות ירוק אחיד סיבי השריר של ת א, כפי הסיבים אקספרס GFP (2E איור). חתכי רוחב של השרירים באמצעות MIME. מושתל רקמת השריר תורם, יש קו התיחום בין סיבי השריר המארח (GFP +) לבין התורם סיבי שריר (נולד ב- GFP). התמונות חדות שלב של השדות חזותי באיור איור דו-ממדי–F מוצגים באיור 2E'–נ' מציע כי אכן ישנם סיבי השריר נוכח באזורים איפה שיש אין GFP האות.
פוסט-MIME 14 ימים, הזרקת2 BaCl, על ידי לימוד טורי בין המקטעים של שריר TA שנותרו ללא תווית או מסומנות עם נוגדנים desmin (איור 3), אנו לומדים כי האות GFP מתבטא בכך כל סיבי השריר ב שריר שאינו מטופל של עכברים המארח, אך לא את השריר שטופלו MIME (desmin אדום תיוג מגלה קיימא סיבי שריר). בשריר מארח TA מטופלים עם הזרקת2 MIME, BaCl, myogenesis התורם-תא-derived ניכרת מן הנוכחות של סיבי שריר desmin(+) רבים המציגים אין אות GFP לזיהוי (איור 3C–D, 3 C' –D'). סיבי השריר chimeric הנובעות הפיוז'ן סביר של התאים myogenic המארח ו התורם ניתן להבחין נמוכה רמות מתונות של זריחה GFP הוצגו על ידי סיבים אלו. סיבי chimeric רבים מופיעים על פני קוטר כל שריר ת א רומז כי התורם SCs מסוגלים מעביר כמה מאות מיקרונים בתוך epimysium של השריר המארח. כימות של GFP + סיבים מוצג באיור 3E. איור 4 מציג בהגדלה תמונות של טורי חתכי רוחב כל שריר ת א2 מטופלים MIME + BaCl.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55731/55731fig1.jpg"> 
איור 1 . השלבים הכרוכים מינימלית פולשנית שריר הטבעת (MIME). MIME מתבצע בהרדמה כללית. זה כרוך הצבת ~ 10 מ"ג של התורם שריר (התורם עכבר EDL) בתמיסה צלצול קשירת התפרים המנחה לקצוות שלה (א). מחט בקוטר 18 עבר דרך לציר הארוך של שריר המארח (B) , הרקמה נשאבים דרך במסלול המחט (C). הרקמה שמאל שמוטבע לשריר המארח (D), התפרים המנחה נחתכים, החורים המחט חתומות עם דבק רקמות (E). הפצעים המחט אטום מצוינים עם החצים (נ). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55731/55731fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55731/55731fig2.jpg"> 
איור 2 . מחקרים של שריר ת א 3 ימים לאחר MIME. שריר מארח שנאספו 3 ימים לאחר MIME; סימנים של מזרקים הערה במחשב מארח TA (חיצים; A-B). נתונים נוספים מאשרים כי העכבר התורם מוטבע אדי היא שהסתתר בתוך תא השריר TA (בג). קרינה פלואורסצנטית תמונות של שריר TA חתכי רוחב הצג אין קרינה פלואורסצנטית ירוק בשריר ת א (ד)של פראי-סוג קרינה פלואורסצנטית ירוק בהיר בשריר NSG-GFP TA (E), הפרדה בין המארח לבין התורם שריר בשריר TA NSG-GFP ב 3 ימים פוסט-באמצעות MIME (נ). התמונות חדות שלב של השדות visual D-F מוצגות באיור D'-F', בהתאמה. הקו האדום פאנלים F ו- F' מציגה את קו התיחום בין הרקמה מארח ושל התורמים. סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55731/55731fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55731/55731fig3.jpg"> 
