Name: טכניקת Fractator אופטי להעריך מספרים תאים במודל עכברוש של תרפיה אלקטרו-פולית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: למדו את שיטת ה-Optical Fractionator לספירת תאים במוח עכברוש לאחר גירוי אלקטרו-פולי. טכניקה סטריאולוגית זו מספקת הערכות מדויקות של נוירוגנזה בהיפוקמפוס.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים לסוזאן סורנסן על סיוע טכני מיומן. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מן הקרן ולוקס; קרן יאשה; קרן Aase ו Ejnar Danielsens; קרן האחים הרטמן; הבמאי יעקב מדסן ואשתו אולגה מאדנס קרן; דוקטור סופוס קרל אמיל פריס ואשתו דוריס פריס &#39;אמון; קרן 1870; קרן Torben ו- Alice Frimodts והקרן למחקר נוירולוגי. עריכה של כתב היד בוצעה על ידי Inglewood Biomedical Editing.

<ol><li>Boyce, R. W., Dorph-Petersen, K. A., Lyck, L., Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design-based+stereology%3A+Introduction+to+basic+concepts+and+practical+approaches+for+estimation+of+cell+number%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Design-based stereology: Introduction to basic concepts and practical approaches for estimation of cell number.</a> Toxicol. Pathol. 38 (7), 1011-1025 (2010).</li>
<li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWest%2C+MJ+%22Introduction+to+stereology%22">Introduction to stereology</a>. 2012 (8), Cold Spring Harb. Protoc. 843-851 (2012).</li>
<li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereological+methods+for+estimating+the+total+number+of+neurons+and+synapses%3A+issues+of+precision+and+bias%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stereological methods for estimating the total number of neurons and synapses: issues of precision and bias.</a> Trends Neurosci. 22 (2), 51-61 (1999).</li>
<li>Gundersen, H. J., Jensen, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+systematic+sampling+in+stereology+and+its+prediction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">The efficiency of systematic sampling in stereology and its prediction.</a> J. Microsc. 147 (Pt 3), 229-263 (1987).</li>
<li>West, M. J., Slomianka, L., Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1793176">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Anat. Rec. 231 (4), 482-497 (1991).</li>
<li>Kaae, S. S., Chen, F., Wegener, G., Madsen, T. M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+hippocampal+structural+changes+following+electroconvulsive+seizure+treatment+in+a+rat+model+of+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Quantitative hippocampal structural changes following electroconvulsive seizure treatment in a rat model of depression.</a> Synapse. 66 (8), 667-676 (2012).</li>
<li>Chen, F., Madsen, T. M., Wegener, G., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+electroconvulsive+seizures+increase+the+total+number+of+synapses+in+adult+male+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Repeated electroconvulsive seizures increase the total number of synapses in adult male rat hippocampus.</a> Eur Neuropsychopharmacol. 19 (5), 329-338 (2009).</li>
<li>Gundersen, H. J., Jensen, E. B. V., Kiëu, K., Nielsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficiency+of+systematic+sampling+in+stereology+-+reconsidered%5BTitle%5D)+AND+%22J.Microsc%22%5BJournal%5D)">The efficiency of systematic sampling in stereology - reconsidered.</a> J.Microsc. 193 (3), 199-211 (1999).</li>
<li>West, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+based+stereological+methods+for+estimating+the+total+number+of+objects+in+histological+material%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Morphol.%28Warsz%29%22%5BJournal%5D)">Design based stereological methods for estimating the total number of objects in histological material.</a> Folia Morphol.(Warsz). 60 (1), 11-19 (2001).</li>
<li>Olesen, M. V., Wörtwein, G., Pakkenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroconvulsive+stimulation%2C+but+not+chronic+restraint+stress%2C+causes+structural+alterations+in+adult+rat+hippocampus+-+a+stereological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Electroconvulsive stimulation, but not chronic restraint stress, causes structural alterations in adult rat hippocampus - a stereological study.</a> Hippocampus. 25 (1), 72-80 (2015).</li>
<li>Olesen, M. V., Wortwein, G., Folke, J., Pakkenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electroconvulsive+stimulation+results+in+long-term+survival+of+newly+generated+hippocampal+neurons+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Electroconvulsive stimulation results in long-term survival of newly generated hippocampal neurons in rats.</a> Hippocampus. 27 (1), 52-60 (2017).</li>
<li>Madsen, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+neurogenesis+in+a+model+of+electroconvulsive+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Psychiat%22%5BJournal%5D)">Increased neurogenesis in a model of electroconvulsive therapy.</a> Biol Psychiat. 47 (12), 1043-1049 (2000).</li>
<li>Cameron, H. A., Mckay, R. D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neurogenesis+produces+a+large+pool+of+new+granule+cells+in+the+dentate+gyrus%5BTitle%5D)+AND+%22J.Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Adult neurogenesis produces a large pool of new granule cells in the dentate gyrus.</a> J.Comp. Neurol. 435 (4), 406-417 (2001).</li>
<li>Dorph-Petersen, K. A., Nyengaard, J. R., Gundersen, H. J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+shrinkage+and+unbiased+stereological+estimation+of+particle+number+and+size%5BTitle%5D)+AND+%22J.Microsc%22%5BJournal%5D)">Tissue shrinkage and unbiased stereological estimation of particle number and size.</a> J.Microsc. 204 (3), 232-246 (2001).</li>
<li>Schmitz, C., Hof, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+straightforward+and+rigorous+methods+of+counting+neurons+based+on+a+computer+simulation+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem.+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Recommendations for straightforward and rigorous methods of counting neurons based on a computer simulation approach.</a> J Chem. Neuroanat. 20 (1), 93-114 (2000).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+rat+brain+in+stereotaxic+coordinates%22">The rat brain in stereotaxic coordinates</a>. , 2nd edn, Academic Press. Sydney. (1986).</li>
<li>Kempermann, G., Gast, D., Kronenberg, G., Yamaguchi, M., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+determination+and+long-term+persistence+of+adult-generated+new+neurons+in+the+hippocampus+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Early determination and long-term persistence of adult-generated new neurons in the hippocampus of mice.</a> Development. 130 (2), 391-399 (2003).</li>
<li>Fabricius, K., Wortwein, G., Pakkenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+maternal+separation+on+adult+mouse+behaviour+and+on+the+total+neuron+number+in+the+mouse+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct.+Funct%22%5BJournal%5D)">The impact of maternal separation on adult mouse behaviour and on the total neuron number in the mouse hippocampus.</a> Brain Struct. Funct. 212 (5), 403-416 (2008).</li>
<li>Dorph-Petersen, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Volume+and+neuron+number+of+the+lateral+geniculate+nucleus+in+schizophrenia+and+mood+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Volume and neuron number of the lateral geniculate nucleus in schizophrenia and mood disorders.</a> Acta neuropathologica. 117 (4), 369-384 (2009).</li>
<li>Eriksen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+stereological+estimates+in+patients+with+severe+head+injuries+using+CT+and+MR+scanning+images%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Application of stereological estimates in patients with severe head injuries using CT and MR scanning images.</a> Br. J. Radiol. 83 (988), 307-317 (2010).</li>
<li>Gundersen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereology%3A+the+fast+lane+between+neuroanatomy+and+brain+function--or+still+only+a+tightrope%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurol.+Scand.+Suppl%22%5BJournal%5D)">Stereology: the fast lane between neuroanatomy and brain function--or still only a tightrope?</a> Acta Neurol. Scand. Suppl. 137, 8-13 (1992).</li>
</ol>