איור 3 . מחקרים של שריר ת א 14 ימים לאחר MIME. הנתונים שנאספו 14 ימים שלאחר MIME מוצגים. האות האדום הוא מ תיוג immunofluorescent של desmin (סיגנל חיובי desmin מציין כי myofibers הם קיימא), האות כחול הוא מדאפי (כתמי גרעינים), האות ירוק הוא מ- GFP. שליטה TA שריר (נכון hindlimb) שנקטפו העכבר המארח, כצפוי, myofibers כמעט כל הם חיוביים עבור desmin, רומז כי myofibers אלה הם קיימא (A; אדום). בנוסף, בהתבסס על דאפי מכתים, זה ברור זה myonuclei של כמעט כל myofibers ממוקמים באופן עקיף, כצפוי בשריר בריא (A; סימן כחול). טורי מקטעים של שריר שליטה TA מראים כי כמעט כל סיבי השריר בצבע ירוק בהיר, רומז כי הם חיוביים עבור ה-GFP. MIME + BaCl2 -מטופלים TA שרירים (hindlimb השמאלי), תורם-תאית myogenesis ניכרת מן הנוכחות של סיבי שריר desmin(+) רבים המציגים אין קרינה פלואורסצנטית GFP לזיהוי (C-D, C'-D'). Desmin(+) סיבי שריר נמוך בינוני GFP קרינה פלואורסצנטית (סיבי שריר chimeric) נמצאים לאורך הקוטר של השריר TA כולו, רומז כי MIME מספק התורם SCs יכול להעביר בתוך epimysium של השריר TA, לקדם התורם-תא-נגזר myogenesis. א '-D' ההגדלה גבוהה תמונות של האזורים בתוך הקופסאות הכחולות A - ממד. כימות של סיבי GFP(+) וסיבים מרכזי nucleated מוצגים ב- E. גודל ברים = 100 מיקרומטר (A-D) ו- 50 מיקרומטר (א '-יח '). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55731/55731fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" s alt="Figure 4" class="xfigimg"></img alt="Figure 4" class="xfigimg" s>rc="/files/ftp_upload/55731/55731fig4.jpg" / > 
איור 4 . עדות לנזק נרחב והתחדשות 14 ימים לאחר ההזרקה2 MIME ו- BaCl. בהגדלה, טורי חתכי רוחב כל שריר ת א2 מטופלים MIME + BaCl מוצגים. הנתונים מראים כי רבים סיבי השריר, אשר הם בינוני או חזק GFP + יש במיקום מרכזי גרעינים (א-ב; אדום האות א' הוא מ- desmin, כחול אות א' של דאפי, אות ירוק ב' מ- GFP). נתונים אלו מראים כי ניוון והתחדשות לאחר הזרקת2 BaCl אינו משפיע על הביטוי GFP. בהקשר זה, הנוכחות של סיבי השריר מרכזי nucleated בשריר ת א2 מטופלים MIME + BaCl, עם ביטוי GFP-קטן-לא, מרמז כי סיבים אלו הם כנראה תוצאה של myogenesis (או התחדשות) עם תרומה משמעותית מ GFP - תאים myogenic. תצפיות אלה יכולים לאמת יותר בתמונות בהגדלה של שדות נבחרים (C-F; C, D, ו- E ו- F, בהתאמה, חופפות אזורים של חתכי רוחב טורי; קודי הצבע של התמונה גבולות מציינות המיקום של אזורים אלה ב- A ו- B). גודל ברים = 100 מיקרומטר (A-B) ו- 50 מיקרומטר (C-F). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55731/55731fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

אנו מתארים טכניקה ניסיוני הרומן נקרא מינימלית פולשנית שריר הטבעת (MIME), אשר מבוססת על ראיות כי רקמת שריר השלד מכיל תאים myogenic קיימא יכול להקל על התורם-תאית myogenesis כאשר מושתל לתוך שריר המארח.

שריר פולשנית הטבעה (MIME) - טכניקה ניסיוני הרומן כדי להקל על Myogenesis התורם-תאית

Skeletal muscle possesses regenerative capacity due to tissue-resident, muscle-fiber-generating (myogenic) satellite cells (SCs), which can form new ...

המטרה הכללית של טכניקה זו היא להשתיל מקטע קטן של רקמת שריר מתורם אל תוך שריר של מארח, וזאת כדי לקדם מיוגנזה (יצירת שריר) המתווכת על ידי תאי התורם. שיטה זו יכולה לסייע במתן מענה לשאלות מפתח בתחום הביולוגיה הרגנרטיבית של השריר, כגון, האם רקמת שריר שנלקחה לאחר המוות יכולה לקדם מיוגנזה המתווכת על ידי תאי תורם בשריר של מארח. היתרון המרכזי של טכניקה זו הוא שהיא פולשנית במידה מינימלית.ההשלכות של טכניקה זו פונות לעבר טיפול בדיסטרופיות שרירים שאינן קטלניות, מכיוון ששילוב של השכבת שריר, תרגול ואימונותרפיה עשוי להצליח להחזיר את הפוטנציאל הרגנרטיבי של שרירים פגועים מסוימים. כפיזיותרפיסט וכמהנדס ביומדיקלי, אני מאמין שהטבע הפולשני המינימלי של פרוצדורת ה-MIME הוא מרכזי, כיוון שהיא מספקת מקור לתאים מיוגניים, יחד עם פיגום רקמה טבעי, מבלי לשבש באופן מוגזם את מבנה ותפקוד השריר המארח. את הפרוצדורה תדגים גב' מוריום בגם, עוזרת מחקר במעבדתי.ראשית, יש להקרין בעזרת הומנסיה (euthanize) עכברי תורם מסוג C57 black six בני 12 עד 16 שבועות, כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב. השתמשו במספריים כירורגיים כדי לפתוח את העור מעל השטח הקדמי של הרגל האחורית. לאחר איתור שריר ה-TA, הסירו אותו כדי לחשוף את שריר ה-EDL הממוקם מאחורי שריר ה-TA.החליקו את קצה פינצטה מאחורי השריר ומשכו בעדינות כדי לבדוק אם הבהונות נמתחות, ובכך לאשר כי השריר הוא ה-EDL. לאחר זיהוי שריר ה-EDL, השתמשו במקטעים של משי 4-0 באורך של כ-10 סנטימטרים כדי לקשור תשורי הנחיה לגידים הדיסטליים והפרוקסימליים. קשרו שני קשרים כפולים בתשורי הגידים הפרוקסימליים והדיסטליים של השריר.גזרו את הגיד הדיסטלי של ה-EDL והסיטו את השריר. לאחר מכן, גזרו את הגיד הפרוקסימלי כדי לשחרר את השריר. הניחו את שרירי ה-EDL שנאספו בתוך פטריה הממולאת בתמיסת רינגר לעכברים.הרדמו את עכבר המארח הזכר מסוג NSG-GFP, בן שמונה עד 10 שבועות, בהתאם לפרוטוקול הכתוב. מרחו וזלין על העיניים כדי למנוע התייבשות. כדי להכין את העור, מרחו קרם להסרת שיער על החלק הקדמי של הרגל האחורית השמאלית והשאירו אותו למשך שתי דקות.בעזרת מגבונים ספוגים ב-PBS, הסירו את קרם הדיפילציה יחד עם הפרווה. לניקוי העור, קרצפו לסירוגין בעזרת שלושה מגבונים של תמיסת פובידון יוד (povidone iodine) ו-70% ethanol. כדי ליצור נתיב למחט בשריר ה-TA של המארח, העבירו מחט כירורגית דרך מרכז השריר, לאורך הציר האורכי שלו.יש לוודא שהמחט מוחדרת בכיוון צפALO-גודלי (מהראש לכיוון הזנב), לאורך שריר ה-TA ובמרכז גוף השריר. לאחר החדרת המחט, העבירו את חוטי התפרים המנחים מקצה אחד של רקמת התורם, דרך חלל המחט הכירורגית בכיוון גודו-צפALO (מהזנב לכיוון הראש). משכו את המחט אל מחוץ לשריר המאחסן בכיוון גודו-צפALO, כדי להוביל את רקמת התורם דרך נתיב המחט.