למחברים אין אינטרסים פיננסיים מתחרים.

באמצעות ECS כמתודולוגיה כדי לגרום neurogenesis, אנו מוצאים עלייה מיידית של 260% היווצרות של נוירונים חדשים BrdU חיובי בהיפוקמפוס. בבריכה זו של נוירונים שנוצר בחריפות מצאנו 40% שחיקה מיום 1 עד 3 חודשים, עם כמעט 50% של נוירונים שזה עתה נוצרו שורדים לפחות 12 חודשים לאחר הטיפול 10 , 11 . הספירה של נוירונים שכותרתו BrdU בעקבות ערכת הדגימה קפדנית, לפיה את כל ההיפוקמפוס נחתך לתוך חלקים עבה 80 מיקרומטר ואחריו תת דגימה של כל סעיף 5 עם התחלה דגימה אקראית בין סעיף 1 לבין סעיף 5. בחירת החלקים הללו נבחרת באופן אקראי ושיטתי, זוהי דרך מצוינת להפחתת השונות של התוצאה הסופית, ללא ספירה ממצה 1 . זו ערכת הדגימה אפשרה לנו לספור נוירונים BrdU חיובי בממוצע של 12 (8-16) hippocampאל חלקים בכל מוח חולדה, עם דיוק סופי של 9-11%. בעת שימוש בשיטה fractionator, חשוב לדעת את החלק של גובה הסעיף שבו ספירת מתבצע, מאז התכווצות רקמה דפורמציה מתרחשת לעתים קרובות במהלך עיבוד היסטולוגית 14 . ואכן, ראינו התכווצות ניכרת של עובי במחקר זה. יתר על כן, יש לציין כי הצטמקות רקמה דיפרנציאלית עשויה להתרחש, כפי שהוצג Dorph-Petersen et al. 2001. עם זאת, כל עוד המבנה המלא של הריבית זמין לניתוח, מגבלות אלה לא לגרום הטיה של המספר הכולל של חלקיקים, כלומר נוירונים BrdU חיובי. במחקרים בהם הצטמקות רקמות היא בעיה מסוימת, יש תמיד לציין כי התוצאות מתקבלות ברקמות מעוותות. במחקר זה, ספרנו בגובה של 10 מיקרומטר. לקטעים של המחקר הנוכחי היה עובי ממוצע סופי של 26 מיקרומטר, 5 מיקרומטראזור השמירה בחלק העליון ואת אזור 11 מיקרומטר (מתכוון) השומר בחלק התחתון של הקטע. פרמטרים אלה מקובלים מאז אזורי השמירה צריך להיות בערך קוטר של החלקיקים שנדגמו. לאחר התיחום של GCL / SGZ, דיקטורים היו ממוקמים באופן אקראי באופן אקראי בתוך השטח המסומן. יש להציב את הדיסקטורים באורך קבוע, הממטב את הדגימה והספירה כדי להשיג ביעילות אומדנים בדיוק כפי שנקבע על ידי החוקר. דיוק אופטימלי מושגת בדרך כלל על ידי ספירת עד 150-200 תאים בכל מבנה של עניין 5 . במחקר הנוכחי, ספרנו ממוצע של 133 (טווח 33-372) נוירונים חיוביים BrdU בכל היפוקמפוס חולדה. בשל מספר תאים נמוך בחלק מחיות הבקרה, הספירות של נוירונים חיוביים של BrdU נפלו מתחת למספר המקובל של התאים הנדרשים כדי להשיג דיוק מתאים, וכתוצאה מכך ערכי CE גבוהים יחסית עבור מקרים אלה. חעם זאת, כפי שקיבלנו ערכים CE של פחות ממחצית ערכי CV (ראה סעיף תוצאה נציג) דגימה נוספת לספור לא היה נדרש. ערכי CV הגבוהים מראים כי התורם הגדול ביותר לשינויים שנצפו מקורו בשינוי הביולוגי. ואכן, אנו עשויים לטעון כי המספר הממוצע של נוירונים חיוביים BrdU שנספרו במחקר הנוכחי היה גבוה מהנדרש. לדוגמה, בקבוצה אחת של חולדות השגנו ערך CE של 9%, וצפתה ערך CV של 43%. במקרה זה, היינו יכולים לכוון דיוק של כ 20%. לסיכום, הדיוק של המספר הכולל של נוירונים חיוביים BrdU במחקר הנוכחי הוא מספיק בכך שהוא לוכד השפעות טיפול אמיתי על המספרים האמיתיים של חלקיקים. בשל השונות הביולוגית הגדולה יחסית בקבוצות מסוימות של בעלי חיים, ניתן היה לקבל את אותן אומדנים בדייקנות מקובלת, למרות ההוצאות הנמוכות של מאמץ. שונות ביולוגית גבוהה בתוך הקבוצות יכולה רקלקבל פיצוי על ידי הגדלת מספר בעלי חיים. אפשר לטעון כי תקן הזהב לקבלת מספרי תאים מדויקים כרוך בספירה ממצה של כל האובייקטים של עניין. עם זאת, ברוב המחקרים של המוח זה לא אפשרי בשל המספרים העצומים של תאים. למרות יעילות הרבה יותר מאשר ספירת תאים ממצה, Fractator אופציונלי הוא זמן רב יחסית בהשוואה להקרנה פשוטה של ​​הבדלים במספרי תאים אשר העדיף אם המספר המדויק של תאים אינו חיוני. זה הניסיון שלנו כי הבדלים של יותר מ 20-30% ניתן לאתר אך ורק על ידי הליכי ההקרנה. אם נעשה בצורה נכונה, דגימה באמצעות stereology מבוסס עיצוב מספק הערכות משוחדת ומדויקת בצורה יעילה 1 . המאפיין הבלתי מוטה של ​​הסטריאולוגיה מייצר הערכות, שכאשר משוכפלים, מקורב לאוכלוסייה האמיתית, ומשפר את יכולת ההחזר שלאומדן 21 . בתחילה יש לקבל מדגם מייצג של כל מבנה העניין (במחקר זה את ה- GCL / SGZ בהיפוקמפוס), דבר המאפשר הערכה בתת-קבוצה תקפה מבחינה סטטיסטית של סעיפים 4 . כדי להשיג מספר מתאים של סעיפים וספירת בדיקות אנו מיישמים את SURS, דבר המקטין את השונות בהשוואה לדגימה אקראית 8 . יתר על כן, SURS מבטיח כי חלקיקים של עניין בתוך המבנה נדגמים עם הסתברויות אותו, ללא קשר לגודל שלהם, צורה, כיוון והפצה במבנה. כמו סטראולוגיה כזו היא להיות מומלץ מאוד כאשר קבלת הערכות מדויקות ולא משוחדות היא היבט מרכזי של הפרויקט.