מקם כראוי את רקמת שריר ה-EDL התורמת בתוך שריר ה-TA המארח, תוך שימוש בתפרים המנחים בקצוות הגודליים (caudal) והראשוניים (cephalic) של השריר התורם. לאחר השקת רקמת התורם, גזור את התפרים המנחים ובצע התאמות במידת הצורך באמצעות פינצטה בעלת חוד דק. לבסוף, אטום את פצעי המחט ברקמת השריר על ידי סגירת שקע הפצע באמצעות פינצטה ומריחת דבק לרקמות וטרינריות בעזרת חוד של מחט כירורגית בקוטר 27 gauge.לאחר ביצוע ה-MIME, יש להזריק 50 עד 60 µL של Barium Chloride בריכוז 1.2% לשריר ה-TA של המארח בשלושה מוקדים לאורך השריר: בשליש הפרוקסימלי, במרכז ובשליש הדיסטלי של גוף השריר. לאחר ההזרקה, נקה את רגלו של העכבר המארח בעזרת אתנול והגן על העור על ידי מריחה של שכבה דקה של וזלין. הנח את העכבר בכלוב התאוששות בודד ללא מצע.יש להניח פד חימום ג'ל איזותרמי תחת מחצית מהכלוב כדי לספק תמיכה תרמית לעכבר המארח, תוךما שהעכבר עדיין יוכל לנוע למחצית שאינה מחוממת. לאחר השלמת ההחלמה, יש להחזיר את העכבר לכלובו המקורי. השתמשו במספריים כירורגיים כדי לפתוח את העור מעל השטח הקדמי של הרגל.לאחר איתור שריר ה-TA, גזרו את הגיד הדיסטלי שלו והסיטו את השריר. גזרו את גיד השריר הפרוקסימלי כדי לשחרר את שריר ה-TA. אספו את שרירי ה-TA מצד שמאל (המטופל) ומצד ימין (הביקורת).שקלו את השרירים שנאספו על ידי הנחתם על נייר שקילה ומספרי שקילה. לצורך קריו-הגנה, טבלו את השרירים לזמן קצר בשמן מינרלי ולאחר מכן ספגו את השמן העודף. כדי לבצע הקפאה מהירה (snap freeze) של השרירים, הניחו אותם על נייר אלומיניום וטבלו אותם במהירות בבקבוק כפול (dual flask) מלא בחנקן נוזלי.העבירו את הדגימות הקפואות למבחנות קריוגניות מסומנות. הטמעה מדויקת של רקמת התורח בתוך שריר המארב היא קריטית להצלחת ה-MIME. לאחר שלושה ימים, שריר ה-EDL של התורח נשאר מושתל בשריר ה-TA של המארב, כאשר סימני המחט עדיין גלויים על שריר המארב.בנוסף, חיתוכים רוחביים של שרירי התורם אינם מראים פלואורסצנציה ירוקה, בעוד שבחיתוכים רוחביים של שרירי המארח היא כן מופיעה. בחיתוכים הרוחביים של השרירים שהושתלו, קיים גבול ברור בין סיבי שריר של המארח החיוביים ל-GFP לבין סיבי שריר של התורם השליליים ל-GFP.14 ימים לאחר הטיפול, כל סיבי השריר והשרירים שלא טופלו הם חיוביים ל-GFP. אך לא כך בשרירי המארח שטופלו. רבים מסיבים אלו, שהם שליליים ל-GFP, נמצאו כחיים באמצעות סימון דסמין (desmin) בצבע אדום.ממצאים אלו מדגימים כי MIME מוביל למיוגנזה המופקת מתאי תורם. בשריר ה-TA קיימים סיבי שריר כימריים. אלו זוהו על ידי פלואורסצנציה נמוכה עד בינונית, הנובעת ככל הנראה מההיתוך של תאים מיוגניים של המארח והתורם.נוכחותם לכל אורך קוטרו של השריר המארח מעידה על כך שתאי מיוגניים של תורם יכולים לנדוד מאות מיקרונים בתוך השריר. לאחר רכישת המיומנות, ניתן לבצע טכניקה זו בתוך 15 עד 20 דקות, אם היא מבוצעת כראוי. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי אופן השימוש בטכניקת MIME להטמעת מקטע של שריר תורם בתוך שריר מארח, במטרה להקל על מיוגנזה המתווכת על ידי תאי תורם.טכניקת ה-MIME סוללת את הדרך לבחון אם שריר אנושי פוסט-מורטם יכול לקדם מיוגנזה המתווכת על ידי תאי תורם בעכבר מאחס. היא גם מסייעת להעריך אם גרייה חשמלית עצבית-שרירית מסוגלת להגביר מיוגנזה המתווכת על ידי תאי תורם. ניתן להחיל שיטה זו גם על מערכות אחרות, כגון יצירת מודלים חייתיים של מחלות אנושיות על ידי השקת ביופסיה של שריר אנושי לתוך בעלי חיים מאחסים, וכדי לבחון אם מימטיקאות של רקמת שריר המכילות תאים מיוגניים יכולות לקדם מיוגנזה.

minimally-invasive-muscle-embedding-mime-novel-experimental-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

מעקב דינמיקה של engraftment שריר בבעלי חיים קטנים על ידי In vivo פלורסנט הדמיה

מיקרו גזור טכניקה explants היא שיטה חזקה ואמינה לבידוד שגשוג התאים שריר השלד מן, השרירים נוער למבוגרים או עובריים כמקור לתאי גזע שרירי השלד. באופן ייחודי, התאים האלה כבר נגזר clonally לייצר גזע שריר השלד שורות תאים המשמשים in vivo השתלה.

למבוגרים עובריים שרירי השלד Microexplant התרבות בידוד בתאי גזע שרירי השלד

רקמת שריר מהונדסת יש פוטנציאל גדול ברפואת רגנרטיבית, כמודל מחלה וגם כמקור חלופי לבשר. כאן אנו מתארים ההנדסיים של מבנה שרירים, במקרה זה מתאי עכבר והיצמדות לאב, והגירוי על ידי פולסים חשמליים.

רקמות שריר שלד הנדסה מתאי Murine היצמדות מולידו ויישום של גירוי חשמלי

אמצעי לא פולשני להערכת ההצלחה של השתלה והיצמדות מתואר. השיטה מנצלת את גן כתב היתוך מאוחד המורכבים של גנים אשר ביטוי ניתן הדמיה בשיטות הדמיה שונות. הנה, אנחנו עושים שימוש...

מולקולרית והדמיה ליעד בתאים שריר מושתלים

תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים (iPSC) שמקורם באבות מיוגניים מבטיחים מועמדים לאסטרטגיות טיפול בתאים לטיפול בדיסטרופיות שרירים. פרוטוקול זה מתאר השתלות ומדידות תפקודיות הנדרשות כדי להעריך את החריטה והבידול של מזואנגיובלסטים שמקורם ב- iPSC (סוג של אבות שרירים) במודלים של עכברים של התחדשות שרירים חריפה וכרונית.

השתלה של תאי גזע פלוריפוטנטיים המושרה נגזר Mesoangioblast כמו אבות מיוגניים במודלים עכבר של התחדשות שרירים

הבידוד והתרבות של אוכלוסייה טהורה של תאי לווין שקטים, אוכלוסיית תאי גזע שריר, הוא חיוני להבנה של ביולוגיה שרירים תאי גזע והתחדשות, כמו גם בתאי גזע להשתלה עבור טיפולים בניוון שרירים ומחלות ניווניות אחרות.

בידוד, תרבות והשתלה של תאי לווין שריר

פרוטוקול זה משתמש באלקטרופורציה כדי להציג ולבטא חלבונים בעלי תווית פלואורסצנטית בסיבי שריר עכברים. לאחר ההתאוששות לאחר אלקטרופורציה, הסיבים מבודדים. לאחר מכן מדמים סיבים בודדים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית ברזולוציה גבוהה כדי להמחיש את מבנה השרירים.

DNA Electroporation, בידוד והדמיה של Myofibers

תאי שריר הם בין התאים האיקריוטיים המורכבים ביותר. אנו מציגים פרוטוקול להתמיינות חוץ גופית של סיבי שריר בוגרים מאוד המאפשר מניפולציה גנטית והדמיה ברורה בכל שלבי ההתפתחות.

במבחנת הבידול של בוגרות Myofibers עבור הדמיה חיה

מחלות אנושיות מורכבות יכול להיות מאתגר למודל במערכות מסורתיות דגם מעבדה. כאן, אנו מתארים גישה כירורגית למודל מחלת שריר האדם באמצעות השתלת ביופסיות שריר השלד האנושי לתוך עכברים לקויה.

ביצוע שריר השלד האנושי Xenografts בעכברים חיסוני

כאן, אנו מציעים שיטה ביעילות להשיג סיבי שריר בודד בשלב מוקדם לאחר לידה התפתחותית מ homozygous מוטציה Lamin δ 8-11 מודל העכבר, מודל חמור מאוד עבור השרירים נייל-דרייפוס ניוון שרירים (edmd).

בידוד ותרבות בודדים מודל מורנה של קבצי נייל-דרייפוס ניוון שרירים בתחילת לאחר לידה פיתוח

פרוטוקול זה מתאר את ההמרה של פיברובלסטים בעור לתוך myoblasts ואת הבידול שלהם myotubes. קווי התאים נגזרים מחולים עם הפרעות נוירומוסקולריות וניתן להשתמש בהם כדי לחקור מנגנונים פתולוגיים ולבדוק אסטרטגיות טיפוליות.

תכנות ישיר של פיברובלסטים אנושיים למיובלסטים כדי לחקור טיפולים להפרעות נוירומוסקולריות

למדו את טכניקת MIME להשתלת שריר תורם בשריר מארח בעכברים, לקידום מיוגנזה מבוססת תאי תורם. שיטה זו מציעה פתרון פוטנציאלי לטיפול בדיסטרופיות שרירים ולשיקום רקמת שריר.

שריר פולשנית הטבעה (MIME) - טכניקה ניסיוני הרומן כדי להקל על Myogenesis התורם-תאית

גלה סרטונים נוספים