כימות תאים במבנה תלת מימדי (3-D) עשוי לדרוש קבלת אומדנים המבוססים על עקרונות בלתי מוטים. גם כיום, מחקרים לעיתים קרובות להשתמש דו מימדי (2-D) שיטות לדווח על נתונים של מבנים 3-D. עם זאת, שיטות אלה לא רואים את האופי הטרוגני של המבנה במונחים של צורה והפצה של תאים וכתוצאה מכך מגבלות שיטתי; הם עושים הנחות על מבנה 3-D של עניין והתוצאות לא מתייחסים המבנה המלא. מגבלות אלה מקטינות את הרגישות והדיוק של השיטות וכן מגבירות את הסיכון לטעויות 1 . הטיה בספירת תאים ניתן להימנע על ידי יישום של עיצוב מבוסס stereology, אשר הוא בעל חשיבות כללית לקבלת מידע כמותי על מספר התאים ברקמות או מבנה נתון. בעוד stereology בעבר היה מאוד זמן רב, ההתקדמות נהלים, רךו הדמיה, הפך אותו להיות הרבה יותר יעיל ויישומי נרחב. הסטריאולוגיה כרוכה בעקרונות הדגימה הסטטיסטיים ובתאוריה הגיאומטרית הסטוכסטית על מנת לספק כלים יעילים להערכת נפח, שטח פני השטח, אורך ומספר אובייקטים במבנה תלת-ממדי על ידי דגימה בסעיפים 2-D. לפיכך, stereology מאפשר אחד כדי לקבל נתונים כמותיים משוחדת על שינויים מבניים בסעיפים רקמות, אשר נותנים הערכות הממוצע של המספרים האמיתיים, ללא ניתוח ממצה 1 . הסטריאולוגיה מוגדרת כהפרש סטטיסטי של פרמטרים גיאומטריים ממידע שנדגם. זה יכול להיות מושגת על ידי הדגימה משוחדת, כלומר דגימה אקראית שיטתית, של סעיפים, כמו גם ספירת כללים להבטיח כי לכל האובייקטים יש הסתברויות שוות להיות נספר 3 . בעוד תוצאות סטריאולוגיות יכולות להיות דרגות שונות של דיוק כפי שצוין על ידי מקדם השגיאה (CE), זה יכול להיות המודעהרק כדי להתאים את השונות הביולוגית הטבועה (מקדם השונות (CV)) על ידי התאמת כמות הדגימה כנדרש 4 , 5 . כמה מחקרים קודמים בסטריאולוגיה בחנו את ההשפעות קצרות הטווח של גירוי אלקטרו-פולסיבי (ECS) על הפלסטיות בהיפוקמפוס במכרסמים 6,7 . נתונים ממחקרים אלה מראים עלייה ראשונית במספר הכולל של נוירונים, כמו גם בידול סינפטי מוגבר בעקבות ECS חוזרת. עם זאת, מחקרים אלה לא מעריכים neurogenesis ישירות, שכן הם אינם משתמשים סמנים ספציפיים עבור התפשטות תאים. כאן אנו מציגים יישום של שיטה סטריאולוגית, הטכניקה Fractator אופטי 8 , 9 , לכימות המספר הכולל של נוירונים שנוצרו לאחרונה בשכבת התא גזענית בהיפוקמפוס תא (GCL), כולל אזור משנה גרגרי (SGZ), כמו גם כמו שלהם לטווח ארוך sאורוויה 10 , 11 . ערכנו חולדות על לוח זמנים קליני רלוונטי של ECS (שלוש פעמים בשבוע במשך 3 שבועות), שהוא אחד הגירויים החזקים ביותר של neurogenesis 12 . בעלי חיים בקרה טופלו באמצעות אותו הליך, אך ללא עובר הנוכחי. בכל אחד מ -21 ימי הניסויים, כל החולדות הוזרקו intraperitoneally עם 5-bromo-2 &#39;-deoxyuridine (BrdU) המשלבת לתוך DNA במקום תימידין במהלך חלוקת התא 13 . לאחר הניסוי נשמרו החולדות במשך ארבע תקופות זמן שונות (24 שעות, 3 חודשים, 6 חודשים ו -12 חודשים). באמצעות עקרון fractionator, השגנו חלק ידוע של ההיפוקמפוס באמצעות דגימה אקראית אחידה של סעיפים, והשתמש דיקטורים אופטיים (בדיקות 3-D) על דגימות רקמות עבה samosted ו immunostained. זה ציין במיוחד כי חלקים קפואים בדרך כלל להתמוטט ציר z במהלך התהליךIng, וכי דיקטורים אופטיים המבוססים על מספר משוקלל מתכוון מספר עובי יש להשתמש במקרה זה 14 . כאשר מטוס המוקד של הדיסקטורים האופטיים הועבר מרחק ידוע דרך החלק, נוירונים חיוביים BrdU נספרו כאשר התכונה שלהם עניין היה מוכר בבירור. בתחום הסטריאולוגיה יש ויכוח על המספר הכולל של חלקיקים שיש לספור 15 ; בדרך כלל 150-200 נוירונים נספרים במבנה של עניין כדי להשיג דיוק נאותה כלומר מקדם של 7-8% 8 . הספירות הנוירונאליות החיוביות של BrdU הושלמו באמצעות תוכנה סטריאולוגית עם הדמיה במיקרוסקופ סטנדרטי המצויד במצלמה ובמטרות הבאות: 2X, 4X ו- 10X וכן אובייקט טבילה של שמן 100X (צמצם מספרי = 1.40) ושלב ממונע . תנועות בכיוון z נמדדו בעזרת מיקרו-מקליט דיגיטלי. ההגדלה הסופיתהיה 3000X.

<table><tbody><tr><td>Materials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5'-bromo-2'deoxyuridine - BrdU</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>19-160</td><td></td></tr><tr><td>Cresyl Violet</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5042</td><td>מכיל את החומרים הבאים עבור 1 ליטר: 0.2 גרם סגול קרסיל; 2.0 גרם נתרן-אצטט, 3 H2O; 3 מ"ל חומצה אצטית קרחון; 1,000 מ"ל מים מזוקקים&nbsp;</td></tr><tr><td>Cryoprotectant</td><td>Capital Region Pharmacy, DK</td><td>861334</td><td>מכיל את החומרים הבאים: סוכרוז; polyvinylpyrrolidon PVP 40; sodiumphosphatebuffer (0.2 M); &nbsp; אתילנגלקול; מים דה-מינרליים.</td></tr><tr><td>dH2O</td><td>בית מרקחת אזור הבירה, DK</td><td>817205</td><td></td></tr><tr><td>Diaminobenzidine &ndash; DAB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5637</td><td></td></tr><tr><td>Envision-HRP</td><td>DAKO</td><td>K4001</td><td>פולימר מתויג פרוקסידאז מצומד לאימונוגלובולינים נגד עכברים אתנול</td></tr><tr><td>- 70</td>% <td>שזיף A/S</td><td>201098</td><td></td></tr><tr><td>אתנול - 96</td>% <td>שזיף A/S</td><td>201104</td><td></td></tr><tr><td>אתנול - 99.9</td>% <td>שזיף A/S</td><td></td> 201111 <td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>במבחנה</td><td>BI-04-003-1A</td><td></td></tr><tr><td>H2O2 30%</td><td>Capital Region Pharmacy, DK</td><td>896456</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>J. T. Baker</td><td>6081</td><td></td></tr><tr><td>מדיום הרכבה</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Tissue Tek</td></tr><tr><td>Mouse-anti-BrdU</td><td>Becton-Dickinson</td><td>347580</td><td></td></tr><tr><td>PBS buffer</td><td>Capital Region Pharmacy, DK</td><td>853436</td><td>pH = 7.4</td></tr><tr><td>PFA</td><td>VWR</td><td>28,794,295</td><td>pH = 7.4</td></tr><tr><td>מאגר פוספט&nbsp;</td><td>בית מרקחת אזור הבירה, DK</td><td>866533</td><td>0.1 מול/ליטר, pH 7.4</td></tr><tr><td>ייבוש מהיר הרכבה בינונית</td><td>Histolab Products AB</td><td>801</td><td>פרטקס</td></tr><tr><td>נתרן טטרבוראט</td><td>Merck A/S</td><td>1,063,080,500</td><td></td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>Merck A/S</td><td>1,076,515,000</td><td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>Merck A/S</td><td>1,086,031,000</td><td></td></tr><tr><td>קסילן</td><td>VWR</td><td>28,973,363<</td><td></td></tr><tr><td>strong>שם</td><td>חברה</strong</td><td>>Catalog Number</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cover slips</td><td>Menzel-Gl&auml; סר</td><td>24x50 מ"מ #0</td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Leica</td><td>&nbsp; CM1860</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוקטור דיגיטלי</td><td>Heidenhain</td><td>VRZ 401</td><td></td></tr><tr><td>כלי זכוכית</td><td>מעבדות מחקר מוח</td><td>1256</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>ניקון</td><td>ליקוי חמה 80i</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת מיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>DP72</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות מיקרוסקופ</td><td>VWR</td><td>48311-703</td><td>SuperFrost +</td></tr> <tr><td>ממונע שלב</td><td>קודם</td><td>H101A</td><td></td></tr><tr><td>מיכלים מרובי צלחות</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D6315-1CS</td><td>&nbsp; Nuclon 12-wells</td></tr><tr><td>תוכנה חדשה</td><td>Visiopharm</td><td>ver. 4.5.6.440</td><td></td></tr><tr><td>Objective 2x</td><td>Nikon</td><td>CFI Plan UW 2X</td><td></td></tr><tr><td>Objective 4x</td><td>Nikon</td><td>CFI Plan Fluor 4X</td><td></td></tr><tr><td>Objective 10x</td><td>Nikon</td><td>CFI Plan Fluor 10X</td><td></td></tr><tr><td>Objective 100x Oil Immersion</td><td>Nikon</td><td>CFI Plan Apo Lambda DM 100X שמן</td><td>צמצם מספרי 1.40</td></tr><tr><td>שייקר אורביטלי</td><td>תאומים BV</td><td>CM-9</td><td>Sarstedt</td></tr><tr><td>מתלה שקופיות</td><td>סאקורה</td><td>4465</td><td></td></tr><tr><td>כלי צביעה שקופיות</td><td>סאקורה</td><td>4457</td><td>Tissue-Tek</td></tr><tr><td>דגימת דיסק</td><td>Leica</td><td>14037008637</td><td></td></tr><tr><td>רשתות צביעה</td><td>מעבדות מחקר מוח</td><td>2512</td><td>25-בארות</td></tr></tbody></table>

טכניקת fractator אופטי להעריך מספרים תאים במודל עכברוש של תרפיה אלקטרו-פולית

The Optical Fractionator Technique to Estimate Cell Numbers in a Rat Model of Electroconvulsive Therapy

שיטות סטריאולוגיות נועדו לתאר פרמטרים כמותיים מבלי לבצע הנחות לגבי גודל, צורה, כיוון והפצה של תאים או מבנים. שיטות אלה היו מהפכניות עבור ניתוח כמותי של המוח היונקים, שבו אוכלוסיות תאים volumetric גבוהים מדי כדי לספור באופן ידני, ו stereology עכשיו את הטכניקה של בחירה בכל פעם הערכות של כמויות תלת מימדיות צריך להיות מופק מדידות על דו מימדי סעיפים. כל השיטות הסטריאולוגיות אינן משוחדות כלל; עם זאת, הם מסתמכים על הידע הנכון על מבנה העניין ואת המאפיינים של הרקמה. הסטריאולוגיה מבוססת על דגימה אקראית אחידה שיטתית (SURS), תוך התאמה של הדגימה לרמה היעילה ביותר ביחס לדיוק, תוך מתן מידע אמין וכמותי על כל מבנה העניין. כאן אנו מציגים את fractionator אופטי בשיתוף עם אימונוהיסטוכימיה BrdU לאO להעריך את הייצור ואת ההישרדות של נוירונים שזה עתה נוצרו בשכבת התא גרגר (כולל אזור משנה גרגרי) של היפוקמפוס חולדה בעקבות גירוי אלקטרו, אשר הוא בין הממריצים החזקים ביותר של neurogenesis. הטכניקה Fractator אופטי נועד לספק הערכות של המספר הכולל של תאים מקטעים עבים שנדגמו מן המבנה המלא. חלקים עבים מספקים את ההזדמנות כדי לצפות בתאים שלהם מלא 3-D היקף ובכך, לאפשר סיווג תא קל וחזק מבוסס על קריטריונים מורפולוגיים. כאשר מיושם כראוי, את הרגישות והיעילות של Fractator אופטי מספק הערכות מדויקות עם דיוק קבוע מראש.

פרמטרים דגימה על ידי ניתוח הפצה z במחקר פיילוט ( איור 3 ), מצאנו התפלגות אחידה של נוירונים חיוביים BrdU בגובה גובה. הצטמקות המדורים נמדדה; עובי ממוצע הסופי היה 26.4 מיקרומטר (19.0-32.0 מיקרומטר) בקטעים במקור לחתוך ב 80 מיקרומטר. בהתבסס על עובי רקמות והפצה של נוירונים שכותרתו BrdU גובה הגובה נקבע 10 מיקרומטר, אזורי השמירה בחלק העליון והתחתון של החלק נקבע 5 מיקרומטר ו 4-17 מיקרומטר בהתאמה. בהתאם הצפיפות של התאים, השטח של מסגרות הספירה היה 1414 או 5210 מיקרומטר 2 . אורך הצעד היה 220 מיקרומטר בשני הכיוונים x ו- y וספירה התא בוצעה בממוצע של 12 (טווח 8-16) סעיפים לכל חיה. פרמטרים אלה הדגימה הביא ממוצע של 133 (טווח 33-372) BrdUתאים אופציונליים נספרים ב- 173 (107-204) disectors בכל חצי כדור המוח. לדוגמה, השגנו את קורות החיים הבאים וערכי CE לאמירות נוירונים חיוביות של BrdU בחולדות עם ECS: 24 שעות: CV = 0.59, CE = 0.11; 3 חודשים: CV = 0.34, CE = 0.12; 6 חודשים: CV = 0.43, CE = 0.09; 12 חודשים: CV = 0.22, CE = 0.09. אנחנו לכמת את המספר הכולל של נוירונים שנוצר לאחרונה הישרדות לטווח ארוך שלהם בהיפוקמפוס חולדה בעקבות ECS באמצעות fractionator אופטי בשילוב עם BrdU מכתים טכניקה 10 , 11 . התוצאות הסופיות הראו נוירוגנזה בסיסית בארבע קבוצות של בעלי חיים שליטה, אשר לא שונה באופן משמעותי כפונקציה של זמן ההישרדות ( איור 3 ). יתר על כן, ECS גרמה לעלייה משמעותית במספר הכולל של נוירונים חיובי BrdU ב 24(259%, p &lt;0.0001), 3 (229%, p &lt;0.001), 6 (152%, p &lt;0.05) ו -12 חודשים (162%, p &lt;0.05), בהשוואה לבקרת בעלי חיים. <img alt="איור 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55737/55737fig3.jpg" /> איור 3: נתונים כמותיים של המספר הכולל של נוירונים חיובי BrdU ב GCL / SGZ של היפוקמפוס חולדה 10 , 11 . ברים אופקיים מייצגים את הערכים הממוצעים. קיצורים: GCL, גרגר תא שכבת; SGZ, אזור משנה גרגרי; שעות, שעות; מ &#39;, חודשים. **** p &lt;0.0001, *** p &lt;0.001 ו- p &lt;0.05 לעומת שליטה (n = 11-12 לקבוצה). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55737/55737fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

כאן, אנו מציגים שיטה סטריאולוגית, fractionator אופטי, המשמש לכימות היווצרות של נוירונים חדשים, ואת ההישרדות שלהם, בהיפוקמפוס חולדה בעקבות גירוי electroconvulsive. כאשר מיושמים כראוי, את הרגישות והיעילות של שיטות stereological מבטיח הערכות מדויקות עם קבוע מראש קבוע מראש.

טכניקת Fractator אופטי להעריך מספרים תאים במודל עכברוש של תרפיה אלקטרו-פולית

Stereological methods are designed to describe quantitative parameters without making assumptions about size, shape, orientation and distribution of cells ...

המטרה הכללית של מחקר סטראולוגי זה המשתמש בשיטת ה-optical fractionator היא להשיג מידע כמותי, כגון המספר הכולל של תאים באזור מוחי ספציפי, באמצעות שיטות המבוססות על עקרונות לא מוטים. שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום הניתוח הכמותי, כגון הערכה של המספר הכולל של תאים במבנה שלם הנחקר. יתרון מרכזי אחד של טכניקה זו הוא שהיא מספקת הערכות מדויקות עם רמת דיוק קבועה ונקבעה מראש.מדגימה את ההליך היא אסת'ר קיאר נידהם (Esther Kjaer Needham), שותפה לכתיבת המאמר. התחילו עם מוח חולדה מקובע וקפוא. בעזרת סקאלפל, הפרדו את ההמיספירות הימנית והשמאלית לאורך קו האמצע של המוח, ולאחר מכן בחרו באחת מההמיספירות באופן אקראי במוח הראשון.לאחר מכן, עברו באופן שיטתי בין ההמיספרה הימנית לשמאלית. לאחר מכן, השתמשו במצע קיבוע כדי לקבע את ההמיספרה הנבחרת על גבי דיסקית דגימה, כאשר הציר האורכי מאונך לדיסקית. כאשר ההמיספרה מקובעת על הדיסקית, הניחו מבחנה סביב ההמיספרה ומלאו אותה ב-Tissue-Tek כדי לכסות את ההמיספרה לחלוטין.בשלב הבא, הכניסו למקריוסטט מיכלים מרובי-תאים (multi dish) ממוספרים לקירור מקדים. לאחר מכן, רכבו את דיסק הדגימה במקריוסטט וחתכו את כל ההיפוקמפ, החל מנקודה אקראית, לפרוסות בעובי 80 micron במישור הקורונלי. במהלך החיתוך, העבירו את כל הפרוסות שנדגמו באופן רצוף לתוך מיכלי ה-multi dish הקרים, כדי להבטיח שהפרוסות יישמרו לפי סדר החיתוך.לאחר שכל ההיפוקמפוס חתך לפרוסות, כסו את הפרוסות לחלוטין בחומר קריו-פרוטקטור ושמרו את המכלים בטמפרטורה של minus 20 degree Celsius עד לשימוש הבא. כאשר תתחילו בצביעה אימונוהיסטוכימית, המתינו עד שהפרוסות יגיעו לטמפרטורת החדר. לאחר מכן, השתמשו במכחול כדי להעביר כל פרוסה חמישית מסדרת פרוסות ההיפוקמפוס לרשתות צביעה בעלות 25 בארות המונחות בתוך צלחונות פטרי מלאים ב-PBS.יש להכין שמונה עד 12 חתכים לכל היפוקמפוס לצורך צביעה. העבירו את רשתות הצביעה המכילות את החתכים לצלוחיות זכוכית תואמות המכילות PBS ושטפו את החתכים פעמיים למשך 10 דקות ב-PBS. לאחר מכן, דגרו במי חמצן בריכוז 3% למשך 20 דקות.לאחר השטיפה, העבירו את החתכים לשלושה תמיסות של חומצה כלורית. לאחר מכן, בצעו ניטרול ב-0.1 sodium tetraborate בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות. לאחר שלוש דגירות של 10 דקות והחלפות של תמיסת השטיפה, העבירו את החתכים לתמיסת חסימה למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.לאחר מכן, דגרו את החתכים בנוגדן ש駄י przeciw-BrdU מהעכבר, המדולל ביחס של 1:100 בתמיסת חסימה, למשך 48 שעות בטמפרטורה של ארבעה מעלות צלזיוס. לאחר דגירת הנוגדן הראשוני, שטפו שלוש פעמים, 10 דקות בכל פעם, בבופר שטיפה. לאחר מכן, דגרו למשך 48 שעות ב-horseradish peroxidase המדולל ביחס של 1:10 בבופר שטיפה.לאחר 48 שעות העבירו את הנתחים ל-PBS למשך 10 דקות, וחזרו על הפעולה עבור סה"כ חמישה שטיפות. לאחר השטיפה, העבירו את הנתחים לתמיסת DAB למשך שבע דקות. לאחר מכן, העבירו לתמיסת DAB המכילה 0.02% hydrogen peroxide למשך 10 דקות.לאחר סדרת שטיפות, העבירו את החתכים לפי סדר מספרי למשקפיות מיקרוסקופ. הניחו להם להתייבש במשך כ-30 דקות. לאחר מכן, ייבשו את הדגימות באוויר על ידי הצבתן במעמד למשקויות.בשלב הבא, בצעו רהידרטציה לדגימות למשך 10 דקות בתוך כלי צביעה לשקופיות המכיל מים מזוקקים. לאחר מכן, העבירו את השקופיות לתוך 0.02% cresyl violet ומים מזוקקים למשך 15 דקות. לאחר חזרה על צביעת ה-cresyl violet, בצעו רהידרטציה לסרטים באמצעות סדרת אתנול.לאחר מכן, בצעו שקיפות של החתכים ב-xylene פעמיים למשך 15 דקות בכל פעם. לבסוף, הוסיפו מדיום סגירה לייבוש מהיר וכסו את השקופיות בכיסוי זכוכית. לאחר 24 שעות ניתן להשתמש בשקופיות לצורך מיקרוסקופיה.התחילו בבדיקת עובי הרקמה על ידי הנחת השקופיות על הבמה הממונעת של המיקרוסקופ ופתיחת תוכנת הסטריאולוגיה. הגדירו את אזור העניין באמצעות עדשה בהגדלה נמוכה לפני המעבר לעדשת טבילה בשמן בהגדלה של 100x. לאחר מכן, בחרו נקודה ספציפית במסגרת הספירה, למשל, אזור סמוך לפינה, ואתרו את החלק העליון של החתך על ידי תזוזה לאורך מישור המוקד עד שמאפיין כלשהו של החתך יופיע במיקוד.רשום את מיקום ציר Z כאפס. לאחר מכן, העבר את מישור המיקוד למטה דרך הרקמה עד שהרמה האחרונה של הרקמה בציר Z תהיה במיקוד, ולאחר מכן סמן מיקום זה. עובי הרקמה המקומי מוגדר מאפס ועד לנקודת סיום זו וניתן לקריאתו בציר Z.תעדו את עובי הרקמה. עובי הרקמה נמדד במספר נקודות בתוך אזור העניין. גובה הדיסקטור (dissector) ואזורי ההגנה, גודל מסגרת הספירה, אורך הצעד וההגדלה הסופית נקבעים בניסוי פיילוט.כעת ניתן להתחיל בספירת הנוירונים החיוביים ל-Brd-U, בדרך כלל בהגדלה סופית של 2000 עד 3000x באמצעות עדשה שמנית עם שמן של 60x או 100x ועם מפתח מספרי גבוה. זהו את הנוירונים החיוביים ל-BrdU בכל מסגרת ספירה, אך אל תספרו את אלה הנוגעים בקו ההדרה האדום. ספרו את אותם נוירונים חיוביים ל-BrdU הנוגעים בקו ההכללה הירוק ואת אלה הנמצאים בתוך גבולות מסגרת הספירה.ספרו רק נוירונים חיוביים ל-Brd-U כאשר המאפיין המבוקש מזוהה בבירור בתוך גובה הדיסקטור (dissector). נוירונים גבוליים (חלקית) המוצגים כאן אינם נספרים. תמונה זו מראה את המספר הכולל של נוירונים חיוביים ל-BrdU בשכבת תאי הגרבולה ובאזור התת-גרנולרי (subgranular zone) של ההיפוקמפוס בחולדה.הפסים האופקיים מייצגים את ערכי הממוצע. בעקבות גרייה אלקטרו-קונוולסיבית, חלה עלייה מיידית של 260% ביצירת נוירונים חדשים חיוביים ל-BrdU בהשוואה לקבוצות ביקורת שלא טופלו. במאגר זה של נוירונים שנוצרו לאחרונה, קיימת נשירה של 40% מהיום הראשון ועד שלושה חודשים, כאשר כמעט 50% מהנוירונים שנוצרו שורדים 12 חודשים לאחר הטיפול.לאחר צפייה בסרטון זה, תהיו בעלי הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להשיג הערכה של מספר התאים הכולל באזור במוח באמצעות שיטות סטריאולוגיות.

the-optical-fractionator-technique-to-estimate-cell-numbers-rat-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

בתאי הגנגליון ברשתית מעבירים מידע חזותי מן העין אל המוח עם רצפים של פוטנציאל פעולה. כאן, אנו מדגימים כיצד להקליט את פוטנציאל הפעולה של תאים גנגליון...

יחידה יחידה ב-vivo הקלטות של התצלובת הראייה של עכברוש

הגידול בחולים המוח שגרתי לעבור הקרנות גולגולתי, ואף מועיל, טיפול זה לעתים קרובות תוצאות תפקוד קוגניטיבי מתישה. זו הבעיה הבלתי פתורה רציני כרגע, לא נותר קליני, העלתה את המאמצים שלנו כדי לתכנן תא גזע טיפולים מבוססי להתאוששות של קרינה הנגרמת decrements קוגניטיבי.

גזע להשתלות אסטרטגיות Cell לשיקום של ליקוי קוגניטיבי נגרמת על ידי הקרנות גולגולתי

מקור: Olesen, M. V.,  et al. טכניקת המפרק האופטי להערכת מספרי תאים במודל חולדה של טיפול בנזעי חשמל. {{}}J. Vis. exp. (2017).  הסרטון מדגים את הטכניקה לכימות נוירונים חדשים שנוצרו ברקמת המוח. פרוסות רקמת ההיפוקמפוס המכילות נוירונים המסומנים בברומודוקסיורידין (BrdU) נצבעו באמצעות אימונוהיסטוכימיה ולאחר מכן כומתו על פני עובי הרקמה באמצעות טכניקת המפרק האופטי.

כימות נוירונים חדשים שנוצרו ברקמת מוח של חולדה באמצעות טכניקת המפרק האופטי

מקור: Jang, S., et al, התקפים בנזעי חשמל בחולדות ופיצול ההיפוקמפוס שלהם כדי לבחון שינויים הנגרמים על ידי התקפים בחלבוני צפיפות פוסט-סינפטיים. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים את השראת התקף נזעי חשמל חריף (ECS) במודל חולדה כדי לחקור נוירופלסטיות הנגרמת על ידי התקפים. חוקרים מפעילים גירוי חשמלי באמצעות אלקטרודות אטב אוזניים, מה שמפעיל ריגוש יתר עצבי וקלונוס. מודל זה מסייע לחקור פלסטיות סינפטית, מנגנוני התקפים והשפעות טיפוליות הקשורות לטיפול בנזעי חשמל (ECT).

גרימת התקף נזעי חשמל חריף במודל חולדה

חשמל התקף (ECS) הוא מודל חיה ניסיוני של נזעי חשמל עבור דיכאון חמור. ECS מעוררת באופן גלובלי פעילות ההיפוקמפוס, המוביל synaptogenesis פלסטיות סינפטית. כאן, אנו מתארים שיטות עבור ה-ECS אינדוקציה בחולדות, fractionation subcellular של hippocampi שלהם כדי לבחון שינויים התקף-induced חלבונים סינפטיים.

חשמל התקפים חולדות ו Fractionation של Hippocampi שלהם כדי לבחון תפיסה-induced שינויים בחלבונים Postsynaptic צפיפות

עבודה זו מציג עבור הערכת stereological לא משוחדת של מספרים דופאמינרגיים וכולינרגיים פרוטוקול צעד אחר צעד העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד (קרי, מיקרוסקופ אור, טבלה אובייקט ממונע (x, y, z המטוס), ותוכנה הציבור לניתוח תמונה דיגיטלית.

הערכה stereological של דופאמין נוירון במספר העכבר הסובסטנציה ניגרה באמצעות מיקרוסקופ רגיל ציוד אופטי Fractionator

פרוטוקול מפורט להערכה של המפרט מבנית וחזותית בחולדות על ידי תגובת טומוגרפיה ו optokinetic אופטית קוהרנטית מוצג. התוצאות מספקים תובנות בעלות ערך מחקר ophthalmologic, כמו גם רגשיות ונוירולוגיות.

באמצעות טומוגרפיה אופטית קוהרנטית ותגובה Optokinetic כמו המפרט מבנית ופונקציונליים מערכת הראייה של עכברים וחולדות

התפקיד של גנים הקשורים למחלות שהתגלו לאחרונה בפתוגנזה של הפרעות נוירופסיכיאטריות נשאר מעורפל. דו-צדדי שונה בטכניקת אלקטרופורציה ברחם מאפשר העברת גנים באוכלוסיות גדולות של נוירונים ובחינת ההשפעות הסיבתיות של שינויים בביטוי גנים על ההתנהגות החברתית.

צינור באמצעות אלקטרופורציה דו-צדדית ברחם כדי לחקור השפעות גנטיות על התנהגות מכרסמים

כאן אנו מציגים שיטה אוטומטית לקביעה כמותית למחצה של מספר נוירון דופאמין בסובסטנציה חולדה nigra pars compacta.

קביעה כמותית למחצה של צפיפות נוירון דופאמין בסבסטנציה ניגרה של מודלים מכרסמים באמצעות ניתוח תמונה אוטומטי

כאן אנו מציגים פרוטוקול לביצוע טומוגרפיה מבוססת טומוגרפיה של פליטת פוזיטרונים פרה-קלינית במודל גליובלסטומה עכברוש באמצעות אלגוריתמים שפותחו בתוך הבית כדי לייעל את הדיוק והיעילות.

פוזיטרונים פליטת טומוגרפיה מבוסס מינון ציור הקרנות טיפול במודל חולדת Glioblastoma באמצעות פלטפורמת מחקר קרינה בבעלי חיים קטנים

פרוטוקול זה מתאר את השימוש במיקרוMS לספקטרומטריית מסה MALDI-2 חד-תאית מונחית פלואורסצנטית, המאפשרת פרופיל מולקולרי משופר של תאי עצב ראשוניים של חולדות.

ספיגה/יינון לייזר בסיוע מטריצה פלואורסצנטית עם ספקטרומטריית מסה פוסטיוניזציה המושרה בלייזר של תאים עצביים בודדים של חולדה

למדו את שיטת ה-Optical Fractionator לספירת תאים במוח עכברוש לאחר גירוי אלקטרו-פולי. טכניקה סטריאולוגית זו מספקת הערכות מדויקות של נוירוגנזה בהיפוקמפוס.

טכניקת Fractator אופטי להעריך מספרים תאים במודל עכברוש של תרפיה אלקטרו-פולית

גלה סרטונים נוספים